הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

Nanoemulsion מיוצב Tripeptide של חומצה אולאית

8.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59034

⸱

27 בפברואר 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Brooklyn College, The City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 3Ph.D. Program in Biochemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 4Department of Genetics and Genomic Sciences, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 5Women's Health Research Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 6Laboratory for Translational Research, Western Connecticut Health Network

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה לסנתז את nanoemulsion של המספר המשלים acids-platinum(II) האולאית התייצב עם tripeptide ליזין-טירוזין-פנילאלנין (KYF). הצורות nanoemulsion בתנאים סינתטי קלה באמצעות הרכבה עצמית של KYF, לחשב את המשלים שלו.

תקציר

אנו מתארים שיטה לייצר nanoemulsion המורכב על ליבה acids-Pt(II) האולאית וציפוי של ליזין-טירוזין-פנילאלנין (KYF) (KYF-Pt-NE). KYF-Pt-NE מכמס Pt(II) ב- 10 wt. %, קוטרו של 107 ± 27 ננומטר, משטח מטען שלילי. KYF-Pt-NE יציב תוך סרום, פעילים ביולוגית. הבניין של fluorophore כדי KYF מאפשרת הסינתזה של nanoemulsion פלורסנט המתאימה עבור הדמיה ביולוגי. הסינתזה של nanoemulsion מתבצע בסביבה מימית, ולא הצורות KYF-Pt-NE באמצעות הרכבה עצמית של פפטיד KYF קצר ואת המספר של acids-platinum(II) האולאית המשלים. תהליך הרכבה עצמית תלויה על הטמפרטורה של הפתרון, יחס טוחנת סובסטרטים, קצב הזרימה של התוספת המצע. שלבים קריטיים כוללים שמירה על קצב מלהיב אופטימלית במהלך הסינתזה, המתיר מספיק זמן עבור הרכבה עצמית, ריכוז מראש את nanoemulsion בהדרגה ברכז צנטריפוגלי.

מבוא

בשנים האחרונות חלה עניין הולך וגובר בתחומי ההנדסה של חלקיקים כאלה ביו יישומים כמו תרופות ו-3,2,1,bioimaging4. Multifunctionality של מערכות מבוססות nanoparticle מחייבת לעתים קרובות שילוב רכיבים מרובים בתוך אחד ניסוח. אבני הבניין המבוססים על שומנים או פולימרים לעיתים קרובות שונים מבחינת תכונותיהם physicochemical וכן הביו שלהם, biodegradability, דבר שבסופו של דבר שעשוי להשפיע על הפונקציה של ננו-מבנה1, 5,6. חומרים נגזרת ביולוגית, כגון חלבונים ופפטידים, זמן הוכרו מבטיח מרכיבי nanostructures רב תכליתיים עקב שלהם רצף גמישות7,8. פפטידים בעצמם לתוך מאוד מסודרת ארכיטקטורות סופרא מולקולרית ויוצרים לוליינית סרטים9,10, פיגומים סיביים11,12, ועוד רבים, ובכך לסלול את הדרך לבניין nanostructures מבוססי biomolecule היברידית באמצעות מלמטה-למעלה הגישה13.

פפטידים נחקרו עבור יישומים ברפואה וביוטכנולוגיה, במיוחד עבור טיפול נגד סרטן14 ו מחלות לב וכלי דם15 גם לגבי פיתוח אנטיביוטי16,17, מטבולית הפרעות18ולאחר זיהומים19. יש יותר ממאה של קטן-פפטיד הרפוי שעברו ניסויים קליניים20. פפטידים נמצאים קל לשנות מהר לסנתז במחיר נמוך. בנוסף, הם חומר מתכלה, אשר מקל מאוד21,שלהם יישומים ביולוגיים ובתחום הרוקחות22. השימוש של פפטידים רכיבים מבניים כולל ההנדסה של חלקיקים מגיב, מבוססת על פפטיד, מחסני הידרוג עבור שחרור מבוקר23,24,25,26 , 27, ביולוגיים מבוססת על פפטיד28,29,30,31או התקנים ביו-אלקטרוניקה-32,-33,-34. חשוב, פפטידים קצרים אפילו עם שאריות חומצה אמינית שניים או שלושה, הכוללים פנילאלנין נמצאו להנחות תהליכי35,36,37 וליצור מיוצב אמולסיות38 הרכבה עצמית .

