כאן, המודל הניסיוני הטיפולי איסכמיה מוצג ואחריו סוללה של פונקציונלי, בדיקות היסטולוגית ומולקולרית כדי להעריך את האפקטיביות של טיפולים אנגיוגנטית.
מאמר שיטה
כאן, המודל הניסיוני הטיפולי איסכמיה מוצג ואחריו סוללה של פונקציונלי, בדיקות היסטולוגית ומולקולרית כדי להעריך את האפקטיביות של טיפולים אנגיוגנטית.
איסכמיה גפה קריטית (CLI) היא מצב חמור הכרוך בסיכון גבוה לקטיעה בגפיים התחתונות. למרות revascularization להיות טיפול בתקן זהב, מספר ניכר של מטופלים CLI אינם מתאימים או ניתוחי וכירורגי או אנדוסקולריזציה. טיפולים מגנטיים מתפתחים כאופציה למטופלים אלה, אך כיום הם עדיין תחת חקירה. לפני היישום בבני אדם, הטיפולים האלה חייבים להיבדק במודלים של בעלי חיים והמנגנון שלו חייב להיות מובן בבירור. מודל בעל חיים של איסכמיה הגוף (HLI) פותחה על ידי החיבור וכריתה של עורקי הירך החיצוניים ואת הוורידים ורידים בעכברים. פאנל מקיף של מבחנים התאספו כדי להעריך את ההשפעות של הטיפול באיסכמיה ובטיפולים אנגיוגנטיים בתוך הפונקציונליות, היסטולוגית ורמות מולקולריות. לייזר דופלר שימש למדידת הזרימה והערכה פונקציונלית של perfusion. תגובת רקמות הוערך על ידי ניתוח של צפיפות נימי לאחר הצביעת עם הנוגדן anti-CD31 על סעיפים היסטולוגית של שריר השריר, ועל ידי מדידה של צפיפות כלי הקיבול הנלווה לאחר דיאפחונזציה. ביטוי של הגנים של אנגיוגנטית היה ככמת על ידי RT-PCR מיקוד גורמים מבוססי אנגיוגנטיים שנבחרו באופן בלעדי בתאי האנדותל (ECs) לאחר לכידת לייזר הניתוח של שרירי השרירים של העכבר. שיטות אלו היו רגישות בזיהוי הבדלים בין האיברים האיסכמי והלא-איסכמי ובין הגפיים הבלתי מטופלות. פרוטוקול זה מספק מודל מחודש של CLI ומסגרת לבדיקת טיפולים אנגיוגנטיים.
מחלת עורקים היקפית (PAD) משפיעה בעיקר על הגפיים התחתונות. PAD נגרמת על ידי טרשת עורקים, חסם עורק שיכול לגרום להגבלה חמורה לזרימת הדם בגפיים התחתונות1. התפטרות לסירוגין הוא הביטוי הראשון של PAD ומתייחס כאב שרירים בעת הליכה. CLI הוא השלב החמור ביותר של PAD, להיות מאובחנים בחולים כי להראות כאבים מנוחה איסכמי, כיבים או נמק2. חולים עם CLI יש סיכון גבוה של קטיעה, במיוחד אם לא מטופל3. הגפיים התחתונות revascularization (או על ידי ניתוח פתוח או הליך אנדוכלי) היא כרגע הדרך היחידה להשיג הצלה איבר. עם זאת, בסביבות 30% מהחולים CLI אינם מתאימים הליכים אלה, מסיבות הכוללות את המיקום של נגעים, התבנית של סגר עורקים....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הליכים בעלי חיים הם בהתאם הוראה 2010/63/האיחוד האירופי אושרה על ידי גוף בעלי חיים מוסדיים רווחה ומורשה על ידי DGAV הרשות המוסמכת פורטוגזית להגנת בעלי חיים (רישיון מספר 023861/2013)
התראה: חלק מהכימיקלים המשמשים בפרוטוקולים רעילים ומזיקים. אנא השתמש בכל נוהלי הבטיחות המתאימים וציוד הגנה אישי (כפפות, חלוק מעבדה, מכנסיים באורך מלא ונעלי הבוהן סגורות)
1. המודל המורין של איסכמיה החוצה
הערה: כל הניסויים מתבצעים ב-22 שבועות בן C57BL/6 עכברים נקבה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
באמצעות הפרוטוקול המתואר, בתאי גזע הטבור מסנצ'יאל וקרינה מייננת במינון נמוך (ldir) נבדקו כטיפולים אנגיוגנטיים של החבל 11,12. לייזר דופלר זלוף קריאות הושגו לפני האינדוקציה איסכמיה ו ב מראש מוגדר נקודות זמן החל מיד לאחר אינדוקציה איסכמיה כדי 45 ימים post-איסכמיה. קריאות של רקמות העור על ידי דופלר לייזר נרשמו כתמונות מקודדות בצבע, ללא פרזיה שהוצגה ככחול כהה ורמת פרפיוז הגבוהה ביותר המוצגת כאדומה. כפי שמוצג באיורים 2a ו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מודלים murine של CLI היו בעיקר באמצעות הארכה של עורק הירך בדיוק המרוחק למקור של הראש העמוק מוריס 4,5,6,7,8,9. זה הראה להשאיר את רוב המחזור הנלווה ללא פגע, אשר מחזיר את זרימת הדם אל האיבר בתוך 7 ימים 9. ניתן להשיג את הסרת המיטה העירבון באמצעות כריתה של עורק הירך. עם זאת, עד שליש מזרימת הדם המקורית ניתן .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
. למחברים אין מה לגלות
אנו מודים לחוסה רינו ולטיאניה קרבלהו, ראשי המכון הביודמיה והמעבדה לפתולוגיה של היסטולוגיה והשוואתי של המכון המולקולרי לובו אנטז, בהתאמה. אנחנו גם מודים ויאצ Sushchyk מהמחלקה לאנטומיה של בית הספר לרפואה של נובה/Faculdade דה Ciências מדיאס, אוניברסידייד נובה דה ליסבון.
התייחסות מימון: פרויקט ממומן על ידי UID/IC/0306/2016 הדיווה הטובה ביותר. פאולה דה אוליביירה נתמכת על ידי מלגת (SFRH/BD/80483/2011) מתוך הדיווה הישנה של האגודה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 7500 מהיר בזמן אמת PCR | יישומי ביו-סיסטמס | מכשיר | |
| אצטון | מרק | 1000141000 | ריאגנט; זהירות - |
| ריאגנט | אדנוזין | ולדפארם | |
| Atipamezole | OrionPharma | Reagent | |
| Barium sulphate (Micropaque) | Guebert | 8671404 (ref. Infarmed) | ריאגנט |
| בופרנורפין | ריכטרPharma | Reagent | |
| Carl Zeiss Opmi-1 FC מיקרוסקופ כירורגי | קרל זייס, גרמניה | מכשיר | |
| cDNA RT2 PreAMP cDNA ערכת סינתזה | Qiagen | 7335730 | Reagent |
| Cryostat Leica CM | Leica Microsystems | 3050S | |
| ערכת מצע DAB peroxidase | DAKO; Vector Laboratories | K3468 | מגיב |
| מימן פרוקסידאז | Merk | 1072090250 | Reagent; זהירות - |
| עט הידרופובי | Dako | 411121 | Reagent; זהירות - |
| רעיל Ketamidor | Richterpharma | CN:580393,7 630/01/12 Dfvf | Reagent |
| לייזר דופלר זילוף הדמיה moorLDI2-HIR | MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK | 5710 | Instrument |
| Leica DM2500 מיקרוסקופ שדה בהיר זקוף | Leica Microsystems | Instrument | |
| Medetor | Virbac | 037/01/07RFVPT | Reagent |
| מגיב מתנול | VWR | UN1230 | ; זהירות - |
| מגיב | פפאברין | לבספל | |
| Pentano Isso | Merk | 1060561000 | Reagent; זהירות - כוח דליק מאוד |
| SYBR® Green | Applied Biosystems | 4309155 | מגיב |
| עכברוש מטוהר נגד עכבר CD31 | Pharmingen | 550274 | Reagent |
| RNeasy Micro kit | Qiagen | 74004 | Reagent |
| Surgic-Pro 6.0 | Medtronic (Coviden) | VP733X | תפר |
| VECTASTAIN ABC HRP KIT (Peroxidase, Rat IgG) | ערכת Vectastain ABC; Vector Laboratories | PK-4004 | Reagent |
| Vicryl5.0 / Vicryl 6.0 | Medtronic (Covidien) | UL202 / UL101 | תפר |
| Zeiss PALM MicroBeam מערכת מיקרודיסקציה לייזר | קרל זייס, גרמניה | מכשיר 1023290916 | |
| מיקרוסקופ סטריאוטקסי | קרל זייס מיקרוסקופיה, גרמניה | מכשיר | |
| מצלמה דיגיטלית | לינוקס | כלי |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה