מאמר שיטה

שליטה מרחבית וטמפורלית של מלנומה מורין ייזום מוטציה תאי גזע מלנוציט

DOI:

10.3791/59666

⸱

7 ביוני 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Sciences, Cornell University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוצדורה הבאה מתארת שיטה לשליטה מרחבית וטמפורלית של ייזום גידול מלנוציטוטי בעור מוראני, באמצעות דגם עכבר מהונדס גנטית. פרוטוקול זה מתאר מאקרוסקופי כמו גם חניכה מיקרוסקופיים עורית מלנומה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מלנומה עורית ידועה כסרטן העור האגרסיבי ביותר. למרות גורמי הסיכון ושינויים גנטיים העיקריים להמשיך להיות מתועד עם עומק הגוברת, שיעור השכיחות של מלנומה עורית הראה עלייה מהירה ורציפה במהלך העשורים האחרונים. כדי למצוא שיטות מניעה יעיל, חשוב להבין את השלבים המוקדמים של חניכה מלנומה בעור. הנתונים הקודמים הוכיחו כי בתאי גזע מלנוציט הזקיקים (MCSCs) ברקמות העור המבוגר יכול לשמש כתאי מלנומה של המקור בעת המבטא מוטציות אונגניים ושינויים גנטיים. Tuמוריגנזה הנובעים MCSCs נוטה מלנומה יכול להיגרם כאשר MCSCs מעבר מן השקט למצב פעיל. מעבר זה מלנומה נוטה MCSCs ניתן לקדם על ידי אפנון של או שיער זקיק תאי גזע המדינה פעילות או באמצעות גורמים סביבתיים חיצוניים כגון אולטרה סגול-B (UV-B). גורמים אלה יכולים להיות מניפולציות באופן מלאכותי במעבדה על ידי depilation כימיים, מה שגורם מעבר של תאי גזע שיער זקיק ו מן השקט למצב פעיל, ועל ידי חשיפה UV-B באמצעות אור שספסל העליון. שיטות אלה מספקות שליטה מרחבית מוצלחת והטמפורלית של חניכה מלנומה עורית בעור מוריין. לכן, אלה במערכות מודל vivo יהיה בעל ערך להגדיר את השלבים המוקדמים של חניכה מלנומה עורית יכול לשמש כדי לבדוק שיטות פוטנציאליות למניעת גידול.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מלנומה, הצורה המממנת של גידולים מלנולוציפטיים, הוא הסרטן האגרסיבי ביותר בעור עם מלנומה עורית אחראי על רוב מקרי המוות של סרטן העור1. בארצות הברית, מלנומה מאובחנת בדרך כלל; הוא הוקרן להיות 5 עד 6th הסרטן הנפוץ ביותר בקרב המקרים המשוער סרטן חדש ב 20182. יתר על כן, בעוד מקרי סרטן הכולל הראו את המגמה של צמצום הדרגתי בעשורים האחרונים, מלנומה עורית שיעור שיעור במהלך העשורים האחרונים להפגין עלייה רציפה ומהירה בשני המינים2.

כדי להילחם מלנומה עורית ביעילות רבה יותר, חשוב להבין בבירור את האירועים המוקדמים של פיתוח מלנומה מתאי המוצא שלהם לזהות טוב יותר קלינית שיטות מניעה יעיל. ידוע כיום כי בתאי גזע בוגרים יכולים לתרום באופן משמעותי להיווצרות הגידול כמקורות הסלולר של סרטן בסוגים רבים ושונים של איברים כולל רקמות העור3,4,5. באופן דומה, מבוגרים תאי גזע מלנוציט (MCSCs) בעור המורין הישן יכול לעבוד כתאי מלנומה של המקור על הפעלה חריגה של Ras/חיל הארץ ו akt מסלולים6. עם זאת, אלה מוטציות אונגניים לבד אינם מסוגלים ביעילות לגרום להיווצרות הגידול מן השקט MCSCs. גידולים מלנולוציפטיים בסופו של דבר להתפתח כאשר MCSCs להיות פעיל במהלך רכיבה על שיער טבעי. עם זאת, בפרוטוקול זה, נתאר שיטות כדי לגרום באופן מלאכותי הפעלה תאית של MCSCs מועדת הגידול, ובכך להקל על שליטה מדויקת של חניכה מלנומה6,7.

