מאמר שיטה

אנגיוגרפיה פלואורסצנטית עבור הערכה של מפרצת Perfusion ועורק ההורה בתוך החולדה מפרצת הארנב במודלים

DOI:

10.3791/59782

⸱

24 ביולי 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, Kantonsspital Aarau, 2Cerebrovascular Research Group, Department for BioMedical Research (DBMR), University of Bern

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך ביעילות את הפרזיה ומפרצת של כלי הקיבול של מפרצת sidewall בחולדות וארנבים, באמצעות fluorescein מבוססי וידאו אנגיוגרפיה וידיאו (FVA). עם ערך ניבוי חיובי של 92.6%, היא שיטה פשוטה אך יעילה מאוד וחסכונית ללא ציוד מיוחד נדרש.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טיפול במפרצת במוח מתמקד בהשגת חסימה מלאה, כמו גם שימור זרימת הדם בעורק האב. Fluorescein נתרן ו indocyanine ירוק משמשים כדי לאפשר התבוננות של זרימת הדם ואת מצב זלוף הספינה, בהתאמה. מטרת מחקר זה היא להחיל FVA כדי לוודא זרימת הדם בזמן אמת, מעמד של הספינה וחסימה של האניוסיאמים לאחר האינדוקציה של מחלת העור הצדדית בארנבים וחולדות, כמו גם כדי לאמת את ההליך במינים אלה.

עשרים מילישניות שנוצרו ב -10 ארנבים על ידי הdecellularized נרתיק של כלי קיבול עורקי בעורק הראשי של ארנב תורם. בנוסף, 48 שנוצרו בשנת 48 חולדות. במהלך המעקב בחודש אחד לאחר היצירה, מורכב העורק הראשי/מפרצת היה גזור FVA התבצע באמצעות פלואורוסקופים ורידי (10%, 1 מ ל) הזרקה באמצעות צנתור וריד האוזן בארנבים והעורק הירך ורידים בחולדות. לאחר מכן, היתה הערכה לאחר מכן.

מאקרו, 14 מתוך 16 היורו בארנבים הצביעו על כך שאין שרידים של עורק הורים עם מנורות שאינן מסומנות באופן מוחלט, עם זאת 11 (79%) זוהו על ידי FVA. ארבעה מופרצות לא נכללו עקב בעיות טכניות. בחולדות, הפרזיה שיורית מפרצת הייתה. מאקרופית ב -25 מתוך 48 מקרים מתוך 23 ללא ראיות מאקרוסקופיות של הפרזיה, FVA אישר את השכיחות של 22 היורו (96%). לא היו אירועים לוואי הקשורים FVA. Fluorescein ישימה בקלות, אין צורך בציוד מיוחד. זוהי שיטה בטוחה ויעילה ביותר להערכת שלמות עורק העורקים ומפרצת/שיורית בהגדרה ניסיונית עם ארנבים וחולדות. FVA באמצעות fluorescein כסוכן ניגודיות מופיע להיות יעיל בשליטה על הפטנטיות של אניומיאמים ואת הספינה הבסיסית והוא יכול אפילו להיות מותאם לעקוף את הניתוח.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ושלמות עורק ההורה היא. בעלת חשיבות עליונה בניתוח מפרצת קיימות מספר אפשרויות לאישור הדלקת עורקים של עורק ומפרצת, כגון סונגרפיה דופלר, אנגיוגרפיה מוחית (DSA), מחשב טומוגרפיה ממוחשבת (CTA) או אנגיוגרפיה מגנטית (MRA)1, 2. עם זאת, אלו שיטות יקרות וגוזלת זמן שלעיתים קרובות אינן זמינות בסביבה מעבדה. יתר על כן, הם עשויים להיות תופעות לוואי רלוונטיות כגון חשיפה לקרינה או צורך הרגעה נוספת של בעלי חיים ניסיוניים כדי למנוע פריט התנועה.

