כריתת ריאה מכרסם השמאלית היא טכניקה יקר במחקר יתר לחץ דם ריאתי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לתאר את הליך כריתת ריאה עכברוש וטיפול לאחר הניתוח כדי להבטיח מינימלי התחלואה והתמותה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כריתת ריאה מכרסם השמאלית היא טכניקה יקר במחקר יתר לחץ דם ריאתי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לתאר את הליך כריתת ריאה עכברוש וטיפול לאחר הניתוח כדי להבטיח מינימלי התחלואה והתמותה.
ב פרוטוקול זה, אנחנו פירוט ושלבי נכונה של אמצעי הזהירות הנדרשים לשם בהצלחה לבצע כריתת השמאלי, זירוז הפה בחולדות עם ממשל נוספים של monocrotaline (MCT) או SU5416 (Sugen). אנחנו גם להשוות בין 2 מודלים אחרים דגמי הפה נפוץ במחקר. השנים האחרונות, עברה המוקד של מודלים הפה כלפי לימוד המנגנון של angioproliferation של נגעים plexiform, שבה תפקידו של זרימת דם ריאתי מוגבר נחשבת בגורם מפעיל חשוב בהתפתחות של חמור ריאתי שיפוץ כלי הדם. אחד המודלים מכרסמים המבטיחים ביותר של זרימה ריאתי מוגבר היא כריתת ריאה השמאלית חד צדדית בשילוב עם "מכה שנייה" של MCT או Sugen. הסרת הריאה השמאלית מוביל זרימת דם ריאתי מוגבר, הסוערת ו שיפוץ כלי הדם. כיום, יש אין הליך מפורט של הניתוח כריתת ריאה אצל חולדות. מאמר זה מפרט פרוטוקול צעד אחר צעד של הליך ניתוחי כריתת ריאה, טיפול לאחר הניתוח בחולדות ספראג-Dawley זכר. בקצרה, החיה. הוא מורדם, פתיחת בית החזה. ברגע עורק הריאה השמאלית וריד ריאתי, סמפון הם דמיינו, הם מאתרים, הסרת הריאה השמאלית. החזה אז נעצמו וחילצנו החיה. הדם הוא נאלץ להפיץ רק על הריאה הימנית. זו הגברת לחץ בנימי הדם מוביל פרוגרסיב שיפוץ סגר עורקי הריאה קטן. הלהיט השני של MCT או Sugen הוא בשימוש שבוע לאחר הניתוח כדי לגרום בתפקוד אנדותל. השילוב של זרימת דם מוגברת ריאות, בתפקוד אנדותל מייצרת הפה חמורה. המגבלה העיקרית של הליך זה הוא כי הוא דורש מיומנויות כירורגית כללית.
לחץ דם עורקי ריאתי (הפה) היא מחלה מתקדמת, חמורה המאופיינת על ידי הגברת זרימת דם ריאתי מוגבר התנגדות כלי הדם, דלקת, שיפוץ של כלי דם ריאתי קטנים1. שיפוץ זה בדרך כלל תוצאות נגעים וסקולאריים להכשיל, להשמיד את העורקים הריאה קטן, גרימת vasoconstriction והגדלת החדר הימני afterload2. כמה טיפולי תרופתי מוצלחת של הפה קיים; מכך, הקשורות הפה התמותה נותר גבוה. לאחרונה, עבר המוקד של מחקר על pathobiology של יתר לחץ דם ריאתי לכיוון מנגנון של אנגיוגרפיה-התפשטות שבו התפקיד של זרימת דם ריאתי מוגבר נחשבת בגורם מפעיל חשוב בהתפתחות של ריאות כלי הדם שיפוץ3,4.
