Doliolids, כולל את המינים דולילטה gegenbauri, הם קטנים זואופלנקטון הג ימית של משמעות אקולוגית המצויים על מערכות משנה יצרנית המדף ברחבי העולם. הקושי של התקשות האורגניזמים העדינים האלה מגביל את החקירה שלהם. במחקר זה אנו מתארים גישות טיפוח לאיסוף, גידול ושמירה על הdoliolid דולילטה gegenbauri.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הטיפוח-תרגול של החיל הימי ( uljanin 1884) למחקרים ניסיוניים
במאמר זה
סיכום
תקציר
לגטין זואופלנקקלס משחקים תפקיד מכריע בתוך מערכות אקולוגיות של האוקיינוס. עם זאת, קשה בדרך כלל לחקור את הפיזיולוגיה, הצמיחה, הפוריות והאינטראקציות ההזנה בעיקר עקב אתגרים מתודולוגיים, כולל היכולת להתרבות. הדבר נכון במיוחד לגבי הdoliolid, דולילטה גגנבאורי. ד. gegenbauri בדרך כלל מתרחשת במערכות המדף סובטרופי continental פרודוקטיבי ברחבי העולם, לעתים קרובות בריכוזים פורחים מסוגל לצרוך חלק גדול של הייצור הראשוני היומי. במחקר זה אנו מתארים גישות טיפוח לאיסוף, גידול ואחזקה של ד. gegenbauri לצורך ביצוע מחקרים מבוססי מעבדה. ד. gegenbauri ומינים doliolid אחרים ניתן ללכוד לחיות באמצעות שכאוכלי מאוד נגרר 202 יקרומטר שינוי כילות פלנקטון של הספינה נסחף. תרבויות הן הוקמה באופן אמין ביותר כאשר טמפרטורות המים הן מתחת ל -21 ° c והם התחילו מגונזוסואידים בלתי-מפותחים, התבגרות ואחיות גדולות. תרבויות ניתן לשמור על כלי תרבות מעוגל על גלגל פלנקטון מסתובבת לאט ומתמשכת על דיאטה של אצות תרבותית במי ים טבעיים במשך דורות רבים. בנוסף ליכולת להקים תרביות מעבדה של D. gegenbauri, אנו מדגימים כי מצב האיסוף, ריכוז אצות, טמפרטורה, וחשיפה למי ים ממוזג באופן טבעי כולם קריטיים לתרבות הקמה, צמיחה, הישרדות ורבייה של D. gegenbauri.
מבוא
זואופלנקטון חשבון עבור ביומסה בעלי חיים הגדול ביותר באוקיינוס, הם רכיבי מפתח באתרי מזון ימיים, ולשחק תפקידים חשובים בתוך מחזורי אושן ביוגיאוכימיים1,2. זואופלנקטון, למרות מורכב של מגוון עצום של אורגניזמים, ניתן להבדיל בגסות לשתי קטגוריות: ז'לטין ולא ז'לטין עם מספר ביניים מטקא3,4. לעומת זואופלנקטון שאינם ז'לטין, זואופלנקטון ז'לטין קשים במיוחד ללמידה בשל ההיסטוריה המורכבת שלהם מהחיים5, והרקמות העדינות שלהם ניזוקו בקלות במהלך לכידת וטיפול. מינים זואופלנקטון ז'לטין הם, ולכן, קשה לשמצה התרבות במעבדה ובדרך כלל למדו פחות לעומת מינים שאי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת מתקני מינון לגידול מתקנים
הערה: כל החומרים והציוד הנדרשים מפורטים בטבלת החומרים.
- הכינו 1 M נתרן הידרוקסיד (NaOH), 0.06 M אשלגן פרמנגנט (KMnO4) פתרון. כדי להכין את הפתרון הזה, לפזר 400 g של NaOH ל 10 המים האלה מימי. הוסף 100 g של KMnO4 לפתרון naoh ולערבב היטב.
- הכינו את התמיסה 0.1 M ביסולפיט (נחכ3) על-ידי המסת 100 g של נחסו3 ל -10 מים מיוהים ומערבבים היטב.
התראה: ריאגנטים אלה הם גירויים שעלולים לגרום לבעיות בדרכי הנשימה אם נשאף. מקום באזור מאוורר היטב, כגון ברדס. . הימנע ממגע עם העור לובשים כפפות מגן, ביגוד מגן, הגנת עיניים והגנה על הפנים בעת ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בעקבות ההליכים המתוארים לאיסוף ולעיבוד הdoliolid, d. gegenbauri המתואר באיור 3, ניתן לשמור על תרבות של d. gegenbauri במהלך ההיסטוריה המורכבת שלה חיים (איור 1) ו קיים אותו במשך דורות רבים. למרות שהטיפוח של D. gegenbauri מתואר כאן, הליכים אלה צריכים גם להיות רלוונטיים לטיפוח של זנים doliolid אחרים.