עם מספר גדל והולך של מכשירים אנדוכלי חדש המתעוררים, יש צורך עוקב עבור בדיקות טרום קליני של מכשירים כאלה. עם זאת, מחקרים אלה מסתמכים לעתים קרובות על ניתוח שלאחר המוות (למשל, פתולוגיה מאקרו והיסטולוגיה) וחוסר מידע על perfusion דינמי. יתרה מזאת, עבור החוקר הוא עשוי להיות חיוני כדי לקבל מידע מיידי ואמין במהלך הליך כירורגי ניסיוני. אנגיוגרפיה פלואורסצנטית היא חסכונית וקל לבצע ויזואליזציה טכניקה1,3,4.

ככזה, indocyanine ירוק (icg) וידאו אנגיוגרפיה משמש לעתים קרובות בהליכים נוירוכירורגית קלינית והוא למד בהרחבה5,6. Fluorescein וידאו אנגיוגרפיה (FVA) היא טכניקה חלופית, עם יתרון נוסף של יצירת אות פלואורסצנטית כי הוא בטווח אורך הגל של החזון האנושי, ולכן ניתן לראות על ידי העין בלתי ללא מצלמה מורחבת הספקטרום אינפרא אדום 7. fluorescein וידאו אנגיוגרפיה משמש פחות לעתים קרובות בניתוח קליני ודוחות על fva בהגדרות ניסיוני נדירים1,4.

מטרת דו ח זה היא להדגים את הכדאיות ואת היקף היישומים של FVA ב החולדה והארנב מחקר הפרה-קלינית מראש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המכרסמים שוכנו במתקן לטיפול בבעלי חיים ובניסויים נבדקו ואושרו על-ידי הוועדה לרווחת בעלי חיים באוניברסיטת ברן, שוויץ (להיות 108/16) ו (BE65/16). כל החיות שמרו על דיאטת מעבדה סטנדרטית עם גישה חופשית למזון ולמים. כל הניסויים בבעלי חיים נערכו תחת שיקול קפדני של 3Rs (החלפה, הפחתה ועידון). עשר נשים שפנים לבנות ניו זילנד ו-48 זכר וויסטאר חולדות נכללו. ההנחיות להגיע הגיעו רק8.

הערה: עשרים מילישניות שנוצרו ב -10 ארנבים על ידי הdecellularized נרתיק של כלי קיבול עורקי בעורק הראשי של ארנב תורם. בנוסף, 48 מיקרוניתוחי מיקרו-כירורגי הינם נוצרים ב-48 חולדות כמתואר לפני4,9. הליך הדמיה וניתוח מאקרוסקופי בוצעו 4 שבועות לאחר יצירת מפרצת.

1. הכנת החומר הדרוש לפלואורוסקופים וידאו אנגיוגרפיה

  1. שינוי הפנס באמצעות הקלטה על פילטר כחול (ראה טבלת חומרים), שישמש כמסנן עירור. הלפיד צריך לפלוט רק אור כחול. השתמש בקלטת שחורה כדי למנוע דליפה של אור לא מסונן.
  2. לצייד את המצלמה (למשל, מצורף למיקרוסקופ) עם מסנן bandpass ירוק (לראות את הטבלה של חומרים), אשר ישמש כמסנן אור פליטה. רק אור ירוק צריך עכשיו. להיות מסוגל לעבור

2. הכנת מקום העבודה והחומרים

  1. לחטא את סביבת העבודה עם פתרון חיטוי.
  2. לכסות את השולחן עם וילונות סטרילי כדי למנוע זיהום.
  3. השתמש בכלים סטריליים לניתוח.