באמצעות השיטות המתוארות כאן, שליטה מרחבית וטמפורלית של חניכה מלנומה עורית מפני גידול MCSCs ביטוי אונגניים BrafV600E יחד עם אובדן של ביטוי pten ניתן לבצע בהצלחה, כמו שאנחנו דיווחו בעבר על6. שיטה זו משלבת ממצאים קודמים כי הפגנת שיער זקיק גזע הפעלה של תא דרך הסרת שיער כמו גם איך חשיפה של העור murine ל-UV-B יכול להקל על ההפעלה של MCSCs תושב זקיק השיער וטרנסלוקציה של הסלולר הזה אוכלוסיית המשנה לאפידרמיס הפוליקולרית6,8,9,10. אלה במערכות מודל vivo יכול לספק מידע חשוב לגבי איך שינויים פיסיולוגיים וסביבתיים יכולים לשנות את הסטטוס התאי של מלנומה נוטה MCSCs, אשר בתורו יכול לגרום לחניכה משמעותית של מלנומה בעור.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים בעלי החיים מבוצעים בהתאם לטיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת קורנל ולהשתמש בוועדה (IACUC).

1. הכנה

  1. לאסוף קטעי זנב מ 12 יום עכברים לידתיים ולעכל ב 400 μL של 0.05 N NaOH ב 95 ° צ' עבור 1 h. מערבולת ולהוסיף 32 μL של 1 M טריס-HCl, pH 7. עכברים גנוטיפ על פי פרוטוקולי ה-PCR שסופקו דרך המעבדה ג'קסון ולזהות עכברים עם גנוטיפ של ריבית6.
    - Tyr-creer – hemizygous (+/creer)
    - Lsl-BrafV600E – heterozygous (+/Lsl-v600e)
    - Pten – homozygous flox (flox/flox)
    - Lsl-tdTomato – hemizygous (+/ליטר)
    הערה: רצפים פריימר מסופקים ברשימת חומרים.
  2. השתמש בקוצץ שיער (קוצץ חשמלי) כדי לגלח את העור הקודם 2 עד 3 ימים לפני כל הניסויים המתוארים להלן, וכאשר עכברים הם כ -7 שבועות של גיל. לדאוג לא לפגוע בעור העכבר הדק באמצעות הקוצץ החשמלי כמו כל פציעה עלולה לעורר תגובה ריפוי הפצע אשר יפעיל את השיער זקיק גזע תאים, כולל MCSCs.
  3. קבע אם מחזור השיער הוא בתוך הזמן והאם העור נפצע במהלך תקופת ההמתנה. אם העור מראה סימן כלשהו לפציעה, אין להשתמש בעכבר להליכים אלה.
    הערה: למרות שמחזור השיער עשוי להיות מעט שונה בין הרקעים הגנטיים, בגיל זה מחזור השיער בעור העורבן הוא בדרך כלל במצב הטלנוגן11. The Tyr-CreER הגנטי יהיה יעד MCSCs בעור טלעוגן, ואת השינויים הגנטיים הבאים יהיה להתבטא לצמיתות בכל שלדורות של mcsc, כולל גידולים מלנוציטים ומלנוציטוטיק.

