הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

לשעבר Vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר

7.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58347

⸱

4 באוקטובר 2018

 ,  , 
1Department of Physiology and Cell Biology, School of Medicine, University of Nevada, 2Department of Pharmacology, Larner College of Medicine, University of Vermont

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מציגים פרוטוקול סידן התמונה איתות באוכלוסיות של סוגי תאים בודדים באזור צומת עצב-שריר מאתר.

תקציר

ניתן לנטר את הפעילות החשמלית של תאי ברקמות בטכניקות אלקטרופיזיולוגיות, אך אלה הם בדרך כלל מוגבל לניתוח של תאים בודדים. מאז עלייה של תאיים סידן (Ca2 +) ציטוזול מתרחש לעיתים קרובות בגלל הפעילות החשמלית, או בתגובה מספר עצום של גירויים אחרים, תהליך זה יכול להיות במעקב על ידי ההדמיה של תאים נטען עם פלורסנט סידן רגיש צבענים.  עם זאת, קשה תמונה תגובה זו בסוג של תא בודד בתוך רקמת כל כי צבע אלה נתפסות על ידי כל סוגי תאים בתוך הרקמה. לעומת זאת, סידן מקודדים גנטית אינדיקטורים (GECIs) יכול לבוא לידי ביטוי על ידי סוג של תא בודד, לזרוח בתגובה לעליה של תאיים Ca2 +, וכך מאפשר ההדמיה של Ca2 + איתות של אוכלוסיות שלמות של סוגי תאים בודדים. כאן, אנו מיישמים את השימוש של GECIs GCaMP3/6 לצומת neuromuscular העכבר, תאי שוואן סינפסה התלת-צדדי בין מוטורי לגלוקוז, שרירי השלד מסוף/perisynaptic. נדגים את התועלת של טכניקה זו קלאסי שמחוץ רקמות ההכנות. שימוש של הפיצול אופטי, אנו מבצעים הדמיה כפולה באורך הגל של Ca דינמי2 + אותות ותווית סטטי של צומת עצב-שריר (NMJ) בגישה זה יכול להיות מותאם בקלות כדי לפקח על שני GECI תא ספציפי או מתח מקודדים גנטית אינדיקטורים (GEVI) בו זמנית. לבסוף, נדון את רוטינות המשמש ללכידה מפות מרחביות של עוצמת קרינה פלואורסצנטית. יחד, טכניקות אלו אופטי, מהונדס, אנליטית יכול להיות מועסק ללמוד את הפעילות הביולוגית של subpopulations תאים נפרדים ב- NMJ במגוון רחב של הקשרים.

מבוא

NMJ, כמו כל הסינפסות, מורכב משלושה אלמנטים: מסוף presynaptic נגזר תא עצב, תא נוירון postsynaptic/אפקטור, ותא perisynaptic גליה1,2. בעוד ההיבטים הבסיסיים של ההעברה הסינאפסית היו שהראו-זה סינפסה3, היבטים רבים של תהליך זה נשאר לא ידוע, בחלקו בשל הביטוי של מולקולות אותו על ידי אלמנטים הסלולר ברורים של סינפסה הזה. לדוגמה, קולטני פורין אדנין נוקלאוטיד ATP והן אצטילכולין (ACh), אשר פורסם במשותף על ידי מנוע נוירונים ב- NMJ חוליות, באים לידי ביטוי על ידי שריר, תאי שוואן מוטורי לגלוקוז, ובכך שמסבך את הפירוש של כל השפעה תפקודית שהופעל על ידי אלה חומרים (למשל, משדר השחרור או תגובה, יצירת כח השריר)4. יתר על כן, למרות NMJ מרכיבי ה-tripartite פשוטים בהשוואה, לדוגמה, נוירונים במערכת העצבים המרכזית אשר לעתים קרובות להפגין תשומות סינפטית מרובים, אם המנוע נוירונים, תאי שריר או תאי שוואן להשתנות בתגובה לגירויים מבוסס על מהותי שלהם הטרוגניות (למשל, נגזרת עובריים, סוג של סיבים, מורפולוגיה) אינו ברור. על מנת לטפל בכל הבעיות הללו, זה יהיה יתרון לאתר בו זמנית את התגובה של תאים רבים בתוך אחד רכיב סינפטית, כמו גם מסלול, באותו הזמן, תגובה כזו גם שאר הרכיבים נפרדים. אסטרטגיות המקובלת באמצעות צבעם למדוד סידן איתות לא יכול להשיג שתי מטרות אלה, בגלל צבע שהוחל אמבטיה הוא נלקח על ידי סוגי תאים מרובים לאחר היישום לרקמות, צבע טעון intracellularly יכול לשמש רק לדמיין גדודים נפרדים או קטן של תאים. כאן, ניצול העכברים הטרנסגניים לבטא GECIs תוכנן כדי למדוד סידן לתא ספציפי איתות, יחד עם הדמיה ספציפית, כלי תוכנה5, אנחנו מדגימים הראשון של אלה שתי מטרות הכוללת ונדון כיצד התוספת של חדש כלים הטרנסגניים יעזור להשיג השני. טכניקה זו יהיה שימושי עבור מי שמעוניין מעקב אחר הדינמיקה סידן או אחרים הסלולר איתות האירועים נצפות דרך גן מקודד חיישנים אופטיים אוכלוסיות תאים מרובים בו-זמנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

