הטיפול בעמוד השדרה של החולדה הוא מודל רב ערך ומשחזר של פגיעה חד-צדדית בחוט השדרה כדי לחקור את המנגנונים העצביים של locomotor התאוששות ויעילות הטיפול. מאמר זה כולל מדריך מפורט של שלב אחר שלב לביצוע הליך החצייה ולהערכת ביצועים locomotor בזירה בשטח פתוח.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כירורגיה של חוט השדרה הLocomotor הניתוח והערכה פתוחה בשדה החזה בעכברוש
במאמר זה
סיכום
תקציר
פגיעה בחוט השדרה גורמת להפרעות בתפקוד המוטורי, החושי והאוטונומי מתחת לרמת הנגע. דגמי בעלי חיים ניסיוניים הם כלים יקרי ערך כדי להבין את המנגנונים העצביים המעורבים בשחזור locomotor לאחר SCI ולעצב טיפולים לאוכלוסיות קליניות. ישנם מספר מודלים של SCI ניסיוני, כולל החבלה, דחיסה, ופציעות רוחבי המשמשים במגוון רחב של מינים. החצייה כרוכה בחתך חד צדדי של חוט השדרה ומשבשת את כל העולים ויורדים על צד אחד בלבד. הפגיעה בעמוד השדרה מייצרת פציעה סלקטיבית ובררנית מאוד בהשוואה לשיטות החבלה או הדחיסה שהיא שימושית לחקירת הפלסטיות העצבית במסלולים שנפגעו וניזוקו הקשורים להתאוששות תפקודית. אנו מציגים פרוטוקול צעד אחר צעד מפורט עבור ביצוע הT8 בית החזה ברמה החוליות של בחולדה כי התוצאה שיתוק הראשונית של הנגע בצד של הפצע עם התאוששות ספונטנית מדורגת של locomotor פונקציה על מספר שבועות. אנו מספקים גם פרוטוקול locomotor הבקיע להערכת התאוששות תפקודית בשדה הפתוח. הערכה locomotor מספקת פרופיל התאוששות לינארית ניתן לבצע הן מוקדם יותר ושוב לאחר הפציעה כדי להתאים במדויק בעלי חיים עבור נקודות זמן מתאים שבו לבצע בדיקות התנהגותיות מיוחדות יותר. טכניקת הזיהום הציג ניתן להתאים בקלות מודלים אחרים רוחבי ומינים, ואת הערכה locomotor ניתן להשתמש במגוון של SCI ומודלים פציעה אחרים כדי להבקיע פונקציה locomotor.
מבוא
פגיעה בחוט השדרה (SCI) קשורה להפרעות חמורות בתפקוד המוטורי, החושי והאוטונומי. מודלים ניסויים בעלי חיים של SCI הם כלים יקרי ערך כדי להבין את האירועים האנטומיים והפיסיולוגיים המעורבים ב-SCI פתולוגיה, כדי לחקור את המנגנונים העצביים תיקון והתאוששות, ועל המסך עבור יעילות ובטיחות של טיפול פוטנציאלי תערבויות. העכברוש הוא המינים הנפוצים ביותר במחקר SCI1. מודלים חולדה הם בעלות נמוכה, קל להתרבות, ו סוללה גדולה של בדיקות התנהגותיות זמינים להעריך את התוצאות תפקודית2. למרות כמה הבדלים מיקומי בדרכי, חוט השדרה העכברוש משתף פונקציות דומות sensorimotor דומה עם יונקים גדולים יותר, כולל פרימטים3,
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הניסויים המתוארים במאמר זה בוצעו בהתאם להנחיות של המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים ואושרו על ידי ועדת האתיקה באוניברסיטת מונטריאול.
1. ניתוח החצייה בחזה
- ללבוש ציוד הגנה מתאים (כפפות, מסכה, ושמלת) כדי לשמור על סביבה אספטי לניתוח. לנקות את האזור כירורגי עם מגבונים אלכוהול, ולמקם וילונות כירורגי סטרילי על השדה כירורגי. לעקר כלים כירורגיים ולמקם בשדה כירורגי.