תרופות מבוססת פלטינה, בשל יעילות גבוהה שלהם, משמשים משטרי הטיפול רבים של סרטן, גם לבד וגם בשילוב עם סוכנים אחרים,39,40. תרכובות פלטינה לגרום נזק לדנ א על ידי יצירת חוצה קישורים monoadducts, intrastrand או interstrand. נגעים Pt-DNA מזוהים על ידי המנגנונים הסלולר ו, אם לא יתוקן, להוביל אפופטוזיס הסלולר. המנגנון החשוב ביותר, שבו Pt(II) תורמת מוות תאי סרטן, הוא עיכוב של ה-DNA שעתוק41,42. עם זאת, היתרונות של טיפול פלטינה הם הצטמצמו מאת מערכתית רעילות Pt(II) שמפעיל תופעות לוואי חמורות. זה מוביל מינון נמוך יותר קליני של Pt(II)43, אשר לעתים קרובות התוצאות מתחת לרמה תרפויטית ריכוזי פלטינה לכת ה-DNA. כתוצאה מכך, תיקון ה-DNA כי בעקבות תורמת הישרדות cell סרטן ורכישת ההתנגדות Pt(II). הכימותרפיה-ההתנגדות פלטינה היא בעיה רצינית טיפול נגד סרטן, הגורם העיקרי של הטיפול כשל44,45.

פיתחנו nanosystem יציב המכיל את הסוכן Pt(II) על מנת לספק אפקט מיגון ב מחזור מערכתי, להפחית את תופעות הלוואי Pt II-induced. המערכת מבוססת על ליבת acids-Pt(II) האולאית התייצב עם tripeptide KYF כדי ליצור את nanoemulsion (KYF-Pt-NE)46. אבני הבניין של KYF-Pt-NE, חומצות אמינו tripeptide, כמו גם של חומצה אולאית, בעלי מעמד בדרך כלל מזוהה בתור בטוחה (גרא) ועם המזון והתרופות האמריקני (FDA). KYF-Pt-NE מוכן באמצעות שיטה של nanoprecipitation47. בקיצור, המספר המשלים acids-Pt(II) אולאית הוא מומס של הממס האורגני ולאחר מכן נוסף dropwise פתרון KYF מימית (איור 1) ב- 37 מעלות צלזיוס. הפתרון הוא זז במשך מספר שעות לאפשר הרכבה עצמית של KYF-Pt-נברסקה Nanoemulsion זה מרוכזים 10 רכזים צנטריפוגלי kDa ושטף שלוש פעמים עם מים. שינוי כימי של KYF עם fluorophore מאפשרת הסינתזה של פלורסנט FITC-KYF-Pt-NE מתאימים עבור הדמיה הביו-רפואית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. סינתזה של המספר המשלים Acids–Platinum(II) האולאית

  1. הפעלה של ציספלטין
    1. להשעות 50 מ"ג (0.167 mmol) של ציספלטין ב 4 מ ל מים (למשל, nanopure) ב 60 מעלות צלזיוס.
    2. הוספת dropwise 55.2 מ"ג (0.325 mmol) AgNO3 0.5 מיליליטר מים אל הפתרון של ציספלטין ומערבבים את התגובה כבר לפחות שעתיים ב 60 מעלות צלזיוס. התמיסה לבן של AgCl יהוו המציין את ההתקדמות של התגובה.
    3. כדי לקבוע אם התגובה הפעלת הושלמה, לבצע את הבדיקה עם 10% HCl לנוכחות של יון Ag+ ללא פתרון. הבדיקה צריך להיות שלילי (אין התמיסה AgCl נוספים צריך טופס).
    4. Centrifuge את תערובת התגובה ב x 3,220 g 10 דקות ולהסיר את התמיסה לבן של AgCl.
    5. לאסוף את תגובת שיקוע ולסנן אותו באמצעות מסנן מזרק 0.2 מ מ. לבדוק את תגובת שיקוע לנוכחות של פלטינה על-ידי החלת 2-3 טיפות של הפתרון באמצעות פיפטה פסטר SnCl2 קריסטלים. הבדיקה היא חיובית אם צבע קומפלקס קואורדינטות של פח עם פלטינה צהוב/כתום כהה.
    6. השתמש את תגובת שיקוע Pt(II) מופעל עבור השלב השני.
  2. התגובה של חומצה אולאית עם Pt(II) מופעל
    1. להשעות 94.2 מ"ג חומצה אולאית (0.333 mmol) ב- 3 מ ל מים ב 60 מעלות צלזיוס.
    2. להוסיף 13.3 מ ג (0.333 mmol) של NaOH 1 מ"ל של מים, ומערבבים עם הפתרון של Pt(II) מופעל משלב 1.1
    3. מערבבים את התגובה כבר שעתיים ב 60 מעלות צלזיוס, הבא בטמפרטורת החדר למשך הלילה. המוצר הגולמי הוא התמיסה חום/צהוב שמנוני.
    4. Centrifuge את תערובת התגובה ב x 3,220 g 10 דקות ולהסיר את תגובת שיקוע. יבש את המוצר הגולמי 25 ° c באמצעות המאדה. לטהר את המוצר על ידי מספר שוטף עם acetonitrile. הצבע הסופי של המספר המשלים acids–Pt(II) אולאית טהורה הוא צהוב חיוור.

