במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול להפקת קורטיזול מן הסנפיר ואת עצם הלסת של מינים חדקניים. פין והלסת רמות קורטיזול נבדקו נוסף על ידי השוואת שני ממיסים כביסה ואחריו אליסה assays. מחקר זה מנווט את הכדאיות של עצם הלסת קורטיזול כמו אינדיקטור מתח הרומן.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מיצוי הקורטיזול של החדקן פין ואת עצם הלסת מטריצות
במאמר זה
סיכום
תקציר
מטרות מחקר זה היו לפתח טכניקה להפקת קורטיזול מתוך סנפירים חדקניים באמצעות שני ממיסים כביסה (מים איזופנול) ולכמת את כל ההבדלים רמות קורטיזול סנפיר בין שלושה המינים העיקריים חדקניים. סנפירים נקצרו מ 19 sturgeons הוקרב כולל שבעה בלוגה (huso huso), שבעה סיבירי (acipenser baerii), ו חמש סרומגה (א. stellatus). הsturgeons הועלו בחוות איראניות במשך שנתיים (2017-2018), וניתוח הוצאת קורטיזול נערך בדרום קוריאה (ינואר-פברואר 2019). ג'ווונז מ 5 ה. huso שימשו גם להפקת קורטיזול. הנתונים נותחו באמצעות הליך המודל הליניארי (GLM) הכללי בסביבת SAS. מקדמי הווריאציה הפנים והבין-שונות של וריאציה היו 14.15 ו-7.70, בהתאמה. בקצרה, שיטת החילוץ קורטיזול מעורב כביסה את הדגימות (300 ± 10 מ"ג) עם 3 מ ל של ממס (מים באולטרטהורים ו איזופנול) פעמיים, סיבוב ב 80 rpm עבור 2.5 דקות, ייבוש האוויר הדגימות שנשטפו בטמפרטורת החדר (22-28 ° c) במשך 7 ימים, ייבוש נוסף דגימות באמצעות מקצף חרוז ב 50 Hz עבור 32 דקות ושחיקה אותם אבקה, החלת 1.5 mL מתנול לאבקה מיובש (75 ± 5 מ"ג), וסיבוב איטי (40 rpm) עבור 18 h בטמפרטורת החדר עם ערבוב רציפה. בעקבות החילוץ, דגימות היו centrifuged (9,500 x g עבור 10 דקות), ו-1 mL supernatant הועבר צינור מיקרוצנטריפוגה חדש (1.5 mL), הדגירה ב 38 ° צ' כדי להתאדות את מתנול, וניתח באמצעות האנזים מקושר אנזימים מחובר בדיקות (אליסה) . הבדלים לא נצפו ברמות הקורטיזול סנפיר בין מינים או בתוך סנפיר והלסת רמות קורטיזול בין שטיפת ממיסים. התוצאות של מחקר זה להפגין כי מטריצה הלסת החדקן הוא מחוון מתח אלטרנטיבי מבטיח מטריצות מוצק.
מבוא
קורטיזול הוא מחוון אמין של מתח בעלי חיים. מיצוי הקורטיזול מספק מסגרת תקפה לחוקרים לניטור רמות הלחץ ודפוסים כלליים של התוקפים. לדוגמה, מחקרים קודמים ניהלו אימות מתודולוגי של מדידות קורטיזול שיער באמצעות שיטות שונות בבני אדם1,2, קופים3,4, בקר5, כבשים6, ו דג זהב7,8. במינים של דגים, מדידות קורטיזול בתוך מטריצות כגון קשקשים, ריר העור, צואה, ו9 דם הוכחו לספק מידע על בריאות הדגים. כאשר דגימת דם היא בעייתית או קשקשים חסרים, מטריצות....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
ההליכים הניסיוניים והשיטות הבאות אושרו על ידי הרשות לרווחת בעלי חיים והאתיקה של האוניברסיטה הלאומית של קנגוון, צ'אנצ'צ, הרפובליקה של קוריאה.
1. אוסף פין
- ללכוד את החדקן בעדינות באמצעות רשת כדי למזער את הפציעה והלחץ.
- שטפו בזהירות את הדג במים מתוקים ולאחר מכן נגבו את משטח הגוף עם מגבת ספיגה לפני המתת החסד.
- הכה את ראש הדג בעזרת פטיש פלסטי שהדג המום או מאבד את ההכרה. . תסיר את הראש בעזרת סכין
- מדוד את משקל הגוף (גר') ואורך (ס מ).
- לאחר המתת חסד, לאסוף דגימות סנפיר ידי חיתוך קרוב ככל הגוף ככל האפשר באמצעות מספריים כירורגי מעוקר.