2. טיפול טמוקסיפן לקומבינציה גנטית של היצור-לקס

  1. הכנת טמוקסיפן עבור הזרקת הצפק (IP) או ניהול אקטואלי עבור שילוב גנטי מערכתי או מקומי מחדש
    הערה: על מנת טמוקסיפן כדי לגרום שילוב חוזר, זה חייב להיות מטבוליזם על ידי הכבד ל 4-הידרוקסימטפן (4-OHT), אשר יכול לאגד ולהפעיל את Creer. יישום מקומי של טמוקסיפן לא יהיה חילוף חומרים בדרך זו ו 4-OHT חייב לשמש ישירות. רק שיטה אחת של משלוח טמוקסיפן נדרש עבור שילוב מספיק מחדש.
    1. טממוקסיפן: מכינים טממוקסיפן בריכוז של 10 מ ג-1 מומס בשמן תירס. כדי לסייע פירוק התרופה לתוך פתרון, להוסיף עד 10% נפח הכולל של 100% אתנול כיתה מולקולרית תרופה בצורת אבקה, מערבולת עבור 3 דקות ולאחר מכן להוסיף את הנפח הנותר של שמן תירס. המשך למערבולת עד שהחומר הגבישי אינו גלוי עוד בפתרון. פתרון טמוקסיפן ניתן לעקר על ידי עובר דרך מסנן יקרומטר 0.2. . המשך לשלב 2.2.1 לטיפול
    2. 4-OHT: להכין פתרון מניות של הידרוקסיטמוקסיפן עד 3 מ"ג mL-1 ב 100% אתנול. לאחר מכן, ניתן ליישם פתרון עובד ככל הנדרש כדי לכסות את אזור העור של הריבית (בדרך כלל יישום יחיד).
      הערה: פתרון מניות של הידרוקסיטמוקסיפן יכול להיות מומס ב 100% אתנול עבור ריכוז סופי של 5 מ"מ. לאחר מכן, כדי להכין פתרון עובד, 5 μL של פתרון מניות 4OH-tamoxifen ניתן מדולל לתוך 15 μL של 100% אתנול. עבור 4 מ"מ2 שטח, 1 עד 3 μl של פתרון העבודה ניתן להחיל למריחה על הסביבה.
  2. טיפול בעכברים עם טמוקסיפן או מערכתית או למריחה על העיצוב
    1. עבור טיפול סיסטמי, מנהל 2 מ"ג טמוקסיפן דרך הזרקת IP פעם ביום עבור 3 ימים באמצעות מחט G 26.
      הערה: באמצעות מודל זה, כ 93% ± 4% של השקט MCSCs מתויגים עם tdTomato6.
    2. להפעלה אזורית, בצע טיפול מקומי אחד עם 4-OHT. כסו את תחום העור המעניין בפתרון העבודה. ניתן לקבוע את כמות פתרון העבודה לפי גודל אזור הריבית כפי שמתואר בשלב 2.1.2.
  3. ב 48 h בעקבות המינון האחרון של טמוקסיפן, המשך לשלב 3 עבור הגידול הכימי להסרת שיער המושרה או לשלב 4 עבור UV-B המושרה ליזום גידול

3. להסרת שיער כימית

  1. לצייד חדר טיפול בעכבר המכיל מערכת isof, עם החומרים הנדרשים הבאים: קרם הסרת שיער, שקיות צמר, מטלית נייר, ומים.
  2. מניחים את העכבר לתוך התא אינדוקציה מורדם עם 3.5 כדי 4.5% isofלאנה ו 1 L/min חמצן.
  3. לאחר שקצב הנשימה התייצב, לאשר את העכבר הוא במישור הנכון של הרדמה על ידי ביצוע צביטה הבוהן ולהעביר את העכבר לצינור הראשי שמירה על הרדמה עם 1 כדי 1.5% isofלהקה ו 1 L/min חמצן. להחיל משחה העין כדי לשמור על העיניים מפני ייבוש תוך הרדמה.
  4. השתמש בספוגית כותנה כדי להחיל שכבה דקה של קרם הסרת שיער לאזור מגולח של העור העכבר.
  5. ברגע שהקרם הוחל באופן שווה, השתמש בדגימות כותנה נקיות כדי להתחיל בהסרה. הזמן הכולל שהקרם במגע עם העור לא יעלה על 1 דקות.
  6. לנגב בעדינות את העור במטלית נייר לחה ולהבטיח כי כל קרם שיורית הוסר.
    הערה: קרם להסרת שיער יכול לגרום לגירוי בעור אם הוא לא מוסר לחלוטין. עכברים מסוימים, כגון אלה על רקע C57BL/6, יכול להיות נוטה לפתח דרמטיטיס12. למרות נדיר, כמה בעלי חיים יפתחו דרמטיטיס בתוך 24 שעות לאחר הסרת השיער קרם יישום או להסרת שיער מכני. הקפד לבדוק את העכברים יום לאחר הטיפול כדי לחפש סימנים של גירוי בעור האזורי.
  7. הסירו את פירי השיער שהוסרו ואת כל החומרים ששימשו לתוך תא בידוד.
  8. מניחים את העכבר לתוך כלוב העכבר ריק, נקי עד ההרדמה יש לבשו.
  9. . החזר את העכברים לכלובים שלהם

