כאן נתאר 3 מודלים פציעה דג זברה מבוגרים, שלהם להשתמש בשילוב עם טיפול תרופות לדיכוי המערכת החיסונית. אנו מספקים הדרכה על הדמיה של התחדשות הרקמות ועל גילוי מינרליזציה עצם המצוי בו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם
במאמר זה
סיכום
תקציר
דג זברה מסוגלים להתחדש איברים שונים, כולל תוספות (סנפיר) לאחר קטיעה. פעולה זו כרוכה לרגנרציה של העצם, אשר מתחדש בערך שבועיים לאחר פציעה. יתר על כן, דג זברה מסוגלים לרפא עצם במהירות לאחר trepanation של הגולגולת, ותיקון שברים זה יכול להיות בקלות מוחדרים קרני גרמית סנפיר דג זברה. מבחני פציעה אלה מייצגים פרדיגמות ניסיוני האפשריים כדי לבחון את ההשפעה של תרופות מנוהלת על במהירות ויוצרים העצם. כאן נתאר את השימוש של מודלים אלה פציעה 3 ואת שלהם להשתמש בשילוב עם טיפול מערכתי glucocorticoid, אשר מפעילה עצם מעכבות ואפקטים לדיכוי המערכת החיסונית. אנו מספקים זרימת עבודה כיצד להתכונן לטיפול לדיכוי המערכת החיסונית דג זברה למבוגרים, להמחיש כיצד לבצע קטיעה פין, trepanation של calvarial עצמות, שברים סנפיר, ולתאר כיצד השימוש glucocorticoids משפיעה על שני יוצרי העצם תאי העצם, תאי של שושלת היוחסין מונוציט/מקרופאג כחלק מולדת חסינות רקמת העצם.
מבוא
דג זברה מייצגים במודל בעלי חיים רב עוצמה ללמוד פיתוח חוליות ומחלות. זה בשל העובדה כי הם חיות קטנות זה מתרבים טוב מאוד, כי הגנום שלהם הוא מלא ברצף, לבצע מניפולציה1. יתרונות נוספים כוללים את האפשרות לבצע הדמיה חיה המשך בשלבים שונים, לרבות ויוו הדמיה של דג זברה בוגרת2והיכולת לבצע תפוקה גבוהה סמים מסכי דג זברה הזחלים3. בנוסף, דג זברה בעלי קיבולת גבוהה משובי במגוון של איברים ורקמות כולל העצם, ובכך לשמש מערכת שימושי כדי ללמוד מחלת השלד ותיקון4,5.
אוסטאופורוזיס glucocorticoid-induced (ג'יו) היא מחלה הנובעת טיפ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על-ידי דרזדן Landesdirektion (היתר מספרים: AZ 24D-9168.11-1/2008-1, AZ 24-9168.11-1/2011-52, AZ 24-9168.11-1/2013-5, AZ 24-9168.11-1/2013-14, AZ DD24.1-5131/354/87).
1. הכנת חומרים ופתרונות
הערה: Prednisolone, כמו אחרים glucocorticoids, מוביל החיסוני. לפיכך, אמצעי זהירות חייב להילקח כדי למנוע זיהום אצל מטופלים בעלי חיים במהלך הניסוי. כדי הזה סוף, כלי זכוכית אוטוקלב "הדג, מים (דהיינו, המים המשמשים אחורי דג זברה בוגרת) לפני תחילת הניסוי.
- לחשב את המספר של דג זברה כדי לשמש את הניסוי. הקפד לכלול אנשים לשמש כפקדי.
- אוטוקלב 600 מ ל זכוכית מכוסים ברדיד אלומיניום עם....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
פרוטוקול המובאת כאן שימש שוב ושוב כדי לעודד היווצרות העצם מהיר במהלך התחדשות של ה דג זברה סנפיר והגולגולת10,11,16. בשילוב עם שיטת הציג prednisolone המינהל, מחקרים על ההשפעות של prednisolone במהלך התחדשות העצם יכול להיות נרדף. לדוגמה, ניתן לבצע מחקרים על היווצרות העצם ואת מינרליזציה ב להתחדש. נגד, כמו אחרים19,glucocorticoids20, מוביל עיכוב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
דג זברה הוכיחו מועיל במחקר שלד לגבי רבים. מוטציות שנבחר לחקות היבטים של מחלות אנושיות כגון פרכת או דלקת מפרקים ניוונית23,24,25,26,27, הזחלים, כמו גם סולמות משמשות כדי לזהות העצם תרכובות סטרואידים אנבוליים מולקולה קטנה מסכי7,28,29. הטיפולים של דג זברה עם סמים המוחלות ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי מענק מרכז של משובי טיפולים דרזדן ("דג זברה כמודל לפענח את המנגנונים של אובדן עצם המושרה glucocorticoid"), בנוסף על ידי מענק של פתוח (Transregio 67, פרויקט 387653785) כדי FK. אנחנו מאוד אסירי תודה. Jan Kaslin, Chekuru אווינאש עבור שלהם הדרכה וסיוע על ביצוע trepanation של calvariae, שברים סנפיר גרמית קרני הניסויים היו תוכנן, שבוצעה, נותחו על ידי ק ג, FK. FK כתב היד. כן נרצה להודות Katrin למברט, ניקול Cudak וחברים אחרים של מעבדות קנופף וברנד לקבלת סיוע טכני ודיון. תודתנו גם הולך אל פישר מריקה, Jitka Michling לטיפול דגים מעולה, הנרייטה קנופף, ג'וש קורי להגהת כתב היד.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פרדניזולון | סיגמא-אולדריץ' | P6004 | |
| דימתילסולפוקסיד (DMSO) | סיגמא-אולדריץ' | D8418 | |
| אתיל-3-אמינובנזואט מתאנסולפונאט (MS-222) | סיגמא-אולדריץ' | A5040 | |
| מלקחיים קהים | Aesculap | BD027R | |
| מלקחיים עדינים | דומונט | 91150-20 | |
| אזמל | בראון | 5518059 | |
| 840004 | Agarose | Biozym | |
| (0.3 מ"מ x 13 מ"מ) | BD Beckton Dickinson | 30400 | |
| Micro Drill | Cell Point Scientific | 67-1000 | מופץ למשל על ידי Harvard Apparatus |
| Steel Burrs (0.5 µ קוטר מ') | כלי מדע עדין | 19007-05 | |
| Artemia ssp. | Sanders | 425GR | |
| פיפטה פסטר (פלסטיק, פסטה) | Alpha Labs | LW4111 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| אבקת S אדומה אליזרין | Sigma-Aldrich | A5533 | |
| כחול אלצ'יאן 8 GX | סיגמא-אולדריץ' | A5268 | |
| Calcein | סיגמא-אולדריץ' | C0875 | |
| טריפסין | סיגמא-אולדריץ' | T7409 | |
| סטריאומיקרוסקופ | Leica | MZ16 FA | עם מצלמת QIMAGING RETIGA-SRV |
| סטריאומיקרוסקופ | אולימפוס | MVX10 | עם מצלמת אולימפוס DP71 או DP80 |
מקורות
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).
- Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish. Nature Protocols.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
