מאמר שיטה

תא היקפי של דם מונאפרור (PBMC) חרט הומניזציה מודל Xenograft עבור מחקר הטרנסג-אונקולוגיה (I-O)

DOI:

10.3791/59679

⸱

15 באוגוסט 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1BeiGene (Beijing) Co., Ltd.

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מתארים היקפית אנושית תא היקפי (pbmc)-מבוסס הומניזציה מודל העכבר מבע שתלת עבור מחקר translational-אונקולוגיה. פרוטוקול זה יכול לשמש כמנחה כללי להקמת ולאפיון מודלים דומים להערכת הטיפול של I-O.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הגילוי וההתפתחות של הטיפול האימונואונקולוגיה (I-O) בשנים האחרונות מייצג אבן דרך בטיפול בסרטן. עם זאת, אתגרי הטיפול ממשיכות להתקיים. מודלים של בעלי חיים רלוונטיים ועמידים בפני מחלות הם משאבים חיוניים להמשך המחקר והפיתוח הקדם-קליני כדי לטפל במגוון של מחסומים חיסוניים נוספים. כאן, אנו מתארים את הדם ההיקפי היקפי תא מונאנרור (PBMC)-מבוסס על מודל הומניזציה האנושית. BGB-A317 (טילאסיאמאב), נוגדן נגד PD-1 הומניסט בפיתוח קליני בשלב מאוחר, משמש כדוגמה לדון פלטפורמת הגדרת פלטפורמה, אפיון מודל והערכות יעילות הסמים. אלה עכברים הומניזציה לתמוך בצמיחה של הגידולים האנושיים ביותר נבדק, ובכך מאפשר הערכה של הטיפולים I-O בהקשר של החסינות האנושית וסרטן אנושי. ברגע שהוקמה, המודל שלנו הוא יחסית זמן וחסכוני, ובדרך כלל להניב תוצאות מאוד מתועלות. אנו מציעים כי הפרוטוקול המתואר במאמר זה יכול לשמש כמנחה כללי להקמת דגמי העכבר מחדש עם PBMC האדם וגידולים עבור מחקר I-O.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אימונואונקולוגיה (I-O) הוא שדה מתרחב במהירות של טיפול בסרטן. חוקרים החלו לאחרונה להעריך את הפוטנציאל התרפויטי של פונקציות מודלדירוג של המערכת החיסונית לתקוף גידולים. המערכת החיסונית מחסום בלואדס הפגינו פעילויות עידוד במגוון סוגי סרטן, כולל מלנומה, קרצינומה של תאי הכליה, ראש וצוואר, ריאות, שלפוחית השתן וסרטן הערמונית1,2. בניגוד לטיפולים ממוקדים כי ישירות להרוג תאים סרטניים, אני-O טיפולים הפוטנציאל המערכת החיסונית של הגוף לתקוף גידולים3.

עד היום, הוקמו מודלים רבים של חיות I-O. אלה כוללים: 1) עכבר הגידול קווי תאים או הומושתל הגידול בעכברים syngeneic; 2) גידולים ספונטנית נגזר מעכבר מהונדסים גנטית (פנינה) או מסרטנים-אינדוקציה; 3) כלאריק אבני חן עם דפיקה-in של היעד סמים האדם (s) במערכת החיסון מורטין פונקציונלי; ו 4) עכברים עם מחדש חסינות אנושית מושתלים עם תאים סרטניים אנושיים או המטופל נגזר xenografts תלי (PDXs). לכל אחד מדגמים אלה יש יתרונות ברורים, כמו גם מגבלות, אשר תוארו ונבדקו באופן נרחב במקומות אחרים4.

החוקה של החסינות האנושית בעכברים לקויה העריכו בצורה מוערכת כגישה קלינית למחקר של מחקר I-O של טרנסלtional. הדבר מושג בדרך כלל באמצעות אחד משני הצדדים של תאים חיסוניים מבוגרים (למשל, דם היקפי תאים ברורים (pmbc)5,6, או 2) חרט תאי גזע המטבטיים (hsc) מ, למשל, דם טבורי או עוברי כבד7,8. עכברים אלה הומניזציה יכול לתמוך בצמיחה של גידולים אנושיים, ובכך לאפשר הערכה של הטיפולים I-O בהקשר של החסינות האנושית וסרטן האדם. למרות היתרונות, יישומים של עכברים הומניזציה במחקר I-O היו בדרך כלל הפריע מספר חששות, כגון זמן פיתוח מודל ארוך ועלות גבוהה במידה ניכרת.

