הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

11.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58379

⸱

2 באוקטובר 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Johns Hopkins University School of Medicine, 2Department of Health, Beijing Military General Hospital, 3Southern Medical University, 4Department of Molecular and Cellular Physiology, Johns Hopkins University School of Medicine, 5Department of Gynecology and Obstetrics, Johns Hopkins University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים את התפתחות מודל העכבר PCOS דמוי רזה עם גלולה דיהידרוטסטוסטרון ללמוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

תקציר

Hyperandrogenemia משחק תפקיד קריטי בתפקוד הרבייה וחילוף אצל נקבות, סימן ההיכר של תסמונת השחלות הפוליציסטיות. פיתוח מודל רזה PCOS דמוי העכבר המחקה נשים עם PCOS הוא בעל משמעות קלינית. ב פרוטוקול זה, נתאר מודל כזה. על-ידי הוספת באורך 4 מ מ של DHT (דיהידרוטסטוסטרון) קריסטל אבקת גלולה (האורך הכולל של גלולה הוא 8 מ מ), מחליף אותו מדי חודש, אנחנו מסוגלים לייצר דגם עכבר דמוי-PCOS עם סרום DHT רמות 2 קיפול גבוה יותר מאשר עכברים לא מושתל דיהידרוטסטוסטרון (DHT-לא). הבחנו תפקוד הרבייה וחילוף ללא שינוי במשקל הגוף ואת הרכב הגוף. בעוד מפגין רמה גבוהה של בעיות פוריות, תת קבוצה קטנה של עכברים הנשי אלה PCOS כמו שאפשר להכנס להריון צאצאיהם מראים עיכוב ההתבגרות טסטוסטרון מוגבר כמבוגרים. המודל הזה PCOS דמוי העכבר רזה הוא כלי שימושי כדי לימוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

מבוא

Hyperandrogenism היא סימן ההיכר של תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) על פי קריטריונים NIH, של עודף אנדרוגן, החברה PCOS (AE-PCOS). נשים עם PCOS יש קושי להיכנס להריון, הגדילו את הסיכון לסיבוכים הריון1. אפילו אם הם להיכנס להריון, צאצאיהם נקבה יש2,של תוצאות בריאותיות שליליות3. מודלים אלו פותחו מגוון אסטרטגיות4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 . מציג תכונות רבות של PCOS (anovulation ו/או לקוי סובלנות גלוקוז, אינסולין) עם משקל גוף מוגבר והשמנה המשויך adipocyte מוגדלת בגודל ובמשקל מוגברת adipocyte ינאו ישנן שתי אסטרטגיות מרכזיות לייצר מודלים המשמשים ללמוד PCOS. אחד הוא טיפול עם רמות גבוהות של אנדרוגנים ישירות (אקסוגני אנדרוגן הכניסה/הזרקת) או בעקיפין (כגון חסימת המרה אנדרוגן לאסטרוגן עם ארומטאז) לאחר הלידה13. נוספת היא על ידי העובר hyperexposure של אנדרוגנים במהלך ההיריון14,15 ללמוד את הצאצא. לדוגמה, הצאצא הנקבה קוף רזוס16,17, כבשים18, מכרסמים שנחשפו לרמות זכר של אנדרוגן במהלך התקופה תוך רחמי לפתח תכונות כמו PCOS בהמשך החיים. מודלים אלה משופרת באופן משמעותי את ההבנה שלנו של אפקטים האנדרוגן, תיכנות העובר ואת ההשפעות הסביבתיות הרחם. עם זאת, מודלים אלה יש מגבלות משלו: 1) חיות לפתח השמנת יתר, לכן קשה להפריד את ההשפעות של hyperandrogenemia לבין השמנת יתר הנגרמת הרבייה מטבולי לקוי; 2) לפני ההריון, נשים עם PCOS כבר מוצג רמות גבוהות של אנדרוגנים, וכך נחשפו oocytes אנדרוגן עודף לפני ההפריה; 3) במינון תרופתי של טסטוסטרון (T) או דיהידרוטסטוסטרון (DHT) המשמש לאחר הלידה או במהלך ההיריון אינן משקפות בהכרח את הסביבה אנדרוגן של PCOS. נמדדו רמות טסטוסטרון ו- DHT נוזל הזקיקים בשחלות ו/או סרום, טסטוסטרון ו- DHT רמות הם מקפלים 1.5 ל 3.9 גבוהה יותר בנשים עם PCOS5,19,20,21 22, ,23 בהשוואה לנשים לא מושפע. יצרנו של העכבר למבוגרים דגם23,24,25 שמתפתח תפקוד הרבייה וחילוף בתוך שבועיים אתחול של חשיפה כרונית DHT מן ההכנסה של גלולה עם 4 מ מ אורך אבקת DHT קריסטל (האורך הכולל של גלולה הוא 8 מ מ). מודל זה מייצר רמות DHT בסרום שנמצאים על קיפול כפול גבוה יותר (המכונה 2xDHT) מזה של בקרת עכברים ללא טיפול DHT. העכברים 2xDHT לא להציג שינויים של לעשות LH, טסטוסטרון, אסטרדיול בסרום הבזליים לא לפתח השמנת יתר, ולהראות משקל דומה השחלות, רמות של כולסטרול, חומצות שומן, לפטין, TNFα ו- IL-623,24, 25 יחסית שולט אפילו עד 3.5 חודשים לאחר DHT ההכנסה23,24,25. בנוסף, על ידי הזדווגות הנקבות שכבר פיתחו תכונות של PCOS, נוכל ללמוד את ההשפעה של hyperandrogenic האימהי סביבה על הבריאות ועל הרבייה מטבולי של הצאצאים15.