גידול בעלי חיים, ניסויים בוצעו על פי מוסדות לאומיים של בריאות המדריך עבור הטיפול, השימוש של חיות מעבדה, את IACUC-האוניברסיטה של נבאדה.

1. הכנת דיאפרגמות ועצבים הסרעפת מן העכברים הטרנסגניים

  1. לרכוש העכברים הטרנסגניים לנוקלאוטידים גנוטיפ אלו עכברים.
    הערה: תחל מפורטים בדף "מידע" עבור כל אחד אלו עכברים.
    1. מתרבים עכבר 3 ל 6-בן חודש לבטא עותק אחד של המתאים הטרנסגניים/דפיקה-ב Cre-הנהג אלל ועותקים אפס של אלל GCaMP3/6 מותנה עם עכבר השניה, באותו הגיל לבטא אחד או שני עותקים של תנאי GCaMP3 / 6 אלל ועותקים אפס של אלל נהג-Cre.
    2. גנוטיפ הגורים ומארק אלה שיש להם Cre והן מותנה אללים GCaMP3/6 – אלה ייקרא מעתה העכברים הטרנסגניים-כפול (למשל, Myf5-Cre, GCaMP3 מותנה)6.
      הערה: בדרך זו, כל הנתונים תפיק מן עכברים המבטאים עותק אחד של Cre והן מותנה אללים GCaMP3/6. הדבר חשוב במיוחד בעת הוספת בעכברים המוטנטים אחרים (למשל, הסתרה) הצלבים.
  2. מתי העכברים הטרנסגניים-כפול של הגיל המתאים (למשל, כמחנכת יום 0 או 5 [P0 או P5] או למבוגרים), המתת חסד העכברים על-ידי עריפת ראשו אותם עם מספריים (עבור עכברים צעיר יותר P10) או על-ידי הצבתם תא שאיפה איזופלוריין — כאשר הם כבר לא מגיבים צובט את הזנב עם זוג מלקחיים, הם מוכנים להקריב.
  3. להקריב את החיה על ידי עריפת ראש עם זוג מספריים.
  4. מדור באופן רוחבי על פני החיה כולו מתחת הכבד, מעל הלב והריאות במספריים iridectomy.
  5. לנתח הכבד, הלב, הריאות, וישתדלו לשמור על אורך עצב הסרעפת היא ארוכה דיה להיגרר אלקטרודה היניקה (קרי, 1-2 ס מ).
    הערה: ניתן לזהות את עצב הסרעפת השמאלית כמו פיסת רקמה שמזין את החלק המדיאלי של הסרעפת השמאלית לבן. זה בטח לא לחתוך בעת הסרת הריאות. עצב הסרעפת נכון פועל בתוך פיסת fascia כי גם מכיל את הווריד הנבוב העליון הוא דק, לבן יותר הווריד הנבוב. יחד, הם שניהם לחדור הסרעפת נכון המדיאלי.
  6. נוסף להסיר את בית החזה של עמוד השדרה, למעט הרכס דק סביב הסרעפת.
  7. הכנס צינור microfuge עם פתרון קרבס-חיזוק עם µg 1/mL 594-αBTX 10 דקות בחושך על הסרעפת ועל המדגם עצב הסרעפת.
    הערה: בריכוז זה של 594-αBTX תוויות ACh קולטנים (AChRs) בלי לחסום את תפקידם (תצפית אישי).

2. גירוי ורישום של פוטנציאל פעולה שריר

  1. באמצעות סיכות minutien, לשתק את הסרעפת על-ידי הצמדת אותם על צלחת 6 ס מ מצופה סיליקון ג'ל מבודד, מלא ~ 8 מ"ל של פתרון קרבס-צלצולים יותר מחומצן ולמקם אותו לבמה מיקרוסקופ. Perfuse את הסרעפת עם פתרון קרבס-חיזוק נוסף (8 מ לדקה) למשך 30 דקות.
    הערה: זה ומעכלת את לא מאוגד 594-αBTX, וכן equilibrates את הרקמה לאחר ניתוח.
  2. הפוך אלקטרודה היניקה לפי שיטות הוקמה7.
    1. בהגדלה X 4, שימוש micromanipulator, זוז האלקטרודה היניקה עצב הסרעפת השמאלית ולהחיל שאיבה על-ידי הוצאת הקנה של מזרק 5-mL מחובר לאורך צינור שאליו מחובר האלקטרודה היניקה.
      הערה: כאשר בהצלחה נמשכים אל האלקטרודה היניקה, עצב הסרעפת הוא מתוח. להפעיל את ממריץ ולעורר את הסרעפת עצב על ידי flipping את ידני לעבור 1 x.
    2. ודא כי הסרעפת חוזים בתגובה הגירוי 1-הרץ על ידי חזותית בודק אותה עם תאורה brightfield. אם לא, להתאים את המתח על-ידי הפעלת הידית מתח מצטבר להשגת דופק supramaximal, אשר ניתנת לאימות כמקורית על-ידי בדיקה ויזואלית של התכווצות שרירים. אם עדיין לא גלוי, לכבות את העצב עם המזרק ולנסות לצייר אותה שוב על-ידי החלת שאיבה.
  3. כבה את זלוף ולהוסיף את מעכב BHC שרירים ספציפיים צולבות הקישור חוטים שרירן6 או ממוצע-conotoxin8 אנטגוניסט ערוץ נתרן ממותגת מתח ריכוז סופי של 100 מיקרומטר.
    1. 100 מיקרומטר BHC, פיפטה µL 4 של מניות 200 מ מ של דימתיל סולפוקסיד ולחצו predilute זה ב 1 מ"ל של פתרון קרבס-צלצול.
    2. הסר 1 מ"ל של פתרון קרבס-הצלצול של המנה.
    3. הוסף את BHC prediluted, למנה.
      הערה: predilution זו מסייעת למנוע את אינדוקציה על ידי דימתיל סולפוקסיד מדולל של היענות פלורסנט לא ארעי בתאים המבטאים GCaMP3.
    4. המתן 30 דקות ולאחר מכן, הפעל את זלוף בפתרון קרבס-צלצול טריים למשך עוד 20-30 דקות.
  4. להכין את האלקטרודה הקלטה.
    1. להשתמש בכפפות, מניחים על filamented זכוכית בורוסיליקט בקוטר חיצוני (OD) של 1 מ מ, קוטר פנימי (ID) של 0.4 מ מ פולר micropipette והדק את החוגה כדי. תהדק את זה למקומו. סגור את הדלת פולר.
    2. שימוש של פולר P-97, לתכנת את ההגדרה הבאה: חום-900, ברגע האחרון 120, מהירות ב-75, הפעם 250, הלחץ 500, וכן אין לולאות נוספים.
      הערה: Resistance (R) נמדד באמצעות פקדי תוכנה של המגבר: התוכנה רכישת נתונים מאשר התנגדות על ידי פתירת הנוסחה V = IR. הבקר תוכנה עובר זרם ידוע (I) (בדרך כלל 1 nA) דרך האלקטרודה, מודד את השינוי במתח (V), ובכך מאפשר לנו למציאת המהירות
    3. עבור דיאפרגמות עובריים, ודא כי ההתנגדות היא ליד 60 MΩ, ובשביל דיאפרגמות בוגרים, 10-20 MΩ. לטעון את האלקטרודה הקלטה עם 3 מ' אשלגן כלורי.
  5. בהגדלה X 10, להוריד את האלקטרודה לתוך שריר, באמצעות micromanipulator השנייה מעברו האחר של הבמה כמו אלקטרודה מגרה.
  6. באמצעות תוכנה רכישת נתונים אלקטרופיזיולוגיות, המתן עד פוטנציאל ממברנה המנוחה משתנה מ- 0 ל-65 mV או בהמשך.
  7. לעורר 1 הרץ ואמת הנוכחות של פוטנציאלי פעולה השריר על-ידי בדיקת פוטנציאל גדול זה מוצגים להחטיא צנוע (פוטנציאל המתנשא מעל 0 mV כשזה מתחיל ב-65 mV או בהמשך). אל תבלבל החפץ גירוי עם פוטנציאל הפעולה.
    הערה: פוטנציאל הם באופן משמעותי יותר משך (~ 5 ms) מאשר גירוי חפצים.

3. הדמיה של זריחה המדגם

  1. בהגדלה X 20, לאתר הלהקה endplate במרכז של השריר על-ידי חיפוש 594-αBTX – שכותרתו ' NMJs תחת עירור אור ירוק/צהוב (550 ננומטר). לעבור עירור אור כחול (470 ננומטר) התמונה Ca2 + תגובות שריר, נוירון מוטורי או תאי שוואן.
  2. אם רצונך בכך, להגדיר המפצל תמונה עם מסננים bandpass ומסנן קצה חד ודיקרואיק זוהר עבור ההדמיה כפולה באורך הגל.
  3. על מנת לחשב פלורסצנטיות מקסימלי (Fmax) הוצגו על ידי רקמת GCaMP3/6-הבעת ', להוסיף µL 12 3 מ' אשלגן כלורי (אשלגן) ההכנות של הסרעפת6.
    1. לבצע ניסויים עם הבר בהירות על הבר טבלת בדיקת מידע מוגדר כ- 110% של רמת שבו הרקמה GCaMP3/6-הבעת ' מוצגים רוויה בהגדלה X 20, מבלי binning בתגובה אשלגן כלורי.
  4. שיא 20 מסגרות לשנייה לא תפספס שאירועים מהר.
  5. לעורר עם s 1-45 של 20-40 הרץ של גירוי עצבי על-ידי אספקת רכבת של דחפים באמצעות האלקטרודה יניקה או להוסיף אגוניסטים תרופתי על ידי יישום אמבט או זלוף ולאסוף דינמי פלורסנט Ca2 + תגובות בסוג של תא אחד יחד עם האות NMJ 594 סטטי-αBTX.
    הערה: אם רקמות ספציפיות אדום או מרחיקת אדום GECI או GEVI עכברים הופכים לזמינים לשימוש ב- NMJ, הם יכולים לשמש כדי לאסוף שני אותות דינמי המשקף את שני הרכיבים הסלולר ב- NMJ.
  6. כאשר הניסויים הדמיה או אלקטרופיזיולוגיות גמורים כי היה להשיג את התוצאות הרצויות, perfuse המים דרך הקווים זלוף ולמצוץ מים 2 x - x 3 דרך האלקטרודה שאיבה על מנת להבטיח כי מלחי לא לבנות.

4. ייצוא וניתוח של הנתונים באינטנסיביות סטיית תקן מפה של קרינה פלואורסצנטית (SDiu16)

  1. רצפי תמונות הרשומה רשמה 16 סיביות TIFF ערימות ולטעון אותן למערכת הרצויה הדמיה נתונים ניתוח לניתוח.
  2. בתפריט קובץ 8 קבוצו של התוכנה, בחר תמונה הערימה עניין ולחץ כדי לטעון.
    1. ברגע הוידאו נטען, יסרוק הזמן כדי לזהות סעיף זה אין פעילות פלורסנט הסלולר.
      הערה: אזור זה ישמש כדי ליצור מדגם רקע.
    2. החזק את מקש Shift ולחץ כדי לצייר אזור התיבה שנוספה (ROI) באזור מזוהה אזור הדגימה רקע.
    3. לאחר יצירת תיבת, לחצו על הרווח כדי ליצור חלקת רקע פעילות שינוי.
    4. המעקב באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר באפשרות מגוון להציג את האפשרות לזרוק רועי כטקסט כדי להפוך את האיתור כקובץ טקסט קואורדינטות xy.
  3. חוזרת הוידאו של הריבית, לסרוק שוב כדי לזהות את אזור הזמן שבו מתרחשת הפעילות של ריבית.
    1. באמצעות הכפתור האמצעי של העכבר, בחר באזור הזמן בתיבה זמן צהוב.
    2. לחץ לחיצה ימנית על הסרטון ובחר מחסנית OPS ולאחר מכן אפשרות למפות Stat 5.
      הערה: פעולה זו תיצור מפת סטיית תקן (SD מפה) בחלון השמאלי.
    3. לחץ על המפה SD ולאחר מכן הקש ] מפתח x 19 כדי להחיל את המפה חום הצבע המתאים.
    4. המפה SD באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר STM טען ושמור, אשר יציג את האפשרות לשמור את ה-stm כמו tiff לשמור את המפה SD.
    5. אז, הקש [ מפתח x 19 לשוב אל מפת צבע בגווני אפור.
    6. הקש C ולאחר מכן D כדי להעלות את צפיפות כלי מיפוי. באמצעות לחצן העכבר השמאלי ואת לחצן העכבר במרכז, להתאים את סף כדי לכלול כל פעילות פלורסנט שמוצג במפת ה-SD.
    7. הקש C כדי לסגור את הכלים צפיפות תוך שמירה על הגדרות הסף.
    8. המפה SD באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר חלקיקי ה-STM , ולאחר מכן למצוא את PTCLS.
      הערה: זה יהיה לזהות תאים בודדים לבטא פעילות פלורסנט.
    9. לחץ לחיצה ימנית על המפה SD פעם נוספת ובחר ליצור חלקיקים ROIs.
      הערה: זה להרכיב את התאים שנבחרו על הוידאו המקורי של עניין.
    10. תוך החזקת מקש shift לחוץ, לחץ לחיצה ימנית על כל אחד של החלקיק מזוהה עכשיו ROIs בסרטון המקורי.
    11. בחר סמן רועי ו- Int מידה ב- ROI.
      הערה: פעולה זו תיצור חלקות פעילויות פלורסנט נפרדים עבור כל רועי מזוהה בסרטון של ריבית. אלה יכולים להיות נשמר על-ידי לחיצה ימנית על כל אחד מאלו, בחירת Assorted, ואחריו לזרוק רועי כטקסט.
  4. לקבלת נתונים היסטוריים ההיגיון שבבסיס פעולות אלה, נא עיין קובץ קוד מקור9.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מספר דוגמאות של שינויים בעוצמה פלורסצנטיות, מתווכת על-ידי עליות של תאיים Ca2 + בתוך התא מוגדרים סוגי NMJ, להראות את התועלת של גישה זו. תוצאות אלו מוצגים כמו זריחה המרחבי בעוצמה מפות, אשר מספקים את מיקומו של תאים מגיבה, כמו גם את עוצמת התגובות שלהם, ובכך מאפשר על ההערכה של כמה תאים מגיב ומגיב כמה כל תא מסוים גירוי. לדוגמה, כפי שמוצג באיור1, לקחנו סרטונים של ההיענויות2 + Ca אוכלוסיה של מסוף/perisynaptic שוואן תאים (TPSCs)-NMJs של הסרעפת של...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן אנו מספקים דוגמאות של מדידת Ca2 + תגובות תאים מסוימים ברקמת עצב-שריר שלם, שימוש בעכברים לבטא GECI. על מנת לבצע בהצלחה ניסויים אלה, זה הכרחי כדי לא לפצוע את עצב הסרעפת בזמן. לשיקוף Ca2 + תגובות בתאי שוואן בעוצמה נמוך או גבוה (כלומר, 20 X או 60 X), יש צורך להשתמש BHC או ממוצע-conotoxin חסום לתנועה. עבור צריכת חשמל נמוכה הדמיה של Ca2 + תגובות בתאי השריר, זה ניתן למדוד אותם בהיעדרו של תרופות אלו, וכך מאפשר רכישה סימולטני של שריר Ca2 + ארעי עוצמות ושרירים אורך שינויים ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה בכספים של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) GM103554, GM110767 אל (T.W.G.) ומן המרכז הלאומי לחקר משאבי 5P20RR018751, את GM103513 8P 20 הלאומית המכון של כללי למדעי הרפואה (ל G.W.H.).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכברי Myf5-CreJax#007893מניע ביטוי תאי שריר כבר ב-E136
>Wnt1-Cre עכבריJax#003829מניע ביטוי לתוך הכל  תאי שוואן ב-E13 אך לא P209
>Sox10-Cre עכבריJax#025807מניע ביטוי תאי שוואן בגילאים מבוגרים יותר
עכברי GCaMP3 מותניםJax#029043מבטא GCaMP3 באופן ספציפי לתא
עכברי GCaMP6f מותניםJax#024105מבטא GCaMP6f באופן
ספציפי לתאBHC (3-(N-butylethanimidoyl)-4-hydroxy-2H-chromen-2-one)Hit2Lead#5102862חוסם מיוזין בשרירי השלד אך לא העברה עצבית6
>CF594-α-BTXBiotium#00007מסמן אשכולות קולטני אצטילכולין בפפטידים NMJ
µ-conotoxin GIIIbInt'l#CONO20-01000חוסם Nav1.4 תעלות נתרן תלויות מתח8
סיליקון דיאלקטרי ג'ל; הידוע גם בשם דבקי SylgardEllswoth# Sil Dielec Gel .9KG מאפשר קיבוע של הסרעפת על ידי פינים זעירים
פינים זעירים (קוטר 0.1 מ"מ)Fine ScienceTools 26002-10משתק דיאפרגמה על ג'ל סיליקון דיאלקטרי
Eclipse FN1 מיקרוסקופ זקוף NikonMBA74100מאפשר בימוי ותצפית על דגימה
פלטפורמת מיקרוסקופ קבועה בסיסית עם מתרגם מיקרוסקופ XY ידני Autom8MXMScrמאפשר תנועה של דגימה
מיקרומניפולטור ידני NarishigeM-152מכיל אלקטרודות הקלטה וגירוי 
מגבר מיקרואלקטרודה התקנים מולקולרייםAxoclamp 900Aמאפשר אלקטרודה חדה, הקלטה אלקטרופיזיולוגית תוך-תאית
מערכת רכישת נתונים מיקרואלקטרודה עם רעש נמוך, התקנים מולקולרייםDigidata 1550 מאפשר איסוף נתונים אלקטרופיזיולוגיים
מערכת ניתוח נתונים של מיקרואלקטרודותמכשירים מולקולרייםPCLAMP 10 תקןמבצע ניתוח נתונים אלקטרופיזיולוגיים
ממריץ גל מרובעדשאS48מגרה עצב לעורר שרירים
יחידת בידוד גירוידשאPSIU6מפחית  חפצי גירוי
חוטי בורוסיליקט, קוטר חיצוני 1.0 מ"מ, קוטר פנימי 0.5 מ"מ SutterFG-GBF100-50-15Impalas ומתעד פוטנציאל שרירים מעורר עצב חוטי
בורוסיליקט, קוטר חיצוני 1.5 מ"מ, קוטר פנימי 1.17 מ"מ SutterBF150-117-15מוארך ומשמש לאלקטרודה יניקה
חולץ מיקרופיפטהSutterP-97 מושך ומכין אלקטרודות הקלטה
1200x1200 פיקסלים, מצלמת cMOS עם תאורה אחורית PhotometricsPrime 95bמצלמה רגישה המאפשרת הדמיה ברזולוציה גבוהה ובמהירות גבוהה
מקור אורLumencorSpectra Xמספקת תאורה מנורות LED למניעת פלואורסצנטיות
  יעדי טבילה במים פלואורסצנטיים מתוקנים באינסוף, W.D. 2 מ"מ NikonCFI60מספק מרחקי עבודה ארוכים להדמיה של דגימה
תאורת סיבים אופטיים עם מנורת הלוגןSumitaLS-DWL-Nמספק תאורה לתצפית בשדה בהיר
W-View מפצל תמונות תאומים HamamatsuA12801-01מקרין זוג אחד של תמונות באורך גל כפול המופרדות על ידי מצלמה דיכרואית למצלמה בודדת
מסנני פס פס יחיד  (512/25-25 ו-630/92-25) SemRockFF01-512/25-25; FF01-630/92-25מאפשר הדמיה כפולה
560 ננומטר מפצל קרן דיכרואי חד-קצהSem RockFF560-FDi01-25x36מראה דיכרואית המפרידה בין אלומות אור כדי לאפשר הדמיה באורך גל כפול
מערכת רכישת נתוני הדמיהNikonNIS Elements - MQS31000מאפשרת רכישת נתוני הדמיה
מודול בקרת אורך גלמודול MQS41220 של Nikonלנתוני הדמיה acqusiition
מודול חומרה של מפצל פליטה מודול NikonMQS41410להדמיה של נתוני הדמיה
מערכת ניתוח נתוני הדמיהNAVolumetry 8D5, פיג'ימאפשר ניתוח של עוצמת הקרינה ונתוני הדמיה אחרים
: , ,

