הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דיכוי צמיחת תאים מיאלומה In Vivo על ידי ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-נמסר MALAT1 Antisense Oligos

5.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58598

⸱

13 בדצמבר 2018

 ,  , 
1Department of Cancer Biology, Lerner Research Institute, Cleveland Clinic, 2Department of Medical Oncology, Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כתב יד זה מתאר את הסינתזה של ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-מצומדת MALAT1 antisense gapmer דנ א oligonucleotide (SWCNT-נגד-MALAT1), אשר מדגים מסירת SWCNT אמין, חזק טיפולית והשפעת anti-MALAT1 במבחנה, ויוו. שיטות להשתמש של סינתזה, שינוי, ההטיה, הזרקה של SWCNT-נגד-MALAT1 מתוארים.

תקציר

ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT) הוא סוג חדש של ננו-חלקיק, אשר שימש כדי לספק מספר סוגי סמים לתוך תאים, כגון חלבונים, oligonucleotides, תרופות סינתטיות מולקולה קטנה. SWCNT המימדים הניתנות להתאמה אישית, שטחי אזור גדול, באפשרותך לאגוד בגמישות עם סמים דרך שינויים שונים על פני השטח שלו; לכן, זה מערכת אידיאלי להעברת סמים לתוך התאים. זמן noncoding RNAs (lncRNAs) הם מקבץ של יותר מ 200 noncoding RNA nt, אשר לא יכול להיות מתורגם לחלבון אבל יש תפקיד חשוב בתהליכים ביולוגיים, הקשורים pathophysiological. גרורות-הקשורים ריאות אדנוקרצינומה התעתיק 1 (MALAT1) הוא lncRNA שנשמרת מאוד. הוכח כי רמות MALAT1 גבוהות קשורות על פרוגנוזה גרועה סוגי סרטן שונים, לרבות מיאלומה נפוצה (מ מ). נחשפו MALAT1 מווסת את תיקון ה-DNA ומוות תא מ מ; לפיכך, MALAT1 יכול להיחשב מטרה טיפולית עבור מ מ. עם זאת, oligo antisense מסירת יעיל כדי לעכב/נוקאאוט MALAT1 ויוו היא עדיין בעיה. במחקר זה, לנו לשנות את SWCNT עם פג-2000 ו נזווג oligo anti-MALAT1 אליו לבדוק את המשלוח של מתחם זה במבחנה, תזריק את זה דרך הווריד למודל בעכבר של מ מ המופץ, להתבונן על עיכוב משמעותי של התקדמות מ מ, אשר מציינת SWCNT הזה הוא הסעה משלוח אידיאלי עבור gapmer אנטי-MALAT1 ה-DNA.

מבוא

SWCNT הוא nanomaterial חדשניים שיכולים לספק סוגים שונים של תרופות, כגון חלבונים, מולקולות קטנות, חומצות גרעין, stably וביעילות עם סבילות אידיאלי, רעילות מינימלית חוץ גופית1 וויוו2. SWCNT functionalized יש נהדר מסיסות הביו ומים, יכול לשמש הסעות עבור מולקולות קטנות יותר, והוא מסוגל לשאת להן לחדור את קרום התא3,4,5.

lncRNAs הם מקבץ של RNA (> 200 nt) זה משוקלטים מן הגנום ל mRNA אבל לא ניתן היה לתרגם את החלבונים. הוכחה גוברת הראו כי lncRNAs להשתתף ברגולציה של ביטוי גנים6 , מעורבים החניכה, התקדמות של רוב סוגי סרטן, כולל מ מ7,8,9. MALAT1 הוא תעתיק noncoding גרעיני מועשר 2 (NEAT2), מאוד שנשמרת lncRNA10. MALAT1 מזוהה בתחילה ריאות שאינם קטנים התא גרורתית סרטן (NSCLC)11, אבל יש כבר overexpressed רבים גידולים5,12,13; הוא נחשב לאחד lncRNAs ביטוי ביותר, הוא מתואם עם פרוגנוזה גרועה מ מ8,14. רמת הביטוי של MALAT1 גבוה משמעותית בחולים קורס קטלני extramedullary מ"מ לעומת אלו שאובחנו רק מ מ15.