מודלים חייתיים של יתר לחץ דם ריאתי סיפקו תובנות קריטי לסייע להסביר את הפתופיזיולוגיה של המחלה, שמשו כפלטפורמה לשיווק התרופה, תא, ג'ין ומסירת חלבון. באופן מסורתי, הדגם לחץ דם ריאתי כרוני היפוקסיה-induced ודגם פגיעת ריאות MCT היו המודלים העיקריים בשימוש כדי לחקור הפה פתופסיולוגיה5. עם זאת, הן אינן מספיקות לייצר תבנית זרימת ואת neointimal דם ריאתי מוגבר של שיפוץ לעומת השינויים המתוארים בחולים אנושיים. המודל כרונית-היפוקסיה בחולדות תוצאות עיבוי של כלי הדם עם vasoconstriction שתקבעו בלי אנגיוגרפיה-ברכות כלי ריאתי קטנים6. בנוסף, התנאי היפוקסיה הוא הפיך. לפיכך, המודל היפוקסיה הוא גם לא מספיקה כדי לייצר הפה חמורה. המודל פגיעת ריאות MCT להפיק מסוימים בתפקוד אנדותל אבל מורכבות obliterative נגעים של כלי הדם נמצאו בני-אדם עם הפה הראשית חמורה אינם מפתחים החולדות2. בנוסף, חולדות שטופלו MCT נוטים למות רעילות MCT-induced ריאה, מחלת כבד veno-occlusive, דלקת שריר הלב, ולא מן הפה2. בסופו של דבר, כריתת ריאה לבד אינה מספיקה כדי לייצר neointimal נגעים של כלי ריאתי קטנה בתקופה קצרה של זמן. לאחר כריתת ריאה, יש גובה מינימלי בלחץ הדם בעורק ריאתי7. בבני אדם, כריתת ריאה הוא נסבל היטב כאשר הריאות contralateral בריא7.
עם זאת, הליך כריתת ריאה השמאלית בשילוב עם MCT או Sugen יש יתרון מאז זה מחקה את זרימת דם ריאתי מוגבר ותוצאות ריאתי וסקולרית שיפוץ להשוות. חמורה הפה קליניים. כריתת ריאה מתבצע על הריאה השמאלית, אשר יש רק 1 האונה, ולא מימין, שבו יש ארבע אונות. אם הריאה הימנית הוסרה, החיה יוכל לפצות אי ספיקה נשימתית. במודל כריתת ריאה-MCT, דפוס neointimal של שיפוץ מתפתח מעל 90% של פעלו בעלי חיים מטופלים7. באופן דומה, שילוב Sugen עם כריתת ריאה תוצאות חמורות הפה, מאופיינות אנגיוגרפיה-obliterative נגעים של כלי הדם, התפשטות, אפופטוזיס ועל תפקוד RV8. הנוהל כריתת ריאה השמאלית הוא גם יתרון לעומת ניתוחים אחרים לזירוז הפה. בעבר שתואר הדגמים בחולדות כדי להגביר את זרימת הדם ריאתי לריאות כוללים את aorto-caval דלף או עורק ריאתי-בריחי השקה. מודלים אלה הם מאוד מסובך7,9,10,11. לביצוע של המחלף aorto-caval, הבטן של החיה יש אפשרות לפתוח. המחלף נמצא במחלקה העורק הראשי, אשר מגביר את זרימת הדם אל כל אברי הבטן במקום רק את הריאות, לפיכך, הפה לוקח הרבה זמן כדי לפתח. בנוסף, קשה לקבוע את זרימת הדם דרך המחלף, ואילו עם כריתת ריאה הדם לזרום לזוג הריאה הנותרת. ההשקה עורק ריאתי-בריחי יש גם סיבוכים רבים. זרימת הדם בעורקים לווריד יכול להוביל פקקת של השקה ודימום. כמו המחלף aorto-caval, קשה לקבוע את זרימת הדם דרך ההשקה. יתר על כן, זה טכניקה יקר וקשה הדורש מיומנויות כירורגית כלי דם. כריתת ריאה השמאלית חד צדדית מכפילה את זרימת הדם ואת גזירה בריאה contralateral וגורם, בשילוב עם MCT או Sugen, הממצאים והמודינמיקה ו histopathological אופייני של הפה אשר הוא נזק תאי אנדותל8, 12.