מקורות

  1. Sanes, J. R., Lichtman, J. W. Development of the vertebrate neuromuscular junction. Annual Review of Neuroscience. 22, 389-442 (1999).
  2. Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. Neuromuscular synaptogenesis: coordinating partners with multiple functions. Nature Reviews Neuroscience. 15 (11), 703-718 (2014).
  3. Fatt, P., Katz, B. An analysis of the end-plate potential recorded with an intracellular electrode. Journal of Physiology. 115 (3), 320-370 (1951).
  4. Todd, K. J., Robitaille, R. Purinergic modulation of synaptic signalling at the neuromuscular junction. Pflugers Archive. 452 (5), 608-614 (2006).
  5. Hennig, G. W., et al. Use of Genetically Encoded Calcium Indicators (GECIs) Combined with Advanced Motion Tracking Techniques to Examine the Behavior of Neurons and Glia in the Enteric Nervous System of the Intact Murine Colon. Frontiers of Cellular Neuroscience. 9, 436(2015).
  6. Heredia, D. J., Schubert, D., Maligireddy, S., Hennig, G. W., Gould, T. W. A Novel Striated Muscle-Specific Myosin-Blocking Drug for the Study of Neuromuscular Physiology. Frontiers of Cellular Neuroscience. 10, 276(2016).
  7. Johnson, B. R., Hauptman, S. A., Bonow, R. H. Construction of a simple suction electrode for extracellular recording and stimulation. Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 6 (1), A21-A26 (2007).
  8. Hong, S. J., Chang, C. C. Use of geographutoxin II (mu-conotoxin) for the study of neuromuscular transmission in mouse. British Journal of Pharmacology. 97 (3), 934-940 (1989).
  9. Heredia, D. J., Feng, C. Y., Hennig, G. W., Renden, R. B., Gould, T. W. Activity-induced Ca2+ signaling in perisynaptic Schwann cells of the early postnatal mouse is mediated by P2Y1 receptors and regulates muscle fatigue. Elife. 7, e30839(2018).
  10. Cho, J. H., et al. The GCaMP-R Family of Genetically Encoded Ratiometric Calcium Indicators. ACS Chemical Biology. 12 (4), 1066-1074 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

צומת עצבית-שריריתאינדיקטורים לסידן המקודדים גנטיתדימות באורכי גל כפוליםמפליט אופטיאלפא-בונגטוקסין פלואורסצנטיגירוי של העצב הפרנאידימות של תאי שוואןדימות של תאי שריר
לשעבר Vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.