הערה: מגבות ספיגה בודדות שאינן ממוחזרות חייבות לשמש עבור כל דג. סטטי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שהוצגו הציג את הטכניקה מיצוי הקורטיזול שפותחה ואושרה במחקר זה באמצעות שלושה מינים חדקניים. רמות הקורטיזול הושגו באמצעות מים באולטרטהור ו איזופנול כמו ממיסים הכביסה הושוו (איור 2). הקורטיזול משנת H. huso ג'ווונז נבדק כדי לקבוע אם הלסת החדקניים יכול לשמש כמטריצה חלופית סנפירים. ההשפעות של שטיפת ממיסים, מינים חדקניים, האינטראקציה שלהם מוצגים בטבלה 1. רמות הקורטיזול נטו להיות גבוה יותר בדגימות סנפיר שטף עם איזופנול מאשר אלה שטף עם מים (p.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
חדקניים נקרא לפעמים "מאובן חי" כי זה הציג עיבודים מעטים במהלך אלפי שנים האחרונות. הסוג החדקן מכיל 27 מינים המייצרים קוויאר; עם זאת, שלושה מינים (בלוגה, baerii, ו סברוגה) לייצר את רוב האספקה הגלובלית של קוויאר. החדקניים חשופים לדיג יתר ולהפרעות בסביבתם הטבעית ולכן הם בסכנת הכחדה אנושות יותר מכל קבוצה אחרת של מינים. החדקן שייך לקבוצה העתיקה ביותר של החוליות החיים, אשר קיים במשך 150,000,000 שנים. המינים מבוגרים וגדלים לאט; כמה (למשל, H. huso) יכול לחיות במשך 100 שנים ועולה 2,000 ק ג במשקל. החדקני.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין קונפליקטים של עניין לגלות.
תודות
עבודה זו נערכה בתמיכת תוכנית המחקר השיתופי למדעי החקלאות & פיתוח טכנולוגיה (כותרת פרוייקט: שינוי פרודוקטיביות במשק החי עם שינויי האקלים, Project No. PJ012771), המינהל הכפרי לפיתוח, הרפובליקה של קוריאה. כמו כן, מחקר זה היה נתמך על ידי מענק (לא. PJ01344604) מצוות התזונה של בעלי חיים & פיזיולוגיה, המכון הלאומי למדעי החי, RDA, סאול, הרפובליקה של קוריאה. המחברים מכירים בהכרת התנועה הפרסית המנכ ל מוחמד חסן סלמנדה וצוותו, שסיפק דגים משלושת המינים המנוקניים שנבחנו במחקר זה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| סילוק כפפות כירורגיות לטקס | Ansell | 63754090 | |
| Platform סולם אלקטרוני במשקל 100 ק"ג | Baskoolnikoo | 101 EM | |
| פיפטה סרולוגית לאספקת עד 24 מ"ל | Becton Dickinson Falcon | 35-7550 | |
| קורא צלחות מיקרו עם מסנני ייחוס של 450 ננומטר ו-490 עד 492 ננומטר | BioTek | 8041000 | |
| BrandTech | 703459 | ||
| שקית ניילון לאחסון רוכסן | Cleanwrap | 30 ס"מ x100 מ' | |
| איזופרופיל אלכוהול | Daejung כימיקלים & מתכות | 5035-4400 | |
| מתיל אלכוהול | Daejung כימיקלים & מתכות | 5558-4100 | |
| מסובב צינור- MX-RL-Pro | DLAB Scientific | 824-222217777 | |
| פיפטה מדויקת לספק 1.5 ו-10 מ"ל | Eppendorf Research Plus | M21518D | |
| פיפטה מדויקת לאספקת 15 ו-25 μ L | Eppendorf Research Plus | R25623C | |
| נייר שקילה (107 x 210 מ"מ) | Fisherbrand | 09-898-12B | |
| מקצף חרוזים, 50/60 הרץ 2A | GeneReach Biotechnology Corp | tp0088 | |
| מסובב צלחת עם מסלול המסוגל 500 סל"ד | Hangzhou Miu Instrument | MU-E30-1044 | |
| צינורות פוליפרופילן חד פעמיים להכיל לפחות 24 מ"ל | יונדאי מיקרו | H20050 | |
| אדים קולט אדים | קוואנג דונג תעשייתי | KD 901-22128175 | |
| מיקרו-צנטריפוגה המסוגלת 1500 x גרם | Labo Gene | 9.900.900.729 | |
| מערבל מערבולת מיני | LMS | VTX-3000L | |
| גליל רדיד אלומיניום לוטה | לוטה אלומיניום | B0722X5FK5 | |
| משקל דיגיטלי | מטלר טולדו | ME204 | |
| מים טהורים | במיוחד MDM | MDM-0110 | |
| קצות פיפטה | נפטון מדעי | REF 2100.N | |
| בריכת רשת דייגים גדולה | H2O | Hoz135 | |
| ערכת קורטיזול רוק | Salimetrics | 1-3002-4 | |
| מלקחיים לחיתוך עצם | Sankyo | 26-188A | |
| פיפטה רב-ערוצית מדויקת לאספקת 50 μ L ו-200 μ L | VITLAB | 18A68756 | |
| מגבת | יוהאן קימברלי | 1707921546 | |
| נייר טישו (107 ופעמים; 210) | יוהאן קימברלי | 41117 |
מקורות
- Meyer, J. S., Novak, M. A. Hair cortisol: a novel biomarker of hypothalamic-pituitary- adrenocortical activity. Endocrinology. 153, 4120-4127 (2012).
- Ghassemi Nejad, J., et al. A cortisol study: facial hair and nails. Journal of Steroids Hormonal S....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