החידוש של כתב יד זה מוצג ב פרוטוקול כירורגי מאוד מפורט ומקיף כריתת ריאה השמאלית בחולדות, בדיון של האתגרים הטכניים, פיזיולוגיים של מודלים אלה. כי פרוטוקול זה אינו זמין כעת, חוקרים רבים מאמינים שהמודל הוא שימוש קשה מדי. חוקרים אשר אמורה לבצע את כריתת ריאה השמאלית התמודדו עם תמותה גבוהה ומחירים תחלואה הקשורים עם אובדן מיותר של בעלי חיים, להתפשר על הערכה מדעית. במקום זאת, רבים ישתמש הדגמים הקלאסיים כגון הזרקת MCT, כרונית-היפוקסיה או רק את כריתת ריאה ליצירת הפה. עם זאת, מודלים אלה הם הרבה פחות יעיל מאשר השילוב של MCT או Sugen עם כריתת ריאה השמאלית. המטרה העיקרית של מאמר זה היא לספק פרוטוקול כירורגי תחילה מפורט, לשחזור כריתת ריאה חד צדדית משמאל בחולדות ולספק הדגם כירורגי הטוב של הפה. שילוב פרוטוקול זה עבור כריתת ריאה חד צדדית משמאל עם MCT או SU5416 יאפשר חוקרים כדי ליצור מודל הרבה יותר אפקטיבית, הרלוונטית קלינית של הפה חמור ללמוד בפתוגנזה של מחלה קטלנית זו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ההליכים המתוארים להלן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של בית הספר לרפואה Icahn במעמד הר סיני. כל העכברושים קיבל טיפול אנושי תואם הר סיני "מדריך עבור טיפול והשתמש של חיות מעבדה".
1. הכנה לניתוח
2. והכנה צנרור של חולדות
3. הכנת סביבה סטרילית
4. הליך ניתוחי כריתת ריאה השמאלית
5. לאחר הניתוח לשחזור
6. מינהל "המכה השנייה" MCT או Sugen
7. מסוף קציר
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
על פי שיטת הסיווג המקובל, יתר לחץ דם ריאתי מאופיין בלחץ רשע עורק הריאה (mPAP) גבול עליון לחץ נורמלי עורק הריאה (קרי, 25 מ מ כספית). כריתת ריאה + קבוצה MCT, חמור הפה שפותחה על ידי יום 21 עם mPAP מוגברת (איור 1). MPAP מחושבת באמצעות הנוסחה:

בהתכווצות והתרחבות של RV ו הרשות הפלסט...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בריאות הפה מושפעות התפשטות כלי הדם עם היווצרות neointimal, מחק עורקי הריאה לגרום שינויים והמודינמיקה חמורה, כשל נכון חדרית ותמותה מוקדם7,8. השינויים כלי הדם להגביר התנגדות לזרימת הדם, הגדלת הלחץ בעורקים נכון חדרית. בשלבים המוקדמים של הפה, בדרך כלל כשלושה שבועות לאחר ניהול MCT או Sugen, שעכברים פיתחו שינויים היסטולוגית ספציפי כמו היפרטרופיה המדיאלי, עיבוי adventitial muscularization של עורקים קטנים, רבים. שינויים אלה הם הפיכים פוטנציאלי. בשלבים מאוחרים יותר, כ- 6-...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים יש שאין פוטנציאל ניגודי אינטרסים.