2. סינתזה של KYF-Pt-NE, את התווית על-ידי FITC Nanoemulsion FITC-KYF-Pt-NE

  1. סינתזה של tripeptide את KYF ולא את tripeptide שכותרתו fluorescently FITC-KYF
    1. לסנתז את KYF באמצעות פפטיד של מצב מוצק רגיל כימיה. המשתמשים בתקן הבאים צימוד התנאים לצירוף כל חומצת אמינו: וואנג שרף (2.19 mmol), חומצת אמינו Fmoc מוגן (4.38 mmol), 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate (TBTU) (4.38 mmol) ו- diisopropylethylamine (DIPEA) (8.76 mmol). להמיס את חומצות אמינו עם TBTU dimethylformamide (DMF) ו- DIPEA.
    2. משרים 5.7 גר' Fmoc-L-Phe-4-alkoxybenzyl-אלכוהול-שרף (0.382 meq/g) ב 25 מיליליטר DMF 1 שעה לפני השימוש.
    3. Deprotect הקבוצה אמין של חומצה אמינית L-פנילאלנין עם 15 מ"ל של 20% פתרון פיפרידין/DMF במשך 5 דקות, למחוק את הממס וחזור לשטוף את מחזור 20 דקות.
    4. לשטוף את השרף עבור 1 דקות עם ממיסים הבאים: DMF, אלכוהול איזופרופיל (IPA), DMF, IPA, DMF, IPA, DMF, DMF. להתעלם הממס לשטוף אחרי זה.
    5. לבצע את הבדיקה קייזר כדי לקבוע הנוכחות של קבוצה2 NH חינם על השרף (ראה substeps) ואם חיובי (הזרע שרף הוא סגול), להוסיף את חומצת אמינו Fmoc-L-טירוזין ולבצע את צימוד בין לילה.
      1. להכין קייזר בדיקת פתרונות בקבוקים נפרד.
      2. להמיס 5 גר' ninhydrin ב 100 מ של אתנול.
      3. להמיס 80 גר' של פנול, 20 מ של אתנול.
      4. לערבב 2 מ ל תמיסת אשלגן עם מימית 0.001 M
        98 מ של פירידין.
      5. להוסיף 2-3 טיפות של כל קייזר לבחון פתרונות לדוגמה, חום במים רותחים במשך 5 דקות.
    6. על זוגיות מוצלחת של חומצה אמינית שניה, לבצע את הבדיקה קייזר, ואם שלילי. המשך עם פרוטוקול deprotection (שלבים 2.1.3 כדי 2.1.5). חזור על התהליך עם חומצת אמינו ביותר Fmoc-פנילאלנין.
      1. על צימוד של כל חומצות האמינו, לשטוף השרף עבור 1 דקות 5 מ של DMF, IPA, DMF, מתנול, דיכלורומתאן דיאתיל אתר, לאחר כל כביסה למחוק הממס. שמור את השרף עיבוד נוסף.
      2. השתמש חצי של השרף על השלבים הבאים (2.1.7-2.1.9) כדי לשנות את פפטיד עם FITC. כדי לקבל tripeptide KYF שלא שונתה, בצע את ההליך החל 2.1.10.
    7. לשנות את חומצת אמינו N-מסוף של KYF ל- KYF-N3 עם 6-azidohexanoic חומצה. לשם כך, מערבבים 1 g (0.382 mmol) של וואנג KYF שרף ו 120.1 מ"ג (0.764 mmol) של חומצה 6-azidohexanoic עם 245.2 מ"ג (0.764 mmol) של TBTU ו מ"ג 197.1 (1.528 mmol) של DIPEA ב- 30 מ של DMF. מערבבים את התגובה בין לילה בטמפרטורת החדר.
    8. להשיג את KYF-FITC של הסינתזה של KYF-N3 עם propargyl fluorescein באמצעות תגובת לחץ. לשם כך, מערבבים 253 mg (0.097 mmol) של KYF-N3 וואנג שרף עם 3.78 מ"ג (0.019 mmol) של קואי מוצק 71.9 מ"ג (0.193 mmol) של propargyl fluorescein, 2.24 מ ג (0.017 mmol) של DIPEA. התגובה צריך לשנות צבע מירוק לחום.
    9. לאחר 24 שעות, לשטוף את שרף 1דקות לסירוגין עם 5 מ ל DMF ו IPA חמש פעמים, מתנול שלוש פעמים, DMF ומים מים שלוש פעמים, ועם דיכלורומתאן דיאתיל אתר שלוש פעמים. להתעלם הממס לשטוף אחרי זה.
    10. קליב את KYF-FITC או KYF פפטיד של השרף עם פתרון של חומצה trifluoroacetic (TFA) / triisopropylsilane (טיפים) /H2O-היחס של 95/2.5/2.5 מעל 3 שעות.
    11. לזרז את פפטיד גולמי ב קר דיאתיל אתר, שלוש פעמים עם אתר קר, ומייבשים אז תחת שואב האבק.
  2. סינתזה של nanoemulsion FITC KYF-מיוצב עם Pt(II) (FITC-KYF-Pt-NE), KYF-Pt-NE
    1. להמיס 10 מ ג (0.0126 mmol) acids–Pt(II) האולאית המספר המשלים ב- 1.5 מ ל אלכוהול איזופרופיל ומקום של מזרק 5 מ.
    2. הכנס את המזרק עם המספר המשלים acids–Pt(II) האולאית משאבת מזרק ולהגדיר את זרימת 0.1 mL/min.
    3. כדי לסנתז את FITC-KYF-Pt-NE, להמיס 1 מ ג (0.00105 mmol) של FITC-KYF, 1 מ ג (0.00219 mmol) של KYF (יחס 1:2 טוחנת של FITC-KYF:KYF) ב- 20 מ ל מים ולהתאים את הטמפרטורה של הפתרון 37 מעלות צלזיוס. לכסות את הקירות של המיכל ברדיד אלומיניום, כדי למנוע photobleaching של fluorophore FITC. לסנתז את KYF-Pt-NE, לפזר 2 מ ג (0.0044 mmol) של KYF tripeptide ב- 20 מ ל מים, להתאים את הטמפרטורה של הפתרון 37 מעלות צלזיוס.
    4. להוסיף את המספר המשלים האולאית acids–Pt(II) dropwise הפתרון של tripeptide FITC-KYF/KYF או KYF. לבצע שלב זה מתחת למכסה המנוע.
    5. מערבבים את הפתרון ללילה בטמפרטורת החדר להתאדות ממיסים אורגניים ולאפשר הרכבה עצמית של FITC-KYF-Pt-NE או KYF-Pt-נברסקה
    6. לרכז את FITC-KYF-Pt-NE או KYF-Pt-NE ברכז צנטריפוגליות (10k MWCO), ולא תשטוף שלוש פעמים עם 4 מ"ל של המים nanopure.
    7. לאחסן את הפתרונות מימית של KYF-Pt-NE, FITC-KYF-Pt-NE ב 4 º C.
    8. ניתוח תוכן פלטינה בעזרת ספקטרוסקופיית בליעה אטומית (AAS), בעקבות המדריך של היצרן48.
      1. להתכונן עקומת כיול תקני פלטינה תמיסת HCl 10% (טווח אפקטיבי של AAS הוא בין 100 ל 1200 ppb (חלקים לביליון)).
      2. להמיס 50 µL של KYF-Pt-NE פתרון של שלב µL 2.2 ל-100 של aqua regia (תערובת 3:1 של חומצת מלח מרוכזת, חומצה חנקתית) ומשאירים בטמפרטורת החדר במשך הלילה. הוסף µL 850 של מים להגיע נפח דגימה הסופי של 1 מ"ל. לנתח את הדגימה באמצעות AAS. ריכוז החומצה הסופי צריך להיות 10% כל הדגימות שנותחה.
      3. להקליט את הקריאה של ריכוז נק' ב- ppb, לחשב את התוכן פלטינה הסופי המדגם (חשבון עבור מדגם דילול ונפח הראשונית של nanoemulsion).