כאן, אנו מתארים מודל אנושי מבוסס-BMC שניתן ליישם באופן נרחב עבור מחקרי I-O טרנסלtional. מודל זה הוא יחסית זמן-וחסכוני עם השגות גבוהה במחקרי יעילות. זה כבר בשימוש ב-house עבור ההערכות של מספר I-O therapeutics כרגע תחת פיתוח טרום קליני וקליני. BGB-A317 (טילאסיאמאב), נוגדן הומניסטית anti-PD-1 נוגדנים9 , משמש כדוגמה לדון פיתוח מודל, אפיון, ויישומים אפשריים עבור ניתוח יעילות אנטי הגידול.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים שבוצעו במחקרים הכרוכים במשתתפים אנושיים היו בהתאם לסטנדרטים האתיים של בייג'ין ו/או ועדת מחקר לאומית ועם הצהרת הלסינקי 1964 והתיקונים המאוחרים או הסטנדרטים האתיים הדומים. הסכמה מושכלת הושגה מכל המשתתפים הבודדים הכלולים במחקר. כל ההליכים שבוצעו במחקרים הכרוכים בבעלי חיים אושרו על ידי מועצת הביקורת הפנימית בבייג'ין. פרוטוקול זה הותאם במיוחד עבור הערכה של BGB-A317 (טיליגיאמאב) בעכברים הומניזציה/SCID.

1. הקמת המודל האנושי המבוסס על PBMC

  1. Myeloablation של עכברים הנהון/SCID באמצעות ציקלופוספדידה: קביעת מינונים אופטימלית
    1. רכישת עכברים בנוד/SCID נקבה (6-8 שבועות).
      הערה: כל העכברים המעורבים במחקר הזה היו נקבות.
    2. הכינו ציקלופוספמידה (CP) במינונים שונים (50, 100 ו 150 מ"ג/ק"ג) ב תמיסת מלח. להכין disulfiram (DS) ב 0.8% רצף-80 ב מלוחים ב 125 מ"ג/ק"ג.
      הערה: ריכוזים שונים של CP היו מוכנים לאפשר ניהול של כמויות שוות של פתרון התרופה לעכברים מקבל מינונים שונים של CP.
    3. לטפל בחיות עם CP (כיתה) ו-DS (p.o.) פעם ביום עבור 2 ימים. תן DS (p.o.) 2 h לאחר כל מנה של CP.
      הערה: DS מקטין את הרעילות של CP בעכברים, ו CP בשילוב עם DS כבר הציע נויטרופילים לאורך זמן יותר מאשר בעלי חיים מטופלים עם CP לבד10 המינון משטר של CP עשוי להיות מראש נחוש לפני מחקרים בפועל נמצא להשתנות מעט בין זנים שונים של העכבר החיסוני.
    4. איסוף דגימות דם מן הסינוס ורידים מסלולית ולהעביר לצינורות EDTA-K מצופה קרח על היום 0 (1 h לפני מינון1) , יום 2 (24 שעות לאחר מינון2) ויום 4 (72 h לאחר מינון2) .
    5. לבחון את האפקט myeloablation אחרי CP ו DS טיפול על ידי FACS. השתמש עכברוש נגד עכבר CD11b (M1/70), עכברוש נגד העכבר Ly6C (hk 1.4,) ועכבר נגד עכברים Ly6G (1a8) עבור לאחר CD11b+ Ly6Gגבוה כמו נויטרופילים, CD11b+Ly6Cגבוה כמו מונוציטים11,12.
    6. הקלט את משקל הגוף ואת המצב הבריאותי של העכברים מדי יום למשך שבוע אחד. המינון האופטימלי של CP ו-DS נקבע כמשטר כי תוצאות דלדול מקסימלית של נויטרופילים מונוציטים מבלי לגרום לרעילות חמורה לעכברים.
  2. השתלת PBMC האדם בתאום הגידול: מודל הגדרת
    1. בודד PBMCs אנושי מתורמים בריאים על ידי צפיפות הדרגתי צנטריפוגה על פי הוראות היצרן.
    2. טרום לטפל עכברים עם CP ו-DS כפי שמצוין על ידי צעד 1.1.2 ו 1.1.3 כדי להגביר את יעילות ההשתלה.
    3. 20 עד 24 שעות לאחר המינון השני של CP ו-DS, להזריק האדם קו הגידול האנושי כגון A431 תאים (ATCC, 2.5 x 106) ו 5 x 106 pbmcs מבודדים (מעורב סך של 200 μl-פוספט באגירה מלוחים (PBS) המכיל 50% מטריצות) , או שברי הגידול (3 x 3 x3 מ"מ 3, בנפח כולל של 200 ΜL PBS המכיל 50% מטריצות) ו 200 μl של 5 x 106 pbmcs (100 μl כל אחד בצד שמאל וימין של רסיס הגידול מנופה) (ספורטינג ראגה) תת-עורי באגף הימני של החיות.
    4. מדידת נפח הגידול העיקרי ולהקליט פעמיים בשבוע עבור 4-6 שבועות.
      הערה: העכברים יהיה מורדמים ברגע משקולות הגוף שלהם לאבד מעל 20% או נפח הגידול שלהם מגיע 2,000 mm3 או הגידול הוא כיבית.
    5. המתת חסד העכברים בתאי גזים עם פחמן דו חמצני. לאסוף את רקמות הגידול כולו בעכברים הוקרב עם מספריים אופטלמולוגי ולעבד אותם היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה (IHC) ניתוח. בדקו את הביטויים הCD8 האנושיים, ה-PD-1 ו-PD-L1 ברקמות האלה. ראה את הפרוטוקול שלב 4.

2. מסך תורם PBMC

  1. מסך פאנל של תורמים PBMC בשל הווריאציות הצפויות הביא PBMCs שנאספו מיחידים. השתמש בתאי A431 מזריקים עם PBMCs מתורמים שונים על פי ההליכים כפי שצוין בשלב 1.2.
    הערה: במשך 50 תורמים PBMC בריאים הוקרן במחקר על מנת להשיג מספר מספיק של תורמים מתאימים. חוקרים אשר רוצים לאמץ את הפרוטוקול הזה עשוי להחליט על עצמם כמה תורמים PBMC בריאים כדי להיות מוקרן, בהתבסס על העיצוב של המחקרים המתוכננים.
  2. נטר נפח גידול פעמיים בשבוע על ידי מדידת עם caliper.
    הערה: שיעור גידול הגידול עשוי להשתנות עם PBMC מתורמים שונים.
  3. לאסוף את רקמות הגידול בנפח ממוצע של 200-500 מ"מ3 ולעבד אותם עבור היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה (ihc) ניתוח. לבחון CD8 אנושיים, PD-1 ו-PD-L1 ביטויים. ראה שלב 4 עבור פרוטוקול מפורט.
  4. בחר התורמים PBMC כי התוצאה בצמיחה גידול מתון (נפח הגידול > 200 מ"מ3 14 ימים לפוסט חיסון) ו גבוהה יחסית pd-1, Pd-L1 ו CD8 ביטויים (מתכוון הציונים ihc > 2). ראה שלב 4 עבור פרוטוקול הבקיע IHC מפורט.

3. שורת התאים של סרטן האדם ומסך PDX

  1. שורות תא מסך ו-PDXs בהתאם להליכים שצוינו בשלב 1.2, כדי להעריך את קצב גידול הגידול, ביטוי L1 PD האנושי של הגידולים וחדירות התא החיסונית.
    הערה: מעל 30 תאים סרטניים האנושי ומעל 20 PDXs של סוגי סרטן שונים הוקרן על ידי המחברים. נתונים של דגמי הגידולים שנבחרו הוצגו בסעיף התוצאות.

4. אימונוהיסטוכימיה (IHC)

  1. קציר כפי שמצוין על ידי שלב 1.2.5 ולתקן רקמות הגידול על ידי האישר בפורמאלין. מייבשים ומטביעים רקמות קבועות בפרפין. מדור את רקמות קבוע ב 3 יקרומטר ולמקם אותם על שקופיות מצופה פולייזין.
  2. . שלוש כפול 7 דקות כל אחד מימה את הסעיפים דרך אלכוהול מדורגים: 100% אתנול פעמיים עבור 3 דקות כל אחד, ואחריו 90%, 80% ו 70% אתנול בתורו עבור 3 דקות כל אחד. לשטוף על ידי מונו H2O שלוש פעמים ולהסיר נוזל עודף מהשקופיות.
  3. לבצע אחזור אנטיגן על ידי הצבת שקופיות במיכל ולכסות עם 10 מ"מ נתרן ציטראט מאגר (pH 6.0), או טריס-EDTA (pH 9.0). מחממים את המיכל במיקרוגל למשך 3 דקות. מרתיחים באמבט מים ב 95 ° c עבור 30 דקות ואז להתקרר לטמפרטורת החדר. לשטוף על ידי מונו H2O שלוש פעמים ומכה נוזל עודף מהשקופיות.
  4. לחסום את הסעיפים על ידי 3% בסרום שור בערוץ PBS עבור 1 h ו 0.3% H2O2 פתרון ב-pbs עבור 10 דקות. כתם על ידי נוגדנים נגד האדם CD8 (EP334), PD-1 (NAT105,) ו-PD-L1 (E1L3N) ב 4 ° c לילה, ו HRP מובח השנינוגדנים ב RT עבור 1 h. Drop את המצע (3, 3-diaminobenzidine) אל השקופיות ולשלוט על זמן התגובה (שניות לדקות) על ידי ניטור צבע חום ממיקרוסקופ.
  5. לכסות את השקופיות עם בלזם נייטרלי לאחר לאשר את השקופיות ב 0.5% המלח חומצה הידרוכלורית ו 0.5% מים אמוניה בתורו 5 s כל אחד, אז ב 80%, 90% ו 100% אתנול ברצף עבור 3 דקות כל אחד, ולבסוף באמצעות שלושה שינויים עבור 5 דקות כל אחד. לזהות את הנוגדנים על ידי התבוננות צבע חום של מיקרוסקופ באמצעות.
    הערה: האדם CD8 ו PD-1 ביטוי על סרטן החדירה leucocytes (TIL) העריכו על ידי הקצאת ציון ביטוי על סולם 5 נקודות (הציון IHC, טווח 0-4) בהגדלה אובייקטיבית (20x, 40x). 0, נעדר; 1, עוצמה חלשה/פחות מ -20% תאים; 2, עוצמה חלשה בינונית/20%-50% תאים; 3, בינוני עד חזק עוצמה/50%-80% תאים; 4, עוצמה חזקה/יותר מ 80% תאים. האדם PD-L1 מכתים בתוך תאים סרטניים הבקיע באמצעות מערכת הבקיע מותאם על סולם 5 נקודה (הציון IHC, טווח 0-4) בגלל האות הפיזור שלה יחסית. 0, נעדר; 1, עוצמה חלשה/פחות מ-10% תאים; 2, עוצמה חלשה בינונית/10%-30% תאים; 3, בינוני/30%-50% תאים; 4, עוצמה חזקה/יותר מ 50% תאים.

