הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תפוקה גבוהה התווית על-ידי Nitrobenzoxadiazole כולסטרול בזרימת Assay

8.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/58891

⸱

7 בינואר 2019

 ,  , 
1Group of Genomics and Pharmacogenomics in HIV, Laboratory of Retrovirology and Viral Immunopathogenesis, IDIBAPS, Hospital Clínic de Barcelona

במאמר זה

סיכום

מדידה של קיבולת בזרימת במבחנה כולסטרול סרום או פלזמה במודלים macrophage התא הוא כלי מבטיח כמו סמן עבור טרשת עורקים. במחקר הנוכחי, אנו לייעל לתקנן שיטה בזרימת להארכה-כולסטרול פלורסנט, לפתח ניתוח תפוקה גבוהה באמצעות לוחות 96-ובכן.

תקציר

טרשת עורקים מובילה למחלות קרדיווסקולריות (CVD). לא ברור עדיין אם ריכוז כולסטרול-HDL (cHDL) ממלא תפקיד סיבתי בהתפתחות טרשת עורקים. עם זאת, גורם חשוב בשלבים המוקדמים של היווצרות הפלאק atheroma הוא היכולת בזרימת כולסטרול HDL (היכולת של חלקיקי ה-HDL כולסטרול מן מקרופאגים לקבל) על מנת למנוע היווצרות תאי קצף. זהו צעד המפתח הימנעות ההצטברות של כולסטרול של אנדותל, וחלק תעבורה כולסטרול הפוכה (RCT) כדי למנוע כולסטרול דרך הכבד. קיבולת בזרימת הכולסטרול בסרום או פלזמה במודלים macrophage התא הוא כלי מבטיח זה יכול לשמש סמן עבור טרשת עורקים. באופן מסורתי, [3H]-כולסטרול כבר בשימוש מבחני בזרימת כולסטרול. במחקר זה, אנו שואפים לפתח אסטרטגיה מהירה ובטוחה באמצעות פלורסנט מתויג כולסטרול (הכולסטרול-להארכה) ב וזמינותו הסלולר לאתר את ספיגת הכולסטרול ותהליכי בזרימת ב מקרופאגים THP 1-נגזר. לבסוף, אנו לייעל, לתקנן את שיטת בזרימת להארכה-כולסטרול ולפתח ניתוח תפוקה גבוהה באמצעות לוחות 96-ובכן.

מבוא

לפי ארגון הבריאות העולמי, הגורמים העיקריים הנוכחי למוות ברחבי העולם הם מחלת לב איסכמית וקו (חשבונאות עבור סכום כולל של 15.2 מיליון מקרי מוות)1. שניהם נמצאים מחלות לב וכלי דם (CVD) זה יכול להיות קדמו טרשת עורקים, שבר atheroma הפלאק של כלי הדם2,3.

טרשת עורקים היא כלי קיר דלקתיות מחלה שבה מקרופאגים, תאי T, תאי פיטום, תאים דנדריטים לחדור את אנדותל ולצבור מהדם, בסופו של דבר ויוצרים הפלאק טרשת עורקים. שלטי טרשת עורקים מציגים ליפופרוטאין קריסטלים הליבה וכולסטרול, שמעידים ברזולוציה גבוהה B-מצב בדיקת אולטרה סאונד מדידות של4,5עובי מדיה התרדמה אינטימה. ב מקרופאגים, כולסטרול בזרימת לכיוון השומנים מקבל חלקיקים מתבצעת על ידי אמצעים של קולטני קלטת (ABC) מחייב ATP ABCA1, ATP איגוד קלטת תת G חבר 1 (ABCG1), הקולטן נבלות SR-BI. האיזון של זרם הכולסטרול ולא בזרימת ב מקרופאגים נחשב תהליך מפתח חניכה טרשת עורקים6. כולסטרול בזרימת נחשבת צעד המפתח כולסטרול חיסול של רקמות היקפיים כדי פלזמה והכבד בתהליך הנקרא תעבורה כולסטרול הפוכה (RCT). כולסטרול יועברו מ מקרופאגים בעיקר כדי אפוליפופרוטאין A1 (ApoA1) על פני השטח של חלקיקי ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה (HDL). HDLs תחבורה ואז הכולסטרול בכבד הפרשה וסילוק מחדש7,8,9.