3. קונאפוקלית הדמיה של ספיגת הסלולר של FITC-KYF-Pt-NE

  1. זרע 6 שורות תאים סרטן השחלות (A2780 CP70, SKOV3, OV90, TOV21G, ES2), 4 מנות קונאפוקלית טוב-הקאמרית-הצפיפות של 4.7 x 104 תאים לכל תא, מראש תרבות בין לילה ב 37 º C.
  2. לאחר 24 שעות, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם פוספט מאגר סליין (הציבורי), דגירה עם FITC-KYF-Pt-NE תא תרבות בינוני (ראה שלב 6.1 תא קו פרטים ספציפיים) למשך 15 דקות ב 37 º C.
  3. לאחר דגירה, מסיר את המדיה, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.
  4. לתקן את התאים עם מתנול קר במשך 5 דקות ב-20 ° C, לשטוף שלוש פעמים עם 1 מ"ל ל- PBS.
  5. Permeabilize התאים עם 1 מ"ל של 0.1% טריטון-X 10 דקות בטמפרטורת החדר, שטיפת שלוש פעמים עם 1 מ"ל ל- PBS.
  6. דגירה התאים במשך 90 דקות עם נוגדנים LAMP1 מצומדת עם אלקסה עבור חיל הים 647 (1 מ"ל) ב- 1:50 דילול ב- PBS בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, לשטוף את התאים 3 פעמים עם PBS.
  7. הפתרון מניות דאפי (1 מ"ג/מ"ל) 1 מ"ג/מ"ל ב- PBS מדולל. לאחר מכן, להוסיף 1 מ"ל של הפתרון מדולל בכל תא, תקופת דגירה של 15 דקות בטמפרטורת החדר. לשטוף את התאים 3 פעמים עם PBS.
  8. הר coverslips בשקופית באמצעות הרכבה בינונית.
  9. תמונה של תאים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי תא חי-גל עירור של 405 ננומטר, 488 ננומטר, 633 ננומטר. קבע את הפרמטרים זיהוי כדלקמן: עוצמת הלייזר של 0.2%, לא יותר מ-1%, יחידת? רקוב 1 אוורירי, לזכות מאסטר אופסט דיגיטלי 650-750, 0.
  10. תמונה פתוחה בתוכנות ליצירת תמונות. תחת התמונה המוצגת, בחר גרפיקה , בחר סרגל סרגל Insertלהוספת סרגל קנה מידה על התמונה.