4. UV-B הקרנה

  1. צייד חדר טיפול בעכבר המכיל מערכת isof, עם החומרים הנדרשים הבאים: UV-B מערכת אור, UV-B מטר אור, כיסוי מגן על העכבר, נוסף UV-B הגנה לחוקר, ו טיימר.
  2. עכברים צריכים להיות לקרינה במינון UV-B של ריבית (כלומר, 0-180 mJ/cm2). השתמש במד אור UV-B כדי לקבוע את אורך הזמן המתאים כדי להאיר את העכברים.
    הערה: mW/cm2 x זמן = מינון
  3. . לדבר עם העכבר בעזרת מלגלית בעוד בחדר האינדוקציה, להשתמש 3.5 כדי 4.5% isofלאנה ו 1 L/min חמצן.
  4. ברגע העכבר מיוצב, לאשר תופעות הרדמה עם צביטה בבוהן ולהעביר את העכבר לצינור ההרדמה הראשי הממוקם בחדר UV. להחיל משחה העין כדי למנוע את העיניים מהתייבשות בזמן הרדמה. שמרו על הרדמה עם 1 עד 1.5%. וחמצן 1 L/דקות
  5. לכסות את העור הגבי עם חומר הגנה UV-B, כך שרק האזור הרצוי יהיה חשוף.
    הערה: בשלב זה, יש לעשות שימוש ב-PPE המתאים. משך הזמן הדרוש כדי לפרק את העכבר תלוי בעוצמת הנורה המשמש, אבל הרדמה אולי צריך להיות מנוטרים אם הזמן הנדרש עולה על 30 s.
  6. מכסים את תא UV באמצעות מכסה עמידות UV או כל חומרים מתאימים אחרים.
  7. הפעל את מנורת UV-B והקרין את העכבר במשך הזמן שנקבע על ידי חוקרים עבור המטרה הספציפית.
  8. כבה את מערכת UV ו-isofלאנה, ואז למקם את העכבר על כלוב העכבר ריק עד ההרדמה יש לבשו.
  9. . החזר את העכברים לכלובים שלהם

