מאמר שיטה

כפול-עכברים הומניזציה מודל שמציעות מיקרובידום יציבה אנושית כמו בטן האדם המערכת החיסונית

DOI:

10.3791/59773

⸱

30 באוגוסט 2019

 ,  ,  , 
1Nebraska Center for Virology, 2School of Biological Sciences, University of Nebraska-Lincoln, 3Department of Food Science and Technology, University of Nebraska-Lincoln

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מתארים שיטה הרומן ליצירת הומניזציה כפולה עכברים התכונה המערכת החיסונית האנושית תפקודית יציבה מנופה של בני אדם כמו מיקרובידום. ניתן לעקוב אחר פרוטוקול זה ללא צורך בעכברים ללא חיידקים או מתקני גנוטוביוטיקה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עכברים הומניזציה (hu-עכברים) התכונה מערכת חיסונית אנושית תפקודית שינתה באופן מהותי את המחקר של פתוגנים אנושיים ומחלות. הם יכולים לשמש כדי לדגמן מחלות כי הם קשים אחרת או בלתי אפשרי ללמוד בבני אדם או דגמי בעלי חיים אחרים. המעיים יכולים להשפיע עמוקות על בריאות האדם ועל המחלה. עם זאת, מיקרובידום בטן מורלין שונה מאוד מזו שנמצאה אצל בני האדם.  יש צורך שיפור מודלים פרה-קליניים הקדם-קליני כי יש חרט מיקרובידום במעיים אנושיים. לכן, יצרנו כפול-עכברים הכוללים גם מערכת חיסונית אנושית ויציבה של מיקרובידום בטן אנושיים. תהנהן. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/szj (nsg) עכברים הם אחד החיות הטובות ביותר עבור הומניזציה בשל הרמה הגבוהה שלהם של הכשל החיסוני. עם זאת, חיידקים NSG ללא נבט, ומודלים שונים חשובים אחרים חיידקים שאינם מסחרית כרגע זמין. יתר על כן, הגדרות מחקר רבות אין גישה למתקני גנוביוטיקה, ועבודה תחת תנאים גנוביוטיים יכול להיות לעתים קרובות יקר זמן רב. וחשוב מכך, עכברים ללא חיידקים יש כמה ליקויים חיסוניים שקיימים גם לאחר החרט של חיידקים. לכן, פיתחנו פרוטוקול שאינו דורש בעלי חיים ללא חיידקים או מתקני גנוביוטיקה. כדי לייצר כפול-עכברים, עכברים NSG טופלו בקרינה לפני ניתוח כדי ליצור מח עצם, כבד, בלוטת התימוס-הומניזציה (hu-בייקון) עכברים. העכברים טופלו לאחר מכן עם אנטיביוטיקה ספקטרום רחב כדי לרוקן את מיקרובידום הבטן מורטין הקיים מראש. לאחר טיפול אנטיביוטי, העכברים ניתנו השתלות צואה עם דגימות של תורם אנושי בריא באמצעות gavage אוראלי. העכבר כפול-הייקון היו פרופילי הגנים הייחודיים של 16S rRNA מבוסס על מדגם התורם האנושי היחיד שהיה מושתל. חשוב מכך, המושתלת האדם כמו microbiome היה יציב בעכברים הכפול hu-בייקון למשך המחקר עד 14.5 שבועות לאחר ההשתלה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עכברים הומניזציה (hu-עכברים) הפכו את המחקר של היבטים רבים של בריאות האדם ומחלות כולל המטפיאה, חסינות, סרטן, מחלות אוטואימוניות, מחלה זיהומית1,2,3,4 ,5,6,7,8,9. אלה-עכברים הם בעלי יתרון ברור על פני מודלים אחרים של העכבר כי יש להם מערכת פונקציונלית האדם החיסונית יכול להיות נגוע פתוגנים ספציפיים אנושיים. עם זאת, החשיבות של מיקרובידום בטן הפגינו על ידי תפקידה במחלות אנושיות רבות כגון השמנה, תסמונת מטבולית, מחלות דלקתיות, סרטן10,11,12, . שלוש עשרה המערכת החיסונית רירית ואת המעיים מיקרובידום הם הופמוטיות לשמור על בטן והומאוסטזיס מערכתית. המערכת החיסונית מעוצבת על ידי אנטיגנים המוצגים על ידי מיקרובידום המעיים ההופקלי המערכת החיסונית ממלא תפקיד רגולציה חשוב בקידום חיידקים המעיים המנוע וסילוק פתוגנים14,15, 16. עם זאת, מיקרובידום הבטן של הו-עכברים לא היה מאופיין היטב, מיקרובידום בטן murine שונה באופן משמעותי בקומפוזיציה ותפקוד מבני אדם17. זאת בשל הבדלים אבולוציוניים, פיזיולוגיים, ואנטומיים בין המורין לבטן האדם, כמו גם גורמים חשובים אחרים כגון דיאטה, אשר עשויים להשפיע על התוצאות הנסיוניות של מחלת hu-עכברים18. לכן, מעבר לסיווג של מיקרובידום בטן מורלין של hu-עכברים, מודל בעלי חיים הכולל הן מערכת חיסונית אנושית ומיקרובידום הבטן האנושית נחוצה כדי ללמוד את האינטראקציות המורכבות של מחלות אנושיות בvivo.