4. סמים שחרור ללימודים

  1. לבצע את המחקרים שחרור התרופה ב- PBS. התאימו את ערכי ה-pH של שלושה מאגרי PBS 7.4, 6.8, 5.0 בהתאמה.
  2. לדלל 5 μL של KYF-Pt-NE ב 180 μL pH המתאים PBS המאגר, להעביר 3.5 kDa MWCO דיאליזה מיני גביע, דגירה ב 37 ° C ב- PBS.
  3. להסיר את מאגר כל צינורות דיאליזה מיני 3-2, 4, 6, 24, 48 ו- 140 h, ולמדוד את הריכוזים פלטינה על ידי AAS. להכין כל דוגמאות לפי שלב 2.2.8 אבל לכוונן את עוצמת הקול הסופי לדוגמה כדי 500 µL.

5. תא תרבות שיטות

  1. תרבות תא קווים A2780, CP70, SKOV-3, OV-90, טוב - 21G, ES-2 תא תרבות בינוני (DMEM) בתוספת עם 10% (A2780, CP70, SKOV-3, ES-2) או עם 15% (טוב - 21G, OV-90) העובר סרום שור (FBS), עם-גלוטמין ו פניצילין/סטרפטומיצין. לגדול כל התאים ב- 5% CO2, האווירה רווי מים ב 37 º C.
  2. הזרע 3 x 105 תאים כל צלחת 96-ובכן ותרבות מראש ללילה עבור ניסויים במבחנה הדגירה. הכינו את הפתרונות KYF-Pt-NE, ציספלטין ו carboplatin במים. התאם את הריכוז של Pt(II) ב KYF-Pt-NE כדי להתאים את ריכוז carboplatin, ציספלטין עבור כל קו תא. תקופת דגירה של 72 שעות ב 37 º C.
  3. לאחר דגירה, להעריך את הכדאיות הסלולר באמצעות וזמינותו של ערכי צבע מוחלטים (וזמינותו MTT התפשטות תאים). בקצרה, הסר בינוני ולהוסיף μL 110 של 10% MTT בינוני לכל טוב ואני תקופת דגירה של 2 h ב- 37 מעלות צלזיוס. ואז להוסיף אבקת μL 100 מכל קידוח, תקופת דגירה של 5 שעות ב 37 º C.
  4. בדוק את ספיגת-570 nm באמצעות צלחת הקורא. לנתח את התוצאות באמצעות ניתוח סטטיסטי עם מבחן Z P-test.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תמונת TEM נציג של KYF-Pt-NE שהוכנו באמצעות פרוטוקול זה מוצג באיור 2A. KYF-Pt-נס הם כדורי במורפולוגיה, ובכן התפזרו, אחידים בגודלם. הקוטר הליבה של KYF-Pt-נס, נמדדו ישירות מתוך שלוש תמונות TEM עם מינימום של 200 מידות הכבוד, הוא 107 ± 27 ננומטר. הקוטר hydrodynamic של KYF-Pt-NE, נותחה באמצעות ספקטרוסקופית אור דינאמי (DLS), נמצאה להיות 240 nm עם מדד polydispersity 0.156. פוטנציאל זטה של KYF-Pt-NE במים נקבע עבור שלושה syntheses עצמאית עם הערך הממוצע של-60.1 mV. היקף...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

השלבים הקריטיים של הסינתזה nanoemulsion כוללים התאמת יחס טוחנת סובסטרטים, שמירה על טמפרטורה וזרימת בקרת קצב במהלך הוספת acids–Pt(II) האולאית, מתן זמן מספיק הרכבה עצמית, מטהרים את המוצר באמצעות רכז צנטריפוגלי טורים. פרמטרים אלה משפיעים על גודל של המורפולוגיה של KYF-Pt-ששומר; לכן, חשוב במיוחד לשמור על יחס נאות טוחנת ולהתאים את התנאים סינתטי כראוי.

היחס של סובסטרטים במהלך הסינתזה nanoemulsion (שלב 3) הוא קריטי עבור תהליך הרכבה עצמית וקובעת לגודל הסופי של המוצר. KYF acid-Pt(II) האולאית טוחנת יחס 1...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

מחברים אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

תודות

אנו להכיר בהכרת תודה תמיכה כספית נדיבה של המכון הלאומי לסרטן, הענק SC2CA206194. אין אינטרסים כלכליים מתחרים מוצהרים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium
tetrafluoroborate (TBTU)		ANASPEC INC.:AS-20376SPPS
צלחת קונפוקלית תאית 4 בארותLab-Tek II, Thermo Fisher Scientific154526להדמיית
6-חומצה ברומוהקסנואיתChem-Impex INT' L בע"מ.24477שינוי קליק לפפטיד
A2780נתרם בנדיבות על ידי פרופסור ג'ון מרטיניטי מבית החוליםקו תאי סרטן השחלות
Barnstead NanopureThermo FisherD11901מערכת סינון מים
BUCHI rotavapor R-3BuchiZ568090להסרת ממס וייבוש דגימות
צנטריפוגה 5810 Reppendorf5811Fלהפרדת קומפלקס פלטינה
Cis-dichlorodiamineplatinum (II) 99%Acros Organics19376-0050בדיקות מבחנה
CP70נתרם בנדיבות על ידי פרופסור ג'ון מרטינטי מבית החוליםקו תאי סרטן השחלות אמבט
מים דיגיטליVWR97025-134לחימום מדיה לתרבית תאים
פיזור אור דינמי (DLS)Brookhaven Instrument Corporationלמדידת גודל ננו-חלקיקים
ES-2ATCCCRL-1978קו תאי סרטן השחלות
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 99.79%Chem-Impex INT' L בע"מ.00493SPPS
Fmoc-L-Phe 4-שרף אלכוהול אלקוקסי בנזיל (0.382 meq/g),Chem-Impex INT' L בע"מ.01914SPPS
Fmoc-LTyr(tBu)-OH 98%Alfa AesarH59730SPPS
HERACELL 150i CO2 חממתתרמו מדעי פישר
משאבת מזרק בלחץ גבוהעידן חדש1010-USלתוספת קומפלקס פלטינה בסינתזה של ננו-חלקיקים
פלטה חמה/בוחשVWR12365-382לערבוב וחימום
מדגםנוגדן LAMP-1 (מצומד עם Alexa Fluor 647)Santa Cruz Biotechnologysc-18821 AF647להדמיה
N,N-diisopropylethylamine (DIPEA)Oakwood Chemical 005027SPPS
Ninhydrin 99%Alfa AesarA10409מבחן קייזר
חומצה אולאיתChem-Impex INT' L בע"מ.01421לסינתזה קומפלקס פלטינה
OV90ATCCCRL-11732קו תאים סרטן השחלות
PBSקורנינג21-031-CVלשטיפת תאים
Permount הרכבה בינוניתפישר כימיSP15-100להדמיה
פנולפישר כימיA92500מבחן קייזר
חומצה פוספוטונגסטיתפישר כימיA248-25כתם שלילי עבור TEM
Piperidine 99%BTC219260-2.5LSPPS
פלטינה AAS נשמה סטנדרטיתAlfa Aesar880861000ug/ml לעקומת כיול
Propargyl bromide 97%Alfa AesarL10595לשינוי אלקין של
ארון ביולוגי מדעיThermo Scientific Fisher1385Bio-hood לתרבית
תאים מערכת ואקום לניקוי עצמיWelch2028משאבת ואקום לרוטאד
כסף חנקתיAcros Organics19768-0250הפעלת ציספלטין
SKOV3ATCCHTB-77קו תאים סרטן השחלות
נתרן הידרוקסידפישר מדעיS313-1לסינתזה מורכבת פלטינה
פח (II) כלורידסיגמא אולדריץ'208256 בדיקת נוכחות פלטינה
TOV21GATCCCRL-11730קו תאי סרטן השחלות
חומצה טריפלואורואצטית 99% (TFA)אלפא AesarL06374SPPS
Triisopropylsilane (TIPS)Chem-Impex INT' L בע"מ.01966SPPS
Triton-XSigma AldrichT8787-100MLלהדמיית
אבקת אורנין 40%Fisher ScientificS25328Aלשינוי אלקין של פלואורסצאין
Vivaspin 20 (10000 MWCO)SartoriousVS2001לשטיפת ננו-חלקיקים ועיבוי
VWR מיקרוסקופ הפוךVWR89404-462לניטור תרבית תאים
הר סיני הר סיני