הפרדיגמה החדשה (רלוונטי על הקריטריונים NIH וחברה AE-PCOS) מודלים המחלה על ידי ייצור דומה יחסית רמות אנדרוגנים לאלה של נשים עם PCOS 2 - טסטוסטרון גבוה יותר 3-fold או רמות DHT בהשוואה לנשים לא מושפע. עם זאת, מודל זה נשמר על ידי DHT אקסוגני מתמשך ולא hyperandrogenism אנדוגני מתוכנת ברגע DHT נסוגה. המטרה הכוללת של מאמר זה היא להתמקד 1) כיצד להפוך בגדר DHT; 2) כיצד לייצר רזה-PCOS כמו עכבר דוגמן 3) אסטרטגיות כדי להעריך את הצאצאים הנשי של אלה סכרים. אחרים מדידות והערכה של פנוטיפים שאינן מטופלות כתב יד זה אך ניתן למצוא5,15,23,24,25,26.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כאן, אנו מציגים נתונים היסטוריים פרוטוקולים עבור הכניסה והכנה של גלולה DHT, ולבדיקת הרבייה וחילוף. העכברים השתמשו במחקר זה היו מעורבים רקע (C57/B6, CD1, 129Sv), היו נשמרות עם אוכל ומים ad libitum במחזור/כהה 14/10 h ב 24 ° C במתקן ברודווי בניין מחקר בבעלי חיים בביה ס אוניברסיטת ג'ונס הופקינס של הרפואה. כל ההליכים אושרו על ידי ג'ונס הופקינס אוניברסיטת חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה.

1. יצירת מודל עכבר דמוי-PCOS

  1. DHT צניפה הכנה
    1. אוטוקלב אבובים silastic לחטא. לחתוך silastic צינורות באורך של 15 מ מ עם סכין גילוח;
    2. חותם צד אחד על ידי הזרקת סיליקון דבק רפואי לתוך הצינור עם מחט קהות 20 גרם המצורפת מזרק 3 מ. המשאבה צריכה להיות מופנמים מ המזרק ולאחר מכן דבק מוכנס לתוך המאגר. המשאבה היא להכניס מחדש, דבק נדחף למטה עד שיתחיל מגיחים המחט. המחט קהות נעשית על ידי חיתוך בצד קצה חד של 20 גרם המחט במספריים חזקים בכל. האורך של סיליקון בצינור צריך להיות יותר מ 2 מ מ כדי לאפשר חיתוך שלאחר הייצור;
    3. לילה יבש; בדוק אם יש בועות אוויר בצד אטום. אלה עם בועות אוויר לא משמשים כדורי DHT. אחרים יכולים לשמש כדורי הבקרה לא-DHT.
    4. ללבוש כפפות, מסיכה, משקפי מגן, חלוק המעבדה לפני ביצוע DHT-גלולה בשכונה כדי להימנע מחשיפה DHT העור.
    5. אבקת DHT לשפוך לתוך פלסטיק שוקלים הסירה ולחץ הצד הפתוח של הדבק הכתיר צינורות (מיוצר A1.1) לאבקה DHT.
    6. אבקת DHT יכול להיות מהודקת עם מהדק נייר גדול זה הוא straightened.  המשך עד DHT המגיע לגובה של 4 מ מ (או באורך הרצוי). בדוק את האורך של DHT עם סרגל, לאטום את הצד הפתוח עם סיליקון, יבש למשך הלילה.
    7. חותכים כל צד אטום כדי להפוך את האורך של סיליקון באורך של 2 מ מ. האורך הכולל של גלולה יהיה 8 מ מ.
    8. חותם צידי אבובים silastic ריק כמו גלולה שליטה (לא-DHT).
    9. שמור כדורי צינור חרוטי 50 מ ל עטוף בנייר כסף (כדי למנוע חשיפה קלה) בטמפרטורת החדר עד השימוש. כדורי DHT לשמור על יעילות מלאה במשך 3 חודשים לפחות של שטח אחסון.
  2. DHT ההכנסה והחלפת
    1. עד 20 DHT כדורי או שליטה כדורי טובע בנפרד צינור חרוטי 50 מ עם 30 מ ל סליין 0.9% סטרילי במשך 24 שעות ביממה ב- 37 °C עבור equilibration לפני הכניסה.
    2. לפני הניתוח, משטחים וכפפות תעוקר עם clidox, משטחי עבודה מכוסה פלסטיק נקי מגובה מגבוני נייר (משטח כירורגית).  כל הכלים יבואו במגע עם בעלי חיים הם ושוקמו מיציאתם המתקן בבעלי חיים על ידי autoclaving.  מכשירים יורשו יבש וקריר לפני השימוש.
    3. בן חודש 2 נקבות עכברים משמשים (4 – 5 עכברים/כלוב). עכברים מוזרקים intraperitoneally עם חריגות השירותים הווטרינריים (3.5 מ"ג/ק"ג bw), קטמין (78.8 mg/kg bw) באמצעות על מזרק אינסולין. חישובים עבור ערבוב של הרדמה הוא טבלה 1.
    4. לאחר הרדמה נאותה מושגת, כפי שהיא נמדדת על ידי אובדן של הבוהן רפלקס הנשימה מואטת, העכבר להיות הכנה לניתוח.
    5. לחטא את העור של האזור עם betadine בעזרת גזה סטרילי ונקי עם 70% אתנול.  האזור שוב ימותג betadine.
    6. לחתוך חור בסביבות 5 מ מ אורך עם מספריים מתחת לעור ליד הצוואר. שימוש של 10 גרם trochar, גורם מנהרה קטנה (15 מ מ) לכיוון rostral. בגדר נוסף dorsally עם trochar.
