משמש לכמת את תבנית. הנשימה בעכברים ערים אנו מראים כי מקטעים של 15 מתחת לפרוטוקול מתוקננת מציגים ערכים דומים למשך זמן ממושך של נשימה שקטה. מתודולוגיה זו מאפשרת גם הכמת של דום נשימה ונשימות מוגבר במהלך השעה הראשונה בחדר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
(UBP) הוא שיטה לכמת את תבנית הנשימה בעכברים, היכן שתדר הנשימה, נפח הגאות והאוורור של הדקה מדווחים באופן שגרתי. כמו-כן, ניתן לאסוף מידע לגבי התפוקה העצבית של הנשימה, כולל קיומה של מרכז apneas ונשימה מורחבת. שיקול חשוב של UBP הוא להשיג קטע נשימה עם השפעה מינימלית של התנהגויות להוט או פעיל, כדי להבהיר את התגובה לאתגרים נשימה. כאן, אנו מציגים פרוטוקול המאפשר בסיסיות קצרות, שקטות להתקבל בעכברים מיושנים, הדומה להמתנה לתקופות ארוכות יותר של נשימה שקטה. השימוש במקטעי זמן קצרים יותר הוא יקר ערך, כמו כמה זנים של עכברים עשויים להיות יותר ויותר מתרגש או חרד, ותקופות ארוכות יותר של נשימה שקטה לא ניתן להשיג בתוך פרק זמן סביר. הונחו 22 חודשים בן עכברים בחדר UBP והשוו 4 15 s שקטים נשימה מקטעים בין דקות 60 – 120 למשך זמן ארוך יותר 10 דקות נשימה שקטה כי לקח 2 – 3 h כדי לרכוש. כמו כן הצלחנו להשיג ספירות מרכזיות של apneas ונשימות מרושמות לפני מקטעי הנשימה השקטים, לאחר תקופת ההכרות של 30 דקות. אנו מראים כי 10 דקות של נשימה שקטה דומה לשימוש קצר הרבה יותר 15 s משך. בנוסף, את הזמן המוביל של אלה 15 שקטים מגזרי נשימה ניתן להשתמש כדי לאסוף נתונים לגבי apneas של המקור המרכזי. פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים לאסוף נתונים של תבנית של נשימה בפרק זמן מוגדר ועושה אמצעים שקטים בסיסיים ריאלי עבור עכברים שעשויים להפגין כמויות מוגברת של התנהגות להתרגש. מתודולוגיית UBP עצמה מספקת דרך שימושית ולא פולשנית לאסוף נתונים של דפוס-of-נשימה ומאפשר לעכברים להיבדק על מספר נקודות זמן.
מבוא
Ubp היא טכניקה נפוצה להערכת דפוסי נשימה1,2,3,4. בשיטה זו, עכברים ממוקמים בתא סגור שבו הבדלים בלחץ בין החדר הראשי (שבו החיה שוכנת) וחדר התייחסות מסוננים באמצעות הינע פנאומטי כדי להשיג ערכים. ההתקנה של UBP וכתוצאה מכך הוא פולשני ולא מרסן ומאפשר אמצעים הנשימה להיות מוערך ללא דרישה של הרדמה או ניתוח. בנוסף, טכניקה זו מתאימה למחקרים המצריכים מדידות מרובות באותו עכבר לאורך זמן. משתנים כגון תדר נשימה, נפח גאות, ואוורור דקה ניתן לכמת עם שיטה זו, במהלך ניסוי אחד או על פני מספר מבחנים. הגוף השלם UBP גם מספק מדדים של זרמי השיא משך מחזור הנשימה. ביחד, ה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים במכללת לה ממוין. כל שימוש בבעלי חיים היה בהסכמה עם המדיניות המתוארת במדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה8.
הערה: (קריטי) לפני ניסויים, השג את כל האישורים וההדרכה הדרושים לשימוש בעלי חיים. חשוב שהנסחנים מוכרים עם התנהגויות העכבר ורמות הפעילות, כולל סימנים של שינה, מצוקה ו/או חפץ התנועה לעומת הריח והנשימה הרגילים.
1. לשכת החלל הפלמטריים השלמה
- קראו את מדריכי המשתמשים המתאימים לחדר הסטנדרט הברומטרי, כולל מחברים, טבעות O, וכו ', וצרו קובץ פרוטוקול סטנדרטי להגדרת אנלייזרים (לדוגמה, חילוף חומרים) ופרמטרים ספציפיים לתו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התוצאות של UBP כהערכה של דפוס של נשימה בגיל 16 (בן 22 חודשים) עכברים שבוצעו תחת גז האוויר הרגיל (20.93% O2 עם מאוזנת N2) מדווחים. הניתוח כלל השוואה של מקטע נשימה ארוך יותר של 10 דקות (שלקח למעלה מ -2 שעות להשיג) לעומת הממוצע של ארבעה מגזרים קצרים של 15 דקות (כימות בתוך מספר שניות 60 – 120). מעקב אחר זרימה מייצגת של נשימה שקטה, כאשר הנשימה מתאימה ללא התנהגויות נשימה פעילות, מסופקת באיור 1א. כאשר אוספים דומים נאספים מבעלי חיים, 100% מהנשימות צריכים להתקבל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול מספק מידע לגבי בסיס נשימה שקט בעכברים, כמו גם איסוף נתונים על מרכזי apneas ונשימות מוגבר. תוצאות הנציג מראים כי 10 דקות הבסיסית שקט יש דפוס דומה של נשימה בהשוואה לממוצע של 4 15 s התקפי עבור קבוצה של עכברים ישנים. וחשוב מכך, התקפי ה-15 אינם שונים מבחינה סטטיסטית, וגם לקבוצות אלה אין הבדלים בין השינויים השונים באמצעות המבחן של לוונאי. נתונים אלה מדגימים כי אפילו התקף קצר אחד מספיק לניטור נשימה שקטה. עם זאת, זה אפשרי לחלוטין כי ניתוח וריאציה בודדת בתוך עכבר ב 15 s לעומת 10 דקות עלול לגרום ממצאים שונים, כמו 10 דקות.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
המחברים רוצים להודות לאנג לה, שרה רובי, ומריסה מיקי על עבודתם בשמירה על מושבות החיות. עבודה זו ממומנת על ידי 1R15 HD076379 (L.R.D.), 3R15 HD076379 (L.R.D. לתמוך CNR), ואת מלגת מחקר לתואר ראשון McDevitt במדעי הטבע (BEE).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מנתח פחמן דו חמצני | AEI Technologies | CD-3A | |
| חיישן פחמן דו חמצני | AEI Technologies | מחשב P-61B | |
| חייב להיות תואם לדרישות Ponemah | |||
| מיכלים | Haun | 100% חמצן, 100% פחמן דו חמצני, 100% חנקן - דרגת מזון, או מיכלים מעורבבים מראש לאתגרי אוויר וגז נומליים בחדר | |
| מנתח חמצן | AEI Technologies חיישן | S-3A | |
| AEI Technologies | N-22M | ||
| צינורות פוליאוריטן | SMC | TUS 0604 Y-20 | |
| Ponemah תוכנה | DSI | ||
| תא מכרסמים קטן | Buxco/DSI | ||
| מדחום (מערכת LifeChip) | Destron-חשש | מכל סוג של מדחום כדי לקחת טמפרטורות גוף מדויקות הוא מתאים, אך השימוש בשבבים מושתלים מאפשר הפרעה מינימלית לבעלי חיים לנטילה מספר מדידות טמפרטורת גוף בזמן שהחיה עדיין בתא ה-UBP | |
| מתמרים | Validyne | DP45 | זקוקים לאחד לכל חדר |
| מערכת פלתיסמוגרפיה לכל הגוף | Data Science International (DSI) | כולל ACQ-7700, בדיקות לחץ/טמפרטורה וכו' |
מקורות
- DeRuisseau, L. R., et al. Neural deficits contribute to respiratory insufficiency in Pompe disease. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (23), 9419-9424 (2009).
- Ogier, M., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