5. ביעילות Vivo ולימודי פרמקודינמיקה הומניזציה PBMC-הנהון/SCID Xenograft מודלים

  1. התייחס מראש לעכברי הנהון/SCID כפי שמצוין בשלב 1.1.3. בקצרה, לטפל בעכברים עם 100 מ"ג/ק"ג CP (כיתה) ו 125 מ"ג/ק"ג DS (p.o.) פעם ביום עבור 2 ימים.
  2. 20 כדי 24 שעות לאחר המינון השני, להזריק תת-עורי (ספורטינג ראגה) עם מספר מצוין של תאים סרטניים אנושיים 2.5-5 x 106 pbmcs (סך של 200 μl התערובת התא ב 50% מטריצות) באגף הקדמי הימני של בעלי חיים.
    הערה: מספר ה-PBMC המשמש עבור כל עכבר בודד במחקר אחד בודד צריך להיות זהה. עם זאת, בשל וריאציות של הזמינות של PBMC מבודדים סך בזמן של כל מחקר, המחברים בחרו להשתמש 2.5 x 106, 4 x 106, או 5 x 106 pbmc במחקרים שונים. למרות שזה הבדל 2-קיפול בכמות מנוהלת של PBMCs עשוי להשפיע על מידת הומניזציה, המחברים לא להתבונן הבדלים משמעותיים בהערכת אנטי סרטניים efficacies של טיפולים חיסוני נבדק.
  3. עבור העפיל PDXs, הכנס תת-עורי שברי הגידול (3 x 3 x 3 מ"מ3) באגף הקדמי הימני של בעלי חיים. הכנס תת-עורי 200 μL של 5 x 106 pbmcs (100 μl כל צד) משמאל ומימין של רסיס גידול מנופה.
    הערה: PDX רקמות הגידול היו מנוהלים בתמיסה מטריצות, זהה לתיאור עבור דגמי קו התא.
  4. מקבץ באופן אקראי את החיות. ומתייחס לפרוטוקול הלמידה המתוכנן  להעריך את הפעילות נגד הגידול של תרופות מועמד, BGB-A317 (QW, כש) במקרה זה, על מינונים שצוין במודלים סרטניים שונים.
    הערה: שלושה תאים סרטניים האנושי (כלומר, A431 (אפידמואיד קרצינומה), SKOV3 (סרטן השחלות) ו-SK-MES-1 (סרטן ריאות)), כמו גם שני דגמי PDX (כלומר, BCLU-054 (סרטן ריאות) ו BCCO-028 (סרטן המעי הגס)), נחשבים מודלים הגידול טוב עבור טיפול I-O הערכה במודל העכבר ההומניציוני הזה.
  5. מדידת נפח הגידול העיקרי פעמיים בכל שבוע, באמצעות caliper.
    הערה: הפסד משקולות גוף gand נצפו סביב 4-6 שבועות פוסט PBMC חרט בלימודים שלנו, המאפשר 1-2 חודשים חלון עבור הערכות יעילות טיפולית.
  6. עבור ניתוח פרמקודינמיקה של הגידול מחדר התאים החיסונית, לחתוך את רקמות הגידול לחתיכות קטנות לעכל אותם עם קולגן סוג I (1 מ"ג/mL) ו DNase I (100 μg/mL) ב RPMI1640 ועוד 5% סרום העוברי (FBS) עבור 30 דקות ב 37 ° c. להעביר את הרקמות מתעכל באמצעות מ40 יקרומטר תא בתאי להשיג השעיות תא בודד.
  7. לשטוף את התאים ולהתאים את מספר התא לריכוז של 1 x 107 תאים/mL ב-facs קירור קר מאגר (PBS, 1% fbs) ב 96-לוחיות התחתונה עגול היטב. לשטוף את התאים על ידי תפרידו ולחסום אותם על ידי הוספת 20 μg/mL האדם IgG עבור 30 דקות, ואחריו כתמים עם אנטי אדם CD3 (HIT3a), CD8 (OKT8) ו PD-1 (MIH4) נוגדנים ב 4 ° c עבור 30 דקות. ואז הנושא דגימות ויטראז לזרום cy, לנתח באמצעות guavaSoft 3.1.1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעקבות ההליכים המוצגים כאן, מודל מבוסס PBMC מבוססי הומניזציה האדם הוקמה בהצלחה. בקצרה, ההשפעות של CP myeloablation ב בנוד/SCID עכברים נקבע על ידי הזרימה cy, לנסות ניתוח של נויטרופילים ואוכלוסיות מונוציט הטיפול בפוסט CP ו DS (איור 1). 100 מ"ג/ק"ג CP בתוספת 125 mg/ק"ג DS נקבע כמינון אופטימלי משמש מחקרים מאוחרים יותר כמו תוצאות משטר דלדול מקסימלית של נויטרופילים ומונוציטים מבלי לגרום לרעילות חמורה לעכברים. הבא, האדם PBMC ו השתלת הגידול בוצעה. נוכחות של תא החיסון האנושי מחלחל בסביבה מיקרוסביבתית...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הידע שלנו על התפתחות הסרטן וההתקדמות התקדמה באופן משמעותי בשנים האחרונות, עם דגש על הבנה מקיפה של תאי הגידול ומשתית הקשורים שלה. רתימת מנגנוני החיסון המארחים יכול לגרום להשפעה גדולה יותר נגד תאים סרטניים, המייצג אסטרטגיית טיפול מבטיח. מודלים murine עם מערכות חיסונית ללא שינוי של העכבר, כגון מודלים syngeneic ואבני חן, השתמשו באופן נרחב כדי לחקור חסינות מחסום מתווכת. הערכות היעילות המשתמשות במודלים אלה תלויות בעיקר במטרה נגד העכבר הפונדקאית נגד נוגדנים13,14. עם זאת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לכל המחברים יש עניין בעלות על בייג'ין. טונג ג'אנג וקאנג לי הם ממציאים על כיסוי פטנט BGB-A317 תיאר במחקר זה.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים לחברי המעבדות שלנו לדיונים מועילים. עבודה זו הייתה נתמכת באופן חלקי על ידי התוכנית לחדשנות ולמדעי החיים בביו-רפואית ולטיפוח המחקר של הנציבות העירונית של בייג והטכנולוגיה תחת הסכם גרנט. Z151100003915070 (פרויקט "המחקר הקדם קליני על הרומן אונקולוגיה החיסון נגד הגידול BGB-A317"), וזה היה גם נתמך באופן חלקי על ידי מימון החברה הפנימית למחקר טרום קליני.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>PBMC הפרדה/תרבית תאים
Histopaque-1077Sigma10771בידוד תאים
DMEMCorning10-013-CVRתרבית תאים
DPBSCorning21-031-CVRתרבית תאים
FBSCorning35-076-CVתרבית
תאיםפניצילין-סטרפטומיצין,גיבקו15140-163תרבית תאים
טריפסין-EDTA (0.25%), פנול אדוםגיבקו25200-114תרבית תאים
מטריג'לקורנינג356237חיסון CDX
<ניתוח חזק>FACS
דאוקסיריבונוקלאז I מדגימת לבלב בקרסיגמאDN25 הכנה
קולגנאז סוג ISigmaC0130הכנת דגימה
נוגדן נגד עכברים/CD11b (M1/70) אנושי נוגדןBioLegend101206FACS
נגד עכבר Ly-6C (HK1.4)BioLegend128008FACS
נגד עכבר Ly-6G (1A8) נוגדןBioLegend127614FACS
אנטי-אנושי CD8 (OKT8)Sungene BiotechH10082-11HFACS
אנטי אנושי CD279 (MIH4) נוגדןeBioscience12-9969-42FACS
אנטי אנושי CD3 (HIT3a) נוגדן4A ביוטק--FACS
גויאבה easyCyte 8HT Benchtop Flow CytometerMillipore0500-4008FACS
השתלת גידול/PDX/מינון/מדידה
ציקלופוספאמידJ& KCat#419656, CAS#6055-19-2יעילות in vivo
DisulfiramJ& KCat#591123, CAS#97-77-8יעילות in vivo
מזרקBD300841חיסון CDX
מחטים היפודרמיות (14 גרם)Shanghai SA Mediciall & מכשירי פלסטיק ושות', בע"מ0.7*32 TW SBPDX חיסון
Vernier קליפר (MarCal)Mahr16ERמדידת גידול
IVC כלובים מאווררים בודדיםLingyunboji בע"מIVC-128מתקן בעלי חיים
<חזק>IHC
Leica ASP200 מעבד רקמות ואקוםLeicaASP200IHC
Leica RM2235 מיקרוטום סיבובי ידני לחיתוך שגרתיLeicaRM2235IHC
Leica EG1150 H מודול הטמעת פרפין מחומםLeicaEG1150 H
IHC Ariol-Clinical IHC וסורק FISHLeicaAriolIHC
אנטי-אנושי CD8 (EP334) נוגדןZSGB-BioZA-0508IHC
אנטי-אנושי PD1 [NAT105] נוגדןAbcamab52587IHC
אנטי-אנושי PD-L1 (E1L3N) נוגדןאיתות תאים13684SIHC
Polink-2 בתוספת מערכת זיהוי HRP פולימרZSGB-BioPV-9001/9002IHC
נוזלי נוגדן