כתב יד זה נתמך על ידי NIH להעניק 7R01 HL083078-10 מעניקה את איגוד הלב האמריקני AHA-17SDG33370112 ו מ את נבחרת מוסדות של בריאות NIH K01 HL135474 כדי Y.S., את נבחרת מוסדות של בריאות R01 HL133554 כדי L.H.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| להב כירורגי | Bard-Parker | 371215 | חתך |
| פוראן (איזופלורן, USP) | בקסטר | NDC 10019-360-40 | הרדמה |
| BD אנגיוקט 16 גרם | BD | 381157 | צינור אינטובציה, צינור חזה |
| BD 1 מ"ל מזרק אינסולין BD 329652 | לתת בופרינקס לאחר ניתוח | ||
| ביוג'ל מנתחים כפפות כירורגיות | ביוג'ל | 30460-01 | כפפות כירורגיות סטריליות |
| Wahl BravMini+ Trimmer | Braintree Scientific | CLP-41590 P | אתר כירורגי גילוח |
| SU5416 | קיימן כימיקל | 13342 | Sugen |
| תאורת סיבים אופטיים | Cole-Parmer | EW-41723-02 | אור לאינטובציה |
| Surgipro II 4-0 תפר | Covidien | VP831X | סגירת שרירים בין-צלעיים |
| פוליסורב 5-0 תפר | Covidien | GL-885 | סגירת עור |
| שקופית בינונית תא אינדוקציה עליון | DRE וטרינרי | 12570 | אספקת חמצן ואיזופלורן |
| DRE קומפקטי 150 מכרסם מכונת הרדמה | DRE וטרינרי | 373 | משלוח חמצן ואיזופלורן |
| ערכת צריבה לכלי קטן | כלי מדע עדין כלים | 18000-00 | צריבה כדי למזער דימום |
| מאוורר בעלי חיים קטנים VentElite | מכשיר הרווארד | 55-7040 | מאוורר |
| עכברSTAT ג'וניור | קנט סיינטיפיק | MSTAT-JR | אוקסימטר דופק ומד דופק |
| חיישן אוקסימטר דופק כף עכבר | קנט סיינטיפיק | SPO2-MSE | דופק אוקסימטר & חיישן כף דופק |
| PhysioSuite RightTemp | קנט מדעי | PS-02 | כרית טמפרטורה |
| PVP הכנה פתרון | Medline | MDS093944 | ניקוי אתר כירורגי |
| פולי מרופד | וילון Medline | כיסוי NON21002Z | בעלי חיים |
| 3 מ"ל מזרק | Medline | SYR103010 | נותנים נוזלים לאחר הניתוח |
| ערכות מיקרו-כירורגיות, Integra | Miltex | 95042-540 | כלים כירורגיים: ספקולום חוט רגיל, בדיקה כפולה, מספריים מקפרסון-ואנאס איריס ישר, מספריים ישרים לקשתית |
| מלקחיים המוסטטיים - מיקרו-ג'ייקובסון-מוסקיטו | Miltex | 17-2602 | יתוש |
| בופרנורפרין HCl 0.3 מ"ג/מ"ל | Par Pharmaceutical | NDC 42023-179-01 | שיכוך כאבים |
| מספריים מעוקלים Cooley-Mayo | פילינג | 352090 | מספריים גדולים |
| ג'רלד רקמות מלקחיים | פילינג | 351900 | מלקחיים |
| Wangesnsteen רקמות מלקחיים | פילינג | 342929 | מלקחיים אטראומטיים |
| פילינג מחזיק מחט כלי דם דק | פילינג | 354962DG | מחזיק מחט |
| קרוטלין | סיגמא-אולדריץ' | C2401-1G | MCT |
| Surflash 20 G IV קטטר | Terumo | SR * FF2051 | לקריאת לחץ במהלך קצירת איברים |
| ADVantage PV מערכת עם 1.2 Fr צנתר | Transonic Inc | ADV500 | שיא לחץ עורק ריאתי וחדר ימין |
| המוקליפ בינוני | Weck | 523700 | כלי קשירה |
| פתוחים מוליך קליפ קשירה; | מוליך המוקליפ | Weck Horizon | 237081 |
| מיקרוסקופ כירורגי | Zeiss OPMI MD | 1808 | הגדלה |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.