הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

12K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58291

⸱

19 בינואר 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre de Recherche en Cancérologie et Immunologie Nantes Angers (CRCINA), Institut national de la santé et de la recherche médicale (INSERM), Université d'Angers, Université de Nantes, Nantes, France, 2Service de chirurgie pédiatrique, Centre hospitalier universitaire (CHU) de Nantes, Nantes, France, 3Unité de Formation et Recherche (UFR) des Sciences Pharmaceutiques et Biologiques, Université de Nantes, Nantes, France

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר כיצד להעריך הסינרגטיות בין נוגדן נגד סרטן תרופות antineoplastic במודלים פרה באמצעות המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay.

תקציר

Potentiation נוגדנים חד-שבטיים עוינת (mAb) על ידי סוכנים כימותרפיות מהווה אסטרטגיה רב ערך עבור תכנון טיפול יעיל ובטוח מפני סרטן. כאן אנו מספקים פרוטוקול כדי לזהות שילוב רציונלי בשלב פרה. ראשית, אנו מתארים הנועד מבוססת תא להעריך את הסינרגטיות בין mAb נגד סרטן תרופות ציטוטוקסיות, המשתמשת המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay1. זה כולל את המדידה של גידול התא סמים, נוגדן-רגישות שימוש assay MTT, ואחריו ניתוח המחשב אוטומטית כדי לחשב את ערכי אינדקס (CI) שילוב. CI ערכים של < 1 לציין הסינרגטיות בין mAbs נבדק סוכנים ציטוטוקסיות1. כדי לאמת את במבחנה ממצאים ויוו, נתאר בהמשך שיטה כדי להעריך את היעילות של משטר השילוב במודל גידול xenograft. במודל זה, הטיפול המשולב מעכבת באופן משמעותי הגידול, כשהתוצאה הישרדות המורחבת משמעותית בהשוואה פקדים סוכן יחיד. חשוב, הניסויים ויוו חושף משטר השילוב הוא נסבל היטב. פרוטוקול זה מאפשר הערכת יעילות תרופה נגד סרטן צירופי במודלים פרה וזיהוי של שילוב רציונלי כדי להעריך בניסויים קליניים.

מבוא

הגישה הקונבנציונלית בטיפול של מספר רב של סוגים שונים של סרטן היה מבוסס על יחידני. אפילו אם זה משמש עדיין במקרים רבים, שיטה זו נפגשו מספר מכשולים שמוביל בחירה של טיפולים משולבים2. במיוחד, תאים סרטניים פגיעים יותר לפתח עמידות כאשר מטופלים עם תרופה אחת על ידי גרימת הישרדות חלופי מנגנונים3, והתוצאה היא כישלון טיפולי בחולים4. יתר על כן, ביחידני, תרופות בדרך כלל הפארקים אחראית הרשות במינון גבוה. את המצב הזה לעיתים קרובות תוצאות המופע של תופעות לוואי למינון חזק זה יכול להיות בלתי נסבל, כוח רופאים להפסיק את הטיפול2. מסיבות אלו, האגודה של מולקולות נגד סרטן הוא עכשיו העדיפו יחידני.

שילובים תרופתיים האידיאלי יהיה אלה שפועלים בסינרגיה נגד תאים סרטניים, ללא רעילות מוגברת נגד תאים נורמליים. הסינרגטיות מתייחס האינטראקציה של שניים או יותר תרופות שמייצר השפעה תרפויטית עולה על הסכום של כל תרופה בודדים מתנהג בנפרד. אינטראקציות כזה עלול לגרום משופרת יעילות טיפולית קלינית2. זה מגביל את ההתנגדות הטיפול מגביר את היעילות, ניתן גם להפחית רעילות2. למעשה, ניתן להפחית את המינון של כל תרופה כדי להפחית את תופעות הלוואי שלהן על ידי מיקוד מסלולים שונים. בנוסף, אחד של המולקולות יכול לשמש גם סוכן sensitizing נגד תאים סרטניים. ההשפעה של התרופה השנייה שעשויים להיות מוגברת על תאים sensitized, המינונים פחות יכול להיות בשימוש5.