חקר המחלות האנושיות ישירות במקצועות האדם הוא לעתים קרובות לא מעשי או לא מוסרי. מודלים בעלי חיים רבים לא ניתן להשתמש כדי ללמוד פתוגנים אנושיים כמו וירוס הכשל החיסוני האנושי 1 (HIV-1). מודלים של פרימטים לא אנושיים הם מחוץ גנטית, יקר מאוד, ואינם חשופים לפתוגנים אנושיים רבים. עכברים שנגזרו כמו נבט חינם (GF) ו מחדש עם האדם כמו בטן microbiomes שימשו רבות כדי ללמוד בריאות האדם מחלה19,20. עם זאת, בעלי חיים אלה אין מערכת חיסונית אנושית ועבודה עם בעלי חיים GF דורש מתקנים מיוחדים, הליכים, ומומחיות. לכן, יש צורך שיפור מודלים טרום קליניים כדי ללמוד את הקשר המורכב של המעיים מיקרובידום ואת המערכת החיסונית האנושית. זנים רבים של עכברים, כגון נוד. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/szj (nsg), אינם זמינים מסחרית כ-GF. בעלי חיים GF עלולים לסבול מליקויים חיסוניים ארוכי טווח שאינם מפוכים לחלוטין על ידי החרט של חיידקים21. לכן, יצרנו כפול העכברים שמציעות הן מערכת החיסון האנושי תפקודית מיקרובידום הבטן האנושי כמו המעיים בתנאים מסוימים ללא הפתוגן (SPF). כדי ליצור כפול הו-עכברים, הניתוח בוצע על עכברים NSG כדי ליצור מח עצם, הכבד, עכברים הומניזציה של התימוס (hu-בייקון). העכברים של הו-בייקון טופלו לאחר מכן עם אנטיביוטיקה ספקטרום רחב ולאחר מכן נתן השתלות צואה עם דגימת תורם אנושי בריא. אנו מאופיינים את הבטן בקטריאלי מיקרובידום של 173 דגימות צואה מ 45 כפול השני עכברים ו 4 דגימות בצואה אדם התורם. עכברים כפול הייקון יש פרופילי הגנים הייחודיים של 16S rRNA מבוסס על מדגם התורם האנושי היחיד כי הוא מושתל. חשוב מכך, המושתלת האדם כמו microbiome היה יציב בעכברים למשך המחקר עד 14.5 שבועות לאחר ההשתלה. בנוסף, metagenomes החזוי הראו שלעכברים כפולים בעלי יכולת פונקציונלית שונה מאשר עכברים שדומים יותר לדגימות התורמות האנושיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל השיטות המתוארות כאן נערכו בהתאם לטיפול בבעלי חיים מוסדיים וועדת מחקר (IACUC)-פרוטוקולים מאושרים באוניברסיטת נברסקה-לינקולן (UNL). ה-IACUC ב-UNL אישר שני פרוטוקולים הקשורים להפקת ושימוש בעכברי hu-בייקון, כולל עכברים כפולים. בנוסף, מחקר מדעי הוועדה פיקוח (SROC) ב UNL אישרה גם את השימוש בתאי גזע האדם עובריים ורקמות העובר, אשר הושגו מן המשאבים Bioscience מתקדם עבור לימודי עכברים הומניזציה (SROC 2016-1-002).