3. הכנת בעלי חיים לניתוח

  1. . שוקלים את החיות
  2. לגרום הרדמה ולהתאים את המינון על פי המשקל.
    1. לארנבים, התחילו בהרדמה מאוזנת. מגנים את עיניהם ביד אחת במהלך ההזרקה כדי להפחית את תגובת הפחד שלהם. כסו את הכלוב בסדין. שיעזור להרגיע את החיות
    2. עם 4 % מ96. וחמצן לפני הזריקה
  3. . פקח על עומק ההרדמה צבוט בין הבהונות שלהם. כדי לוודא שהחיות ישנות
    1. מיקום הארנבים על גבם. . הם לא צריכים להגיב
    2. עבור חולדות, לצבוט זנבות שלהם ולהבטיח כי שום תגובה לא נצפתה.
  4. החלת משחה על העיניים של המכרסמים כדי למנוע יובש. להוציא את לשונות חולדות כדי למנוע כל סיכוי לבלוע.
  5. . תתחיל בשימור ההרדמה
    1. עבור ארנבים, צנתור (22 גרם מסוכך על קטטר הרביעי עם יציאת הזרקה, לראות את הטבלה של חומרים) וריד האוזן. שמור על הרדמה מאוזנת. השתמש בעצירת שלושה כיוון כדי לאפשר זריקות בו מרובות.
    2. עבור חולדות, הכנס 50 mg/ק"ג הידרוכלוריד ו 0.5 מ"ג/ק"ג medetomidine intraperitoneally הידרוכלוריד. הצג הרדמה עם הבוהן צביטה רעילים במהלך הניתוח. במקרה של תגובה, לנהל הרדמה נוספת.
  6. הקלטת את החיות על הלוח במצב פרקדן ולגלח היטב את מיקום החתך. לחטא את האזור באמצעות ב, באמצעות באמצעות באמצעות.
    1. לארנבים, לחטא את הצוואר, במיוחד סביב שריר השריר.
    2. עבור חולדות, לחטא את האזור משלפוחית השתן כדי transvers המעי הגס.
  7. מנהל חמצן באמצעות מסכה לאורך הניתוח ולשמור על טמפרטורת הגוף עם כרית חימום.

4. הכנת העורק

  1. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, לנתח ביסודיות את הספינה הנבחרת מן הרקמה שמסביב9,10.
    1. עבור חולדות, לזהות את הווריד הזנב (פחות פולשנית, רצוי בשימוש עבור בעלי חיים ששרדו) או לנתח וריד הירך עבור fluorescein הזרקת4,11.
      הערה: לארנבים, אין צורך בניתוח נוסף של כלי קיבול להזרקה בזמן שווריד האוזן משמש כבר להרדמה.
  2. הצב משטח לבן תחת הספינה שנבחרה כדי להגביר את הניגודיות עם הרקמה הסובבת.
  3. למקד את המצלמה רכוב למיקרוסקופ על העורק.

5. פלואור וידאו-אנגיוגרפיה

  1. לכסות את 5 מזרק mL מלא fluorescein נתרן (100 mg/mL, לראות את הטבלה של חומרים) עם רדיד אלומיניום כדי להגן מפני חשיפה של אור. כבו את האורות (ככל האפשר) והזרק fluorescein נתרן באופן מידי. להזריק תחת החושך כדי למנוע הלבנת.
    1. לארנבים, הכנס 0.3 mL/ק ג פלואורואסעין נתרן דרך הזין שלושה כיוון לתוך הווריד האוזן הצנתור.
    2. עבור חולדות, להזריק 0.4 mL/ק"ג fluorescein נתרן לתוך וריד הירך באמצעות קטטר או 25 גרם מחט.
  2. ריקון המחט או קטטר עם 0.5 mL תמיסת מלח כדי להבטיח כי כל הצבע מוזרק.
  3. יאיר את השדה הכירורגי עם הפנס שהשתנה.
  4. . התחל לצלם עם המצלמה המתוקנת זרימת הדם אמורה להיות גלויה כמה שניות לאחר ההזרקה (איור 1).
    הערה: כאן, השתמשנו שיעור מסגרת = 50 מסגרות/s, אורך מוקד = 70 מ"מ, ו-F 3.4.