באופן מסורתי, נעשה שימוש טריטיום (3H) מתויג רדיו כולסטרול כולסטרול בזרימת10. האות פליטה של רדיואיזוטופים הוא מאוד רגיש10; עם זאת, כולסטרול מתויג הרדיו מציג מגבלות ברורים כגון פרוטוקולים ארוכים, סיכון של חשיפה לקרינה מייננת בצורך מיוחד רדיואקטיביות מתקנים וציוד על מנת להבטיח טיפול בטוח של פליטת רדיואקטיבי. להפך, זריחה יש בהצלחה שולבו טכניקות אבחון בשל פשטותו זיהוי אותות פלואורסצנט, מגוון רחב של fluorophores זמין, ו שלה בטיחות11. בתחום ה סטרולים מתויג פלורסנט מספר השתמשו ללמוד מטבוליזם הכולסטרול כולל dehydroergosterol (עם פלורסצנטיות מהותי), כולסטרול dansyl, 4,4-difluoro-3a, 4adiaza-s-indacene (BODIPY) - כולסטרול, ו 22-(N-(7- Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-23,24-Bisnor-5-Cholen-3β-Ol (להארכה-כולסטרול). במיוחד, להארכה-כולסטרול מציג ספיגה יעילה תאים אנושיים12. שני שונים להארכה מתויג כולסטרול זמינים כעת: 22-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-23,24-bisnor-5-cholen-3b-ol (22-להארכה) ו 25-(N-[(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)-methyl]amino)-27-norcholesterol (25-להארכה; איור 1). כולסטרול בלוחיות הסבר moiety 22-להארכה ייתכן ולביצועי כולסטרול בזרימת מחקרים, בעוד 25-להארכה-כולסטרול משמש בעיקר הממברנה התאית dynamics מחקר13,14.

שורות תאים המשמש בדרך כלל כולסטרול במבחנה בזרימת מבחני הם תאים דמויי מונוציט כגון לוקמיה-derived THP-1 התאים של האדם, 264.7 גלם מאתר תאים15או J774.1. כל התאים האלה יכול להיות מובחן מקרופאגים במבחנה באמצעות 13 12-פעילים phorbol-אצטט (PMA), אך THP 1-נגזר מקרופאגים (dmTHP-1) הכי טוב לשקף לחקות את המקרופאגים האנושי16.

במחקר הנוכחי, אנו לייעל, לתקנן שיטה תפוקה גבוהה פלורסנט כדי לקבוע את הקיבולת בזרימת כולסטרול הדוגמאות סרום dmTHP-1, באמצעות 22-להארכה-כולסטרול כחלופה [3H]-כולסטרול. בנוסף, אנו משווים את הטכניקה פלורסנט ממוטבת עם אנלוגי רדיואקטיבי סטנדרטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

במחקר זה, אישור ועדה אתית (Comitè Ètic d'Investigació קליניקה, חולים במרפאה, ברצלונה; מספר אישור HCB/2014/0756), הודיע בכתב הסכמת כל הנושאים התקבלו.

1. כולסטרול להארכה הכנה

  1. להמיס את להארכה הכולסטרול (MW 494.63; ראה טבלה של חומרים) אתנול טהור כדי להשיג את המניה (2 מ מ). בשביל בקבוקון 10 מ ג, לפזר את תוכן כל בקבוקון באמצעי אחסון 10.1 מ"ל אתנול לרכוש מניה 2 מ מ.
  2. לדלל את להארכה-כולסטרול מן המלאי ב- 1640 RPMI בתוספת 10% עוברית שור סרום ו-5% פניצילין/סטרפטומיצין (R10 בינוני) כדי להגיע ריכוז סופי של 5 μM (למשל, לקבל 10 מ של כולסטרול להארכה ב 5 הריכוז הסופי μM) על ידי דילול μL 25 מניות להארכה-כולסטרול (2 מ מ) R10 בינוני. אמצעי אחסון זה מספיקה בשביל צלחת 96-ובכן.