1. שיכון ואחזקה של עכברים

  1. רכישת 6-8-שבוע עכברים NSG הישן (נוד. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/szj).
  2. בית העכברים תחת תנאי SPF עם החלפת אוויר, מסננים מראש, ו HEPA מסננים (0.22 μm) בחדר עם טמפרטורה מבוקרת, לחות, ולחץ.
    1. הבית ולשמור על עכברים בכלובים מיקרובודדים בודדים במערכת ארון תקשורת מסוגל ניהול האוויר עם מסננים prefilters ו HEPA מסננים (0.22 μm).
  3. בצע את כל ההליכים ומניפולציות של העכברים בכיתה II סוג A2 מכסה בטיחות ביולוגית כי כבר טופלו מראש עם 70% אתנול. לפני העבודה בחדר החיות, מקלחת ולשנות לתוך חלוקים נקיים, החליפה tyvek, המגף כיסויים, כובע שיער, מסכת פנים, וכפפות. ללבוש שמלת הניתוח על חליפת tyvek במהלך הליכים כירורגיים.
    הערה: אולטרה סגול (UV) טיהור האור מועדף גם לפני הליכים.
    1. האוטוקלב כל המכשירים והריאגנטים אם אפשר ולאחר מכן לחטא לפני המעבר למכסה המנוע.
    2. במהלך ההליכים, יש להסיר את הכלובים המאווררים באופן אינדיבידואלי מהארונות ולחטא לפני המעבר למנוע העישון.
  4. להאכיל את העכברים דיאטה לקרינה. ולספק מים אוטוקלבים מספקים ab libitum מזון הקרינה ותוספת עם מזון הוקרן נוסף כנדרש. מחליפים מים אוטוקלבים בשבוע או לפי הצורך.
    הערה: acidified ניתן גם להשתמש במים אוטומטיים. הדיאטה שניתן לקרינה סיפקה היה חיי מדף של 6 חודשים לאחר הייצור.

2. הדור של עכבר בייקון הומניזציה

הערה: הדור של עכבר הו-בייקון תואר בעבר22,23,24.

  1. ביום הניתוח, לתת לעכברים את כל הגוף הקרנה במינון של 12 cGy/g של משקל הגוף.
  2. . הכן את העכברים לניתוח
    1. תן כל עכבר לקרינה מוקרן תערובת של קטמין בריכוז העבודה של 100 מ"ג/ק"ג ו Xylazine על הריכוז של 12 מ"ג/ק"ג, אשר נע מ 130-170 μL לכל עכבר מבוסס על משקל הגוף על ידי הזרקת הצפק (IP) הזרקה להרדמה. כדי להכין 3 מ ל של התערובת קטמין ו Xylazine, להוסיף 0.27 mL של קטמין בריכוז המניה של 100 mg/mL ו 0.03 mL של Xylazine על הריכוז של 100 mg/mL כדי 2.7 mL של תמיסת מלח סטרילי מערבבים היטב. חטא את העור עם 70% איזופנול לפני ההזרקה.
    2. תן כל עכבר מוקרן לקרינה Buprenorphine 1 מ"ג/ק"ג של משקל הגוף (חצי חי 72 h, SR-LAB) על ידי הזרקה תת עורית לניהול הכאב ארוך טווח.
    3. תן כל עכבר מוקרן לקרינה 100 μL (858 μg) של Cefazolin על ידי הזרקת IP עבור מניעה אנטיביוטי טרום הניתוח.
    4. לגלח את השיער של העכברים באמצעות קוצץ שיער חשמלי סביב הצד השמאלי בצד האמצעי של העכבר באתר כירורגי מאוחר יותר השתמשו כדי לחשוף את הכליה השמאלית.
    5. בדוק את רמת ההרדמה הנכונה על ידי הדוושה רפלקס (צביטה הבוהן המשרד).
    6. אם יש צורך בהרדמה נוספת במהלך הניתוח, יש להעניק גז איפלוט ב-3-5%.
    7. החלת משחה אופטלמולוגית על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות הקרנית. החלת תג האוזן במידת הצורך.
  3. לבצע ניתוח להשתיל את הכבד רקמות התימוס לתוך קפסולת הכליה השמאלית.
    1. לחטא את העור באתר כירורגי על ידי החלת לקרצף יוד החל ממרכז האתר כירורגי ונעים לכיוון החוץ באופן מעגלי. חזור על תהליך זה עם 70% איזופנול ובפעם השלישית עם יוד.
    2. באמצעות מלקחיים, לטעון תחילה 1 רקמת הגוף האדם משבר לתוך trocar. ואז באמצעות מלקחיים, לטעון שבר אחד העובר התימוס האנושי לתוך המכונית. ולאחר מכן שימוש מלקחיים, לטעון שבר אחר של רקמת האדם העוברי לתוך המכונית. רקמות צריך להיות גזור 1-1.6 מ"מ3 כדי להתאים את הממדים הפנימיים של trocar.
    3. מלקחיים להשתמש כדי להרים את העור ולהשתמש במספריים כדי להפוך חתך קטן longitudinally. הארך את החתך ל-1.5-2 ס מ בצד השמאלי של העכבר.
    4. מלקחיים להשתמש כדי להרים את שכבת השריר ולהשתמש במספריים כדי להפוך חתך קטן longitudinally. הארך את החתך בהתאם לצורך כדי לחשוף את הכליה.
    5. לחשוף את הכליה על ידי האוחז בעדינות את רקמת השומן סביב הכליה. אל תגעו במישרין בכליה.
    6. הפוך את חתך 1-2 מ"מ בקצה האחורי של קפסולת הכליה באמצעות אזמל.
    7. הכנס לאט את המכונית הטעונה מראש דרך החתך המקביל לציר הארוך של הכליה ושחררו את הרקמות בין קפסולת הכליה לכליה.
    8. החזר בזהירות את הכליה. והמעיים לעמדתם הרגילה שימוש נספג 5/0 P-3 (P-13) תפרים עם 13mm 3/8 מעגל המחט כדי לסגור את שכבת השריר וסיכות כירורגי כדי לסגור את העור.
  4. לאחר הניתוח, לשים את העכבר לתוך כלוב נקי מיקרובודדים המיקרו להתאוששות.
    1. כדי למזער את אובדן החום במהלך ההתאוששות לאחר ניתוח, לשים את הכלוב המכיל את העכברים על משטח חימום כי הוא מחובר למשאבת מים כי מחמם ומסחררת את המים.
    2. מפקחים על העכברים עד שחזרו להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה.
  5. בתוך 6 h של השלמת הניתוח, דרך הזנב-וריד, להזריק CD34 + תאי גזע המטפאות מבודדים מרקמת הגוף האנושי העובר.
    1. לחמם את העכברים עם מנורת חום. לחטא את הזנב עם 70% איזופנול ולאחר מכן להזריק 1.5 כדי 5 × 105 תאי גזע/200 μl לתוך הווריד הזנב.
    2. הפסיקו את הדימום מהזריקה והעכברים החוזרים לכלוב המיקרו-מבודדים ולכלוב המיקרו-מבודדים למדף הכלוב.
      הערה: עכברים שלאחר הניתוח מוחזקים יחד בדרך כלל, חמישה כלוב של מיקרובודדים, במהלך ההחלמה ולאחריה. עם זאת, עכברים מוחזקים יחד רק אם כולם קיבלו ניתוח באותו יום.
  6. . תבדקו את העכברים מדי יום עקוב בזהירות אחר הסיכות הכירורגית והחלף אותם לפי הצורך. עקוב בקפדנות אחר העכברים לכל סימן של זיהום או אי נוחות. לספק מזון אוטוקלע על הרצפה של הכלוב מיקרובודדים לאחר כמה ימים לאחר הניתוח.
  7. הסר את הסיכות כירורגי 7-10 ימים לאחר הניתוח. . להחזיר את העכברים לידי ב3-5 הסר בזהירות את הסיכות ולאחר מכן החל משחה אנטיביוטית וכאבים להקלה על האתר.
  8. אפשר 9-12 שבועות לחוקה של תאי החיסון האנושיים, ולאחר מכן לאסוף דם היקפי מן הווריד saphenous האמצעי מכל העכברים ההומניזציה.
    1. לרסן עכברים מודע באמצעות איפוק בגודל כראוי חרוט פלסטיק עם פתח ליד הראש של העכבר לנשימה ופתיחה ליד החלק האחורי של העכבר כדי לבודד רגל אחת. לשים את העכברים לתוך ראש חרוט האיפוק הראשון ולאחר מכן בעדינות למשוך רגל אחת דרך פתיחת הרגל.
    2. רסס את הצד האמצעי של הרגל הבודדת עם 70% איזופנול, ולאחר מכן פזר אנטיביוטיקה ומשחה להקלה על כאבים באותו אתר.
      הערה: המשחה מסייעת לחשוף את מיקום הווריד ללא צורך בהסרת שיער ומסייעת גם ביצירת droplet דם.
    3. באמצעות מחט 25-מד בזווית 90 °, נקב את הווריד ולאסוף 50-100 μL של דם באמצעות צינור מצופה דם EDTA מצופים. לעצור את הדימום על ידי הפעלת לחץ על האתר עם גזה סטרילית. , ברגע שהדימום נפסק. החזר את העכברים לכלוב שלהם
      הערה: נפח הדם המרבי שנאסף הם בדרך כלל 50 μL לכל שבוע או 100 μL כל שבועיים.
    4. השתמש בדם היקפי שנאסף כדי לבדוק את רמת תא החיסון האנושי מחדש באמצעות הזרמת cy, hCD45, mCD45, hCD3, hCD4, hCD8, hCD19.