מקורות

  1. Agrahari, V., Agrahari, V., Mitra, A. K. Nanocarrier fabrication and macromolecule drug delivery: challenges and opportunities. Therapeutic Delivery. 7 (4), 257-278 (2016).
  2. Anselmo, A. C., Mitragotri, S. Nanoparticles in the clinic. Bioengineering & Translational Medicine. 1 (1), 10-29 (2016).
  3. Peer, D., Karp, J. M., Hong, S., Farokhzad, O. C., Margalit, R., Langer, R. Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy. Nature Nanotechnology. 2 (12), 751-760 (2007).
  4. Roy Chowdhury, M., Schumann, C., Bhakta-Guha, D., Guha, G. Cancer nanotheranostics: Strategies, promises and impediments. Biomedicine & Pharmacotherapy. 84, 291-304 (2016).
  5. Jeevanandam, J., Chan, Y. S., Danquah, M. K. Nano-formulations of drugs: Recent developments, impact and challenges. Biochimie. , 99-112 (2016).
  6. Meerum Terwogt, J. M., Groenewegen, G., Pluim, D., Maliepaard, M., Tibben, M. M., Huisman, A., ten Bokkel Huinink, W. W., Schot, M., Welbank, H., Voest, E. E., Beijnen, J. H., Schellens, J. M. Phase I and pharmacokinetic study of SPI-77, a liposomal encapsulated dosage form of cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 49 (3), 201-210 (2002).
  7. Fan, Z., Sun, L., Huang, Y., Wang, Y., Zhang, M. Bioinspired fluorescent dipeptide nanoparticles for targeted cancer cell imaging and real-time monitoring of drug release. Nature Nanotechnology. 11 (4), 388-394 (2016).
  8. Jeong, Y., et al. Enzymatically degradable temperature-sensitive polypeptide as a new in-situ gelling biomaterial. Journal of Controlled Release. 137 (1), 25-30 (2009).
  9. Uesaka, A., et al. Morphology control between twisted ribbon, helical ribbon, and nanotube self-assemblies with his-containing helical peptides in response to pH change. Langmuir. 30 (4), 1022-1028 (2014).
  10. Hwang, W., Marini, D. M., Kamm, R. D., Zhang, S. Supramolecular structure of helical ribbons self-assembled from a B-sheet peptide. Journal of Chemical Physics. 118 (1), 389-397 (2003).
  11. Svobodova, J., et al. Poly(amino acid)-based fibrous scaffolds modified with surface-pendant peptides for cartilage tissue engineering. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 831-842 (2017).
  12. Kumar, V. A., et al. Highly angiogenic peptide nanofibers. ACS Nano. 9 (1), 860-868 (2015).
  13. Romera, D., Couleaud, P., Mejias, S. H., Aires, A., Cortajarena, A. L. Biomolecular templating of functional hybrid nanostructures using repeat protein scaffolds. Biochemical Society Transactions. 43 (5), 825-831 (2015).
  14. Medina, S. H., Schneider, J. P. Cancer cell surface induced peptide folding allows intracellular translocation of drug. Journal of Controlled Release. 209, 317-326 (2015).
  15. Recio, C., Maione, F., Iqbal, A. J., Mascolo, N., De Feo, V. The Potential Therapeutic Application of Peptides and Peptidomimetics in Cardiovascular Disease. Frontiers in Pharmacology. 7, 526(2016).
  16. McCarthy, K. A., et al. Phage Display of Dynamic Covalent Binding Motifs Enables Facile Development of Targeted Antibiotics. Journal of the American Chemical Society. 140 (19), 6137-6145 (2018).
  17. Lazar, V., et al. Antibiotic-resistant bacteria show widespread collateral sensitivity to antimicrobial peptides. Nature Microbiology. 3 (6), 718-731 (2018).
  18. Czeczor, J. K., McGee, S. L. Emerging roles for the amyloid precursor protein and derived peptides in the regulation of cellular and systemic metabolism. Journal of Neuroendocrinology. 29 (5), (2017).
  19. Branco, M. C., Sigano, D. M., Schneider, J. P. Materials from peptide assembly: towards the treatment of cancer and transmittable disease. Current Opinion in Chemical Biology. 15 (3), 427-434 (2011).
  20. Cheetham, A. G., et al. Targeting Tumors with Small Molecule Peptides. Current Cancer Drug Targets. 16 (6), 489-508 (2016).
  21. Ndinguri, M. W., Solipuram, R., Gambrell, R. P., Aggarwal, S., Hammer, R. P. Peptide targeting of platinum anti-cancer drugs. Bioconjugate Chemistry. 20 (10), 1869-1878 (2009).
  22. Eskandari, S., Guerin, T., Toth, I., Stephenson, R. J. Recent advances in self-assembled peptides: Implications for targeted drug delivery and vaccine engineering. Advanced Drug Delivery Reviews. 110, 169-187 (2017).
  23. Zhou, J., Du, X., Yamagata, N., Xu, B. Enzyme-Instructed Self-Assembly of Small D-Peptides as a Multiple-Step Process for Selectively Killing Cancer Cells. Journal of the American Chemical Society. 138 (11), 3813-3823 (2016).
  24. Sun, J. E., et al. Sustained release of active chemotherapeutics from injectable-solid beta-hairpin peptide hydrogel. Biomaterials Science. 4 (5), 839-848 (2016).
  25. Lock, L. L., Reyes, C. D., Zhang, P., Cui, H. Tuning Cellular Uptake of Molecular Probes by Rational Design of Their Assembly into Supramolecular Nanoprobes. Journal of the American Chemical Society. 138 (10), 3533-3540 (2016).