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pardoll, D. M. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).
  2. Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy. Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).
  3. Li, Z., Kang, Y. Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer. Pharmacology & Therapeutics. 161, 79-96 (2016).
  4. Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. Experimental animal modeling for immuno-oncology. Pharmacology & Therapeutics. 173, 34-46 (2017).
  5. Fisher, T. S., et al. Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity. Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).
  6. McCormack, E., et al. Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors. Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).
  7. Rongvaux, A., et al. Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine. Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).
  8. Matsumura, T., et al. Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells. Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).
  9. Zhang, T., et al. The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions. Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).
  10. Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).
  11. Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice. Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).
  12. Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).
  13. Takao, K., Miyakawa, T. Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).
  14. Payne, K. J., Crooks, G. M. Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans. Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).
  15. Mestas, J., Hughes, C. C. Of mice and not men: differences between mouse and human immunology. Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).
  16. von Herrath, M. G., Nepom, G. T. Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity. Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).
  17. Mahdi, B. M. A glow of HLA typing in organ transplantation. Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6(2013).
  18. Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges. Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).
  19. Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. Overcoming current limitations in humanized mouse research. Journal of Infectious Diseases. 208, Suppl 2 125-130 (2013).
  20. Walsh, N. C., et al. Humanized Mouse Models of Clinical Disease. Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).
  21. Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. Humanized mice in translational biomedical research. Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).
  22. Brehm, M. A., et al. NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC. The Journal of Immunology. 200, 1 Supplement 57(2018).
  23. King, M., et al. A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene. Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).
  24. Ito, M., et al. NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells. Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).
  25. Shultz, L. D., et al. Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells. Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).
  26. Sasaki, E., et al. Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine. Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).
  27. Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease. Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PBMCAnti PD 1Patient Derived Xenografts

מאמרים קשורים