טיפול משולב יכול לכלול שניים או יותר תרופות כימותרפיות ו/או תרופות/מוצרים ביולוגיים, כגון נוגדנים חד-שבטיים6. אלה mAbs במיוחד היעד תאים המבטאים אנטיגן פני שטח התא של עניין מסוגלות להרוג תאים סרטניים באמצעות מסלולים אימונולוגי כולל נוגדנים תלויי תאית cytotoxicity (ADCC), עם המעורבות של תאים חיסוניים אפקטור 7, cytotoxicity תלויי-המשלים (CDC)6. הם גם משמשים דרך מנגנון חיסוניות מתווכת על ידי אפופטוזיס8,9,10,11. במקרה זה, אינדוקציה של התהליך של מוות תאים מתוכנת עלול לרגש תאים סרטניים, להחליש את תפקידם ולבצע את כימותרפית המשויך יעיל יותר במינון נמוך יותר. ככזה, proapoptotic mAb הם מועמדים טובים עבור עיצוב משטרי בשילוב עם תרופות antineoplastic.

מודלים מתמטיים שונים תוארו להעריך הסינרגטיות סמים; אחד מהם הוא מבוסס על שילוב מדד בשיטה1. שיטה זו מבוססת על העיקרון חציון-אפקט שפותחה על ידי צ'או1. המשוואה חציון-אפקט מופיע את מינון התרופה לבין האפקט כדלקמן.

figure-introduction-1

. הנה, D הוא מינון התרופה; Dm הוא המינון חציון-אפקט; הפא הוא השבר מושפע המנה; מ' הוא המעריך שמסמל את הצורה של מינון-אפקט מגרש1. המינון חציון-אפקט משמש כדי לחשב את המינון Dx של התרופה מעכב או הורג "x" אחוזים של תאים. הערך CI לאחר מכן מחושב כדי להעריך את השפעת השילוב סמים, כדלקמן1מוספים.

figure-introduction-2

הערך CI 1 מציין אפקט תוסף וערך CI של < 1 מציין אפקט סינרגיסטי, בעוד ערך CI של > 1 מציין הטינה1. היישום של שיטה זו נוספת בהנחייתם של הזמינות של תוכנית מחשב, CompuSyn, הקובע הסינרגטיות של אנטגוניזם במינונים כל או רמות ההשפעה הדמיה אוטומטית12.

הקבוצה שלנו פיתח ייחודיים 8B6 mAb O-אצטיל-GD2 ganglioside (OAcGD2) נוירובלסטומה אנטיגן13 , נוספת הדגימו כי mAb הזה הוא מסוגל לגרום מוות של תאים עם תכונות של אפופטוזיס11. כדי לבדוק אם mAb 8B6 יכול לרגש לתאי נוירובלסטומה topotecan הסוכן antineoplastic, שינינו את השיטה הנ ל שפותחה על ידי צ'או1. ראשית, אנו לקבוע מנה אפקטיבית (אד50) 50 הערכים של mAb 8B6 ו- topotecan. בשלב הבא, התאים נוירובלסטומה עם יחס equipotent של שתי תרכובות בהתבסס על אד50 ערכים נחשפים לקבוע את הערכים CI שימוש בתוכנת סימולציה הנ. שיטה זו מאפשרת לנו להפגין הסינרגטיות בין mAb 8B6 ו- topotecan חוץ גופית בתוך. בשלב הבא, אנו מתארים את פרוטוקול להעריך עוד יותר את העוצמה והביטחון של שילוב משטר זה ויוו. פרוטוקול זה ניתן להחיל בקלות כדי לבחור mAb נגד סרטן חזק ובטוח ושילובים הסוכן כימותרפיות במחקרים פרה. ייצוג סכמטי של מחקר זה מסופק באיור1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

דיור בעלי חיים, ניתוח ניסיוני אושרו על ידי הממשלה הצרפתית (הסכמי #C44-278, #APAFIS 03479.01). טיפול בבעלי חיים ונהלים נערכו תחת הוראת האיחוד האירופי 2010/63/האיחוד האירופי ומשפט צרפתית #2013-118 בנושא ההגנה על בעלי חיים משמשים למטרות מדעיות.

1. הערכה של סמים האינטראקציה בין mAb 8B6 ו Topotecan ב חוץ גופית

  1. הכנת הדוגמא 96-ובכן
    התראה: להתייעץ עם ועדת בריאות ובטיחות של המוסד, רגולציה מקומית לחוקים הקשורים לבטיחות מעבדה. סקור את חומר ומידע גיליון בטיחות לפני שעבדה עם כל המדיה, שורות תאים או נוגדנים. השתמש סטרילי טכניקה נכונה ולעבוד תא למינארי. כל פתרונות/הציוד המשמשים לטיפול תאי חייב להיות סטרילי.
    הערה: פרוטוקול הבאים תוכנן לשימוש עם תאים חסיד. שינויים נדרשים להחיל את השיטה על תאים nonadherent גדל ההשעיה; פרוטוקול זה משתמש ארבע פעמים עבור כל תנאי הניסוי.
    1. לגדול IMR5 תאים בבקבוקון T75.
    2. ביום הראשון (יום 0), לבחון את התרבות תאים במיקרוסקופ כדי לבדוק את confluency תא. האחות התא האמצעי הבקבוק, לשטוף אותו עם 5 מ ל תמיסת באגירה פוספט (PBS) ולהוסיף 3 מ"ל של 0.05% חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA) / PBS פתרון. להחזיר את הבקבוקון החממה במשך 3 דקות (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2).
    3. לבחון את התרבות תאים במיקרוסקופ על ניתוק התא.
      הערה: במקרה הצורך, לחזור את הבקבוקון החממה למשך דקות 3 עד 5 נוספים, בהתאם לסוג תאים סרטניים.
    4. להוסיף 10 מ של התא מלא בינוני הבקבוק ולהעביר התליה תא ל צינור חרוטי סטרילי 15 מ"ל. Centrifuge את התאים עבור 5 דקות ב x 300 גרם. לספור את התאים באמצעות hemocytometer.
    5. להסיר ולמחוק את תגובת שיקוע. Resuspend בגדר תא במדיום גידול מלאה. לכוון את עוצמת הקול בינונית בריכוז הסופי של עונה 1 פרק 105 תאים/מ ל....
    6. זרע 84 בארות של צלחת 96-ובכן תרבות עם 10 תאים4 , כל אחד, אשר הוא 100 µL תא השעיה. בצע את הפריסה ניסיוני באיור 2.
    7. דגירה את התאים עבור 18 h בחממה תא (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2).
  2. הכנה פתרון סמים
    הערה: ללימודים רגישות עולה סמים/mAb, לשנות את התזמון האורך, ריכוז הטיפול שיתאים מיוחד הסם/mAb המדובר. שים לב הריכוז ההתחלתי הוא 3 x הריכוז הסופי.
    1. למחרת בבוקר (יום 1), להכין את הפתרונות הבאים סמים באמצעות מדיום הגידול מלאה.
      1. mAb פתרון הכנה
        1. לדלל mAb ב 500 µL של מדיום הגידול מלאה להשגת פתרון עובד נוגדן ריכוז mAb של 240 µg/mL.
        2. לבצע חמש כפולה דילולים טורי כמצוין באיור2.
      2. Topotecan פתרון הכנה
        1. שתדללו, כמו לעיל, לסם µL 500 של מדיום הגידול מלאה להשגת הפתרון עובד סמים עם ריכוז סופי של 120 ננומטר.
        2. לבצע חמש כפולה דילולים טורי כמצוין באיור2.
      3. הכנה פתרון נוגדן וסמים
        1. לדלל את הפתרונות mAb והסמים ב 500 µL של מדיום הגידול מלאה להשגת פתרון 120 ננומטר סמים, mAb µg 240/mL (הפתרון עובד).
        2. לבצע חמש כפולה דילולים טורי כמצוין באיור2.
    2. כדי להגיע הריכוז הסופי, להעביר 50 µL של כל פתרון סמים לתוך הבארות המתאים, כפי שמצוין בפריסה ניסיוני ( איור 2).
      הערה: להעביר 50 µL של מדיום הגידול מלאה לתוך הבארות התא אינו מטופל, כמצוין באיור2.
    3. דגירה את התאים עבור 72 h בחממה (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2).
