פרוטוקול זה מתאר את תהליך העיבוד החיסוני שאיבה רקטלית ביופסיה עבור calretinin, S100 חלבון, חלבון מוצר גן 9.5. שיטת האבחון החדשנית של מחלת הירשפרונג מעדיפה רגישות ותעריפים מסוימים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
האבחון של מחלת הירשפרונג על-ידי חיסוני שאיבה רקטלי ביופסיות עבור Calretinin, S100 חלבון וחלבון מוצר גן 9.5
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלת הירשפרונג (HD) היא מחלת מעיים מולדת אשר מתבטאת קלינית כחוסר יכולת לעבור meconium בתינוקות או עצירות לטווח ארוך אצל ילדים. ביופסיה שאיבה רקטלית (RSB) כדי לקבוע את העדר של תאים גנגליון והיפרפרס עצביים הוא המבחן המדויק ביותר עבור האבחנה של HD כיום. המטאוקסילין המסורתי-אאוזין מכתים חסר רגישות וספציפיות. כתמים אצטילכולין אסטראז לא ניתן להשתמש באופן נרחב עקב התהליך המורכב שלה. הפרוטוקול הרומן שלנו של כתמים עבור calretinin, חלבון S100, וחלבון מוצר גן 9.5 (PGP 9.5), אשר אנו מתנהלים על RSBs, תצוגות רגישות גבוהה ושיעורי ספציפיות של 96.49% (95% מרווח ביטחון, 0.88-0.99) ו 100% (95% ביטחון מרווח, 0.97-1.00), בהתאמה. מקטעים מושפעים HD לעתים קרובות להציג כהעדר הביטוי של calretinin, S100 חלבון, ו PGP 9.5, אשר הם סמנים של היפרפרס עצבי ברקמת submucosal. פרוטוקול זה מתאר את תהליך ההפעלה המפורט של שיטת אבחון חדשה זו.
מבוא
מחלת הירשפרונג (HD) היא הפרעת מעיים שכיחה בבטן מולדת המאופיינת בהעדר תאים גנגליון בחלקים שונים של מערכת העיכול1. מערכת העצבים האנושית נוצר כאשר הפלישה של התאים העצביים העובריים הושלמה. אם יש הפרעה של התהליך ואת הפלישה נכשל להשלים, המעי המרוחק של היילוד הופך aganglionic2. המצב הקטלני הזה נקרא מחלת הירשפרונג. התפשטות, תנועתיות וגידול במעיים הם שלושת המרכיבים העיקריים של הקולוניזציה המוצלחת.
המטאוקסילין מסורתית ו אאוזין (H & E) כתמים של ביופסיה מוגבלת submucosal לא יכול להגיע כגורם משביע רצון של התוצאה כמו H & E כתמים של רקמה בעובי מלא שהתקבלו מהניתוח. בנוסף, אצטילכולין אסטראז (כאב) כתמים של רקמת....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקול זה אושר על ידי מועצת האתיקה המחקר של בית החולים האיחוד של האוניברסיטה של Huazhong המדע והטכנולוגיה.
1. שאיבה רקטלית ביופסיה
- בצע את ביופסיה שאיבה פי הטבעת על ידי מנתח ילדים מיומן היטב עוזר באמצעות מערכת Rbi2 יניקה ביופסיה רקטלית לאחר קבלת הסכמה מושכלת מהשומר.
- לבצע RSB על חולים שיש להם את הסימנים הבאים: חוסר יכולת לעבור meconium אצל תינוקות או נפיחות ארוכת טווח עם או בלי עצירות אצל ילדים; ילדים עם עצירות ארוכת טווח הזקוקים שמן פרפין כדי להשלים את הצרכים; חסימת מעיים או ניקוב מעיים בעלי סיבות לא ידועות אצל ילדים העוברים בידור.
הערה: התוויות RSB הן כדלקמן: ילדים שיש להם תסמינים חמורים, אשר נמצאים במצב פיזי עני, או ....
- לבצע RSB על חולים שיש להם את הסימנים הבאים: חוסר יכולת לעבור meconium אצל תינוקות או נפיחות ארוכת טווח עם או בלי עצירות אצל ילדים; ילדים עם עצירות ארוכת טווח הזקוקים שמן פרפין כדי להשלים את הצרכים; חסימת מעיים או ניקוב מעיים בעלי סיבות לא ידועות אצל ילדים העוברים בידור.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בסך הכל, 318 חולים נרשמו במחקר שלנו. כל החולים עברו RSB, ואת הרקמות היו מוכתם calretinin, S100, ו PGP 9.5. האבחנה המבוססת על הפרוטוקול הרומן שלנו היה HD ב 97 מקרים, non-HD במקרים 213, וחשד HD ב 8 מקרים. בין 132 חולים כירורגי, 99 חולים אובחנו עם HD על ידי כתמים חיסוני של דגימות מלאות בעובי לאחר הניתוח. S100 ו PGP 9.5 צביעת הראו כי 92% ו 93% מהחולים 99, בהתאמה, היו מכנסי עצב היפרטרופיקים. 83 אחרים של החולים 186 עברו ביופסיות בעובי מלא והראו תאים גנגליון. סך של 103 חולים נרפא קלינית על ידי ט.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כאן תיארנו הליך באמצעות שלושה נוגדנים אימונוהיסטוכימיה שונים כדי להכתים סעיפים RBS לאבחון של HD. הרגישות של פרוטוקול האבחון שלנו היה 96.49% (95% CI, 0.88-0.99), והספציפיות היתה 100% (95% CI, 0.97-1.00).
הצעדים הקריטיים ביותר של הפרוטוקול הם התגובה RSB ונוגדן אנטיגן. גודל הביופסיה קובע את הדיוק של ההכתמים. ביופסיה קטנה לא תספק מספיק רקמות כדי לבצע אבחנה מדויקת, בעוד ביופסיה גדולה מובילה לסיכון גבוה יותר של דימום. כעניין של ניסיון, ביופסיות עם קוטר של 2 מ"מ הם הגודל האופטימלי. עבור התגובה אנטיגן.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
המחברים מודים לweibing טאנג על עזרתו הגדולה במתן מעבדת הצילום. מאמר זה נתמך על ידי מחקר הרווחה הציבורית, וקרנות מיוחדות התקבלו מן הבריאות הלאומית ותכנון המשפחה של סין (גרנט No. 201402007).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נוגדן קלרטינין | MXB Biotechnologies | MAB-0716 170416405c | נוגדן: נוגדן |
| ראשוני S-100 נוגדן | MXB Biotechnologies | Kit-0007 | נוגדן: נוגדן ראשוני |
| PGP9.5 נוגדן | שנחאי לונג איילנד נוגדן בע"מ | R-0457-03 | נוגדן: |
| מגיב משפר נוגדנים | MXB Biotechnologies | KIT-9902-A 170416405a | נוגדן: נוגדן משני A |
| עז נגד ארנב/עכבר IgG נוגדן משני | MXB Biotechnologies | KIT-9902-B | נוגדן: נוגדן משני B |
| ערכת צביעה DAB (המכילה מגיב A B ו-C) | MXB Biotechnologies | DAB-0031 | ערכת צביעה |
| חממת חום | שנחאי yiheng מכשיר ושות 'בע"מ | DHP-9082 | מכשיר |
| Rbi2 יניקה ביופסיה רקטלית מערכת | Aus Systems Pty Ltd, דרום אוסטרליה, אוסטרליה | CP1200 HP1000 SS1000 | מכשיר |
| מיקרוטום | Leica | leica RM2016 | מכשיר |
| חומצת לימון נתרן ציטראט מאגר (100X) | MXB Biotechnologies | MVS-0101 | אנטיגן אחזור |
| מאגר רקמות פתולוגי מייבש | ווהאן ג'ונג'י אלקטרונית ושות' בע"מ | JT-12F | מכשיר |
מקורות
- Tam, P. K. Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery. Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).
- Heanue, T. A., Pachnis, V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advance....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