לכידת doliolid בריאים ולא ניזוק דורש יישום של רשתות מיוחדות והליכי גרירה (איור 4). .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הקיבולת של doliolids התרבות הוקמה במהלך העשורים האחרונים ושימש לתמיכה במחקר במספר תחומים. מחקרים ניסיוניים במעבדות שלנו תמכו בפרסום של לפחות 15 מחקרים מדעיים התמקדו האכלה וצמיחה18,26, רבייה18,28, דיאטה6, 29, פיזיולוגיה30, אקולוגיה31, ו מודל אקולוגי27 של doliolids.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה להצהיר
תודות
אנו אסירי תודה לאנשים רבים שתרמו ידע שנצבר לפרויקט זה במהלך השנים כולל G.-A. Paffenhöfer וד. דימוס שפיתחו את הפרוטוקולים האלה במקור מ. קייסטר, ול' למברלי תרמו גם הם באופן משמעותי לפיתוח ההליכים הללו. N.B. לופס-פיגרואה ו-האדרגס-סנטיאגו יצרו את האומדנים של doliolid שפע שניתן בטבלה 1. מחקר זה היה נתמך בחלקו על ידי הקרן הלאומית המדע הלאומי פרסים OCE 082599, 1031263 MEF, פרויקטים שיתופיים OCE 1459293 ו OCE 14595010 כדי MEF ו DMG, הלאומית הלאומי והאטמוספירה המינהל פרס NA16SEC4810007 ל DMG. אנו אסירי תודה לצוות החרוץ והמקצועי של סוואנה. לי אן דלאו הכין את הדמויות, צ'ארלס י. רוברטסון הגהה על כתב היד וג (ג'ימי) ויליאמס ייצרה את גלגל הפלנקטון
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צינורות תרבית אצות (55 מ"ל צינורות תרבית זכוכית חד פעמיים סטריליים) | כל | NA | לתרביות אצות |
| חיטוי | כל | NA | לעיקור ציוד ומי ים לתרביות אצות |
| כוסות (זכוכית 2 ליטר) | כל | NA | למיון תכולת גרירה נטו פלנקטון מדולל |
| דליים (5 ליטר, ~20 ליטר) | כל | NA | לדילול תכולת גרר רשת פלנטון - יש למזג מי ים לפני השימוש הראשון |
| Carboys (20 ליטר) | כל | NA | לאחסון |
| צנצנת תרבות זכוכית Doliolid מי ים (צנצנת זכוכית עם פה צר 1.9 ליטר עם מכסה) | Qorpak | GLC-01882 | מיכל לתרבית |
| צנצנת תרבות זכוכית Doliolid (צנצנת זכוכית עם פה צר 3.8 ליטר עם מכסה) | Qorpak | GLC-01858 | מיכל לתרבית |
| תא סביבתי (תא סביבתי מבוקר טמפרטורה) | כל | NA | כדי להתאים לתחזוקת גלגל פלנקטון ותרבותית |
| מכשיר סינון למסנני 47 מ"מ | כל | NA | לסינון מי ים לתרבויות |
| מסנני מיקרופייבר מזכוכית, 47 מ"מ | Whatman | 1825-047 | לסינון מי ים לתרבויות |
| פיפטת זכוכית (פיפטת זכוכית בורוסיליטית (צינורות זכוכית), OD 10 מ"מ, מזהה 8 מ"מ, עובי דופן 1 מ"מ) | חברת המדע | NC-10894 | חיתוך וקצוות מותאמים אישית מהדקי צינור מלוטשים |
| , נירוסטה, #104 (178 מ"מ) | כל | NA | להחזקת צנצנות תרבית לגלגל הפלנקטון |
| Isochrysis galbana זן CCMP1323 | המרכז הלאומי לאצות ימיות ומיקרוביוטה (NCMA) | זן CCMP1323 | להאכלת תרביות דוליוליד |
| ערכת מדיה L1, 50 ליטר | המרכז הלאומי לאצות ימיות ומיקרוביוטה (NCMA)MKL150L | לגידול אצות | |
| מנורה (מנורת שולחן פלורסנט עם זרוע מתכווננת) | כל | NA | להארת דוליולידים בצנצנות ובכוסות |
| חממה מבוקרת טמפרטורה מוארת | כל | NA | לתרביות אצות |
| מיקרופיפטות וטיפים סטריליים (0-20 ומיקרו; l, 20-200 ומיקרו; l, 200-1000 ומיקרו; l) | כל | NA | לתרביות אצות |
| פלנקטון נטו (202 ומיקרו; 0.5 מ', אורך 5:1) עם טבעת קצה בקלה ו 4 L אקווריום | בקלה Sea-Gear Corporation | 90-50x5-200-4A/BB | לאיסוף דוליולידים חיים (ראה איור 4) |
| גלגל פלנקטון | NA | NA בנוי בהתאמה אישית (ראה איור 2) | |
| ניילון נצמד | כל | NA | לכיסוי החלק הפנימי של המכסה של צנצנות תרבית דוליוליד |
| אשלגן פרמנגנט | פישר סיינטיפיק | P279-500 | מגיב לניקוי צנצנות וכלי זכוכית |
| Rhodomonas sp. זן CCMP740 | המרכז הלאומי לאצות ימיות ומיקרוביוטה (NCMA) | זן CCMP740 | להאכלת תרביות דוליוליד |
| צינורות גומי | NA | NA | להחזקת צנצנות תרבית לגלגל הפלנקטון (ניתן לייצר מצינורות טיגון) |
| נתרן ביסולפיט | פישר סיינטיפיק | S654-500 | מגיב לניקוי צנצנות וכלי זכוכית |
| נתרן הידרוקסיד | פישר Scientific | BP359-212 | מגיב לניקוי צנצנות וכלי זכוכית |
| פיפטות סרולוגיות סטריליות (1 מ"ל, 5 מ"ל, 10 מ"ל, 25 מ"ל) | כל | NA | לתרביות אצות |
| Thalassiosira weissflogii זן CCMP1051 | המרכז הלאומי לאצות ימיות ומיקרוביוטה (NCMA) | זן CCMP1051 | להאכלת תרביות דוליולידים |
| צלוחיות תרבית רקמות (250 מ"ל) | כל | NA | לתרביות אצות |
מקורות
- Banse, K. Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production. Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).
- Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northe....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