  3. MTT assay
    1. להוסיף 10 µL MTT ריאגנט פתרון טוב לכל.
    2. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות.
    3. להוסיף 100 µL של פירוק פתרון (10% מרחביות ב 0.01 M HCl) כל טוב, באמצעות פיפטה רב-ערוצי, לערבב ביסודיות על ידי pipetting.
    4. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות בתוך תא humidified (95% לחות).
    5. לקרוא את ספיגת-570 nm (570) ו 620 nm (620) באמצעות ספקטרופוטומטרים.
      הערה: לערבב כל מדגם שוב על ידי pipetting לפני קריאת את ספיגת; ספיגת-620 nm מאפשר את התיקון של ערכי הרקע לא ספציפית.
    6. לחשב את ספיגת המתוקן: תוקן ספיגת =570-620.
    7. לחשב את הכדאיות תא כדלקמן: תא הכדאיות = 100 x (דוגמה רעה ספיגת המתוקן / לשלוט כלומר ספיגת המתוקן).
    8. לחשב את מושפעות שבר ערכי (Fa) באמצעות המשוואה הבאה: 1 - (דוגמה רעה ספיגת המתוקן / לשלוט כלומר ספיגת המתוקן).
  4. סמים אינטראקציה עם תוכנת הדמיה אנליטיים ליחיד ולימודי שילוב סמים
    1. להפעיל את תוכנת סימולציה כדי לפתוח את החלון התחלה.
    2. לחץ על הלחצן ' ניסוי חדש ' כדי לפתוח את החלון הראשי .
    3. הקלד את השם של הניסוי בחלון שם .
      הערה: ניתן להוסיף תאריך בחלון תאריך .
    4. לחץ על לחצן תרופה יחידה חדשה .
    5. הקלד את השם בחלון שם מלא .
    6. הקלד את הקיצור בחלון Abbrev .
    7. הקלד את יחידת ריכוז סמים בחלון יחידות .
    8. הזן נתונים נקודה 1 מנה ערך פא, הקש Enter.
    9. חזור על שלב זה עד לכל נקודות הנתונים מוזנים.
    10. לחץ על הלחצן ' סיום '.
    11. בצע את השלבים אותם להיכנס mAb נקודות נתונים.
      הערה: השתמש מאותה יחידה ריכוז נמצא בשימוש בסמים.
    12. לחץ על לחצן חדש התרופה המשולבת .
    13. בחר סמים mAb.
    14. בחר יחס קבוע ולחץ על אישור.
    15. הקלד את השם בחלון שם מלא .
    16. הקלד את הקיצור בחלון Abbrev .
    17. הקלד את היחס סמים/mAb בחלון יחס .
    18. הזן נתונים נקודה 1 מנה והקש Enter.
      הערה: התוכנית באופן אוטומטי יחשב את המנות של mAb ותיבה משולבת.
    19. הזן את ערך הנתונים נקודה 1 פא והקש Enter.
    20. חזור על שלב זה עד לכל נקודות הנתונים מוזנים.
    21. לחץ על הלחצן ' סיום ', לאחר מכן, לחץ על לחצן צור דוח .
    22. בחר mAb והסמים ולאחר מכן, לחץ על אישור.
    23. בחר משולבת ולאחר מכן, לחץ על אישור.
    24. בחר כותרת טבלה CI, טבלת סיכום. לאחר מכן, לחץ על אישור.
    25. הקלד את שם הקובץ של קובץ ה-ניתוח ולחץ על שמור כדי ליצור את הדוח.
      הערה: לאחר לחיצה על אישור, הדו ח ייפתחו באופן אוטומטי דפדפן ברירת המחדל של המחשב.
    26. כדי להדפיס את הדוח, בחר הדפסה בתפריט קובץ של דפדפן האינטרנט. הדוח מכיל מקטע טבלת סיכום הכולל את הכותרת, תאריך, שם הקובץ, הערה תיאור, פרמטרים (מ', מיט ו r), אד50 עבור סוכן או משמש יחידני או בכל שילוב, והטבלה CI עבור כל שילוב אד50, אד 75, אד90, ואד95.
      הערה: ערך CI של < 1 מציין הסינרגטיות, הערך CI = 1 מציין additivity, וערך CI של > 1 מציין אנטגוניזם.