    7. הפתח ואז אטומה עם דבק כירורגי. משוער באופן ידני הפצע בקצוות עם מלקחיים וקווים צחצוח עדין כדי להחיל בשכבה דקיקה של דבק נוזלי על קצוות הפצעים משוערת. הצטברות 3 שכבות דק של דבק כדי לוודא שהדבק מופץ באופן שווה על הפצע. הדבק צריך להרחיב 1 ס מ מכל צד של קצוות הפצע. אני בטוח. בתפר או כירורגיים יכול לשמש גם כדי לסגור את החור. לשים עכברים בחזרה לכלוב, שוכן באופן אינדיבידואלי, עם כרית חום להתאוששות. החלפת גלולה כל 4 שבועות כדי לשמור על רמה קבועה של חשיפה אנדרוגן. בגדר המקורי יוסרו, גלולה החדש יתווסף כפי שמתואר A1.15 במצב דומה.
    8. בדיקה לאחר תקופת היובש estrous אחרי 3 ימים של DHT ההכנסה. ייחום הבמה מוערך על ידי ציטולוגיה הנרתיק.  תאי נרתיק נאספים 16 ימים רצופים על-ידי שימוש pipettor p10 להשפריץ מלח סטרילית (µL סביב 10) לתוך חלל הנרתיק ואז פורש את תמיסת המלח עם קצה פיפטה עקר אותו.  תאי נרתיק sloughed של קיר הנרתיק לערבב עם תמיסת מלח, נאספים.
    9. מורחים תמיסת מלח עם תאים לשקופית עם תוויות. כל שקופית יכול להכיל ששת המדגמים. שקופיות מסומנות לציין איזו דגימה ממוקמת בכל אחד מהמיקומים שש.
    10. לאחר מלוחים יש לגמרי התייבש בשקופית, לשים שקופיות לתוך מיכל עם 100% אתנול לתקן תאים. שקופיות להיות קבועה לפחות 5 דקות, אך יכול להישאר לשבועיים ללא הגבלת זמן עד שימוש נוסף.
    11. להכניס שקופיות פתרונות מכתימים 1 דקות כל עבור מאגר B ושקופיות ג לשטוף עם מים מהברז ויבש בטמפרטורת החדר.
    12. בדוק מורפולוגיה תאים במיקרוסקופ 10 X אובייקטיבית אור.  מורפולוגיה לתא להבחין proestrus (P), ייחום (E), metestrus (ז), diestrus (ד) מתואר הפניות27,28,29.
    13. ספירת הימים בכל שלב ומופרדים המספר הכולל של ימים כדי לחשב את אחוז הזמן בכל שלב.
    14. מבחן גלוקוזה ב 21 ימים לאחר ההוספה DHT על ידי צום העכברים בן לילה (16 שעות), הזרקת דור 2/ק"ג משקל גוף של dextrose 20% intraperitoneally. לדוגמה, אם משקל הגוף העכבר 25 גרם, העכבר הזה להיות מוזרק עם 250 µL של 20% דקסטרוז עם מזרק אינסולין 50 cc (0.5 מ ל). רמות הגלוקוז הם מוערך על ידי רצועות סוכר ובדיקה באמצעות דגימת דם וריד הזנב-0, 15, 30, 60, 90, 120 דקות. זה מתואר ב פירוט במקום30.
  3. איסוף דם
    1. לאסוף דם שונים ימים לאחר ההוספה DHT (אנחנו נגביל אוסף נפח µL 100 על סטרואידים, 30ul עבור LH/FSH assay) בין 9 ל-10 בבוקר על ידי submandibular הווריד. מדמם עם lancet. זה מתואר ב-11.
    2. צנטריפוגה דם ב x 6,000 g ב- 4 ˚C למשך 10 דקות, ולאסוף את השכבה סרום לתוך צינור 1.5 mL אחר שניתן לאחסן ב- 80 °C עד וזמינותו.

