כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור ייצור של אלקטרודה nanopore אלחוטית מסוג סגור ומדידה אלקטרוכימי עוקבות של ננו-חלקיק בודד התנגשויות.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור ייצור של אלקטרודה nanopore אלחוטית מסוג סגור ומדידה אלקטרוכימי עוקבות של ננו-חלקיק בודד התנגשויות.
מדידת תכונות מהותי של חלקיקים בודדים על-ידי nanoelectrochemistry בחשיבותו המהותית עמוק והוא בעל פוטנציאל ההשפעות הננו. עם זאת, electrochemically ניתוח חלקיקים יחיד הוא מאתגר, כמו nanointerface חישה הוא בלתי נשלט. כדי לטפל באתגר זה, נתאר כאן את ייצור ואפיון של אלקטרודה nanopore אלחוטית מסוג סגור (WNE) אשר מוצגים הפארמצבטית מצטיינים ומורפולוגיה מאוד לשליטה. הזיוף נתיישב של WNE מאפשר הכנת nanoelectrodes מוגדרים היטב בתוך מעבדה כימיה כללית ללא השימוש של חדר נקי וכן ציוד יקר. יישום אחד של בן 30 + ננומטר סגור-סוג WNE בניתוח של חלקיקי זהב יחיד בתערובת גם מודגשת, אשר מציג רזולוציה גבוהה הנוכחית של הרשות הפלסטינית 0.6, רזולוציה טמפורלית גבוהה של 0.01 גב' Accompanied על ידי שלהם קטן ומורפולוגיה מעולה קטרים, יותר יישומים אפשריים של WNEs מסוג סגור ניתן להרחיב מ nanoparticle אפיון גילוי מולקולה בודדת/יון, בודק את החד-תאיים.
חלקיקים משכו תשומת לב אדירה בשל תכונות מגוונות כגון שלהם יכולת קטליטי, תכונות אופטי מסוים, electroactivity ויחסי גודל השטח לבנפח גבוה1,2,3, 4. ניתוח אלקטרוכימי של חלקיקים יחיד הוא שיטה ישירה להבנת התהליכים כימי, אלקטרוכימי מהותי ברמת ננו. כדי להשיג מדידות רגישות גבוהה של חלקיקים יחיד, שתי הגישות אלקטרוכימי הוחלו בעבר כדי לקרוא את המידע nanoparticle הנוכחי תגובות5,6,7. אחד גישות אלה כרוך שיתק או לכידה של ננו-חלקיק בודד בממשק של nanoelectrode לחקר electrocatalysis8,9. האסטרטגיה אחרים מונעת על ידי התנגשות ננו-חלקיק בודד עם המשטח של אלקטרודה, אשר יוצרת תנודות הנוכחי ארעי בתהליך דינמי חמצון-חיזור.
שתי השיטות מחייבות הננומטרי העדינה חישה ממשק התואם את הקוטר של חלקיקים בודדים. עם זאת, ייצור מסורתיים של nanoelectrodes שילבה בעיקר את מערכות מיקרו-אלקטרו (MEMS) או לייזר משיכת טכניקות, אשר מייגע, undisciplinable10,11,12, 13. לדוגמה, מבוסס MEMS פבריקציה נוספת של nanoelectrodes הוא יקר ודורש שימוש חדר נקי, הגבלת את ייצור מאסיבי, הפופולריזציה של nanoelectrodes. מצד שני, לייזר משיכת פבריקציה נוספת של nanoelectrodes מסתמכת במידה רבה על החוויה של האופרטורים במהלך אטימה, משיכת חוט מתכת בפנים נימי. אם החוט מתכת אינם נעולים היטב נימי, הפער בין הקיר הפנימי של nanopipette חוט יכול באופן דרמטי להציג את רעשי הרקע עודף הנוכחי, להגדיל את electroactive חישה באזור. מחסרונות אלה להקטין במידה רבה את רגישות nanoelectrode. מצד שני, קיומו של פער ניתן להגדיל את האזור אלקטרודה, להפחית את הרגישות של nanoelectrode. כתוצאה מכך, קשה להבטיח הופעה לשחזור עקב מורפולוגיות בלתי נשלט אלקטרודה כל תהליך ייצור14,15. לכן, שיטת ייצור כללי nanoelectrodes עם הפארמצבטית מעולה נדרשת בדחיפות כדי להקל על אלקטרוכימי חקר התכונות מהותי של חלקיקים בודדים.
