מאמר שיטה

בנייה ושימוש חדר גירוי חשמלי לשיפור Osteogenic התמיינות בתאי גזע Mesenchymal/סטרומה במבחנה

DOI:

10.3791/59127

⸱

31 בינואר 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Frankfurt Initiative for Regenerative Medicine, Johann Wolfgang Goethe-University, 2J. Crayton Pruitt Family Department of Biomedical Engineering, University of Florida

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים פרוטוקול להקמת תא התרבות תאים שנועדו לחשוף תאים לסוגים שונים של גירוי חשמלי, ושימוש בו בטיפול גזע mesenchymal כדי לשפר את הבידול osteogenic.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תאי גזע mesenchymal/סטרומה (MSCs) נעשה שימוש נרחב כדי לקדם את עצם ריפוי ברקמות הנדסה גישות. גירוי חשמלי (EStim) הוכח להגדיל MSC בידול osteogenic במבחנה, לקדם את עצם ריפוי בהגדרות קליניים. כאן נתאר הקמת חדר תרבות תא EStim ואלשין השימוש בטיפול עצמות מח-נגזר MSC כדי לשפר את הבידול osteogenic. מצאנו כי בטיפול MSCs עם EStim במשך 7 ימים גורמת לעליה משמעותית הבידול osteogenic, חשוב, אפקט pro-osteogenic זה נמשכת זמן רב לאחר (7 ימים) EStim הוא הופסק. גישה זו של pretreating MSCs עם EStim כדי לשפר את הבידול osteogenic יכול לשמש כדי למטב את רקמת העצם הנדסה תוצאות הטיפול, לפיכך, לסייע להם לממש את הפוטנציאל הטיפולי מלאה שלהם. בנוסף יישום זה, הזה EStim תא תרבות קאמרית, פרוטוקול יכול לשמש גם כדי לחקור התנהגויות תא רגיש EStim אחרות, כגון העברה, התפשטות, אפופטוזיס מצורף לגרדום.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עלייה טראומה ו/או פגמים הנוצרות על-ידי מחלת עצם מטופלים באמצעות צירופים שונים של טיפול בתאי וטכנולוגיות רפואה רגנרטיבית. MSCs הם התא לפי בחירה, טיפולים כאלה, בשל פעילות osteogenic יחסית גבוהה, בידוד, הרחבת והיעילות, בטיחות1. על מנת למקסם את הפעילות osteogenic שלהם, לכן, למטב את האפקטיביות הטיפולית שלהם, הוכנסו מספר שיטות לטיפול MSCs לפני השימוש בטיפולים אלה (כפי שנסקרו על ידי Mauney et al.2). שיטה אחת כזאת היא EStim, אשר הוכח לשפר MSC בידול osteogenic חוץ גופית3 ולקדם את עצם ריפוי ויוו4. למרות המספר הגדל והולך של לימודי התמקדות בטיפול MSCs עם EStim, משטר אופטימלית עבור למקסם את אפקט pro-osteogenic של EStim טרם מוגדר.

שיטות הפריה אחרות באמצעות EStim לנצל את גשרי מלח בתוך המדיום תרבות, המפריד בין תאים אלקטרודות מתכתי5. היתרון של זה היא כי אספקת EStim באמצעות גשרים מלח מבטלת המבוא של לוואי כימיות (למשל, קורוזיה של אלקטרודות מתכתי) שעשויים להיות ציטוטוקסיות. למרות יתרון זה, גשרי מלח הם מסורבלים כדי לעבוד עם, EStim הם מספקים שונה כי מודלים ויוו ונמסרו ב, ולכן קשה לתאם את התוצאות המתקבלות בעת שימוש את שתי המערכות. כיוונוני לספק EStim באמצעות אלקטרודות מתכתי או פחמן קבוע בתוך הבארות התרבות התא (כפי שנסקרו על ידי Hronik-Tupaj, קפלן6) כדאי לדמות התקנים המשמשים ויוו; עם זאת, התקנים אלה שקשה לנקות/לחטא בין שימושים, מספר התאים שניתן ללמוד לכל ניסוי מוגבל. תיכננו תא EStim המובאים כאן במיוחד כדי לטפל המגבלות של אלה כיוונונים אחרים. בעוד רוב הניסיון שלנו באמצעות לשכת EStim הזה כבר עם 2D ו 3D תרבויות המכיל מח עצם ושומן-רקמה-נגזר MSCs3,4, אחד היתרונות המרכזיים של החדר הזה זה תכליתי והוא, עם יחסית מינורי שינויים, ניתן להתאים ללמוד את סוגי תאים אחרים תחת מגוון תנאים שונים.

כאן נתאר את בניית חדר תרבות תא EStim; לאחר מכן, נדגים את השימוש בו על ידי MSCs בטיפול עם משטרי שונים של EStim ומדידת האפקט המתקבל על בידול osteogenic. בידול osteogenic MSC מוערך באמצעות התצהיר סידן פעילות פוספטאז אלקליין, ביטוי גנים סמן osteogenic. חשוב, ב עבר ניסויים בשימוש תוכנית התקנה זו, הבחנו כי השפעות פרו-osteogenic אלו נמשכות זמן רב לאחר הטיפול EStim הופסק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. בנייה לשכת התרבות של גירוי חשמלי תא

  1. כדי לבנות תא EStim, לאסוף את העפעפיים שני לוחות תרבות תא 6-ובכן תקן; 99.99% פלטינה חוט, 60 ס"מ אורך בקוטר של 0.5-1 מ מ; חוט נחושת מצופה כסף, 70 ס מ אורך בקוטר 0.6 מ"מ; פלייר למהנדס חשמל; מלחם קיט; שפופרת אחת של דבק superconductive; חוט אחד מסוף לחסום מחבר, שישה קטנים 2.2 V נוריות (אופציונלי); שפופרת אחת של דבק סיליקון חלד ציפוי (אופציונלי); גליל אחד של סרט בידוד חשמלי שחור; תקן, גמיש, מבודדים נחושת חוט חשמלי (0.14 מ מ2), 2 מטר אורך (טבלה של חומרים).
  2. מכסה צלחת 6-ובכן, מארק, ואז תרגיל שני חורים (בקוטר של ~ 1 מ מ), 25 מ מ זו מזו, ליד הקצה החיצוני של כל אחד מששת בארות (12 חורים סה כ), כפי שמוצג איור 1A, B.
  3. חתך אורכי 12 5 ס מ של חוט פלטינה עם מגזריים. לכופף כל אחד החוטים ידנית לתוך צורת L, עוזב את קצה אחד ארוך 3 ס"מ וחותכים השני 2 ס מ. הכבל מצופים כסף לתוך שני אורכי 35 ס מ.
  4. להוסיף יותר זמן (3 ס"מ) כפוף סוף חוט פלטינה (מ פנימה להוציא) לתוך כל חור מסועף, להשאיר 1-2 מ מ בולטות מבחוץ של המכסה, לכופף אותו באמצעות מלקחיים. לאבטח את החוטים פלטינה החורים המכסה עם דבק superconductive ולהשאיר לו להתייבש במשך כ- 6 שעות.
  5. הלחמה קצות כל החוטים פלטינה 6 (זה מאוחר יותר לשמש cathodes, ראה איור 1A) מהעורקים עפעפיו לאחד החוטים מצופה כסף. חזור על הליך דומה הלחמה החוטים הנותרים פלטינה 6 (שישמש מאוחר יותר אנודות) לכבל אחרים מצופה כסף.
    1. הוסף נוריות במעגל בין כל אחת של שש אנודת-קטודה אלקטרודת פלטינה הזוגות, לאשר פונקציונליות במהלך הניסויים (אופציונלי). מניחים חתיכת סרט בידוד שחור תחת כל הוביל כדי למנוע חשיפת התאים צלחות תרבות נורית ה-LED (איור 1C).
  6. הדבק המחבר מסוף לחסום תיל כדי לפינה השמאלית העליונה של המכסה 6-ובכן צלחת וחבר שני חוטים מצופים כסף המסופים קלט, כפי שמוצג באיור 1C.
  7. לגזור מקטע 20 מ מ x 20 מ מ מהפינה השמאלית העליונה של מכסה 6-ובכן צלחת השני (איור 1B, המכסה Nr. 2) כדי להכיל את המחבר מסוף לחסום את המכסה הראשון. מכסה את המכסה הראשון, מצויד האלקטרודות, עם המכסה השני, להדביק אותם ביחד עם סרט דביק.
    1. כדי לשפר את התקשרות של הכיסוי שני, השתמש דבק סיליקון ציפוי (אופציונלי). כדי לעשות זאת, מכסה את המכסה עם האלקטרודות כסף עם 3-5 מ מ שכבה של דבק סיליקון, ולכסות המכסה אחרים, ומאפשר 12 שעות על הדבק להתייבש.
  8. חבר קצה אחד שני רגיל החוטים נחושת מבודד המסופים פלט של המחבר תיל ומסתיים אחרים למחברים זכר בננה (4 מ מ).
    הערה: אורך החוטים האלה תלוי המרחק מן המדף בחממה, שבו התאים יישמר, לספק הכוח, מחוץ החממה (איור 1D).
  9. להתאים את המינון (מתח), משטר של EStim להעביר התאים על ידי ויסות אספקת חשמל DC.
    1. הפעל את אספקת החשמל על-ידי לחיצה על כפתור ON/OFF בלוח הקדמי. להפעיל ערוץ 1 על ידי לחיצה על לחצן 1.
    2. הקש על לחצן Nr. 4 (V-set) כדי להגדיר את המתח. עיתונות כפתורים 2, . ו- 5 כדי להגדיר את הפלט טען ב- 2.5 (פ') הקש Enter.
    3. להבטיח כי הפלט עומס של 2.5 V (2,500 mV) מקביל EStim mV/מ"מ, לפי המשוואה הבאה, פשוטה.
      V EStim = figure-protocol-1 ; או
      V = VEStim × d
      . הנה, V = מתח פלט במילי-ואטים; d = המרחק בין האלקטרודות במילימטרים; V EStim = המתח גירוי במילי-ואטים לכל מילימטר.
      הערה: פישוט זה חלה רק במקרה של מתח DC מתמדת. ההתנגדות בין המדיום לבין התאים הוא זניח כמו אלקטרודות שאינם נמצאים במגע ישיר עם התאים; במקום זאת, EStim מועבר לתאים דרך המדיום.

2. mesenchymal תא גזע תרבות osteogenic בינוני

  1. לרכוש ולאחסן MSCs עכברוש זמינים מסחרית (ראו טבלה של חומרים) בחנקן נוזלי עד היום של הניסוי. לחלופין, בידוד MSCs מבעלי חיים אחרים על פי פרוטוקולים שפורסם במקומות אחרים7,8 על פי תקנות מוסדיים מקומיים לשימוש של חיות ניסוי.
  2. ביום של הניסוי, להסיר את בקבוקון אחד (1 x 106 תאים) של MSCs האחסון חנקן נוזלי, במהירות (תוך 1 דקות) והפשרה של התאים בתוך אמבט מים טרופה על 37 מעלות צלזיוס.
    1. בתנאים סטריליים ב תא למינארי, pipette את התוכן המבחנה לתוך צינור בז ' 50 מל ' ולהוסיף 9 מיליליטר בינונית רגילה (ננומטר) prewarmed עד 37 ° C, המורכב בינוני הנשר של Dulbecco ששונתה (DMEM; 1 x) עם 10% לא פעיל חום העובר שור סרום (FBS) ו- 1% פתרון פניצילין/סטרפטומיצין. גלולה את התאים עבור 5 דקות על ידי צנטריפוגה ב x 300 גרם.
    2. תא למינארי, להסיר את תגובת שיקוע, בזהירות resuspend בגדר תא ב 12 מ של NM prewarmed ל- 37 מעלות צלזיוס. העבר את התאים resuspended בקבוקון התרבות של תאים T-75.
  3. התרבות התאים 37 ° C, 5% CO2, 5% O2 עד שיגיעו למפגש של 80% – 90% (לאחר כ 3-5 ימים).
  4. המעבר את התאים.
    הערה: ביצוע כל הפעולות מלבד צנטריפוגה הדגירה בתנאים סטריליים תא למינארי.
    1. כשמגיעים זרימה של 80% – 90%, לאחזר את התאים עם פתרון ניתוק התא. תשאף המדיום התרבות תאים, לשטוף 2 x עם 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS), הוסף 5 מ של 1 x פתרון ניתוק התא, וחוזרים התאים החממה במשך 5 דקות.
    2. ברגע התאים מנותקים, להוסיף כמות שווה של תרבות בינוני כדי להשבית את הפתרון ניתוק. לאסוף את התאים בשפופרת בז 50 מ ל, לסובב אותם ב 300 x גרם במשך 5 דקות.
    3. למחוק את המדיום, resuspend תאים 1 מ"ל של מדיום נורמלי טריים. להעריך את מספר התאים קיימא עם הכתם trypan blue.
    4. זרע עונה 1 פרק 106 תאים בבקבוקון T-75 חדש עם 12 מ של prewarmed ננומטר. התרבות התאים 37 ° C, 5% CO2, 5% O2 עד שיגיעו למפגש של 80% – 90%.
      הערה: תא passaging (צעדים 2.4.1–2.4.4) יכול לחזור כמה פעמים עד המספר הדרוש של תאים מתקבל. אל תשתמש שגילן עולה על המעבר 8 תאים.
  5. זרע 9 x 104 תאים ב- 3 מ"ל של NM (10% לא פעיל חום העובר שור סרום, 1% פניצילין/סטרפטומיצין, DMEM), כל טוב של צלחת 6-ובכן תרבות. דגירה התאים ליום 1-37 מעלות צלזיוס, 5% CO2, 5% O2.
  6. למחרת, תשאף תרבות בינוני ולהחיל 3 מ"ל של בידול osteogenic בינוני (אום; בינונית רגילה בתוספת 10-7 מ' דקסמטסון 10 מ מ β-glycerophosphate, מ מ 0.05 חומצה אסקורבית-2-פוספט).
  7. מקום 6-ובכן לצלחת עם תאים בחממה, דגירה 37 ° C, 5% CO2, 5% O2 בן לילה.

3. טיפול MSCs עם EStim

  1. ביום שהתאים מטופלים עם EStim, לעקר את האלקטרודות בפתרון אתנול 70% למשך 30 דקות; לאחר מכן, יבש אותם תחת אולטרא סגול בבטיחות בארון למשך 30 דקות נוספות.
  2. ב תא למינארי, לכסות את הצלחת 6-ובכן המכיל את MSCs תרבותי עם המכסה מצויד האלקטרודות, מוודא כי האלקטרודות לחלוטין טובע בינוני (אם יש צורך, להוסיף בינוני). להעביר את הצלחת 6-ובכן מקורה (EStim קאמרית) עם תאי החממה וחבר שלה חוטים לספק הכוח.
  3. הגדר את אספקת החשמל 2.5 V פלט טעינה ולפנק את התאים עם EStim עבור 1 h3,9.
  4. לאחר גירוי, נתק את אספקת החשמל, להסיר את התא EStim החממה. תחת תנאים סטריליים, להחליף את המכסה מצויד עם אלקטרודות עם מכסה תקן 6-ובכן צלחת.
  5. להחזיר את התאים החממה ולהשאיר אותם בן לילה. לנקות את האלקטרודות, תחילה עם PBS ולאחר מכן עם 70% אתנול פתרון. לנקות את המוצרים קורוזיה שהצטברו מהמשטח אלקטרודה עם נייר זכוכית עדין.
  6. חזור על שלבים 3.1 – 3.5 6 ימים רצופים. יום 4, לפני החלת EStim, תחת תנאים סטריליים, לשנות המדיום תרבות על-ידי כ רפה בעברית 1.5 מיליליטר בינוני והחלפתו 1.5 מיליליטר המפרך טרי prewarmed
  7. לאחר החלת EStim 7 ימים רצופים, לשמר את התאים בתרבות 7 ימים נוספים, להחלפת המדיום כל 3-4 ימים.

4. מדידות בידול osteogenic

  1. לנתח את השינויים מורפולוגיה תאים במיקרוסקופ.
  2. כדי להעריך את השפעת EStim על MSC בידול osteogenic, מדד סידן התצהיר, פעילות פוספטאז אלקליין osteogenic סמן ביטוי גנים, כפי שתואר במקומות אחרים3,9.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי להעריך את ההשפעה של 100 mV/מ מ EStim על הבידול osteogenic של MSCs, תאים שטופלו EStim עבור 3, 7, ו 14 ימים או nontreated (בקרה) נותחו ביום 14 של culturing על-ידי הערכת שינויים מורפולוגיים ומשקעים סידן (איור 2 ). הדבר נעשה על-ידי הדמיה תאים באמצעות מיקרוסקופיית שדה בהיר (מורפולוגיה שינויים) או תיקון התאים בפתרון paraformaldehyde 4%, מכתימה אותם עם פתרון alizarin אדום 0.02%, לאחר מכן הדמיה אותם באמצעות מיקרוסקופיית שדה בהיר (סידן התצהיר ניתוח).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן נתאר הקמת תא, שיטה לטיפול בבעיות גזע mesenchymal עם EStim כי התוצאות התמיינות משופרת osteogenic.

הגדרת EStim שהוצגו לא דורשת ציוד/ידע מיוחד, יכול להתבצע בתוך מעבדה ביולוגיה/ביוכימיה סטנדרטי בתאי גזע על ידי החוקרים הצעירים. עם זאת, כאשר בונים ומפעילים תא EStim, טיפול מיוחד חייב להילקח מספר שלבים קריטיים. בעת טיפול האלקטרודות פלטינה, יש לקחת טיפול נוסף כמו המתכת הזאת הוא מאוד נזיל, עדין. בעוד מתכות אחרות, כגון פלדה או טונגסטן, יכול לשמש, אלה אינם מומלצים כפי שהם נוטים קורוזיה, אשר יכול להיות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמך בחלקה של אאו גרנט סטארט-אפ של קרן (S-14-03 H) ושל קרן Friedrichsheim (Stiftung Friedrichsheim) ב פרנקפורט, גרמניה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<ייצור חזק>Estim< / מחבר >
/ מתאם ג'קPoppstars1008554 2 חלקים
צבת חיתוךKnipex78 03 125
ספק כוח DC (0-30V / 0-3A)B& K Precisionדגם 9130Bניתן להשתמש בכל דגם סימולרי ניתן להשתמש
בחוטים גמישים מבודדים (0.14 מ"מ2)Conrad Electronic International604794, 6040932 חלקים
גומי סיליקון לא קורוזיביDow Corning3140 RTV*ניתן לרכוש על ידי חנויות רבות
חוט פלטינה (999,5/1000; 1 מ"מ ø)Junker Edelmetalle00D-30100.6 מ' דרוש עבור 1 תא אסים
70% תמיסת אתנולכלעיקור של תא אסים
חוט נחושת מצופה כסף (0.6 מ"מ ø)קונרד אלקטרוניק אינטרנשיונל409334 - 62≈ 70 ס"מ דרוש עבור 1 מכשיר Estim
סט ברזל הלחמהConrad Electronic International1611410 - 62ניתן להשתמש בכל דגם סימולרי
TPP מכסה צלחת 6 בארותSigma-AldrichZ707759-126EA2 מכסים לתא Estim
2.2V נוריות LED עגולות חוטיותConrad Electronic International599525 - 626 חתיכות
UHU סופר דבקUHU GmbH & Co. KGn/a*ניתן לרכוש בחנויות רבות
תרבית MSC
β-גליצרופוספט מלח דיסודיום הידרטSigma-AldrichG9422תרבית תאים אוסטאוגנית
DMEM, גלוקוז נמוך, תוסף GlutaMAX, פירובטתרמו-פישר תרבית תאים מדעית
21885025 DPBS, ללא סידן, ללא מגנזיוםתרמו-פישר תרבית תאים
14190144 דקסמתזוןסיגמא-אולדריץ'D4902תרבית תאים אוסטאוגנית
סרום בקר עובריתרמו-פישר תרביתתאים10500064
50 מ"ל שפופרת פלקוןSarstedt62,547,004תרבית תאים
L-אסקורביתסיגמא-אולדריץ'A4544תרבית
פניצילין/סטרפטומיציןתרמו-פישר תרבית תאים מדעית15140122
תאי גזע מזנכימליים של חולדות Sprague-Dawley (SD), מקור מח עצםCyagenRASMX-01001תרבית תאים
תמיסת ניתוק תאיםתרמו-פישרA1110501תרבית תאים מדעית, ניתוק תאים
TC Flask, T75Sarstedt833911302תרבית תאים
TPP 6 בארותתרבית תאיםSigma-AldrichZ707759-126EA
צבע כחול טריפאן, תמיסה של 0.4%Bio-Rad1450021ספירת תאים
בננה חזקמדעית מדעיתתאים אוסטאוגנית