במחקר הקודם, יש לנו אישר כי אנטי-MALAT1 oligos robustly לגרום נזק לדנ א אפופטוזיס מ מ16 באמצעות gapmer DNA antisense oligonucleotides מיקוד MALAT1 (אנטי-MALAT1) בתאים מ מ. ה-DNA gapmer המורכב antisense DNA, מקושרים על ידי 2'-הביתה-RNAs, אשר יכול לבקש MALAT1 המחשוף מאת RNase H פעילות פעם מאוגד17. יעילות משלוח ויוו antisense oligos עדיין מגבילה את השימוש הקליני.

כדי לבדוק את המשלוח אפקט של SWCNT אנטי-MALAT1 gapmer oligos, gapmer אנטי-MALAT1 ה-DNA היא מצומדת כדי DSPE-PEG2000-אמין functionalized SWCNT. SWCNT-נגד-MALAT1 מכן מוזרק לווריד מודל העכבר המופץ מ מ; עיכוב בולט הוא ציין לאחר ארבעה טיפולים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים המערבות בעלי חיים אושרו מראש על-ידי IACUC מרפאת קליבלנד (אכפת לי חיה המוסדית והוועדה שימוש).

1. סינתזה של Functionalized SWCNTs

  1. מערבבים 1 מ ג של SWCNTs, 5 מ"ג של DSPE-PEG2000-אמין ו 5 מ ל מים נטולי נוקלאז סטיריליים בקבוקון נצנוץ זכוכית (20 מ ל). לנער את זה טוב כדי להמיס כל ריאגנטים לחלוטין.
  2. Sonicate את המבחנה ב sonicator אמבט מים ברמת הכוח של 40 W לשעה בטמפרטורת החדר (RT, מינימום 20 x 3, להחליף את המים כל 20 דקות כדי למנוע התחממות יתר). לאחר מכן, centrifuge זה ב x 24,000 g עבור 6-אייץ ' ולאסוף את הפתרון supernatant. ניתן לאחסן פתרון פונקציונלי זה SWCNT ב 4 מעלות צלזיוס למשך חודשיים.
  3. להוסיף 1 מ"ל של פתרון SWCNT מהשלב 1.2 למכשיר 100 kDa MWCO צנטריפוגלי מסנן, ואחריו 4 מיליליטר מים נטולי נוקלאז מעוקר. צנטריפוגה 10 דקות ב x 4,000 g ב- RT כדי להסיר תוספת DSPE-PEG2000-אמין. חזור על התוספת של 4 מ של מים, צנטריפוגה 5 x. יותר מ- 0.5 mL של שאריות SWCNT פתרון יישאר במסנן לאחר כל צנטריפוגה.
  4. למדוד את הריכוז של הפתרון SWCNT שאריות במסנן באמצעות ספקטרומטר של UV/VIS ב 808 nm לאחר כביסה הסופי. הריכוז הסופי הוא בדרך כלל כ 50 מ ג/ליטר (מחושבת על-פי השיטה שפותחה על ידי ואח קם18).
    הערה: ודא DSPE-פג-functionalized ' SWCNTs הם מסיסים במים לאחר שלב 1.4 יציבים בפתרונות ביולוגיים שונים ללא צבירת גלויים לאחר מספר שבועות.

2. ההטיה של אנטי-MALAT1 Gapmer DNA ולצדו 2'-O RNAs ששונה כדי Functionalized SWCNT

  1. להוסיף 0.5 מ ג של Sulfo-LC-SPDP לתוך 450 µL של DSPE-PEG2000-אמין functionalized SWCNT. להוסיף µL 50 ל- 10 x PBS ולאחר מכן תקופת דגירה של 2 h-RT.
  2. כדי להסיר תוספת Sulfo-LC-SPDP, להוסיף את התגובה מ שלב 2.1 למכשיר 100 kDa MWCO צנטריפוגלי מסנן, ואחריו 4 מיליליטר מים נטולי נוקלאז. צנטריפוגה 10 דקות ב x 4,000 g -RT. חוזר התוספת של 4 מ"ל של מים, צנטריפוגה את 5 x.
  3. להוסיף 200 ננומטר תיול-השתנה anti-MALAT1-Cy3 gapmer DNA לתוך 1.5 מ של פתרון DTT מסחרי, תקופת דגירה של 90 דקות ב- RT. Purify את המוצר עם עמודה NAP-5, ע פ הפרוטוקול של היצרן. Elute האנטי-MALAT1-Cy3 עם µL 500 1 ללא נוקלאז סטיריליים x PBS.
    הערה: ניתן לאחסן את SWCNT functionalized עם DTT נוסף, אשר ייתכן קליב דיסולפידי נוסדים במהלך האחסון של gapmer אנטי-MALAT1 thiolated ה-DNA. ניתן להסיר את DTT נוסף לפי עמודה aNAP-5 לפני ההטיה עם SWCNT.
  4. לאסוף את הפתרון SWCNT DSPE-PEG2000-אמין sulfo-LC-SPDP-טיפול עזב את המסנן, לדלל את זה עם µL 500 של פתרון אנטי-MALAT1-Cy3. לאחר מכן, דגירה זה ב 4 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה. SWCNT-נגד-MALAT1 מצומדת שניתן לאחסן ב 4 מעלות צלזיוס למשך 3 שבועות. בעקבות הליך דומה SWCNT מצומדת עם oligo antisense לטרוף יכול להיות מסונתז והוא משמש SWCNT-control.

3. הזנב הזרקה לווריד של SWCNT-נגד-MALAT1

  1. ליצור מודל העכבר המופץ מ מ.
    1. כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר של השוואה, לארגן באופן אקראי 14 במנוד ראש. CB17-Prkdcscid/J עכברים (בן 8 שבועות) משפט או פקד קבוצות (שבע בכל קבוצה) עם אותו יחס זכר/נקבה.
    2. לנקות את הספסל מבצע ולחטא אותו עם אלכוהול 70%.
    3. השתמש מנורת חימום כדי לחמם את העכבר כדי לעזור הזנב הווריד להופיע. לרסן את העכבר כראוי עם restrainer הזרקה הזנב.
    4. מזריקים תאים 5 x 106 MM.1S-לוק-mCherry 50 µL ל- PBS דרך הווריד של זנב ללא הרדמה. הקש ההזרקה עם ספוגית אלכוהול עבור 30 ס' סמן העכבר מוזרק ולהחזיר את כלוב נקי.
  2. להתחיל את הטיפול ביום 7 אחרי הזריקה תא MM.1S.
    1. מזריקים µL 50 ל- PBS המכיל SWCNT-נגד-MALAT1 לווריד הזנב של העכבר. השתמש PBS המכילים SWCNT-הפקד כפקד.
    2. הקש ההזרקה עם ספוגית אלכוהול עבור 30 s.
    3. לצפות את הדימום המקומי על הזנב ואת ההתנהגות הכללית של העכבר עבור 1 דקות ולאחר מכן להחזירו כלוב נקי. להתבונן עכברים כל מוזרק שוב לפני שחזר לכלוב המדף, כדי לוודא כי הזריקות מתקבלים טוב.
  3. לחזור על הזריקה כל 7 ימים עד לסיום הניסוי.
    1. לסיים את הניסוי כאשר הבריאות הכללית של העכבר מבזה: כשאני לא אוכלת או שותה, את המראה של כפות רגליים חיוור, דימום תת עורי, קוצר נשימה, ירד פעילות, שיתוק של הגפיים התחתונות, ו/או מסה שניתן לגעת בהם הבטן הוא ציין.

4. הערכת התקדמות המחלה

  1. להעריך את המצב הכללי של העכברים בכל יום אחרי הזריקה תא MM.1S-לוק-mCherry. שים לב במיוחד אם העכברים לפתח משתק של הגפיים התחתונות.
  2. להעריך את הגידול באמצעות ויוו הדמיה המערכת 1 x שבוע, לפני הזריקה SWCNT-נגד-MALAT1.
    1. להכין טרי 15 מ"ג/מ"ל D-Luciferin עם 1 x PBS.
    2. עזים ומתנגד העכברים עם מכשיר אידוי איזופלוריין (3-5% עבור אינדוקציה ו 1 – 3% עבור תחזוקה, בהתאם למצב של העכברים).
    3. להזריק 150 מ"ג/ק"ג של D-Luciferin ב עכבר כל intraperitoneally, 5 דקות לפני הדמיה; לאחר מכן, תמונה העכברים במצב של שכיבה עם ספקטרום מערכת הדמיה.
    4. איסוף תמונות רציפים של העכברים כל 2 דקות, עד רוויה הפריה חוץ גופית. להתאים את מרווח הזמן לפי ספיגת/האות D-Luciferin.
  3. השתמש CO2 להקריב העכברים ברגע הסיום של הניסוי הוא הגיע.
  4. מאז זה מודל המופץ מ מ, תהליך העכברים כדלקמן.
    1. שוקלים את העכבר לפני ניתוח.
    2. לאסוף דם היקפיים מכל הלב עבור וזמינותו ספירת דם (CBC) המבוצעת על ידי מכונה מונה תאי הדם. את ספירת תאי דם לבנים, תאי דם אדומים, כמו גם היחס של לימפוציטים, הן המדדים העיקריים.
    3. לבודד את הטחול, שוקל אותה. לחשב את היחס בין משקל גוף/טחול; שקול > 0.5% כמו הגדלת טחול.
    4. לאסוף את הרקמות של מח העצם, הטחול, לימפה, כליות, ואת הרקמה עם גרורות לעין.
    5. לאסוף את עמוד השדרה, אם העכבר של שיתוק של הגפיים התחתונות.
    6. חלץ RNA וחלבון בין דגימות מח עצם.
    7. לתקן את כל הרקמות הנותרים בפורמלין.
    8. עבור decalcification, לטבול את הדגימות עצם תמיסת EDTA 0.25 M (pH 8.0) 5 ימים לאחר 24 שעות של קיבעון.
    9. לטבול כל דוגמאות ב 75% אלכוהול לאחסון לטווח ארוך.
  5. להשוות את עוצמת האות של לוציפראז באותן נקודות זמן לשתי קבוצות. בין שתי הקבוצות, את תאריכי ההקרבה של כל עכבר ולחשב את עקומות הישרדות של שתי הקבוצות עם התוכנה.
    הערה: כל ההליכים מסוכמות באיור1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי להדגים את השפעת עיכוב anti-MALAT1 gapmer-DNA מ מ, אנו הפיל את הביטוי של MALAT1, השתמש בה תאים H929 ו- MM.1S. ארבעים ושמונה שעות לאחר מכן, התאים שנאספו לניתוח של יעילות דפיקה למטה, מצב אפופטוזיס בתאים transfected עם אנטי-MALAT1 gapmer או פקד ה-DNA. לרביעיית-PCR התוצאות הראו כי ה-DNA gapmer אנטי-MALAT1 הפיל את הביטוי MALAT1 בתאים H929 ו- MM.1S ביעילות (איור 2א). המצב של אפופטוזיס נקבע על ידי cytometry זרימה, אשר חשף MALAT1 ולמטה מוסדר המושר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הראיות הוכיחו כי lncRNAs לקחת חלק מרכזי בויסות פיזיולוגיים רבים ושגרות pathophysiological ב סרטן, כולל7,מ מ8,9; יש להם פוטנציאל להיות ממוקד לטיפול בסרטן, אשר יכול להתממש מאת antisense oligonucleotides20,21,22. המזון והתרופות האמריקני (FDA) אישר מספר תרופות antisense oligonucleotide, כולל fomivirsen עבור רטיניטיס cytomegalovirus