לאחרונה, פותחה טכניקת nanopore כמו גישה אלגנטית ללא תווית עבור מולקולה בודדת ניתוח16,17,18,19,20. בשל ייצור לשליטה שלה, nanopipette מספק ריתוק ננו, עם קוטר אחיד הנע בין 30-200 ננומטר על ידי לייזר פולר נימי21,22,23,24 . יתר על כן, הליך ייצור לשחזור ופשוט מבטיחה ההכללה של nanopipette. לאחרונה, אנחנו הציע אלקטרודה אלחוטית nanopore (WNE), אשר לא דורשים אטימה של חוט מתכת בפנים nanopipette. באמצעות תהליך ייצור נתיישב, לשחזור, WNE יש תצהיר מתכת הננומטרי בתוך nanopipette כדי ליצור את electroactive ממשק25,26,27,28 . מאז WNE בעל מבנה מוגדר היטב עם מורפולוגיה אחיד של לידות שלה, הוא משיג ברזולוציה גבוהה הנוכחי, כמו גם התנגדות נמוכה-קיבול (RC) קבוע הזמן לביצוע ברזולוציה הטמפורלית גבוהה. בעבר דיווחנו שני סוגים של WNEs, פתוח- וסוג סגורים-, למימוש ניתוח בישות אחת. WNE פתוח-סוג מעסיק שכבה nanometal שהופקדו על הקיר הפנימי של nanopipette, אשר ממירה הזרם faradic של ישות יחידה התגובה הנוכחית26יונית. בדרך כלל, הקוטר של WNE פתוח-סוג הוא בסביבות 100 ננומטר. כדי להקטין עוד יותר את הקוטר של WNE, הצגנו את WNE סגור-סוג, שבו nanotip מתכת מוצק תופסת באופן מלא את הטיפ nanopipette באמצעות גישה כימית-אלקטרוכימיות. בשיטה זו ניתן להפיק במהירות של nanotip 30 ננומטר זהב בתוך ריתוק. nanopore. הממשק מוגדר היטב באזור קצה של WNE סגור-סוג מבטיחה יחס אות לרעש גבוה למדידות אלקטרוכימיות של חלקיקים בודדים. כמו ננו-חלקיק הזהב טעון מתנגש עם WNE סגור-סוג, תהליך טעינה-מתרוקנת מרביים על הממשק עצה גורם לתגובה משוב קיבולי (CFR) בהמעקב הנוכחי יוניים. בהשוואה של הקודם ננו-חלקיק יחיד התנגשות המחקר ויה nanoelectrode עם מתכת בנקאית בתוך29, WNE סגור-סוג הראה גבוהה יותר הרזולוציה הנוכחית של 0.6 ± 0.1 פאפא (RMS) בעלת רזולוציה טמפורלית גבוהה יותר של 0.01 ms.
במסמך זה, אנו מתארים הליך ייצור מפורט עבור WNE סגור-סוג זה כולל מבוקר מאוד מידות ואת הפארמצבטית מצטיינים. פרוטוקול זה, תגובה פשוטה בין BH4AuCl4– – נועד להפיק nanotip זהב החוסמת לחלוטין כגדולים של nanopipette. לאחר מכן, אלקטרוכימיה דו-קוטבי מאומץ לצמיחה רציפה של nanotip זהב המגיע אורך מספר מיקרומטר פנימה nanopipette. הליך פשוט זה מאפשר את יישום זה ייצור nanoelectrode, אשר יכול להתבצע בכל מעבדה כימיה כללית ללא חדר נקי עם ציוד יקר. כדי לקבוע את גודל, מורפולוגיה ומבנה פנימי של WNE סגור-סוג, פרוטוקול זה מספק הליך אפיון מפורט עם השימוש מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה (SEM) וספקטרוסקופיה זריחה. דוגמה אחת האחרונות מודגשת, אשר מודד ישירות את האינטראקציות מהותי ודינאמי של חלקיקי זהב (AuNPs) מתנגשים לכיוון nanointerface של WNE סגור-סוג. אנו מאמינים כי WNE סגור-סוג עלולה לסלול נתיב חדש עבור מחקרים עתידיים אלקטרוכימי של תאים חיים, ננו-חומרים וחיישני ברמות ישות אחת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
1. הכנת פתרונות
הערה: לב זהירות כללית עבור כל הכימיקלים. להיפטר כימיקלים בשכונה fume, ללבוש כפפות, משקפי מגן, חלוק מעבדה. לשמור נוזלים דליקים אש או ניצוצות. כל הפתרונות מימית הוכנו באמצעות הנדסה גנטית מים (18.2 MΩ ס מ 25 ° c). פתרונות מוכנים היו מסונן באמצעות מסנן גודל הנקבוביות 0.22 μm.