  26. Kalafatovic, D., Nobis, M., Son, J., Anderson, K. I., Ulijn, R. V. MMP-9 triggered self-assembly of doxorubicin nanofiber depots halts tumor growth. Biomaterials. 98, 192-202 (2016).
  27. Frederix, P. W., et al. Exploring the sequence space for (tri-)peptide self-assembly to design and discover new hydrogels. Nature Chemistry. 7 (1), 30-37 (2015).
  28. Horsley, J. R., et al. Photoswitchable peptide-based 'on-off' biosensor for electrochemical detection and control of protein-protein interactions. Biosensors and Bioelectronics. 118, 188-194 (2018).
  29. Hoyos-Nogues, M., Gil, F. J., Mas-Moruno, C. Antimicrobial Peptides: Powerful Biorecognition Elements to Detect Bacteria in Biosensing Technologies. Molecules. 23 (7), 1683(2018).
  30. Xiao, X., et al. Advancing Peptide-Based Biorecognition Elements for Biosensors Using in-Silico Evolution. ACS Sensors. 3 (5), 1024-1031 (2018).
  31. Puiu, M., Bala, C. Peptide-based biosensors: From self-assembled interfaces to molecular probes in electrochemical assays. Bioelectrochemistry. 120, 66-75 (2018).
  32. Wang, J., et al. Developing a capillary electrophoresis based method for dynamically monitoring enzyme cleavage activity using quantum dots-peptide assembly. Electrophoresis. 38 (19), 2530-2535 (2017).
  33. Etayash, H., Thundat, T., Kaur, K. Bacterial Detection Using Peptide-Based Platform and Impedance Spectroscopy. Methods in Molecular Biology. 1572, 113-124 (2017).
  34. Handelman, A., Apter, B., Shostak, T., Rosenman, G. Peptide Optical waveguides. Journal of Peptide Science. 23 (2), 95-103 (2017).
  35. Chen, C., Liu, K., Li, J., Yan, X. Functional architectures based on self-assembly of bio-inspired dipeptides: Structure modulation and its photoelectronic applications. Advances in Colloid and Interface Science. 225, 177-193 (2015).
  36. Reddy, S. M., Shanmugam, G. Role of Intramolecular Aromatic pi-pi Interactions in the Self-Assembly of Di-l-Phenylalanine Dipeptide Driven by Intermolecular Interactions: Effect of Alanine Substitution. Chemphyschem. 17 (18), 2897-2907 (2016).
  37. Marchesan, S., et al. Unzipping the role of chirality in nanoscale self-assembly of tripeptide hydrogels. Nanoscale. 4 (21), 6752-6760 (2012).
  38. Scott, G. G., McKnight, P. J., Tuttle, T., Ulijn, R. V. Tripeptide Emulsifiers. Advanced Materials. 28 (7), 1381-1386 (2016).
  39. Galanski, M., Jakupec, M. A., Keppler, B. K. Update of the preclinical situation of anticancer platinum complexes: novel design strategies and innovative analytical approaches. Current Medicinal Chemistry. 12 (18), 2075-2094 (2005).
  40. Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials. Dalton Transactions. 39 (35), 8113-8127 (2010).
  41. Oberoi, H. S., Nukolova, N. V., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Nanocarriers for delivery of platinum anticancer drugs. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (13-14), 1667-1685 (2013).
  42. Fichtinger-Schepman, A. M., van Oosterom, A. T., Lohman, P. H., Berends, F. cis-Diamminedichloroplatinum(II)-induced DNA adducts in peripheral leukocytes from seven cancer patients: quantitative immunochemical detection of the adduct induction and removal after a single dose of cis-diamminedichloroplatinum(II). Cancer Research. 47 (11), 3000-3004 (1987).
  43. Englander, E. W. DNA damage response in peripheral nervous system: coping with cancer therapy-induced DNA lesions. DNA Repair. 12 (8), 685-690 (2013).
  44. Galluzzi, L., et al. Molecular mechanisms of cisplatin resistance. Oncogene. 31 (15), 1869-1883 (2012).
  45. Boeckman, H. J., Trego, K. S., Turchi, J. J. Cisplatin sensitizes cancer cells to ionizing radiation via inhibition of nonhomologous end joining. Molecular Cancer Research. 3 (5), 277-285 (2005).
  46. Dragulska, S. A., et al. Tripeptide-Stabilized Oil-in-Water Nanoemulsion of an Oleic Acids-Platinum(II) Conjugate as an Anticancer Nanomedicine. Bioconjugate Chemistry. 29 (8), 2514-2519 (2018).
  47. Martinez Rivas,, J, C., et al. Nanoprecipitation process: From encapsulation to drug delivery. International Journal of Pharmaceutics. 532 (1), 66-81 (2017).
  48. Agilent Technologies. Analytical Methods for Graphite Tube Atomizers, User's Guide Manual, 8th edition. , (2012).
  49. Park, S. Y., et al. A smart polysaccharide/drug conjugate for photodynamic therapy. Angewandte Chemie. 50 (7), 1644-1647 (2011).
  50. Canton, I., Battaglia, G. Endocytosis at the nanoscale. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2718-2739 (2012).
  51. Lokich, J., Anderson, N. Carboplatin versus cisplatin in solid tumors: an analysis of the literature. Annals of Oncology. 9 (1), 13-21 (1998).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

קונג'וגט של חומצה אולאית ופלטינהציפוי פפטיד KYFתהליך התכנסות עצמיתריכוז צנטריפוגליננו-אמולסיה פלורסצנטיתשחרור פלטינהתאי סרטן השחלהמיקרוסקופיה אלקטרונית בשידור (TEM)שיטת משאבת מזרק
Nanoemulsion מיוצב Tripeptide של חומצה אולאית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.