מטרת הנייר היא לזהות שינויים ברמות הסטרס לאחר הביקור בשלוש הגדרות שונות ולתאר את השיטות המשמשות לזיהוי רמות הסטרס המבוססות על מדדים של קורטיזול בהרוק, α-עמילאז, ודוח עצמי פסיכולוגי כלי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מטרת הנייר היא לזהות שינויים ברמות הסטרס לאחר הביקור בשלוש הגדרות שונות ולתאר את השיטות המשמשות לזיהוי רמות הסטרס המבוססות על מדדים של קורטיזול בהרוק, α-עמילאז, ודוח עצמי פסיכולוגי כלי.
הביקור בסביבות טבעיות נקשר להפחתת לחץ פסיכולוגי. למרות שרוב המחקרים הקשורים למתח הסתמך על פורמטים של דו ח עצמי, מספר גדל והולך של מחקרים משלב כעת הורמונים ביולוגיים הקשורים ללחץ וזרזים, כגון קורטיזול ו-אמקלז, כדי למדוד רמות של מתח. מוצג כאן הוא פרוטוקול כדי לבחון את ההשפעות על רמות של מתח ביופיזיקלי ופסיכולוגי בעקבות ביקורים לשלושה מיקומים שונים עם רמות שונות של הטבע. רמות הלחץ הפסיכולוגי בביופיזיקלי ודיווח עצמי נמדדות מיד עם הכניסה למיקומים שנבחרו ובדיוק לפני המבקרים העוזבים את האתר. באמצעות שיטת "ריר", המדד הביופיזיקלי מורכב מדגימות של 1-2 mL של רוק שסופקו על-ידי נושאי הלימוד בעת הכניסה לאחד משלושת מיקומי הלמידה. כפי שנקבע על ידי הספרות הקיימת, הרוק נאסף בתוך מסגרת זמן 45 דקה לאחר סיום האירוסין של המבקר במקום. בעקבות איסוף רוק, הדגימות מסומנות ומועברים למעבדה ביולוגית. קורטיזול הוא משתנה ביופיזיקלי של עניין במחקר זה נמדד באמצעות תהליך אליסה עם קורא לוחית TECAN. כדי למדוד מתח שדיווח על עצמו, שאלון הלחץ הנתפס (PSQ), המדווח על רמות של דאגה, מתח, שמחה ודרישות שנתפסו. המידע נאסף בכל שלושת האתרים בשעות אחר הצהריים המאוחרות, בשעות הערב המוקדמות. בהשוואה לכל שלוש ההגדרות, רמות הסטרס, כפי שנמדדות הן הסמנים הביולוגיים והן הדוחות העצמיים, נמוכות באופן משמעותי לאחר הביקור בסביבה הטבעית ביותר.
רמות הלחץ הגבוהות כבר מזמן נקשרו למצבים רבים של בריאות חמורות כגון מחלות לב, השמנת יתר, והפרעות פסיכולוגיות1,2,3. גוף גדל והולך של מחקר מציע כי קרבה או ביקור הגדרות טבעיות כגון פארק ונופים שאינם מפותחים יכול להיות השפעה יוצאת דופן על הרווחה הפסיכולוגית וירידה רמות של מתח1,4, . חמש,שש,שבע,שמונה,9,10 הסברים על ההשפעות של הגדרות טבעיות ורמות הסטרס כללו את הפרטים הבאים: (1) הגדרות טבעיות לספק מקומות לפעילות גופנית8,11 ו (2) מבקרים לסביבה טבעית יש את היכולת למקד בתהליכי חשיבה שאינם משימות, ובכך מובילים לירידה בעייפות הקשב12. כדי לקבוע את ההשפעות של הטבע על הפחתת לחץ, מחקר זה מנצל את הדוח העצמי של הלחץ הפסיכולוגי (PSQ) ושני בסמנים מבוססי רוק, קורטיזול ו-עמילאז, לאחר הביקור לשלושה אתרי בילוי שונים. מיקומים אלה משתנים בין הרמות שלהם "טבעיות" וכוללים הגדרה מסוג פראי, פארק עירוני, מתקן כושר ונופש מקומי.
מחקר זה נועד להתייחס לשאלות המחקר הבאות: (RQ1) ישנם הבדלים ברמות של סטרס ביופיזיקלי הנמדד על ידי קורטיזול הרוק ו α-עמילאז כאשר לעומת כל שלושת האתרים (כלומר, טבעי, חצי טבעי, בנוי)? (RQ2) האם יש הבדלים ברמות של לחץ פסיכולוגי הנמדד על ידי PSQ (המתבטאת בארבעה מבנים: דרישות, דאגות, מתח ושמחה) בהשוואה לכל שלושת האתרים (כלומר, טבעי, חצי טבעי, בנוי)?
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מחקר זה עוקב אחר מדיניות והנחיות של תוכנית הגנת מחקר האדם של אוניברסיטת אינדיאנה המועצה סקירה מוסדית.
1. בחירת מיקום
2. הקרנת משתתפים והכנתו
3. תנאים ותכנון ניסיוני
4. דגימות רוק
5. קוונפיקציה של α-עמילאז
הערה: בצורה זו, α-עמיקלז הידרו 2-כלורט-p-ניטרופניו-α-D-maltotrioside ל-2-כלורו-ניטרונול וצורות גלוקוז, 2-כלורט-p-ניטרופניל-α-D-maltoside, maltotriose, ו גלוקוז. התגובה מפוקחת בספיגה של 405 ננומטר, התואמת לפעילות α-עמיקלז במדגם. שיטת הפעולה ממחישה יניאריות בין 0 ל-2000 U/L.


6. קוונפיקציה של קורטיזול
הערה: בשיטה זו, קורטיזול חינם הוא ככמת ברוק באמצעות עקומת קורטיזול סטנדרטית. תקנים ודגימות מדולל מתווספים לצלחת microtiter כי הוא מצופה מראש עם נוגדן. מצורף קורטיזול-peroxidase מתווסף הבארות, ואחריו תוספת של נוגדן חד שבטיים כדי קורטיזול. הכמות של כריכת קורטיזול/peroxidase המשלים יורדת כריכוז הקורטיזול במדגם מגביר.
| רגיל | #1 | #2 | #3 | #4 | #5 | #6 | #7 |
| אמצעי אחסון של מאגר שמות (μL) | 225 | 125 | 125 | 125 | 125 | 125 | 125 |
| נוסף | מניות Std | #1 | #2 | #3 | #4 | #5 | #6 |
| נפח של חיבור (μL) | 25 | 125 | 125 | 125 | 125 | 125 | 125 |
| ריכוז סופי (pg/mL) | 3200 | 1600 | 800 | 400 | 200 | 100 | 50 |
טבלה 1: טבלת הכנה של עקומת עקומות סטנדרטית.

איור 1 : לוחית דוגמה פריסה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
7. מדידה פסיכולוגית (שאלון מאמץ נתפס)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תאור המדגם
ניצול טכניקת דגימה מיכסה, מחקר זה גייסה 35 מבקרים מכל אחד משלושת האתרים. בסך הכל, 105 נושאים גויסו במחקר זה, כולל 63 זכרים ו 42 הנקבות. הגילאים הממוצעים של מבקרים שגויסו משלושה אתרים שונים היו 25.9 שנים (אתר A), 37.2 שנים (אתר B), ו-28.8 שנים (אתר C). כמו כן נרשמו תדרים של ביקורי נושאים לשלושת האתרים שנבחרו. עבור אתר A ואתר C, רוב הנושאים ביקרו באתר זה אחד עד שלוש פעמים בשבוע. לנושאים באתר ב', תדירות הביקורים שלהם הייתה מפוצלת בין 1 ל -3 פעמים בשבוע ויותר משלוש פעמים בשבוע.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מטרת מחקר זה היא לזהות שינויים פוטנציאליים בלחץ באמצעות כלים ביופיזיים ופסיכולוגיים בעקבות ביקורי פנאי לשלוש הגדרות שונות עם רמות שונות של הטבע. גם קורטיזול וגם α-עמילאז הוכחו כאינדיקטורים אמינים לרמות של לחץ פסיכולוגי. הליך הבדיקה של עמיקלז המתואר במחקר זה הותאם לפורמט היטב 96. כאשר רמות אמילז ברוק גבוהות, שינויי ספיגה מתרחשים במהירות. לכן, זה קריטי להגביל את מספר הדגימות שנותחו בו, כמו מספר הדגימות שניתן לנתח בו מוגבל על ידי כמה מהר 2.5 μL של המדגם ניתן להוסיף לכל באר. במחקר זה, רמות עמיקלז נמדדו בטור אחד (שמונה תגובות...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים אינם מצהירים על ניגודי אינטרסים.
מחקר זה מומן בחלקו באמצעות תוכנית המענק למחקר של הפקולטה (FRGP) בחסות בית הספר לבריאות הציבור באוניברסיטת אינדיאנה, בלומינגטון, ב. המחברים רוצים להודות ד ר אליסון וויט ומליסה פייג ' על הסיוע המערכת שלהם והערות בונה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ערכת בדיקה חיסונית של אנזים קורטיזול | DetectX | K003-H1 | ערכת הבדיקה החיסונית של אנזים קורטיזול נועדה למדוד כמותית קורטיזול הקיים בתמציות צואה מיובשות, רוק, שתן, סרום, פלזמה ודגימות מדיה של תרבית. |
| תוויות קריוגניות לאחסון קריוגני | Fisherbrand | 5-910-A | דבק ייחודי עמיד בטמפרטורה קיצונית |
| עמילאז נוזלי (CNPG3) Reagent Set | Pointe Scientific | A7564 | לקביעה קינטית כמותית של פעילות α-עמילאז בסרום אנושי. |
| צינורות פוליפרופילן תחתונים עגולים 2 מ"ל עם מכסה חוט חיצוני | Greiner Bio-One | 07-000-257 | 2.0 מ"ל U-BTM Cryo.s פוליפרופילן עצמאי מעוקר |
| Synergy Multi-Mode Microplate Reader | BioTek | זהו קורא מיקרו-פלטות ספיגה, פלואורסצנטיות וזוהר חד-ערוצי, המשתמש בעיצוב אופטיקה כפולה לביצוע מדידות של דגימות בפורמט מיקרופלייט. |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.