2. דור של נוירובלסטומה האנושי Xenografts בעכברים Scid גמא Nonobese הנד סוכרתית (NSG עכברים)

הערה: הכללת כל זיהום של התרבות תאים. מאז המטריקס קרום המרתף יוצר ג'ל מעל 5 ° C, כל אורח/ים ילד/cultureware או מדיה במגע עם קרום המרתף מטריקס הכימית צריך להיות prechilled/קר כמו קרח. לשמור על המטריקס קרום המרתף על קרח במהלך התהליך כולו.

  1. הכנה של התליה תא IMR5
    1. הפשרת הכימית מטריקס קרום המרתף בן לילה על ידי השוקע המבחנה בקרח במקרר 4 ° C לפני השימוש.
    2. ביום 0, לקצור את IMR5 תאים בתרבית כמפורט לעיל.
    3. העבר את התאים צינור חרוטי 15 מ"ל ו צנטריפוגה ב x 300 גרם במשך 5 דקות.
    4. למחוק את תגובת שיקוע. לשטוף את התאים 2 x עם 15 מ"ל של PBS קר כקרח, ולהכין תא השעיה של 5 x 107 תאים/מ ב- PBS קר כקרח.
      הערה: אם יש צורך, להעביר התליה תא לרכבת התחתית microcentrifuge 1.5 mL.
    5. מערבולת המבחנה מטריקס קרום המרתף.
      הערה: הכימית מטריקס קרום המרתף צריך להיות הקרת, התפזרו.
    6. להוסיף אמצעי אחסון אחד של קרום המרתף מטריקס ריאגנט ולערבב אותו על-ידי pipetting כדי לקבל השעיה תא של 2.5 x 107 תאים /mL.
    7. לשמור על התליה תא על קרח.
  2. הכנה של העכברים
    הערה: העכברים צריך להיות בן 6-7 שבועות.
    1. לשמור על עכברים תחת תנאי ספציפי פתוגן-חופשית.
    2. לאפשר תקופת הסתגלות שלושה - חמישה ימים לאחר העכברים הגיעו.
    3. ביום של חיסון, לגלח את האגף היכן הזריקה יהיה (ראה שלב 2.3.6).
  3. הכנה של הזריקה תא הגידול
    הערה: לשמור את המתלה תא קר כקרח קרום המרתף מטריקס aseptic לאורך כל ההליך.
    1. לערבב את התאים, בזהירות לצייר התליה תא לתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 21 G.
    2. בדוק כדי לוודא שאין אין בועות אוויר במזרק.
    3. לחטא את האזור חיסון של העכבר באמצעות פתרון חיטוי.
    4. סחוט בעדינות את העור של העכבר לאגף בין האצבעות, במקום ההזרקה.
    5. הכנס את המחט בדיוק לקפל את העור. אין למקם את המחט עמוק לתוך הרקמה כדי להבטיח זריקה תת עורית.
    6. להזריק 100 µL IMR5 תא השעיה (קרי, 2.5 x 106 תאים) subcutaneously לתוך באגף הימני התחתון של העכברים.
    7. לסובב את המזרק כדי למנוע דליפה, לשלוף את המחט.
  4. מעקב אחר שינויים במשקל הגוף ואת הגידול
    1. למדוד את האורך (א) ורוחב (ב) של הגידול עם קליבר.
    2. לחשב את נפח הגידול באמצעות הנוסחה (א x B2) x 0.5.
    3. להתחיל טיפול כאשר הגידולים הגיעו בכמות ממוצעת של ~ 50-60 מ מ3.

3. סמים המינהל נוגדן בעכברים

  1. עירוי לוריד של mAb 8B6
    1. בזהירות ממלאים מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 25 גרם mAb פתרון....
    2. הנח את העכבר מתחת למנורת חום למשך 10 דקות להתרחב את הווריד הזנב.
    3. לרסן את העכבר restrainer מכרסמים.
    4. לחטא את האזור חיסון של העכבר באמצעות פתרון חיטוי.
    5. את המחט במקביל לוריד הזנב, 2-4 מ מ חודר לתוך לומן תוך שמירה על שיפוע של המחט הפנים כלפי מעלה (איור 3 א).
    6. מזריקים µL 100 של נוגדן פתרון לווריד (העירוי).
    7. עם סיום ההזרקה, בעדינות לחץ ההזרקה כדי למנוע דימום.
  2. בקרום הבטן מינהל topotecan
    1. לצייר את הפתרון סמים בתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 25 גרם.
    2. החזק את העכבר במצב פרקדן, עם הקצה האחורי מעט יותר גבוהה מהרגיל.
    3. לחטא את האזור חיסון של העכבר באמצעות פתרון חיטוי.
    4. אתר קו האמצע בבטן של העכבר ולחץ נפשית לחלק את הבטן הגזרות. אתר ההזרקה ברביע הימני או השמאלי התחתון (איור 3B).
    5. הכנס את המחט לתוך. חלל הבטן (5 מ מ עמוקה) ב ~ 10° זווית, ברביע התחתון ימינה או שמאלה.
    6. להזריק 100 µL של סמים פתרון intraperitoneally (i.p.).
    7. לחטא את האתר חיסון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

התוצאות נציג ודמויות מותאמים באישור מוקדם יותר לאור העבודה14.

8B6 mAb anti-OAcGD2 משפר בסינרגיה אפקטים המעכבת של Topotecan על צמיחת שורת תאים נוירובלסטומה:

כדי ליצור את התרופה ריכוז נוגדן כדי לשמש להערכת הסינרגטיות בין 8B6 topotecan, mAb, התרופה שהיא התכוונה נוגדן של IMR5 האנושי נוירובלסטומה תאים נמדדו תחילה, שימוש assay MTT. חש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כדי לחזות את התוצאה של תגובות בין תרופתיות, ניתן להשתמש בשלוש שיטות: מתודולוגיה isobologram17, מודל לא-ליניאריות תערובת18ו השילוב מדד1. ניתוח מדד משולב הוא הנפוץ ביותר בשימוש כי היישום שלה היא פשוטה בשל הזמינות של תוכנית מחשב ידידותי למשתמש. למטרה זו, אנו קודם מאופיין התגובה מינון-אפקט של כל סוכן להשתמש לבד או בשילוב, על ידי ביצוע וזמינותו של MTT19. מתודולוגיה זו מתבססת על היכולת של התאים קיימא כדי להפחית את המלח tetrazolium ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

S.Fa. ג'יי, ומסווגים המיועדים לשמש הממציאים של ממתינים פטנטים המכסים את היישום הקליני של נוגדנים אנטי-O-אצטיל-GD2 טיפולית.

