כאן, אנו מציגים שיטות למחקר תפוקה גבוהה של סדרת cavefish מקסיקני התנהגויות, צביעת חיוני של מערכת mechanosensory. שיטות אלה להשתמש בקבצי script התוכנה-החופשית, מחוייט, מתן שיטה מעשית וחסכונית עבור המחקרים של התנהגויות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מעקב אחר התנהגות והדימות Neuromast של Cavefish מקסיקני
במאמר זה
סיכום
תקציר
בעלי החיים שוכני המערה התפתחו סדרה של מאפיינים מורפולוגיים והתנהגותיים להסתגל לסביבות שלהם חשיבתו אפל, מזון-דליל. בין התכונות הללו, התנהגות הרעיה הוא אחד החלונות שימושי לתוך יתרונות פונקציונליים של האבולוציה תכונה התנהגותית. שהוצגו במסמך זה הן שיטות מעודכן לניתוח התנהגות המשיכה רטט (VAB: התנהגות אדפטיבית הרעיה) הדמיה של mechanosensors המשויכת של טטרה הותאם המערה, Astyanax mexicanus. בנוסף, שיטות מוצגים לצורך מעקב תפוקה גבוהה של סדרת התנהגויות cavefish נוספים כולל היפראקטיביות ושינה-הפסד. Cavefish גם להראות asociality, התנהגות שחוזרת על עצמה וחרדה גבוהה יותר. לכן, cavefish לשמש מודל חיה עבור התנהגויות מפותחת. שיטות אלה להשתמש בקבצי script התוכנה-החופשית, בהזמנה אישית שניתן להחיל על סוגי אחרים של התנהגות. שיטות אלה מספקים חלופות מעשי וחסכוני תוכנת מעקב זמינים מסחרית.
מבוא
טטרה מקסיקנית, Astyanax mexicanus (Teleostei: Characidae), מיוחד בין הדגים שיש שני morphs אלטרנטיביות שונות באופן קיצוני - מורף רואי, השטח-המגורים ואת מורף עיוורת, שוכני המערה מורכבת מכמה ברורים אוכלוסיות1. למרות שונה מורפולוגיה ופיזיולוגיה, הם עדיין interfertile2,3. אלה morphs interfertile להופיע התפתחו במהירות (~ 20,000 שנים)4, מה שהופך אותם מערכת מודל אידיאלי לחקר הסתגלותם המהירה. Cavefish ידועים חבילה של תכונות מורפולוגיים והתנהגותיים מתבדרת כולל צפיפות מוגברת של בלוטות הטעם, עלייה במספר mechanosensors, הרעיה התנהגות מכוון לתדר מסוים של גירוי רוטטת, ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הפרוצדורות מתבצעות לבצע את ההנחיות המתוארות "עקרונות של מעבדה חיה אכפת" (המכון הלאומי לבריאות פרסום מס' 85-23, תוקן 1985), שאושרו על-ידי האוניברסיטה של hawai ' i Manoa מוסדיים טיפול בעלי חיים, שימוש ועדת חיות פרוטוקול 17-2560-3.
1. רטט המשיכה התנהגות (VAB) assay (≤ 10 דקות עבור הליך הקלטת כולה)
הערה: השתמש מצלמת אינפרא אדום רגיש או לבנות מצלמת אינפרא-אדום על-ידי שינוי מצלמת אינטרנט USB. כדי לשנות את מצלמת אינטרנט USB, ראה תיאור מפורט שהוצגו על ידי המעבדה קין בנושא זה cavefish-יופיטר (מבעיה זו mexicanus א ), או תיאור קצר את החומרים המשלימים.
- הגדרת הקלטה
- כדי לוודא כי המצלמה תישאר בעמדה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התוצאות שהוצגו במסמך זה הן דוגמאות מייצגות של מה ניתן לרכוש עם השיטות שהוצגו. לכן, התוצאות ניתן לסטות מעט לבין אלו המובאות כאן הן cavefish והן דגים השטח בהתאם לתנאי הניסוי.
התנהגות המשיכה רטט
ניתן למצוא תוצאות נציג VAB באיור 3 מערת ודגים משטח. הערה הפעולה edge-בעקבות הדג פני השטח (איור 3 א; תכ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטות אלה שהוצגו קל לגישה אבל יכול להיות מסובך לביצוע בשל אופיו של מקורותיה freeware. לכן, מומלץ מאוד לבצע מבחני ניסיון וניתוחים לפני כל ניסויים בפועל.
