ב פרוטוקול זה, אנו מתארים את תהליך מלא של משקפיים השראת בעכברים באמצעות החדש תוכנן ניסיוני. קוצר ראייה, הטכניקה הדרושה להשגת תוצאות לשחזור ויציבה במדידות פרמטרים עינית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ב פרוטוקול זה, אנו מתארים את תהליך מלא של משקפיים השראת בעכברים באמצעות החדש תוכנן ניסיוני. קוצר ראייה, הטכניקה הדרושה להשגת תוצאות לשחזור ויציבה במדידות פרמטרים עינית.
דגם מאתר של קוצר ראיה יכול להיות כלי רב עוצמה עבור מחקר קוצר ראייה בגלל מניפולציה גנטית יחסית קל. דרך אחת כדי לגרום קוצר ראיה אצל בעלי חיים היא לשים ברור מינוס עדשות מול העיניים במשך שבועות (עדשה-induced קוצר ראייה, LIM). עם זאת, הפרוטוקולים הקיימים השראת ולהערכה משתנים מעבדה מעבדה. כאן, אנחנו תיאר שיטה מעשית מאוד לשחזור לזירוז LIM בעכברים באמצעות החדש תוכנן משקפיים. התיקונים שיטה העדשה stably מול העין העכבר בעת מאפשרת העדשה שיוציאו אותך לניקוי או אקטואלי סמים המינהל. גן # מושגים בסיסיים חזקים ויעילים, הסטיה היא קטנה. השיטה המתוארת כאן ניתן ליישם עכברים מיד לאחר הגמילה אשר מרחיב את המשך אפשרי לניסויים. אנחנו גם נתנו טכני מייעץ להשגת תוצאות לשחזור שבירה ומדידות אורך צירית. אנו מקווים פרוטוקול צעד אחר צעד המתוארים כאן, במאמר מפורט יכול לעזור החוקרים לבצע ניסויים קוצר ראייה עם קוצר ראייה בצורה חלקה יותר ולהפוך את הנתונים דומים ברחבי מעבדות.
השכיחות של קוצר ראייה גדל באופן דרמטי לאחרונה, ואילו המנגנון של התפתחות והתקדמות שלה עדיין במידה רבה unknow1. פנוטיפ האופיינית ביותר של קוצר ראייה הוא התארכות של אורך צירית (אי אל), אשר מגביר את הסיכון לסיבוכים ברשתית או אפילו עיוורון2. כדאי להבין בפתוגנזה של קוצר ראייה ולפתח טיפולים יעילים, חזקים מודלים בעלי חיים קצר והערכה פנוטיפ יציב יש צורך.
בקצרה, שתי שיטות קיימות עבור גרימת קצר הברית בבעלי חיים: טופס-מניעת קוצר ראייה (FDM), קוצר ראייה עדשות-induced (LIM)3. לשעבר מקומות רשתות ומפזרים מול העין או sutures העפעף כדי לטשטש את התמונה, מה שמשפיע על התפתחות תקינה של גלגל העין, וכתוצאה מכך הפנוטיפ קוצר ראייה. המקומות האחרונים מינוס עדשות מול העין כדי להעביר את נקודת המוקד מאחורי הרשתית. הרשתית מזהה את המשמרת של המוקד, מאריך את גלגל העין כדי ליישר מחדש את הרשתית ואת מוקד. עבור FDM, לאחר העפעף סגור או מפזר תוקנה מול העין, אין כמעט תחזוקה נוספת נדרשת. עבור לים, העדשה צריך להיות המריא לניקוי כדי לשמור אותו לשקוף. לפיכך, FDM קל יחסית לבצע להיגרם טכנית. עם זאת, מנגנוני FDM ו- LIM שונים, באיזו שיטת מחקה את קוצר ראייה-אנוש כדאי עדיין תחת הדיון3. אחד היתרונות של LIM הוא פנוטיפ חזק יותר בהשוואה FDM, לפחות במקרה של עכברים4.
חיות שנוצלו להשראת קוצר ראייה כוללים בנות5, קופים6, חדפי־עצים7, שרקנים8ועכברים4. בהתחשב האפשרות של מניפולציה גנטית, שופע נוגדנים זמינות ועלות נמוכה לגידול, עכברים יכול להיות הבחירה הראשונה כמודל בעלי חיים של קוצר ראייה. לעומת אחרים חיות גדולות, תיקון עדשות או רשתות ומפזרים מול העין העכבר זאת, יחסית קשה במיוחד עבור עכברים צעירים כגון זכות לאחר הגמילה. על הניסויים צריכים אקטואלי והתרופות האמריקני או מדידות העין ביניים מרובות, זה גם הכרחי עבור מסגרת להיות נשלף. אתגר נוסף הוא שינוי מורפולוגי קטן של עכבר גלגל העין, אשר צריך טכניקה מתוחכמת והתקנים להעריך. עד כה, שייצור שונות ומדידת פרוטוקולים המשמשים בקבוצות מחקר שונים מקשה להשוות באופן חוזר את התוצאות מעבר מעבדות. פרוטוקול סטנדרטי עם פרטי נדרש.