2. התא תרבות, זריעה (יום 2)

  1. התרבות התאים THP-1 R10 בינוני ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2. התאם ל 0.3 x 106 תאים/מ ל כל 3 ימים.
  2. הזרע התאים צלחת 96-ובכן לבן עם חלק תחתון שטוח, ברור ב- 0.2 x 106 תאים/היטב במדיום R10 (100 μL לכל טוב).
  3. לטיפול תאי עם לענייני חוץ phorbol ננומטר 100, פעילים-12 13-אצטט (PMA מ מניה 10 μM) עבור 48-72 שעות, המקננת ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 להבדיל THP-1 תאים לתוך dmTHP-1.
    הערה: מומלץ להשתמש μL 5 מניות PMA (10 μM) בμl 500 R10 בינוני. לפני כן, להכין μM 10 מניות ובחום על ידי המסת בקבוקון lyophilized 1 g ב- 10 מ"ל של דימתיל סולפוקסיד (דימתיל סולפוקסיד), aliquot, ואת המניה ב-20 ° C.
  4. לחילופין (הצעה) לשלב פעולות 2.2 ו- 2.3 עבור המגון טוב יותר. להכין 10 מ ל THP-1 תאים בשפופרת 15 מ"ל, להוסיף μL 200 מניות PMA (10 μM), מערבבים בעדינות, מיד זרע μL 100 לכל טוב לצלחת. דגירה התאים כפי שמתואר בשלב 2.3.

3. אפוליפופרוטאין B דלה הכנה סרום (ABDS) (יום 2 או 3)

  1. כדי להכין פתרון פוליאתילן גליקול (PEG), לדלל גליצין ב- PBS 10% (עם H סטרילי2O) כדי ריכוז של 200 מ"מ ב- pH 7.4. 40 מ ל-200 מ מ גליצין להוסיף 10 גרם של פג 8000 להשיג פג 20% (w/v). מערבבים את הפתרון נמרצות כדי homogenize.
  2. החל 4 חלקים של 20% יתד לכל 10 חלקים סרום/פלזמה על כל מדגם סרום/פלזמה צינור 1.5 מ ל ולהשאיר את התערובת על קרח במשך 25 דקות17 (לדוגמה, עבור 100 μL של פלזמה או סרום, להוסיף 40 μL של 20% יתד פתרון).
  3. Centrifuge את התמיסה פג-אפוליפופרוטאין B ב 13,000 x g למשך 15 דקות ב 4 º C.
  4. למחוק את התמיסה. להעביר את תגובת שיקוע צינור חדש.
    הערה: אנו ממליצים להכין את ABDS ביום השלישי (טרי). אם זה לא אפשרי, להכין את ABDS ביום 2 ולשמור אותו ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.

4. להארכה-כולסטרול תא טעינה (יום 2)

  1. ביטול המדיום תרבות של ה-dmTHP-1 ולשטוף את התאים פעמיים עם 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS).
  2. לטעון את התאים עם 5 μM להארכה-כולסטרול (100 μL לכל טוב) במדיום R10 דגירה בין לילה ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2.

5. דגירה עם כולסטרול Acceptors (יום 3)

  1. ביטול המדיום ולשטוף את התאים פעמיים עם PBS.
  2. דגירה התאים עם 2 – 5% ABDS או הריכוז הרצויה של מקבל השומנים מטוהרים (HDL, ApoA, ספקיות, וכו ') מעורבבת עם RPMI 1640 השקופה בינונית (100 μL לכל טוב) עבור 4-6 h ב- 37 מעלות צלזיוס.
    הערה: כוללות פקד שלילי (נולד ב- C) המורכב השקופה RPMI 1640 בינונית ללא acceptors ופקד חיובי (C +) (למשל, ABDS מתוך מאגר של תורמים בריאים) או מטוהרים HDLs. שים לב כי הפקד חיובי חל במיוחד כאשר המטופל דגימות (תנאי המחלה) הם ניתחו (משלים איור 1).
  3. להכין מלאי 200 מ של הפתרון פירוק התא 1 (50 מ מ טריס מאגר, 150 מ מ NaCl, H2O). מערבבים את היחס פתרון 1-1:1 (v: v) פירוק התא עם אתנול טהור כדי לקבל את הפתרון פירוק 2.