2. להעריך את הרבייה פרופילים של הצאצאים הנשי של DHT באופן כרוני מוכנס סכרים

  1. הזדווגות
    1. העכבר הנשי להיבדק מועברת לתוך הכלוב עם זכר מפרה מוכחת (שהיה לה בעבר הגורים עם עכבר נקבה)-15 ימים לאחר הכניסה גלולה.
    2. המסמך משקל הגוף של סכר כל שבוע כדי לקבוע אם העכבר בהריון. סכר משקל בעליות של יותר מ 3 g תוך שבוע מצביעה על הריון.
    3. איסוף הדם של סכרים השבוע השני לאחר שאנו צופים משקל הגוף מוגברת של סכרים גדול יותר מאשר 3g של שבוע לפני.
  2. גיל ההתבגרות לאומדן פתח הנרתיק, ייחום ראשון
    1. בדוק את פתח הנרתיק על-ידי בדיקה ויזואלית כל יום לאחר הגורים נגמלים ביום 21 אחרי לידה (PND), למדוד את המרחק anogenital ולהקליט הגיל של פתח הנרתיק.
    2. פעם נפתח הנרתיק, לאסוף תאי נרתיק מדי יום, כפי שמתואר 1.2.8–1.2.11 כדי לבדוק estrous לאחר תקופת היובש.
    3. להתבונן תא מורפולוגיה כפי שמתואר 1.2.12, ייחום ראשון מוגדר לתאריך כי כל התאים הם תאי אפיתל cornified.
  3. אגרוף במשקל ועל אוזנו הגוף
    1. טובלים את הטיפ נולד לתוך העיסה קעקוע לסמן כל pup עם קעקוע על הבוהן, כפי שמתואר הפניה12 -7 PND ואני שוקל עכברים מדי 7 ימים עד 70 ימים של גיל.
    2. עכברים ניקוב האוזן צריכים למספר אותם באמצעות מערכת איור 1 בין 12 עד 16 PND. כדי להבחין בין מין, לבחון בצד הגחוני של הגוף, הנקבות יהיה גלויים הפטמות.
    3. לאסוף את הדם-21, 26, 70 PND לאחר הלידה כפי שמתואר לעיל 1.3.1
  4. Assay הורמונלי
    1. רמות DHT בנסיוב הדם נמדדים על ידי שניהם מקושרים-אנזים immunosorbent assay (אליסה), באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית טנדם מסה ספקטרומטר (LC-MS)23,24,31,32. T נמדד על ידי LC-MS, או עכברוש/עכבר אליסה זה אומת על-ידי אוניברסיטת וירג'יניה ליגנד Assay הליבה במרכז לחקר רבייה23,24.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

רמות DHT בסרום ובדיקה סובלנות גלוקוז

רמות DHT נמדדו מסרום שנאספו על ידי שני אליסה ועל ידי LC-MS לפי פרוטוקול 1.24 – 1.25, 2.9, 3.0. הערכים המוחלטים של DHT שונים בין ספקטרומטר מסה, אליסה, עם זאת, כאשר הקיפול יחסית (בסביבות 2-fold) של DHT לעומת לא-DHT ההכנסה של שני מבחני ודי דומה על פני ניסויים15,23,24 ( איור 2A...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

Hyperandrogenism היא תכונה מרכזית של PCOS. סרום DHT רמות (שני לקפל גבוה בעכברים DHT מאשר בעכברים לא-DHT) בשימוש פרוטוקול זה נמוכים יותר מאלה שדווחו על-ידי חוקרים אחרים במחקרים קודמים, מכוילים לחקות באופן יחסי נשים עם PCOS5,19, 20,21. שלא כמו דגמים אחרים, מודל DHT 2-fold זה אינו משנה את משקל הגוף ואת הרכב הגוף כולו לעומת לא-DHT עכברים עד 3.5 חודשים לאחר DHT ההכנסה23...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