3. טיפול אנטיביוטי

  1. לפני טיפול אנטיביוטי, לאסוף דגימות מראש טיפול בצואה. הזיזו את העכברים לכלוב חדש. של מיקרובודדים
  2. הכינו קוקטייל טרי של אנטיביוטיקה רחבה מדי יום.
    1. הכינו 250 mL של מים המכילים מטרוניאזול טריים (1 g/L), Neomycin (1 g/L), ואנקומיצין (0.5 g/L), ו-אמפיצילין (1 g/L) עבור כל כלוב מיקרודלטור של עכברים.
      הערה: השתמש באוטוקלבד או במים סטריליים עבור אנטיביוטיקה שנוספו מי שתייה.
    2. הוסף 9.2 גרם של סוכר ענבים ממותק תערובת כדי 250 mL של המים לאנטיביוטיקה בתוספת.
      הערה: השימוש בסוכר ענבים ממותק לערבב מסכות את הטעם המר של אנטיביוטיקה ומסייע למנוע התייבשות בעכברים.
    3. שנה את האנטיביוטיקה ואת הסוכר ענבים ממותק לשתות לערבב מים ומניחים את העכברים בכלוב אוטוקלאובי חדש מדי יום.
      הערה: עכברים הם שלובים ומחליפים את הכלובים מדי יום, מונעים מהעכברים לחדש את עצמם בעזרת חיידק המעיים.
    4. לקבלת העפילה המקסימלי של מיקרובידום הבטן האנושית, יש לספק אנטיביוטיקה למשך 14 ימים. במהלך טיפול אנטיביוטי, לפקח על העכברים לירידה במשקל והתייבשות. ירידה במשקל צפוי במהלך הראשון 3-4 ימים ומישורים אחרי זה למשך הטיפול. אם התייבשות מתרחשת, לתת את העכברים תמיסת מלח או פתרון Ringers באמצעות הזרקת הצפק.
      הערה: בנוסף, מנגנוני הgavage מיקרועיים מתקשרים לטיפול אוראלי של אנטיביוטיקה. בעוד יעיל בשנת מכלה את חיידק הבטן murine, מצאנו כי השיטה פחות פולשנית של הוספת אנטיביוטיקה למים השתייה לשים לחץ פחות על העכברים שלנו הומניזציה והובילו תוצאות טובות יותר.