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Oryan, A., Kamali, A., Moshiri, A., Baghaban Eslaminejad, M. Role of Mesenchymal Stem Cells in Bone Regenerative Medicine: What Is the Evidence? Cells, Tissues, Organs. 204 (2), 59-83 (2017).
  2. Mauney, J. R., Volloch, V., Kaplan, D. L. Role of Adult Mesenchymal Stem Cells in Bone Tissue Engineering Applications: Current Status and Future Prospects. Tissue Engineering. 11 (5-6), 787-802 (2005).
  3. Mobini, S., Leppik, L., Thottakkattumana Parameswaran, V., Barker, J. H. In vitro effect of direct current electrical stimulation on rat mesenchymal stem cells. PeerJ. 5, e2821(2017).
  4. Leppik, L., et al. Combining electrical stimulation and tissue engineering to treat large bone defects in a rat model. Scientific Reports. 8 (1), S1(2018).
  5. Song, B., et al. Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo. Nature Protocols. 2 (6), 1479-1489 (2007).
  6. Hronik-Tupaj, M., Kaplan, D. L. A review of the responses of two- and three-dimensional engineered tissues to electric fields. Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 167-180 (2012).
  7. Huang, S., et al. An improved protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow. Journal of Orthopaedic Translation. 3 (1), 26-33 (2015).
  8. Nau, C., et al. Tissue engineered vascularized periosteal flap enriched with MSC/EPCs for the treatment of large bone defects in rats. International Journal of Molecular Medicine. 39 (4), 907-917 (2017).
  9. Eischen-Loges, M., Oliveira, K. M. C., Bhavsar, M. B., Barker, J. H., Leppik, L. Pretreating mesenchymal stem cells with electrical stimulation causes sustained long-lasting pro-osteogenic effects. PeerJ. 6, 4959(2018).
  10. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), San Diego, CA. 402-408 (2001).
  11. Curtis, K. M., et al. EF1alpha and RPL13a represent normalization genes suitable for RT-qPCR analysis of bone marrow derived mesenchymal stem cells. BMC Molecular Biology. 11, 61(2010).
  12. Wang, L., Li, Z. -y, Wang, Y. -p, Wu, Z. -h, Yu, B. Dynamic Expression Profiles of Marker Genes in Osteogenic Differentiation of Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells. Chinese Medical Sciences Journal (Chung-kuo i hsueh k'o hsueh tsa chih). 30 (2), 108-113 (2015).
  13. Kim, H. B., Ahn, S., Jang, H. J., Sim, S. B., Kim, K. W. Evaluation of corrosion behaviors and surface profiles of platinum-coated electrodes by electrochemistry and complementary microscopy: biomedical implications for anticancer therapy. Micron. 38 (7), Oxford, UK. 747-753 (2007).
  14. Cho, Y., Son, M., Jeong, H., Shin, J. H. Electric field-induced migration and intercellular stress alignment in a collective epithelial monolayer. Molecular Biology of the Cell. , mbcE18010077(2018).
  15. Tai, G., Tai, M., Zhao, M. Electrically stimulated cell migration and its contribution to wound healing. Burns & Trauma. 6, 20(2018).
  16. Love, M. R., Palee, S., Chattipakorn, S. C., Chattipakorn, N. Effects of electrical stimulation on cell proliferation and apoptosis. Journal of Cellular Physiology. 233 (3), 1860-1876 (2018).
  17. Adams, D. S., Levin, M. General principles for measuring resting membrane potential and ion concentration using fluorescent bioelectricity reporters. Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (4), 385-397 (2012).
  18. Jin, G., Li, K. The electrically conductive scaffold as the skeleton of stem cell niche in regenerative medicine. Materials Science & Engineering. C, Materials for Biological Applications. 45, 671-681 (2014).
  19. Hronik-Tupaj, M., Rice, W. L., Cronin-Golomb, M., Kaplan, D. L., Georgakoudi, I. Osteoblastic differentiation and stress response of human mesenchymal stem cells exposed to alternating current electric fields. Biomedical Engineering Online. 10, 9(2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

RunX2Osterix

מאמרים קשורים