קצב נתונים הדור יכול להיות מהירה ברגע הוקם במסגרת ניסיוני אנליטיים. הוקמה לאחר, זה אפשרי להקליט שני דגים ב- 7 דקות לקבלת VAB וזמינותו, דגים 30 ב- 24 שעות ביממה עבור פעילות/שינה וזמינותו של דג אחד 2.5 עד 3 דקות עבור neuromast הדמיה, החל מ- MS222 הרדמה לכידת התמונה הסופית. משך הזמן של הניתוחים וידאו ותמונה יכול להשתנות במידה ניכרת בהתאם הביצועים .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
אנו מודים לכל חברי המעבדה יושיזאווה כולל Cetraro ש ש סיימון, ג ולדז, ג Macapac, ג'יי צ'וי, ל' Lu, ג'יי נגוין, ס פודהורצר, ה Hernandes, פונג ג'יי, ג'יי קאטו, אני לורד לטיפול דגים על הדגים נסיוני בשימוש כתב היד הזה. אנו מודים גם חברי המעבדה קין א כולל עמ' Masek לאמן שלי להרכיב מצלמת IR CCD. לבסוף, ברצוננו להודות את מעבדת המדיה - המכללה למדעי החברה - בית הספר לתקשורת האוניברסיטה של hawai ' i Mānoa על עזרתם לא בפז עם ביצוע הווידאו, סמית ב', ג' לאם ולבן ס במיוחד. עבודה זו נתמכה על ידי קרן קהילתית הוואי (16CON-78919 ו- 18CON-90818), המכון הלאומי של הבריאות NIGMS (P20GM125508) מעניק שלי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 4-Di-1-ASP (4-(4-(dimethylaminostyryl)-1-methylpyridinium iodide) | MilliporeSigma | D3418 | |
| 880 nm אורך גל אור שחור | תאורה מתקדמת | BL41192-880 | |
| avfs | freeware | גרסה 1.0.0.6 | http://turtlewar.org/avfs/ |
| Avisynth | freeware | גרסה 2.6.0 | http://avisynth.nl/index.php/Main_Page |
| Cygwin | freeware | גרסה 2.11.0 | https://www.cygwin.com/ |
| תא בדיקה גלילי (צלחת זכוכית פיירקס 325 מ"ל) | Corning | 3140-100 | קוטר 10 ס"מ גובה 5 ס"מ |
| Ethovision XT | Noldus Information טכנולוגיה, Wageningen, הולנד | גרסה 14 | https://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt |
| דגים אקווריום צילינדר מסנן מים אבן ספוג רך, | ז'רדן שחור (עד Amazon.com) | מסנן ספוג NA | למערכת הקלטת שינה/היפראקטיביות |
| ביצי שרימפס מלח | ישיר | BSEA16Z | |
| תוכנה חופשית | ImageJגרסה 1.52e | https://imagej.nih.gov/ij/ | |
| מאקרו 1.8/12.5-75 מ"מ עדשת זום C-mount | Toyo | NA | חבר למצלמת אינטרנט USB באמצעות תושבת c, המודפסת במדפסת תלת מימד |
| רגולטור ניטרלי | Seachem | NA | |
| מסנן מעבר ארוך IR יצוק אופטי מפלסטיק | אדמונד אופטיקה | 43-948 | חתוך לחתיכה קטנה כדי להתאים ל-CCD של תוכנה חופשית |
| של מצלמת אינטרנט USB pfmapבנה 178 | http://pismotec.com/download/ (ב " הורד את הארכיון" קישור בתחתית) | ||
| Reef Crystals Reef Salt | Instant Ocean | RC15-10 | |
| SwisTrack | freeware | גרסה 4 | https://en.wikibooks.org/wiki/SwisTrack |
| מצלמת אינטרנט USB (LifeCam Studio 1080p HD Webcam) | Microsoft | Q2F-00013 | לחתוך 2-2.5 ס"מ מהחזית |
| WinAutomation | freeware | גרסה 8 | https://www.winautomation.com/ (עצמאי בחינם אפליקציה להליך זה) |
| מערכת הפעלה | Windows Microsoft | 7, 8 או 10 | https://www.microsoft.com/en-us/windows |
| x264vfw | תוכנה חופשית | NA | https://sourceforge.net/projects/x264vfw/ |
מקורות
- Keene, A. C., Yoshizawa, M., McGaugh, S. E. Biology and Evolution of the Mexican Cavefish. Biology and Evolution of the Mexican Cavefish. , Elsevier Inc. Amsterdam. (2015).
- Mitchell, R. W., Russell, W. H., Elliott, W. R.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