6. ניתוח מקרוסקופי

  1. לכרות את מתחם העורק הראשי והאב, ולהעריך את הפתסיתיים על ידי פתיחת עורק האב עם מיקרו-מספריים ולהעריך את לומן העורק הראשי ואת הנחיר של אנאריזם (ראה איור 1, 2)9. למדוד את גודל המיפרצות. מפרצת-אב-עורק-מורכב לאחר מכן ניתן לאחסן לניתוח נוסף (למשל, היסטולוגיה).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קצב הלב ולחץ הדם. היו מנוטרים במהלך הניתוח שיעור לב מרושע היה 193/דקות בארנבים ו-196/מינימום בחולדות. משקל הגוף של הארנבים נעו 3.05-4.18 ק ג, והעכברושים שקלו 335-690 g.

הצלחנו לבצע את FVA בשמונה מתוך עשרה ארנבים (איור 1). ארבעה בדיקות מפרצת בשני ארנבים לא נרשמו עם המצלמה עקב קשיים טכניים. אין בעיות טכניות הקשורות FVA בחולדות דווחו. עם זאת, לא ניתן לבצע את FVA בחולדה אחת בשל קשיים העלולים להיכנס לווריד הירך.

מתוך 16 מנות בשמונה ארנבים, ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

FVA היא שיטה מבטיחה מסובכת כדי לבחון את כלי מכרסמים ניתן לבצע עם מכשירים מסחריים וציוד מחוץ למדף. FVA יכול להיות מיושם במהלך כל ניתוח שבו הערכה תוך-אופרטיבית של שלמות כלי נדרש כמו כלי צריך הניתוח המתאים הראשון.

מחברים הזרקת ורידים העדיפו הזרקה העורקים עקב הסיכון הנמוך של אירועים באופן בכיוון כגון זיהום, איסכמיה ותסמונת תא12. הזרקת ורידי מאפשר אמין, מרחב מוגבלת, כתמים מרוכז מאוד, ודורש צבע קטן במינונים13,14. בנוס...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל המחברים מאשרים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה היה נתמך בחלקו על ידי מענק מחקר של Kantonsspital Aarau, שוויץ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>לארנבות
רדיד
גילוח
סרט
שחור מסנן כחולThorlabs MF475-35
צלחת
מצלמהSony NEX-5R
קטטר22G Vasofix בטיחות
Disinfictant
Fluorescein נתרןFluorescein Faure 10%
צלחת
מסנן ירוקThorlabs MF539-43
כרית
משאבת עירויPerfusor Secura
קטמין הידרוכלורידכל מוצרים גנריים
מחט25G
תמיסת
חמצן
יריעות סטריליות מכשירים
כירורגייםמיקרו מלקחיים, מיקרו מספריים, מספריים כירורגיים קהים
מיקרוסקופ כירורגיOPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, גרמניה
מזרק 2 מ"ל, 5 מ"ל, 50 מ"ל
סרט
תלת כיווני לפיד
אור
קסילזיןכל מוצר גנרי
<חזק>לחולדות
רדיד
גילוח
סרט
שחור מסנןכחול Thorlabs MF475-35
צלחת
מצלמהSony NEX-5R
Disinfictant
פלואורסצאין נתרןפלואורסצאין Faure 10%
מסנן ירוקThorlabs MF539-43
כרית
איזופלורן
קטמין הידרוכלורידכל מוצרים גנריים
Medetomidine hydrochlorideכל מוצרים
מחט25G
צלחת
חמצן
תמיסת
יריעות סטריליות מכשירים
כירורגייםמיקרו מלקחיים, מיקרו מספריים, מספריים כירורגיים קהים
מיקרוסקופ כירורגיOPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, מזרק גרמניה
2 מ"ל, 5 מ"ל
סרט
לפיד
אלומיניום מכונת בעלי חייםחמה גוףGlasבריחת שתןצלצולאלומיניום מכונת בעלי חייםחמה לגוףבריחת שתןגנרייםצלצול אור