5. עיבוד רקמה

  1. בידוד עור
    1. השג את הפרטים הבאים לפני תחילת העבודה: מכשירי נקרופסי, נייר סינון ומגבות נייר.
    2. המתת חסד העכברים לפי פרוטוקולים IACUC שאושרו, ולאשר את המוות לפני שתמשיך.
    3. משתמשים בקוצץ שיער, מגלחים. את כל השערות מאזור העור מצחצח בקלילות את האזור ברקמה נטולת מוך כדי לפנות את האזור.
    4. לעשות חתך קטן עם מספריים חדים ממש מעל הבסיס של הזנב.
    5. הוסף מספריים בוטים גדולים לתוך החתך ולהפריד את רקמות החיבור התת עורי.
    6. לבודד בזהירות את אזור העור של עניין על ידי גזירה עם מספריים חדים לאורך קצה הרקמה.
    7. מניחים את רקמת העור על מגבת נייר נקייה להשתמש מלקחיים עמום כדי למתוח את העור כך שהוא דבק המגבת והוא לימד. שלב זה משמש למתן תמיכה נוספת לרקמות כך שניתן יהיה לתמרן ולעבד אותה תוך שמירה על צורתו.
      הערה: להיזהר רק לטפל באזורים החיצוניים של רקמת העור, כמו מלקחיים עלול לגרום נזק לעור אשר ניתן לראות היסטולוגית.
  2. קיבוע רקמות
    1. מקפלים פיסת נייר סינון במחצית ומתייג בהתאם. מניחים את העור יחד עם גיבוי מגבת נייר לתוך הנייר המקופל הצמוד מיד לקמט, להבטיח כי המדגם הוא חלק ולא מקופל או מקומט. אטום את נייר הסינון על-ידי הידוק הצדדים הפתוחים ולאחר מכן קצץ כך שניתן יהיה להשתמש בנייר הנותר לדגימות עתידיות.
      הערה: שלב זה מבוצע כך העור שומר על צורתו במהלך הקיבעון.
    2. יש להטביע במלואו את דגימת הרקמה ב-10% מחסן ניטרלי באגירה עבור 3 עד 5 שעות בטמפרטורת החדר או לילה ב -4 ° c.
    3. בעקבות קיבעון, להסיר את הדגימות מתוך formalin, לשטוף במים מוכי (2x, 5 דקות כל אחד) ולהמשיך לעשות בלוקים רקמות. הסירו בזהירות כל חומר שרידי מרקמת העור (כלומר, נייר שיורית).
  3. ביצוע בלוקים רקמות קפואות (איור 1)
    1. חתוך את הקצוות של דגימת העור כך שהם לא משוננים ולאחר מכן לבצע 3 חתכים משונן. רוחב של רצועות אלה לא צריך להיות יותר מאשר הגובה של cryomold (5 מ"מ). הבא, לעשות חתכים רוחבי יש פיסות העור אשר אינם ארוכים יותר מאשר ברוחב של cryomold (20 מ"מ) והוא יכול להיות מוטבע. חזרו עם החצי הנותר של העור הקודם, או שמרו את הרקמה לשימושים אחרים (לסירוגין, שמרו חצי לפני הקיבעון).
      הערה: חשוב לשמור על חלקי העור בכיוון הנכון.
    2. אוריינט the cryomold (25 x 20 x 5 מ"מ3) בכיוון לאורך ובמקום 4 כדי 5 פיסות עור על גבי OCT. פעם כל החלקים נמצאים במקום, להשתמש 2 זוגות של מלקחיים עדינים כדי להביא את הקצה הארוך של העור אל החלק התחתון של cryomold. העור צריך עכשיו לעמוד ב-OCT בניצב לבסיס העובש. דאג למזער את היווצרות כיסי האוויר בתוך ה-OCT במהלך שלב זה (איור 1).
    3. ממלאים את העובש עם OCT אל השפה השנייה, ומניחים על המשטח השטוח של הקרח היבש. מלקחיים להשתמש כדי להתאים את כל חלקי העור שייתכן שזזו במהלך ההעברה כמו הבלוק מתחיל להקפיא. לאחר השכבה התחתונה מתחזק, מניפולציה של רקמות יהיה בלתי אפשרי.
    4. גזור 8-10 יקרומטר שקופיות לניתוח.
  4. ביצוע Formalin קבוע פרפין מוטבע (FFPE) רקמה בלוקים
    1. מקום 2 חתיכות של עור קבוע לתוך קלטת בתווית ומייבשים בריכוזים הגוברת של אתנול (75% אתנול עבור 30 דקות, 85% עבור 30 דקות, 90% עבור 30 דקות, 95% עבור 30 דקות, 100% עבור 2x 30 דקות, מחליף את הפקודה קסילן או קסילן עבור 2x 30 דקות). דגירה עם פרפין ב 58-60 °, הראשון 30 דקות, ולאחר מכן לילה.
    2. להטביע את הרקמה 24 x 24 מ"מ2 כייר רקמת פלדת אל-חלד עם פרפין נוזלי ולגבש ב-5 ° c. התמצאות רקמות צריך להיות דומה לזה של גושי רקמה קפואים כך סעיפים האורך על פני זקיקי שיער מרובים יכולים להיות דמיינו (איור 1).
    3. לאחר הפרפין התחזק, להסיר את העובש לחתוך לתוך 5-10 יקרומטר סעיפים לניתוח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מלנומה עורית חניכה הנגרמת על ידי שיער כימי

הליך ההסרת שיער כימי מתואר באיור 2. כאשר העכברים הם 7-שבועות לאחר הלידה, העור הטייתי שלהם הוא בטלגן. במהלך טלעוגן, תאי גזע שיער זקיק ו MCSCs ידועים להיות בשקט, מצב מנוחה. העור לא צריך להראות צמיחה משמעותית שיער לאחר גילוח. מצד שני, להסרת שיער כימי יכול לגרום זקיק השיער הפעלת תא גזע, אשר בתורו מראה צמיחת שיער משמעותי מאזור הריבית (

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההיכר שינויים גנטיים לעתים קרובות למצוא גידולים מלנומה עורית כבר תיאר היטב13. המוטציה הדומיננטית ביותר הנהג הוא BrafV600E, ומודל מהונדסים גנטית העכבר עבור brafV600E-תיווך מלנומה נוצר על ידי קבוצת Bosenberg14 והופקד במעבדה ג'קסון. באמצעות מודל זה של העכבר, המחקר האחרון שלנו הפגינו את הדרישה של הפעלה תאית של MCSCs מועדת הגידול עבור חניכה משמעותית של BrafV600E-תיווך מלנומה בעור הרכה6.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים לא מצהירים. על ניגוד אינטרסים