4. דגימות תורם והשתלת צואה

  1. הכינו דגימות של. בצואה של תורם אנושי
    1. השתמש מקורות מוכנים כראוי של השתלת מיקרוביוטה צואה (FMT) חומר עבור השתלת צואה לתוך העכברים ההומניזציה.
    2. הפשרת fmt ההכנות ו סדרת מחלקים אותם תחת תנאים אנאירובית בחדר אנאירובי.
    3. אם רצונך בכך, בשלב זה תערבב חלקים שווים של דגימות צואה יחד כדי ליצור דוגמה "אנושית" משוחדת.
    4. לשמור על הקפאת ולהפשיר את החומר FMT למינימום, אם מצטט או ערבוב של דגימות אינו נחוץ, רק להפשיר מיד לפני ההליך.
  2. השתלת צואה של אדם
    1. לאחר השלמת טיפול אנטיביוטי 14 ימים, לשנות את מי השתייה למים אוטוקלבים ולהעביר את העכברים לתוך כלוב אוטוקלאובי חדש. להפסיק שינויים בכלוב היומי וליישם פעם אחת כל 1-2 שבועות כלוב לשנות את לוח הזמנים.
    2. תן שני השתלות צואה ב 24 ו 48 h הפסקה פוסט של אנטיביוטיקה.
    3. 24 שעות לאחר טיפול אנטיביוטי, להפשיר את הכמות הדרושה של חומר FMT, לתת לכל עכבר 200 μL של חומר FMT דרך אוראלי gavage. חזור על ההליך שוב ב 48 h הודעה אנטיביוטיקה.
    4. פזר את החומר שנותר או שאריות FMT המופשרים על פרוות העכברים ההומניזציה או על מצע הכלוב.

5. אוסף טרי מדגם הצואה

  1. שקיות נייר אוטוקלב בודדות לפני המעבר למכסה המנוע.
  2. בתוך מכסה המנוע, לשים עכבר אחד לתוך שקית נייר בודדת ולאפשר לעכבר להפריש.
  3. באמצעות מלקחיים סטרילי, לאסוף את דגימת צואה לתוך צינורות פלסטיק 1.5 mL להקפיא ב-80 ° c. החזר את העכברים. לכלובים מיקרובודדים
    הערה: שיטה זו של איסוף דגימות צואה מאפשר איסוף מדגימת צואה טרי מעכברים בודדים ללא כל מאמץ לגרימת לחץ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 1 מציג חלוקה לרמות של השיטות המשמשות ליצירת עכברי hu-בייקון כפולים ומתאר בקצרה את התהליך של הוספת מערכת חיסונית אנושית תפקודית ויציבה מיקרוביבה של האדם לעכברים nsg. איור 2 מראה דוגמה של הזרימה cy, לנסות ניתוח דם היקפי מעכבר בייקון הומניזציה 10 שבועות לאחר הניתוח. איור 3 מראה את השפע היחסי של הדגימות בצואה האנושית המשמש להעברת מיקרובידום בטן כדי ליצור שני עכברים. איור 4 מציג את השינויים פנוהופי הנגר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול המתואר כאן הוא ליצירת עכברים כפול-בייקון התכונה הן המערכת החיסונית האנושית תפקודית ויציבה אנושי כמו בטן microbiome. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם למודלים אחרים של עכברים או שאינם הומניזציה ללא צורך בעלי חיים GF ומתקני גנוביוטיקה. בעוד שהשיטות המתוארות כאן הן פשוטות יחסית, קיימות מספר פרטים קריטיים החשובים ליצירה מוצלחת של עכברים כפולים משני הסוגים. עכברים NSG הם מאוד חיסוני ומניעת זיהומים הוא המפתח להישרדות לטווח ארוך של העכברים. לקחנו את הצעדים הבאים כדי למנוע זיהום. ראשית, בעלי חיים שוכנו בכלובים מיקרובודדים ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

. למחברים אין מה לגלות

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו רוצים להודות ליאנמין וואן, לגוקובין קאנג, ולפלאבי קונדו לעזרתם ביצירת עכברים הוממיזציה. היינו רוצים להכיר את UNMC מתקן ליבה גנומיקה אשר מקבל תמיכה חלקית מרשת מחקר נברסקה ב גנומיקה תפקודית NE-INBRE P20GM103427-14, הביולוגיה המולקולרית של מערכות נוירוחושי CoBRE P30GM110768, פרד & פמלה מרכז הסרטן באפט-P30CA036727, המרכז של שורש ו ריזובידום חדשנות (CRRI) 36-5150-2085-20, ואת היוזמה נברסקה מחקר. אנחנו רוצים להודות לאוניברסיטת נברסקה-באגף מדעי החיים לינקולן הצוות שלהם על עזרתם. מחקר זה נתמך בחלק על ידי המכון הלאומי לבריאות (NIH) מענקים R01AI124804, R21AI122377-01, P30 MH062261-16A1 כרונית נגיף ההזדקנות במרכז neuroaids (שרשרת), 1R01AI111862 ל Q לי.  לתורמים לא היה כל תפקיד בתכנון לימוד, איסוף נתונים וניתוח, הכנת כתב היד או ההחלטה לפרסום.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחטי האכלה לבעלי חיים 18GCadence Science9928B
Clidox-s Activatorמעבדות מחקר פרמקליות95120F
Clidox-s BasePharmacal Research Laboratories96125F
DGM 108 מתלה כלובTechniplast
שקית מכולת חומה שטוחה 3-5/8 אינץ' D x 6 אינץ' W x 11-1/16 אינץ' L Grainger12R063
FMT תכשירי מיקרוביוטה לאספקה עליונה OpenBiomeFMP30
ענבים Kool-AidKraft Foods Inc.
hCD19-PE/Cy5Biolegend
Biolegend
700Biolegend
Biolegend
/Cy7Biolegend301016
Lactate Buffered Ringer's SolutionBoston BioProducts Inc PY-906-500 
mCD45-APCBiolegend103111
Microvette 100 K3EMicrovette20.1278.100
Neosporin עזרה ראשונה אנטיביוטיקה/משחה לשיכוך כאביםעכברי Neosporin
NSG (NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)מעבדת ג'קסון005557
PrecisionGlide 25 G מחטBD305127
RS200 רנטגן רנטגןטכנולוגיות
Sealsafe Plus GM500 כלובי מיקרו-מבודדטכניפלסט
סטרילי לא ארוגגזה פישרברנד22-028-558
צ'או עכבר מוקרן חלבון 16% Teklad2916
302209-hCD3-PE 300408-hCD4-Alexa 300526-hCD45-FITC 304006-hCD8-APCמקור RAD