שום דבר לא לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (מענקים R00-HD068130 כדי ייגמר בתיקו), המרכז לחקר הסוכרת בולטימור: טייסים וגרנט היתכנות (כדי ייגמר בתיקו).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אבקת 5α-DHT גבישיתSigma-AldrichA8380-1G
Dow Corning צינורות סילסטייםפישר סיינטיפיק11-189-15D0.04 אינץ'/1 מ"מ קוטר פנימי x0.085 אינץ'/2.15 מ"מ קוטר חיצוני
דבק רפואי סיליקוןגורם II, InC.משקפי A-100
, מעילי מעבדה, כפפות ומסכות.
10 ומיקרו; L קצות פיפטה ללא פילטרארה"ב Scientific11113700
מיקרוסקופ שקופית למריחהפישר סיינטיפיק12-550-003
Diff Quik לצביעה תאיםפישר סיינטיפיקNC9979740
LancetFisher ScientificNC9416572
3 מ"ל מזרקBecton, Dickinson and Company (BD),30985
מחט מחוברת: 20 גרםBD305176
סרגל: כל אורך מ-10 ס"מ בקנה מידה מילימטר.
קסילזיןוטרינר אחד AnnSeA LA, MWI, BoiseNDC13985-704-10100 מ"ג/מ"ל
קטמין הידרוכלורידHospira, IncNDC 0409-2051-05100 מ"ג/מ"ל
מצרך כירורגיAutoClip® מערכת, Fine Science Tool12020-00
מזרק אינסוליןBD3294611/2 CC, מינון נמוך U-100 מזרק אינסולין
Trocarמחקר חדשני של אמריקהMP-182
מיקרוסקופCarl Zeiss Primo Star415500-0010-001גרמניה
אגרוף אוזנייםפישר סיינטיפיק13-812-201
טסטוסטרון עכברוש/עכבר ELISA ערכהIBLB79174
DHT ELISA ערכתאלפא דיאגנוסטיקה בינלאומית1940
מגע אחד אולטרה גלוקומטרLife Scan, Inc.
פסי בדיקה אולטרה בנגיעה אחת LifeScan, Inc.
צינור אפנדורףפישר סיינטיפיק05-402-18
סכין גילוחפישר סיינטיפיק12-640
קלידוקספישר סיינטיפיקNC0089321
תחתון כירורגיפישר סיינטיפיק50587953יצרן: Andwin Scientific 56616018
תמיסת חיטוי בטדיןWalgreens
3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)3M מדע. מיושם בחיים

מקורות

  1. Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
  2. Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring. Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).
  3. de Wilde, M. A., et al. Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort. Reprod. Sci. , 1933719117749761 (2018).
  4. Caldwell, A. S., et al. Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models. Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).
  5. van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS. Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).
  6. Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions. Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).
  7. Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. Polycystic ovary syndrome and its developmental origins. Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).
  8. Kauffman, A. S., et al. A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice. Biol Reprod. 93 (3), 69(2015).
  9. Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome. PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).
  10. Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease. Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).
  11. Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions. Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).
  12. Yanes, L. L., et al. Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome. Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).
  13. Kauffman, A. S., et al. A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice. Biol. Reprod. 93 (3), 69(2015).
  14. Filippou, P., Homburg, R. Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS? Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).
  15. Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve. Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).
  16. Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome? Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).
  17. Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis. J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).
  18. Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype. Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).
  19. Pierre, A., et al. Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome. J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).
  20. Dumesic, D. A., et al. Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women. J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).
  21. Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome. J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).
  22. Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism. Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).
  23. Ma, Y., et al. Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction. Endocrinology. , en20161608(2016).
  24. Andrisse, S., et al. Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms. Endocrinology. , en20161553(2016).
  25. Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice. Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).
  26. van Houten, E. L., Visser, J. A. Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function? Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).
  27. Caligioni, C. S. Assessing reproductive status/stages in mice. Curr. Protoc. Neurosci. , Appendix 4, Appendix 4I (2009).
  28. Wu, S., et al. Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice. Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).
  29. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology. Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).
  30. Dinger, K., et al. Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes. Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).
  31. Nilsson, M. E., et al. Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. Endocrinology. 156 (7), (2015).
  32. McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).
  33. Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats. J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).
  34. Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. 17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells. J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

DHTDHT
מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.