- מייבשים את החולדה תחת שילוב של גז איזופלוט (3% אינדוקציה, 0.5-3% תחזוקה) וחמצן (1 ל/דקות). לאשר עומק הרדמה כירורגי הנכון על ידי אימות העדר צביטה הבוהן התגובה רפלקס המצמוץ. ברציפות לפקח על החולדה במהלך ההליך כולו, ולהתאים את כמות משלוח הרדמה כנדרש כדי לשמור על עומק הרדמה ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ניתן ליצור נגעים הניתנים לקריאה בעלת מידת עקביות גבוהה בטכניקת ההיאחקות. כדי להעריך ולהשוות בין נגעים בין קבוצות ניסיוני, האזור המקסימלי של הנגע כאחוז של החתך הכולל של חוט השדרה יכול להיות מחושב בקלות עם כתמים היסטולוגית של סעיפים חוט השדרה. איור 1 מציג את הנגע הנציג של ההימיקורד השמאלי ואת כיסוי של החלק של אזור נגע מקסימאלי משותף בין חולדות עם גודל הנגע ממוצע של 47.3% ± 4.0% של אזור הכבל החוצה החתך (n = 6).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
החוזק העיקרי של טכניקת ההיחיצות הוא הסלקטיביות והתוכסות של הנגע המוביל לשונות מופחתת בפנוטיפים היסטלוגיים והתנהגותיים בין בעלי חיים25. על מנת להבטיח פגיעה חד צדדית ברמת עמוד השדרה המתאימה, זיהוי מדויק של מקטע החוליות הנכון ואת חוט השדרה באמצע הדרך הוא קריטי. כפי שיכול להיות נטייה חוט השדרה לסובב בכיוון של לחתוך במהלך הליך החצייה, זה יכול להיות מועיל כדי לייצב את החוט בעדינות עם מלקחיים עדינים להציב בכל צד במהלך ההליך. הצבת החולדה במסגרת סטריאוטקאית עם הזנב מודבק בעדינות תחת מתח קל יכול לעזור עם יצ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הקנדיים לחקר הבריאות (CIHR; מגב-142288) ל-M.M. M.M נתמך על ידי פרס משכורת של מעלעלי דה רצ'רצ'ה קוויבק סנטרה (FRQS), ו-A. R. B נתמך על ידי מלגת FRQS.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Baytril | CDMV | 11242 | |
| מספריים דיסקציה קהה | מכשירי דיוק עולמיים | 503669 | |
| בופרנורפין הידרוכוריד | עדשת מצלמה CDMV | ||
| Pentax | C31204TH 12.5-75 מ"מ, f1.8, פורמט 2/3 אינץ', | ||
| מצלמת וידאו CMOS | Basler | acA2000-165uc | פורמט 2/3 אינץ', 2048 x 1088 פיקסלים, עד 165 fps, C-mount, USB3 |
| גז חמצן דחוס | Praxair | ||
| כותנה אפליקטורים | CDMV | 108703 | |
| גוזמי עצמות עדינים | Fine Science Tools | 16109-14 | |
| סכין חיתוך | כלי מדע עדינים | 10055-12 | |
| מלקחיים עדינים של Dumont | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Ethicon Vicryl 4/0 סגול קלוע FS-2 תפר (J392H) | CDMV | 111689 | |
| כרית חימום מבוקרת משוב | מכשיר הרווארד | 55-7020 | |
| נקבה חולדות לונג-אוונס מעבדות | נהר צ'ארלס | קוד מתח: 006 | 225-250 גרם |
| קצף ג'ל | CDMV | 102348 | |
| מלקחיים מעוקלים המוסטט | בסדר Science Tools | 13003-10 | |
| מעקר חרוזים | חמים Fine Science Tools | 18000-45 | |
| הידרוג'ל | 70-01-5022 | Clear H20 | |
| Isofluorane | CDMV | 118740 | |
| תמיסת רינגר חלב | CDMV | 116373 | |
| לידוקאין (2%) | CDMV | 123684 | |
| מחט 30 ga | CDMV | 4799 | |
| שטח פתוח | מותאמת אישית | קוטר 96 ס"מ, גובה קיר 40 ס"מ | |
| משחה אופטלמית | CDMV | 110704 | |
| מחשב אישי | עם קישוריות USB3 להקלטת וידאו עם המצלמה הרשומה | ||
| תמיסת מלח פיזיולוגית | CDMV | 1399 | |
| Proviodine | CDMV | 4568 | |
| מכרסמים נוזלי דיאטה | Bioserv | F1268 | |
| להב אזרקפת #11 | CDMV | 6671 | |
| מפסק שמירה עצמית | World Precision Instruments | 14240 | |
| Vannas אירידקטומיה מספריים קפיציים | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| מכונת הרדמה וטרינרית ומכשיר אידוי איזופלוארן | Dispomed | 975-0510-000 | |
| נגן מדיה VLC | VideoLAN | videolan.org/vlc |
מקורות
- Sharif-Alhoseini, M., et al. Animal models of spinal cord injury: a systematic review. Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).
- Sedy, J., Urdzikova, L., Jendelova, P., Sykova, E. Methods for behavioral testing of spinal cord injured rats. Neuroscience and Biobeha....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