6. ניאון האות ללכוד (יום 3)

  1. זיהוי להארכה-כולסטרול מדיה
    1. הסר המדיום תא הלוחות ולאסוף אותו בצלחת 96-ובכן לבן חדש עם התחתון שטוח אטום.
    2. לצורך זיהוי האות זריחה אופטימלית הדגימות מדיה, להוסיף 100 μL של כוהל טהור 100 μL של כל מדגם בינוני כדי לקבל יחס של 1:1 בצלחת לבנה 96-ובכן.
    3. לשמור לצלחת עם התקשורת שטופלו נוספים מודדים עוצמת קרינה פלואורסצנטית (FI) אורך גל nm (עירור/פליטה) 463⁄536 ב luminometer.
  2. זיהוי להארכה-כולסטרול תאיים
    1. לשטוף את התאים פעמיים עם PBS.
    2. כדי להשיג את כולסטרול intracellular, lyse התאים על ידי המקננת בהם עם μL 100 של פירוק פתרון 2 לכל טוב ומנערים את הצלחת בטמפרטורת החדר (RT) במשך 25 דקות.
    3. עבור זיהוי האות זריחה אופטימלית הדגימות lysate תא, ללכוד את עוצמת קרינה פלואורסצנטית lysates תא באותו לבן 96-ובכן צלחת עם תחתית ברורה במול (באותה צלחת שבה התאים היו נזרע בשלב 2.2).
  3. 6.3 למדוד את עוצמת קרינה פלואורסצנטית (FI) ב- luminometer תוך התאמת הפרמטר רגישות ל- 50 בתוכנה (ראה טבלה של חומרים).

7. תוצאות ניתוח

  1. אקספרס בזרימת כולסטרול קצב דגימה כאחוז מחושבת באמצעות הנוסחה:
    figure-protocol-1
  2. השג המדד הסופי של כולסטרול בזרימת (CE) על-ידי חיסור של CE של הפקד שלילי (דוגמה עמוסה להארכה-כולסטרול אבל מודגרות השקופה RPMI 1640 בינונית, ללא כולסטרול acceptors) CE של נתן דוגמאות:
    figure-protocol-2

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

המטרה של כולסטרול בזרימת וזמינותו היא לקבוע במבחנה את הקיבולת בזרימת כולסטרול סרום נתון, פלזמה, או תגובת שיקוע המכיל חלקיקי ה-HDL. השיטה מורכבת loading כולסטרול מתויג תרבות של קו תא מקרופאג סטנדרטי שייצור קשר עם הדגימה הבדיקה מדולל FBS ללא מדיה עם התאים. בסופו של דבר, רמות פלורסנט להארכה נמדדים תא lysate וכלי תקשורת. כדי למטב את המידות, רמת הכולסטרול effluxed מתאי למדיה מעורבב עם אמצעי אחסון אחד החומר הממיס המכיל אתנול. להארכה-הכולסטרול בתאי שנותרה היא resuspended לתוך הממס המכיל אתנול או דטרגנט לפני מדידות. לבסוף, נקבע ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מתויג פלורסנט כולסטרול היא אסטרטגיה מבטיח לנתח ולחקור את המאפיינים ואת חילוף החומרים של הפריה טבעי כולסטרול. היתרונות העיקריים שלה הם כי זה שאפשר לקחת על ידי תאים, מאפשר תאיים ולימודים ממברנה הפצה, ולא ניתן להחיל על כולסטרול בזרימת מבחני כגון פרוטוקול זה (איור 7). בתחום ה סטרולים מתויג פלורסנט מסוימים מאפשרים כולסטרול מעקב גופית כולל BODIPY-כולסטרול, כולסטרול dansyl, dehydroegrosterol ו- 22 ו- 25-להארכה-כולסטרול12. במיוחד, 22-להארכה-כולסטרול מתאים ללמוד dynamics כולסט...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים רוצה להצהיר כי הם הממציאים של הבקשה לרישום פטנט (EPO; 18382337.6-1118; 17 במאי 2018) זכאי "שיטה לקביעת בזרימת כולסטרול" המבוסס על שיטה זו.