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכת על ידי Office של עוזר מזכיר ההגנה לענייני בריאות, באמצעות התוכנית לחקר הסרטן שנסקרו עמית תחת הפרס W81XWH-16-1-0272. דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות הן אלה של המחברים ואינן בהכרח מיוחסות על-ידי משרד ההגנה. עבודה זו הייתה נתמכת גם על ידי מענק זרע מהתוכנית הגזע קורנל לייט. H. Moon נתמך על ידי מרכז קורנל על תוכנית המלומדים בעלי חוליות גנומיקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
טמוקסיפןסיגמאT5648-1Gלהזרקה מערכתית
טמוקסיפןקיימן כימי13258להזרקה מערכתית
שמן תירססיגמא45-C8267-2.5L-EA
4OH-טמוקסיפןסיגמאH7904-25MGלטיפול מקומי
26 גרם 1/2 אינץ' מחטיםשונותבדרגה
1 מ"ל מזרקשוניםבדרגה וטרינרית
Wahl09990-502
קרם להסרת שיערNairn/aזמין ברוב בתי המרקחת
צמר גפן ספוגיותשונות
נורה אולטרה סגולהUVP95-0042-08דגם XX-15M מנורת UV בינונית
200 הוכחה אתנולשוניםאתנול טהור
Histoplast PEFisher Scientific22900700כדורי פרפין
פורמלין ניטרלי חוצץ, 10%סיגמאHT501128-4L
Clear-Rite 3Thermo Scientific6901תחליף קסילן
O.C.T. תרכובתתרמו23730571
קלטת רקמותסאקורה89199-430עבור עיבוד FFPE
CryomoldsSakura455725 x 20 מ"מ
FFPE תבנית מתכתLeica3803082 24 מ"מ x 24 מ"מ
Isofluraneשוניםוטרינרי כיתה
הרדמה מערכת אינהלציהשוניםוטרינרי
כיתה מספריים עדיניםFST14085-09ישר, חד / חד
מספריים עדיניםFST14558-09ישר, חד/חד
MetzenbaumFST14018-13ישר, קהה/קהה
FST11252-00Dumont #5
מלקחייםFST11018-12מיקרו-אדסון
Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/fJackson Labs13590
LSL-tdTomatoJackson Labs007914ai14
Cre-1n/aGCATTACCGGTCGATGCAACGA
GTGATGAG
Cre-2n/aGAGTGAACGAACCTGGTCGAA
ATCAGTGCG
Braf-V600E-1n/aTGAGTATTTTTGTGGCAACTGC
Braf-V600E-2n/aCTCTGCTGGGAAAGCGGC
Kras-G12D-1n/aAGCTAGCCACCATGGCTTGAGT
AAGTCTGCA
Kras-G12D-2n/aCCTTTACAAGCGCCACGCAGACT
GTAGA
Pten-1n/aACTCAAGGCAGGGATGAGC
Pten-2n/aAATCTAGGGCCTCTTGTGCC
Pten-3n/aGCTTGATATCGAATTCCTGCAGC
tdTomato-1n/aAAGGGAGCTGCAGTGGAGTA
tdTomato-2n/aCCGAAAATCTGTGGGAAGTC
tdTomato-3n/aGGCATTAAAGCAGCGTATCC
tdTomato-4n/aCTGTTCCTGTACGGCATGG
וטרינרית גוזם שיער לחיות מחמד

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force. The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).
  2. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2018. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).
  3. White, A. C., Lowry, W. E. Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin. Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).
  4. Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors. Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).
  5. Blanpain, C. Tracing the cellular origin of cancer. Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).
  6. Moon, H., Donahue, L. R., et al. Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure. Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).
  7. Moon, H., White, A. C. A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB. Molecular & Cellular Oncology. 5 (2), e1409864(2018).
  8. Rabbani, P., Takeo, M., et al. Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration. Cell. 145 (6), 941-955 (2011).
  9. Chou, W. C., Takeo, M., et al. Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling. Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).
  10. Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), E4950-9 (2013).
  11. Müller-Röver, S., Handjiski, B., et al. A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages. The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).
  12. Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).
  13. Vultur, A., Herlyn, M. SnapShot: melanoma. Cancer Cell. 23 (5), 706-706.e1 (2013).
  14. Dankort, D., Curley, D. P., et al. Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma. Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).
  15. Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53. Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

UV BOCT

מאמרים קשורים