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kakucs, C., Florian, I. A., Ungureanu, G., Florian, I. S. Fluorescein Angiography in Intracranial Aneurysm Surgery: A Helpful Method to Evaluate the Security of Clipping and Observe Blood Flow. World Neurosurgery. 105, 406-411 (2017).
  2. Ajiboye, N., Chalouhi, N., Starke, R. M., Zanaty, M., Bell, R. Unruptured Cerebral Aneurysms: Evaluation and Management. ScientificWorldJournal. 2015, 954954(2015).
  3. Suzuki, K., et al. Confirmation of blood flow in perforating arteries using fluorescein cerebral angiography during aneurysm surgery. Journal of Neurosurgery. 107 (1), 68-73 (2007).
  4. Gruter, B. E., et al. Fluorescence Video Angiography for Evaluation of Dynamic Perfusion Status in an Aneurysm Preclinical Experimental Setting. Operative Neurosurgery. , Hagerstown. (2019).
  5. Raabe, A., et al. Prospective evaluation of surgical microscope-integrated intraoperative near-infrared indocyanine green videoangiography during aneurysm surgery. Journal of Neurosurgery. 103 (6), 982-989 (2005).
  6. Riva, M., Amin-Hanjani, S., Giussani, C., De Witte, O., Bruneau, M. Indocyanine Green Videoangiography in Aneurysm Surgery: Systematic Review and Meta-Analysis. Neurosurgery. , (2017).
  7. Kuroda, K., et al. Intra-arterial injection fluorescein videoangiography in aneurysm surgery. Neurosurgery. 72, 2 Suppl Operative 141-150 (2013).
  8. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving Bioscience Research Reporting: The ARRIVE Guidelines for Reporting Animal Research. PLOS Biology. 8 (6), 1000412(2010).
  9. Marbacher, S., et al. The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model. Journal of Visualized Experiments. (92), e51071(2014).
  10. Marbacher, S., et al. Complex bilobular, bisaccular, and broad-neck microsurgical aneurysm formation in the rabbit bifurcation model for the study of upcoming endovascular techniques. American Journal of Neuroradiology. 32 (4), 772-777 (2011).
  11. Shurey, S., et al. The rat model in microsurgery education: classical exercises and new horizons. Archives of Plastic Surgery. 41 (3), 201-208 (2014).
  12. Foster, S. D., Lyons, M. S., Runyan, C. M., Otten, E. J. A mimic of soft tissue infection: intra-arterial injection drug use producing hand swelling and digital ischemia. World Journal of Emergency Medicine. 6 (3), 233-236 (2015).
  13. Flower, R. W. Injection technique for indocyanine green and sodium fluorescein dye angiography of the eye. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 12 (12), 881-895 (1973).
  14. Yoshioka, H., et al. Advantage of microscope integrated for both indocyanine green and fluorescein videoangiography on aneurysmal surgery: case report. Neurologia medico-chirurgica (Tokyo). 54 (3), 192-195 (2014).
  15. Ichikawa, T., et al. Development of and Clinical Experience with a Simple Device for Performing Intraoperative Fluorescein Fluorescence Cerebral Angiography: Technical Notes. Neurologia medico-chirurgica. 56 (3), 141-149 (2016).
  16. Alander, J. T., et al. A review of indocyanine green fluorescent imaging in surgery. International Journal of Biomedical Imaging. 2012, 940585(2012).
  17. Lane, B., Bohnstedt, B. N., Cohen-Gadol, A. A. A prospective comparative study of microscope-integrated intraoperative fluorescein and indocyanine videoangiography for clip ligation of complex cerebral aneurysms. Journal of Neurosurgery. 122 (3), 618-626 (2015).
  18. Blair, N. P., Evans, M. A., Lesar, T. S., Zeimer, R. C. Fluorescein and fluorescein glucuronide pharmacokinetics after intravenous injection. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 27 (7), 1107-1114 (1986).
  19. Hillmann, D., et al. In vivo optical imaging of physiological responses to photostimulation in human photoreceptors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (46), 13138-13143 (2016).
  20. Golby, A. J. Image-Guided Neurosurgery. , Elsevier Science. (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Bandpass Filter

מאמרים קשורים