עבודות קודמות תיאר בשיטות מרובות כדי לתקן עדשות או רשתות ומפזרים מול העין העכבר, כגון הדבקה9, תפרים10 ו-11,מסגרת goggle נישאת על הראש12. אנחנו בשילוב קיימים goggle נישאת על הראש טכניקה11,12,13 מסגרת שעוצבו לאחרונה שלנו לפתח פרוטוקול ameliorated להשראת עמיד ויעיל ניסיוני. קוצר ראייה בעכברים. הפרוטוקול ניתן ליישם עכברים צעירים מיד לאחר הגמילה ביום כמחנכת 21 (p21). אנחנו גם אופטימיזציה התהליכים להערכת יציב ומדויק של פנוטיפים כולל שבירה, AL. אנו מקווים פרוטוקול מתוקננת זה יכול לעזור ליצור עכברים קצר מודל נגיש בקלות רבה יותר למחקר קוצר ראייה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה על החיה מחקר של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קאיו דבקה המשפט ארוו שימוש בבעלי חיים של לרפואת עיניים ומחקר החזון, המוסדיים הנחיות על ניסויים בבעלי חיים-קאיו ואוניברסיטת המחקר בעל חיים: דיווח ב- Vivo ניסויים (יגיעו) הנחיות השימוש בבעלי חיים במחקר.
1. הרכבת את המשקפיים עבור עכברים
2. מדידות של שבירה, AL בסיסית.
3. קיבוע של המסגרת על גבי הגולגולת העכבר.
4. ייזום של אינדוקציה של קוצר ראייה ותחזוקה אחר כך
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
At, בדוק תחילה אם כל החלקים הדרושים מוכנים (איור 1 א'). דוגמה של פיסת משקפיים שהורכב מוצג איור 1b. מלבד הגוף העיקרי של המסגרות, האגוז, כל החלקים האחרים הם חד פעמיים על העכבר כל ערכה של משקפיים שהושלם מוצג באיור 1 c. לשנות את הזווית בין שתי המסגרות כדי להתאים את העכבר עם גילאים שונים.
דוגמה של המדידה שבירה מוצג באיור 2a<...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כדי לוודא את המשקפיים כדי לתקן stably על הראש העכבר, מספר פעולות של פרוטוקול זה צריך לשלם תשומת לב רבה. קרום העצם להסירו לחלוטין לפני באמצעות מערכת דבק דנטלי. הדם על הגולגולת גם צריך לנקות בזהירות. בעת כוונון עדין קצת קבילה מייד לאחר היישום של הדבק, אל תזיז את המקל לעתים קרובות לפני שהמערכת דבק מתייבש. מלא את ההוראות של מערכת דבק בזהירות, במיוחד את היחס של כל רכיב של התערובת הסופית. מתי לתפוס את העכבר במהלך קיום של המשקפיים או את המידות להמשך טיפול לאחר הניתוח, לא תופסים את המקל עם הגופה של העכבר יחד. התנועה היחסית בין ה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
העיצוב של מוכספת העכבר הוחל לקבלת פטנט (יישום מס 201741349).
אנו מודים מ. ת Pardue על ייעוץ SDOCT, פ Schaeffel לקבלת ייעוץ על המידות של שבירה, עקמומיות הקרנית, מר Sanshouo יצירה מחדש את נתוני מסגרת תלת מימדי, Miyauchi מ; ק' Tsubota; י' טאנאקה; ס קונדו; ג נאיה; מ יבאקי; י' Miwa; י' Hagiwara; א אישידה; י' טומיטה; י' Katada; אי Yotsukura; ק' טקהאשי; י' וואנג דיונים קריטיים. עבודה זו נתמך על ידי מענקים inAid למחקר מדעי (KAKENHI, מספר 15K 10881) משרד החינוך, תרבות, ספורט, מדע, טכנולוגיה (MEXT) כדי TK. עבודה זו נתמכת גם המענק לחקר קוצר ראייה מן המעבדה Tsubota, inc. (טוקיו יפן).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בורג | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| מכונת כביסה | MonotaRO | 42166397 | |
| אגוז | MonotaRO | 42214243 | |
| מקל | DMM הפוך | אף אחד לא | תוכנן על ידי יצרנים ופלט על ידי מדפסת התלת מימד שנשכרה מ-DMM Make. |
| מסגרת | DMM Make | אף אחד לא | תוכנן על ידי יוצרים ופלט על ידי מדפסת התלת מימד שנשכרה מ- DMM Make. |
| עדשות | עדשות מגע קשת בענן | ללא | התאמה אישית לשימוש עכברים על ידי החברה |
| דבק ציאנואקרילט | בסדר דגם | MP 20 גרם | |
| דבק שיניים שרף צמנט | SUN MEDICAL | סופר בונד | מכיל את נוזל התחריט המשמש להסרת הפריאוסטאום של גולגולת העכבר |
| פוטורפרקטור אינפרא אדום | מרכז העברת סטיינבייס | ללא | עוצב והוצע על ידי ד"ר פרנק שפל מאוניברסיטת Tü bingen |
| תחום ספקטרלי OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, תמיסת פנילפרין הידרוכלוריד | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | לחומר ההרדמה |
| מדיטומידין | רכיבי Orion Corporation | Domitor | לחומר ההרדמה |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | רכיבים להרדמה |
| 0.1% נתרן היאלורונאט מטוהר | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.