תודות

עבודה זו היא נתמכה חלקית על ידי המחקר מעניקה FIS (PS12/00866) מ אינסטיטוטו דה סאלוד קרלוס השלישי, מדריד, ספרד; Fondo Europeo פארא el Desarrollo אזוריים (פדר); אדום de Investigación en סידה (RIS), ISCIII-RETIC (RD16 0025 0002) ותוכנית סרקא / Generalitat דה קטלוניה. המחברים תודה את Retrovirology ואת המעבדה Immunopathology ויראלי של d'Investigacions אינסטיטוט Biomèdiques אוגוסט Pi I Sunyer (IDIBAPS). אנו מודים Escribà ט Rovira ג, ג הורטדו סיוע, Cufí ס מ הידע ואת טכנולוגיית העברת המשרד להדרכה שלה בהגנה על ההמצאה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צלחת איסוף 96 בארותCorning IncCostar 3912צלחת לבנה 96 בארות עם תחתית אטומה שקופה
96 בארות צלחתקורנינג בע"מCostar 3610צלחת לבנה 96 בארות עם תחתית שטוחה שקופה
ערכת בדיקת פליטת כולסטרול (מבוססת תאים)Abcamab196985ערכת בדיקה מסחרית מבוססת תאים בתפוקה גבוהה שמטרתה לקבוע את כולסטרול אפלוקס
חסר צבע RPMI 1640סיגמא-אולדריץ'R7509RPMI 1640 ללא פנול-אדום
Gen5 תוכנת ניתוח נתוניםBioTekגרסה 2.0
גליציןסיגמא-אולדריץ'G8790-100Gגליצין, לשימוש שאינו בבעלי חיים
לומינומטרBiotekSYNERGY HTMulti-Detection Microplate
Reader פתרון ליזה 150 מ"מ Tris Buffer, 150 מ"מ NaCl ו-H2O
תמיסת ליזהבביתאתנול טהור ותמיסת ליזה תאים 1:1 (v:v)
NBD-כולסטרולThermo-FisherN114822-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-23,24-Bisnor-5-Cholen-3β-Ol
PBSSigma-AldrichP3813חוצץ פוספט  מי מלח
PEG 8000סיגמא-אולדריץ'202452-250 גרםפוליאתילן גליקול
PMAסיגמא-אולדריץ'79346פורבול 12-מריסטייט B-אצטט.
R10RPMI 1640 בתוספת 10% סרום בקר עוברי ו-5% פניצילין/סטרפטומיצין.
RPMI 1640Sigma-AldrichR8758RPMI 1640 עם 2 מ"מ L-גלוטמין המכיל 1.5 גרם/ליטר נתרן ביקרבונט ו-4.5 גרם/ליטר תאי
THP-1סיגמא-אולדריץ'ATCC,קו דמוי מונוציטים #TIB-202 שמקורו בלוקמיה מתינוק בן שנה
Tween 80Sigma-AldrichP1754
2

מקורות

  1. The top 10 causes of death. , Available from: http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death (2018).
  2. Hansson, G. K., Hermansson, A. The immune system in atherosclerosis. Nature Immunology. 12 (3), 204-212 (2011).
  3. Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis. Nature. 473 (7347), 317-325 (2011).
  4. Ilhan, F. Atherosclerosis and the role of immune cells. World Journal of Clinical Cases. 3 (4), 345(2015).
  5. Greaves, D. R., Gordon, S. Immunity, atherosclerosis and cardiovascular disease. Trends Immunol. 22, (2001).
  6. Yamamoto, S., Narita, I., Kotani, K. The macrophage and its related cholesterol efflux as a HDL function index in atherosclerosis. Clinica Chimica Acta. 457, 117-122 (2016).
  7. Escolà-Gil, J. C., Rotllan, N., Julve, J., Blanco-Vaca, F. In vivo macrophage-specific RCT and antioxidant and antiinflammatory HDL activity measurements: New tools for predicting HDL atheroprotection. Atherosclerosis. 206 (2), 321-327 (2009).
  8. Santos-Gallego, C. G., Ibanez, B., Badimon, J. J. HDL-cholesterol: Is it really good? Differences between apoA-I and HDL. Biochemical Pharmacology. 76 (4), 443-452 (2008).
  9. Rothblat, G. H., Phillips, M. C. High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport. Current Opinion in Lipidology. 21 (3), 229-238 (2010).
  10. Hafiane, A., Genest, J. HDL-mediated cellular cholesterol efflux assay method. Annals of Clinical and Laboratory Science. 45 (6), 659-668 (2015).
  11. Szalaia, R., Hadzsiev, K., Melegh, B. Cytochrome P450 Drug Metabolizing Enzymes in Roma Population Samples: Systematic Review of the Literature. Current Medicinal Chemistry. 23, 1-26 (2016).
  12. Mcintosh, A. L., et al. Fluorescent Sterols for the Study of Cholesterol Trafficking in Living Cells. Probes and Tags to Study Biomolecular Function: for Proteins, RNA, and Membranes. , 1-33 (2008).
  13. Ostašov, P., et al. FLIM studies of 22- and 25-NBD-cholesterol in living HEK293 cells: Plasma membrane change induced by cholesterol depletion. Chemistry and Physics of Lipids. 167, 62-69 (2013).
  14. Song, W., et al. Characterization of fluorescent NBD-cholesterol efflux in THP-1-derived macrophages. Molecular Medicine Reports. 12 (4), 5989-5996 (2015).
  15. Liu, N., Wu, C., Sun, L., Zheng, J., Guo, P. Sesamin enhances cholesterol efflux in RAW264.7 macrophages. Molecules. 19 (6), 7516-7527 (2014).
  16. Qin, Z. The use of THP-1 cells as a model for mimicking the function and regulation of monocytes and macrophages in the vasculature. Atherosclerosis. 221 (1), 2-11 (2012).
  17. Low, H., Hoang, A., Sviridov, D. Cholesterol Efflux Assay. Journal of Visualized Experiments. (61), 5-9 (2012).
  18. Gimpl, G., Gehrig-Burger, K. Cholesterol reporter molecules. Bioscience Reports. 27 (6), 335-358 (2007).
  19. Zhang, J., Cai, S., Peterson, B. R., Kris-Etherton, P. M., Heuvel, J. P. Vanden Development of a Cell-Based, High-Throughput Screening Assay for Cholesterol Efflux Using a Fluorescent Mimic of Cholesterol. ASSAY and Drug Development Technologies. 9 (2), 136-146 (2011).
  20. Rader, D. D. J. Molecular regulation of HDL metabolism and function: implications for novel therapies. Journal of Clinical Investigation. 116 (12), 3090-3100 (2006).
  21. Davidson, W. S., et al. The effects of apolipoprotein B depletion on HDL subspecies composition and function. Journal of Lipid Research. 57 (4), 674-686 (2016).
  22. Park, S. H., et al. Sage weed (Salvia plebeia) extract antagonizes foam cell formation and promotes cholesterol efflux in murine macrophages. International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1105-1112 (2012).
  23. Litvinov, Y., Savushkin, E. V., Garaeva, E. A. D. A. Cholesterol Efflux and Reverse Cholesterol Transport: Experimental Approaches. Current Medicinal Chemistry. 371 (25), 2383-2393 (2016).
  24. Phillips, A., Mucksavage, M. L., Wilensky, R. L., Mohler, E. R. Cholesterol efflux capacity, high-density lipoprotein function, and atherosclerosis. N Engl J Med. 364 (2), 127-135 (2011).
  25. Rohatgi, A., et al. HDL Cholesterol Efflux Capacity and Incident Cardiovascular Events. New England Journal of Medicine. 371 (25), 2383-2393 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

NBDTHP 196HDL
תפוקה גבוהה התווית על-ידי Nitrobenzoxadiazole כולסטרול בזרימת Assay
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.