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Simpson-Abelson, M. R., et al. Long-term engraftment and expansion of tumor-derived memory T cells following the implantation of non-disrupted pieces of human lung tumor into NOD-scid IL2R gamma(null) mice. Journal of Immunology. 180 (10), 7009-7018 (2008).
  2. Bankert, R. B., et al. Humanized Mouse Model of Ovarian Cancer Recapitulates Patient Solid Tumor Progression, Ascites Formation, and Metastasis. PLoS One. 6 (9), (2011).
  3. Vudattu, N. K., et al. Humanized Mice as a Model for Aberrant Responses in Human T Cell Immunotherapy. Journal of Immunology. 193 (2), 587-596 (2014).
  4. Whitfield-Larry, F., et al. HLA-A2 Matched Peripheral Blood Mononuclear Cells From Type 1 Diabetic Patients, but Not Nondiabetic Donors, Transfer Insulitis to NOD-scid/gamma c(null)/HLA-A2 Transgenic Mice Concurrent With the Expansion of Islet-Specific CD8(+) T cells. Diabetes. 60 (6), 1726-1733 (2011).
  5. Yi, G. H., et al. A DNA Vaccine Protects Human Immune Cells against Zika Virus Infection in Humanized Mice. EBioMedicine. 25, 87-94 (2017).
  6. Stary, G., et al. A mucosal vaccine against Chlamydia trachomatis generates two waves of protective memory T cells. Science. 348 (6241), (2015).
  7. Sun, Z. F., et al. Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4(+) T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1. Journal of Experimental Medicine. 204 (4), 705-714 (2007).
  8. Wang, L. X., et al. Humanized-BLT mouse model of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3146-3151 (2014).
  9. Ernst, W. Humanized mice in infectious diseases. Comparative Immunology Microbiology and Infectious Diseases. 49, 29-38 (2016).
  10. Turnbaugh, P. J., et al. An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest. Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).
  11. Gopalakrishnan, V., et al. Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy in melanoma patients. Science. 359 (6371), 97-103 (2018).
  12. Routy, B., et al. Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors. Science. 359 (6371), (2018).
  13. Clemente, J. C., Manasson, J., Scher, J. U. The role of the gut microbiome in systemic inflammatory disease. Bmj-British Medical Journal. 360, (2018).
  14. Kau, A. L., Ahern, P. P., Griffin, N. W., Goodman, A. L., Gordon, J. I. Human nutrition, the gut microbiome and the immune system. Nature. 474 (7351), 327-336 (2011).
  15. Hooper, L. V., Littman, D. R., Macpherson, A. J. Interactions Between the Microbiota and the Immune System. Science. 336 (6086), 1268-1273 (2012).
  16. Maynard, C. L., Elson, C. O., Hatton, R. D., Weaver, C. T. Reciprocal interactions of the intestinal microbiota and immune system. Nature. 489 (7415), 231-241 (2012).
  17. Xiao, L., et al. A catalog of the mouse gut metagenome. Nature Biotechnology. 33 (10), 1103(2015).
  18. Nguyen, T. L. A., Vieira-Silva, S., Liston, A., Raes, J. How informative is the mouse for human gut microbiota research. Disease Models & Mechanisms. 8 (1), 1-16 (2015).
  19. Turnbaugh, P. J., et al. The Effect of Diet on the Human Gut Microbiome: A Metagenomic Analysis in Humanized Gnotobiotic Mice. Science Translational Medicine. 1 (6), (2009).
  20. Hazenberg, M. P., Bakker, M., Verschoor-Burggraaf, A. Effects of the human intestinal flora on germ-free mice. Journal of Applied Bacteriology. 50 (1), 95-106 (1981).
  21. Hansen, C. H. F., et al. Patterns of Early Gut Colonization Shape Future Immune Responses of the Host. PLoS One. 7 (3), (2012).
  22. Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S. M., Yang, Y. G. Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34(+) cell transplantation. Blood. 108 (2), 487-492 (2006).
  23. Li, Q. S., et al. Early Initiation of Antiretroviral Therapy Can Functionally Control Productive HIV-1 Infection in Humanized-BLT Mice. Jaids-Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 69 (5), 519-527 (2015).
  24. Brainard, D. M., et al. Induction of Robust Cellular and Humoral Virus-Specific Adaptive Immune Responses in Human Immunodeficiency Virus-Infected Humanized BLT Mice. Journal of Virology. 83 (14), 7305-7321 (2009).
  25. Greenblatt, M. B., et al. Graft versus Host Disease in the Bone Marrow, Liver and Thymus Humanized Mouse Model. PLoS One. 7 (9), (2012).
  26. Hintze, K. J., et al. Broad scope method for creating humanized animal models for animal health and disease research through antibiotic treatment and human fecal transfer. Gut Microbes. 5 (2), 183-191 (2014).
  27. Ericsson, A. C., Personett, A. R., Turner, G., Dorfmeyer, R. A., Franklin, C. L. Variable Colonization after Reciprocal Fecal Microbiota Transfer between Mice with Low and High Richness Microbiota. Frontiers in Microbiology. 8, 1-13 (2017).
  28. Ellekilde, M., et al. Transfer of gut microbiota from lean and obese mice to antibiotic-treated mice. Scientific Reports. 4, (2014).
  29. Staley, C., et al. Stable engraftment of human microbiota into mice with a single oral gavage following antibiotic conditioning. Microbiome. 5, (2017).
  30. Zhou, W., Chow, K. H., Fleming, E., Oh, J. Selective colonization ability of human fecal microbes in different mouse gut environments. ISME J. , (2018).
  31. Lundberg, R., Toft, M. F., August, B., Hansen, A. K., Hansen, C. H. F. Antibiotic-treated versus germ-free rodents for microbiota transplantation studies. Gut Microbes. 7 (1), 68-74 (2016).
  32. Wos-Oxley, M., et al. Comparative evaluation of establishing a human gut microbial community within rodent models. Gut Microbes. 3 (3), 234-249 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

BLTOral Gavage16S rRNA

מאמרים קשורים