כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לשפר את חלוקתה פרפין. שיטה זו משלבת חיתוך צף באמצעות תא תרמוסטטי פשוטות כדי למנוע את תהליך ההעברה הנדרש על-ידי השיטה המקובלת. כתוצאה מכך, את היעילות ואת מספר קטעים שלמים פרפין היו השתפרה מאוד.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
חיתוך ושיטת צף בשביל לרקמות פרפין-מוטבע על חלוקתה
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
חלוקתה של הרקמה פרפין-מוטבע הוא בשימוש נרחב כיום מגוון של פתולוגיה. עם זאת, מייגע. כדי לשפר את שיטה זו, מספר חברות מסחריות פיתחו מערכות העברת מקטע מורכבים באמצעות מים נוזלים. כדי לפשט את הטכנולוגיה הזאת, יצרנו שיטה פשוטה באמצעות ציוד ביתי המשלב הביתור ועל צף בתוך תא תרמוסטטי פשוטה; לכן, הסעיפים להזין באופן אוטומטי את המים הרותחים על פני המים. ההיפוקמפוס מוח העכבר למבוגרים, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר מתחלקים, עיניים למבוגרים דג זברה נחתכו באמצעות חלוקתה הפרפין קונבנציונליים והן בשיטת הציג להשוואה. ניתוח סטטיסטי מראה שיפור השיטה שלנו הזמן שנחסך המיוצר חלקים באיכות גבוהה יותר. בנוסף, פרפין חלוקתה של הדגימה כל תוך זמן קצר קל עבור מפעילי ג'וניור.
מבוא
מחקר מורפולוגי חשוב במחקר הביולוגי. למרות הטכנולוגיה החדשה אפשרה לחוקרים לבחון את המטרות שלהם ישירות מן כל רקמות או אורגניזמים1,2,3, חיתוך הדגימה למקטעים דק, ואחריו מכתים, נשאר הראשית מורפולוגיה של רקמות היחיד של שיטה ולא לקחת כסף אבל גם חלבון מיקוד ישירות בתוך הרקמה. מיקרוסקופ אור עושה שימוש בשלושה סוגי המקטעים: פרפין, מוקפאים, ולא semithin. למרות cryosectioning נפוץ להגנה על רקמות antigenicity, הכנת הדגימה היא פשוטה, המורפולוגיה רקמות יתרת הוא עני, מצוייה דק אופטים4,5. פרפין חלוקתה היא השיטה השכיחה בתערוכה מורפולוגי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של אוניברסיטת נאנצ'אנג.
1. להרכיב את הציוד ולחבר את האזמל הקטן
- עיצוב הפרמטר לפי הדרישות (Supplementary איור 1).
- להגיש את הפרמטר במפעל מקומי לייצור לוחות אקריליק.
- להרכיב את כל החלקים ברצף: שימוש בכלורופורם לשילוב 7 לוחות אקריליק מסחריים לתוך טנק עם סעיף ערוץ ומים אמבטיה (איור 1).
התראה: כלורופורם מייצר חומרים רעילים כאשר היא עונה אור וחמצן. להרכיב את המנגנון בשכונה fume. - התקנת הרכיב חשמליים דרך החור בלוח אקריליק #1 (איור 2 א
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
השיטה משופרת גדל מספר קטעים שלמים פרפין. בדקנו שיטה חדשה על רקמות בהיפוקמפוס העכבר למבוגרים, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר מתחלקים עיני דג זברה. מים נוסף למיכל, טמפרטורת המים נשמר בין 38.0 ° C עד 40.0 מעלות צלזיוס. לאחר באופן סדרתי הכנת את דגימות הרקמות, היו למחלקה, בהשוואה חלוקתה קונבנציונלי. השיטה החדשה נמנע מקטע הפסד והגדילה את הפרופורציה של מקטעים שלמים העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, ובעיניים דג זברה למבוגרים (איור 4A<.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כדי לשפר מורפולוגיה סעיף פרפין לפתור את הבעיה של זמן מבוזבז במהלך הפרפין קונבנציונליים חלוקתה, יצרנו של פרפין משופרת חלוקתה שיטה המשלבת חיתוך התגלגלות. שיטה משופרת זו מסתמכת על ציוד פשוטה שכוללת ערוץ סעיף, אמבט מים, תנור עם מתג זיהוי טמפרטורה. הכלים סעיף נכנס לאמבט מים דרך ערוץ סעיף, מתגלה באופן אוטומטי בעת גזירה. לכן, בשיטה זו משפרת את הפרפין חלוקתה איכות ויעילות, אשר אומתה באמצעות פרפין חלוקתה של העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, והעיניים דג זברה למבוגרים.
כדי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים יש פטנט על התקן זה והצהר אין אינטרסים מתחרים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (מענק מס 31400936, 31460260), את מדעי הטבע קרן של ג'יאנגשי פרובינציה של סין (20171BAB215020). אנו מודים גם את תוכנית משותפת בין אוניברסיטת נאנצ'אנג המלכה מרי אוניברסיטת לונדון לתמיכה עבודה זו.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חממת | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| אתנול | סינופארם ריאגנט כימי ושות', מכסה | 64-17-5 | |
| קסילן | Sinopharm Chemical Reagent Co., מכסה | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| מודול הטמעת פרפין מחומם | Leica | ||
| לוח | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co., מכסה | 67-66-3 | |
| גוף חימום חשמלי צינורי (12 V 200 W) | |||
| בקר טמפרטורה (12 וולט 120 וואט) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| מיקרוטום סיבובי | של Leica | ||
| קשר את תעלת המים עם מחזיק סכין המיקרוטום | |||
| BA-4025 | |||
| אאוזין | בסו דיאגנוסטיקס בע"מ | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| ניטרלי Balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co., מכסה | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| מיקרוסקופ | Carl Zeiss | ||
| חומצה הידרוכלורית | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| אמבט מים לקטעי פרפין | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - תרסיס | Leica | ||
| תרמו סיינטיפיק | 9990420 |
מקורות
- Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
- Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
- Mironov, V., Boland, ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