תודות

להעניק תמיכה: Fondation דה Projet דה L 'אוניברסיטת דה נאנט, les Bagouz' א' מאנון, הליגה חדר מרווח וחדיש le סרטן comité דה לה לואר-מלון אטלנטיק, comité du Morbihan ולאחר comité דה Vendée, une רוז למזוג S.A.R.A.H, מרטין l ' etoile de la Société פרנסז דה Lutte חדר מרווח וחדיש לס סרטן et les leucémies de ל'אנפן et de L'adolescent (SFCE). מ ב וג'יי. אף נתמכים על ידי לה ליגה חדר מרווח וחדיש Le סרטן. המחברים תודה את למעבדות-המתקן Bonamy פרנסואה מבנה Fédérative דה רשרש. המחברים גם תודה ד ר ס סוזין (Inserm, פריז) למתן את התאים IMR5, גב' ח' Estéphan לסיוע טכני שלה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת שגשוג תאים (MTT)Roche11-465-007-001
תוכנת CompuSynComboSyn Combosynניתנת להורדה בחינם בכתובת http://www.combosyn.com
מכונת גילוח חשמליתBiosebBIO-1556
סרום עגל עובריEurobioCVFSVFF00-0110% סרום עגל עוברי מומת בחום ב-RPMI 1640
Firefox Mozilla CorporationFirefox בחינם בכתובת http://www.mozilla.org/en-US/firefox/
Heat lampVerre& קוורץ4003/1R
נוירובלסטומה אנושית IMR-5 קו תאיםAccegen BiotechnologyABC-TC0450IMR-5 הוא שיבוט של קו התאים הנוירובלסטומה האנושי IMR32 5459762. תאי IMR-5 סופקו בנדיבות על ידי ד"ר סנטוס סוסין (U.872, פריז, צרפת)
L-גלוטמיןGibco25030-0242 מ"מ בתמיסת ליזה RPMI 1640
nbsp;רוש 11-465-007-001
mAb 8B6אוניברסיטת נאנטN/A
MatrigelCorning354248
Multiskan FCThermofischer Scientific N08625
מחט 21G 1 ו-frac12;  304432BD Microlance
25G 1TerumoNN-2525R
עכברי NSGמעבדות צ'ארלס ריבר5557
Nunc MicroWell 96 בארות מיקרופלטותThermofisher167008
PBSVWRL182-10
PBS, 0,05% EDTASigma-AldrichE9884
PC שפועל Windows 7ניתןWindows 7 בכתובת http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7
פניצילין-סטרפטומיציןGibco15140-122100 יחידות/מ"ל פניצילין ו-100 מ"ג/מ"ל סטרפטומיצין במאגר ריאגנטים RPMI 1640
Thermofischer Scientific8094
מרסן מכרסמיםBiosebTV-150-SM
RPMI 1640Gibco31870-025
מזרק 1 מ"לHenke Sass Wolf5010.200V0
TopotecanSigma-AldrichT2705
ניתן להוריד את &מחט לרכוש את Microsoft

מקורות

  1. Chou, T. C. Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).
  2. Bayat Mokhtari, R., et al. Combination therapy in combating cancer. Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).
  3. Zahreddine, H., Borden, K. L. Mechanisms and insights into drug resistance in cancer. Frontiers in Pharmacology. 4, 28(2013).
  4. Martin, T. P., Baguley, D., et al. Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6. Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).
  5. Choi, B., et al. Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27. Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).
  6. Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy. Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).
  7. Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer. Journal of Hematology & Oncology. 6, 1(2013).
  8. Kowalczyk, A., et al. The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells. Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).
  9. Retter, M. W., et al. Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts. Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).
  10. Nakamura, K., et al. Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody. Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).
  11. Cochonneau, D., et al. Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo. Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).
  12. Chou, T. C., Martin, N. CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).
  13. Alvarez-Rueda, N., et al. A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity. PLoS One. 6 (9), e25220(2011).
  14. Faraj, S., et al. Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside. Oncoimmunology. 7 (1), e1373232(2017).
  15. Ishikawa, F., et al. Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice. Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).
  16. Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice. Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).
  17. Teicher, B. A. Assays for in vitro and in vivo synergy. Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).
  18. White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example. Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).
  19. Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
  20. Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix. Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).
  21. Thompson, J., et al. Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts. Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).
  22. Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures. Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).
  23. Tang, X. X., et al. Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma. Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).
  24. Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice. Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).
  25. Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines. International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).
  26. Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).
  27. Cheung, N. K., et al. Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma. Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).
  28. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  29. Dayde, D., et al. Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20. Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).
  30. Racki, W. J., et al. NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection. Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).
  31. Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer. Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

MTT
Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.