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

המחברים תודה את המכון לחקר לרנר פרוטיאומיה מבנית, גנומית, ואת ההדמיה ליבות לסיוע שלהם ותמיכה. מימון: עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי NIH/NCI מענק R00 CA172292 (J.J.Z.) ואת ראשונית (ל J.J.Z.) ואת קלינית Translational המדע שיתופית (CTSC) של התיק Western Reserve אוניברסיטת הליבה ניצול טייס גרנט (ל J.J.Z.). עבודה זו מנוצל מיקרוסקופ קונפוקלי SP8 לייקה אשר נרכש עם מימון מוסדות לאומיים של בריאות סיג גרנט 1S10OD019972-01.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
SWCNTsMillipore-Sigma704113
DSPE-PEG2000-AmineAvanti Polar Lipids880128
סוניקטור אמבטיהVWR97043-992
4 מ"ל מסנן צנטריפוגליMillipore-SigmaZ740208-8EA
UV/VIS ספקטרומטרתרמו פישר מדעיaccuSkan GO UV/Vis ספקטרופוטומטרמיקרופלייטמקדם הכחדה של 0.0465 ליטר/מ"ג/ס"מ ב-808 ננומטר
Sulfo-LC-SPDPProteoChemc1118
תמיסת DTTMillipore-Sigma43815
NAP-5 עמודהGE Healthcare17-0853-01
in vivo מערכת הדמיהPerkinElmer
NOD. CB17-Prkdcscid / J עכבריםמעבדת צ'ארלס ריבר250
ציטומטר זרימהBecton Dickinso
LipofectamineInvitrogen11668019Lipofectamine2000
סרום בקר עוברי (FBS)Invitrogen10437-028
RMPI-1640 בינוניInvitrogen11875-093
MALAT1-QF:מסונתז על ידי IDT פלוגה5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'
MALAT1-QR:מסונתז על ידי חברת5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'
GAPDH-QF:מסונתז על ידי IDT Company5'- CAAGAGCAAGAGGAGAGAGAGAG - 3'
GAPDH-QR:מסונתז על ידי חברת5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'
PCR כמותי באמצעות SYBR Green PCR master mixThermo Fisher ScientificA25780
RevertAid ערכת סינתזת cDNA מעמד ראשוןThermo Fisher ScientificK1621
anti-MALAT1מסונתז על ידי IDT Company5'-mC*mG*mA*mA*mA*mA*C*A*T*T* *G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'
ערכת בדיקת כדאיות תאPromega CorporationG7570CellTiter-GloLuminescent ערכת בדיקת כדאיות תאים
accuSkan GO UV/Vis ספקטרופוטומטר מיקרופלייטתרמו פישר
Millipore-SigmaUFC910008
תוכנת SPSSIBMגרסה 24.0
D-LuciferinMillipore-SigmaL9504
IDT IDT מסנן צנטריפוגלי מדעי

מקורות

  1. Jiang, X., et al. RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis. Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).
  2. Murakami, T., et al. Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy. Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).
  3. Kam, N. W., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality. Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).
  4. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing. Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).
  5. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway. Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).
  6. Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies. Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).
  7. Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer. Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).
  8. Ronchetti, D., et al. Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma. Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).
  9. Wong, K. Y., et al. Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma. Molecular Cancer. 14, 175(2015).
  10. Schmidt, L. H., et al. The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth. Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).
  11. Ji, P., et al. MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer. Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).
  12. Luo, J. H., et al. Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas. Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).
  13. Guffanti, A., et al. A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing. BMC Genomics. 10, 163(2009).
  14. Cho, S. F., et al. MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression. BMC Cancer. 14, 809(2014).
  15. Handa, H., et al. Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma. British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).
  16. Hu, Y., et al. Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma. Leukemia. , (2018).
  17. Lennox, K. A., Behlke, M. A. Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides. Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).
  18. Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).
  19. Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells. Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).
  20. Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).
  21. Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma. Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).
  22. Amodio, N., et al. Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity. Leukemia. , (2018).
  23. Highleyman, L. FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration. BETA. 5, (1998).
  24. Smith, R. J., Hiatt, W. R. Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder. JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).
  25. Aartsma-Rus, A. FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides. Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).
  26. Nelson, S. F., Miceli, M. C. FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy. The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).
  27. Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery. American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).
  28. Ali-Boucetta, H., et al. Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics. Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).
  29. Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes. Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).
  30. Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods. International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).
  31. Padilla-Parra, S., et al. Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).
  32. Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery. Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).
  33. Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages. Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).
  34. Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA. Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).
  35. Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).
  36. Lelimousin, M., Sansom, M. S. Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization. Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).
  37. Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers. J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).
  38. Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells. Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).
  39. Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles. American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).
  40. Ruggiero, A., et al. Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

MALAT1QRT PCR
דיכוי צמיחת תאים מיאלומה In Vivo על ידי ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-נמסר MALAT1 Antisense Oligos
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.