2. הכנת הגדרת הניסוי
3. ייצור של WNE מסוג סגור
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
נדגים בגישה נתיישב כדי לבדות מוגדרים היטב 30 nm nanopore אלחוטית אלקטרודה בהתבסס על nanopipette חרוט קוורץ. הזיוף של nanopipette הוא הפגין איור 1, הכולל שלושה שלבים עיקריים. Microcapillary של הקוטר הפנימי של 0.5 מ מ, קוטר חיצוני של 1.0 מ מ קבוע של פולר, ולאחר מכן לייזר ממוקדת במרכז נימי להמיס את הקוורץ. על-ידי החלת כוחות המסופים של נימי, זה סוף סוף מפריד ויוצר שני חלקים עם טיפים חרוט ננו. הפרמטרים מושך הינם מסופקים בכל טבלה 1 עבור בדיית nanop...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ייצור של nanopipette מוגדרים היטב היא הצעד הראשון בתהליך ייצור WNE מסוג סגור. על ידי התמקדות לייזר2 CO במרכז נימי, נימי אחד מפריד לתוך שני nanopipettes סימטריים עם טיפים חרוט ננו. הקוטר נשלטת בקלות, הנע בין 30-200 ננומטר, על-ידי התאמת הפרמטרים של פולר הלייזר. יצויין, כי הפרמטרים עבור משיכת עלולים להשתנות עבור אלו שלוחצים פיפטה שונים. הסביבה טמפרטורה ולחות יכול להשפיע גם הקוטר סופי של nanopipette.
לאחר ייצור של nanopipette, תגובה כימית יוצר את nanotip מוצק פנימה nanopipette. ב פרוטוק...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים אין קונפליקטים של אינטרסים.
מחקר זה נתמך על ידי נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (61871183,21834001), חדשנות תוכנית של שנגחאי העירונית לחינוך הנציבות (2017-01-07-00-02-E00023), הפרויקט "צ'אן גואנג" החינוך העירוני שנגחאי הנציבות, קרן פיתוח החינוך שנגחאי (17CG 27).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אצטון | סיגמא-אולדריץ' | 650501 | דליק ונדיף מאוד |
| מטלר טולדו | ME104E | ||
| מגבר Axopatch 200B | מכשירים | ||
| Blu-Tack דבק רב פעמי | |||
| Corning Inc. | צינורות צנטריפוגה עם מכסה CentriStar, 15 מ"ל | ||
| חומצה כלורואורית | אנרגיה כימית | E0601760010 | HAuCl4 |
| Clampfit 10.4 מכשירים | מולקולריים | ||
| Digidata 1550A digitizer | מכשירים | ||
| DS Fi1c מצלמת CCD בצבע אמיתי | Nikon | ||
| Ecoflex 5 Addtion cure סיליקון גומי | Smooth-On | 17050377 | |
| Eppendorf Reference 2 פיפטות | Eppendorf | 492000904 | 10, 100 ו-1000 ומיקרו; L |
| אתנול | סיגמא-אולדריץ' | 24102 | |
| פאראדיי | מאוד נחושת | ||
| iXon 888 EMCCD | צינורות | ||
| Axygen Scientific | 0.6, 1.5 ו-2.0 מ"ל | ||
| מיקרו-מטען | Eppendorf | 5242 956.003 | 20 ומיקרו; L |
| כיסוי מיקרוסקופ זכוכית | פישר סיינטיפיק | LOT 16938 | 20 מ"מ*60 מ"מ-1 מ"מ |
| עובי מטהר מים Milli-Q | Millipore | SIMS00000 | מאייד קרן אלקטרונים דנטון |
| P-2000 חולץ לייזר | Sutter Instrument | ||
| קצות פיפטה | Axygen Scientific | 10, 200 ו-1,000 ומיקרו; L | |
| אשלגן כלורי, + D25 + A2: F2 + A2: F25 | סיגמא אולדריץ' | P9333-500G | KCl |
| פיפטות קוורץ | סאטר | QF100-50-7.5 | OD: 1.0 מ"מ, תעודת זהות: 0.5 מ"מ, אורך 75 מ"מ |
| מקרר | סימנס | ||
| מדלל סיליקון | חלק 1506330 | ||
| חוט כסף | אלפא Aesar | 11466 | |
| נתרן בורוהידריד, | טיאנליאן כימיה. | 71320 | NaBH4 |
| Ti-U מיקרוסקופ שדה כהה הפוך | Nikon |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה