הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אימונוגלובולין G N-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד

8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60104

⸱

18 בינואר 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Beijing Key Laboratory of Clinical Epidemiology, School of Public Health, Capital Medical University, 2School of Public Health, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Sciences, 3School of Medical and Health Sciences, Edith Cowan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

אימונוגלובולין G (IgG) N-גליקן מאופיין באמצעות כרומטוגרפיה של אינטראקציה הידרופילית. בנוסף, המבנה של IgG N-גליקן מופרד בבירור. המוצג כאן הוא מבוא לשיטה ניסיונית זו, כך שניתן להשתמש בה באופן נרחב בהגדרות מחקר.

תקציר

גלילקומיקס הוא התמחות משנה חדשה ב-omics מחקר מערכת המציעה פוטנציאל משמעותי בגילוי בסמנים הדור הבא עבור הרגישות למחלות, גילוי התרופה היעד, ואת התרופה דיוק. אלטרנטיבי IgG N-גליקנים דווחו במספר מחלות כרוניות נפוצות, הציע פוטנציאל גדול ביישומים קליניים (כלומר, ביוארקרס לאבחון וחיזוי של מחלות). IgG N-גליקנים מאופיינים באופן נרחב באמצעות שיטה של אינטראקציה הידרופיפילית (hilic) כרומטוגרפית נוזלית במיוחד. היחידה היא טכנולוגיית גילוי יציבה עם שגיאות מידע ודיוק כמותי קרוב יחסית. בנוסף, המבנה של IgG N-גליקן מופרד בבירור, וניתן לאפיין את ההלחנה והשפע היחסי בפלזמה.

מבוא

N-הגליקוזילציה של חלבונים אנושיים הוא שינוי שכיח וחיוני לאחר השינוי1 ועשוי לסייע לחזות את התרחשות ופיתוח של מחלות באופן יחסי יחסית. בשל המורכבות של המבנה שלה, הוא צפוי כי יש יותר מ 5,000 מבנים גליקן, מתן פוטנציאל גדול כמו ביואריטים אבחון חזוי עבור מחלות2. N-גליקנים המחוברים למערכת החיסונית (igg) הוכחו כחיוניים לתפקוד igg, ו-Igg N-הגליסילציה משתתפת באיזון בין המערכות הפרו-דלקתיות3. IgG N-גליסיציה דיפרנציאלית מעורבת בפיתוח מחלות והתקדמות, המייצגים הן מנגנון נטייה ופונקציונלי המעורבים בפתולוגיה של מחלות. התפקיד הדלקתי של IgG N-הגליסיציה נקשר עם הזדקנות, מחלות דלקתיות, מחלות אוטואימוניות, סרטן4.

עם פיתוח של טכנולוגיית האיתור, השיטות הבאות נמצאות בשימוש נרחב ביותר גליקומיס תפוקה גבוהה: הידרופיפילית אינטראקציה כרומטוגרפיה (HILIC) כרומטוגרפיה נוזלית מאוד ביצועים עם גילוי של קרינה פלואורסצנטית (הייטק-FLR), אלקטרופורזה במגה-קרן עם ג'ל לייזר לגילוי קרינה בלייזר (xCGE-אבל), מטריקס בסיוע לייזר בעזרת מטריצות של זמן הטיסה המסה ספקטרומטריה (מאלדי-תוף-MS), וכרומטוגרפיה נוזלית ממסת המסה (LC-ESI-MS) . שיטות אלה התגברו על חסרונות קודמים של שטף נמוך, תוצאות לא יציבות, ורגישות ירודה ספציפיות5,6.

האגודה משמשת רבות לחקר הקשר בין igg N-הגליקוציה ומחלות מסוימות (כלומר, הזדקנות7, השמנה8, דיסליפידמיה9, סוכרת type10, יתר לחץ דם11, איסכמי שבץ12, פרקינסון מחלה13). בהשוואה לשלושת השיטות הנ ל, היתרונות הבאים הם5,14. ראשית, הוא מספק שיטת ניתוח כמותי יחסי, וניתוח הנתונים הכרוך בנרמול השטח הכולל משפר את יכולת ההשוואה של כל דוגמה. שנית, עלות הציוד והמומחיות הנדרשת נמוכה יחסית, מה שמקל על היישום וטרנספורמציה של ביוגליציה ליישומים קליניים. המוצג כאן הוא מבוא ל-, כדי שניתן יהיה להשתמש בו באופן נרחב יותר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הנושאים הכלולים בפרוטוקול אושרו על ידי ועדת האתיקה של האוניברסיטה הרפואית קפיטל, בייג, סין12. הסכמה מושכלת בכתב הושגה מכל נושא בתחילת המחקר.

1. בידוד IgG

  1. הכן את הכימיקלים כולל מאגר מחייב (מתמיסת מלח מאוחסן באגירה, PBS): 1x pbs (ph = 7.4), לנטרל מאגר: 10x pbs (ph = 6.6-6.8), הללויה: 0.1 m החומצה פורמית (ph = 2.5), נטרול פתרון להתחמק: 1 M אמוניום ביקרבונט, מאגר מאוחסן: 20% אתנול + 20 מ"מ טריס + 0.1 M הנאל (pH = 7.4), ניקוי פתרון עבור חלבון G: 0.1 M NaOH + 30% propan-2-ol.
    הערה: רמת ה-pH היא קריטית בפרוטוקול זה. הנשירה של IgG דורש pH נמוך מאוד, ויש סיכון של אובדן של חומצות סיליות בשל הידרוליזה חומצה. לכן, הימנעות מתרחשת בתוך שניות, ו-pH שוחזר במהירות לנייטרליות, שמירה על שלמות IgG ו חומצות הסילית.
  2. להכין את הדגימות: להפשיר את מדגם פלזמה קפוא ואז צנטריפוגה ב 80 x g עבור 10 דקות, ולהשאיר את הצלחת g מונוליתית חלבון וכימיקלים הנ ל 30 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
  3. העבר מדגם μL 100 (שניתן להשתמש בו כדי לזהות את 2x כדי למנוע את הכשל הראשון) לתוך צלחת אוסף של 2 מ"ל (כאן, סך של שישה דוגמאות סטנדרטיות, דגימת בקרה אחת [מים אולטרה טהורים], ו 89 דגימות פלזמה תוכננו עבור 96 היטב לוחיות והוקצו באופן אקראי לצלחת).
  4. לדלל את הדגימות עם 1x PBS ידי 1:7 (v/v).
  5. נקה 0.45 יקרומטר הידרופילי פוליפרופילן (ghp) מסנן צלחת עם 200 μl של מים אולטרה טהור (לחזור על 2x).
  6. להעביר את הדגימות מדולל לתוך לוחית הסינון ולסנן את הדגימות לתוך צלחת האוסף באמצעות משאבת ואקום (בקרת לחץ ואקום ב-266.6-399.9 Pa).
  7. הכנת לוחות מונוליטיים של חלבון G
    1. מחק את מאגר האחסון.
    2. נקו את לוחות מונוליטיים עם 2 מ ל של מים אולטרה טהורים, 2 מ ל של 1x pbs, 1 מ ל של 0.1 M החומצה פורמית, 2 מ ל של 10x pbs, 2 מ ל של 1x pbs (ברציפות), ולהסיר נוזל זורם באמצעות משאבת ואקום.
  8. העבר את הדגימות מסוננים כדי חלבון G מונוליטי לוחית עבור כריכת IgG וניקוי, ואז לנקות את לוחות מונוליטיים עם 2 מ ל של 1x PBS (לחזור על ניקוי 2x).
  9. Elute igg עם 1 מ ל של 0.1 החומצה פורמית ולסנן את הדגימות לתוך צלחת האוסף על ידי משאבת ואקום, לאחר מכן להוסיף 170 μl של 1 M אמוניום ביקרבונט לתוך צלחת האוסף.
  10. זיהוי הריכוז IgG באמצעות ספקטרוסקופיה ספיגת (אורך הגל האופטימלי = 280 nm).
    1. פתח את התוכנה ובחר במצב חלבון-CY3.
    2. לצייר 2 μL של מים אולטרה טהורים ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על ריק בתוכנה כדי לנקות את המסך (לחזור על 1x).
    3. לצייר 2 μL של מים אולטרה טהורים ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על לדוגמה בתוכנה כדי לזהות את המים אולטרה טהורים.
    4. לצייר 2 μL של המדגם IgG ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על לדוגמה בתוכנה כדי לזהות את המדגם.
    5. צייר 2 μL של מים אולטרה טהורים ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על ריק בתוכנה כדי לנקות את המסך.
    6. סגור את התוכנה.
      הערה: הנוסחה לחישוב ריכוז IgG היא כדלקמן:

      CIgg = מקדם הכחדה x (13.7) x 1,000 μg/mL
  11. לשים את IgG שחולצו להתייבש בתנור ב 60 ° צ' ולשמר את IgG המחולצים (300 μL שחולצו IgG עבור 4 h).
    1. הסר 300 μL של חילוץ IgG אם הריכוז גדול מ-1,000 μg/mL.
    2. הסר 350 μL של חילוץ IgG אם הריכוז הוא בין 500-1000 μg/mL.
    3. הסר 400 μL של חילוץ IgG אם הריכוז הוא בין 200-500 μg/mL.
    4. הסר 600 μL של חילוץ IgG אם הריכוז קטן מ 200 μg/mL.
      הערה: ריכוז IgG צריך להיות רצוי > 200 μg/mL לאיתור הבאים. הסכום הממוצע של IgG צריך להיות רצוי > 1200 μg, אשר ניתן נבדק 2x במקרה הבדיקה הראשונה נכשלת.
  12. ניקוי לוחית מונוליתית בחלבון G לשימוש חוזר
    1. שטוף את הצלחת עם 2 מ ל של מים אולטרה טהור, 1 מ ל 0.1 M NaOH (להסרת החלבונים של זירז), 4 מ ל של מים אולטרה טהור, ו 4 מ ל של 1x PBS (ברציפות), ואז להסיר נוזל זורם באמצעות משאבת ואקום.
    2. לשטוף את הצלחת עם 2 מ ל של מים אולטרה טהור, 2 מ ל 30% propan-2-ol (להסרת חלבונים הידרופובי מאוגד), 2 מ ל של מים אולטרה טהורים, ו 4 מ ל של 1x PBS (ברציפות), ואז להסיר נוזל זורם באמצעות משאבת ואקום.
    3. לשטוף את הצלחת עם 1 מ ל של מאגר (20% אתנול + 20 מ"מ טריס + 0.1 M הנאל) ולהוסיף 1 מ ל של מאגר (20% אתנול + 20 מ"מ טריס + 0.1 M הנאל) לצלחת, ואז לעזוב את הצלחת ב 4 ° c.

2. גליקן לשחרר

  1. הכן את IgG יבשים ולאחסן את הכימיקלים כולל 1.33% SDS, 4% Igepal (החנות הרחק מן האור), ו 5x PBS ב RT.
  2. הכנת האנזים PNGase F על ידי דילול 250 U אנזים עם 250 μL של מים אולטרה טהורים.
  3. דנטורציה של IgG
    1. הוסף 30 μL של 1.33% SDS ולערבב על ידי vortexing, להעביר את המדגם לתוך 65 תנור ° c עבור 10 דקות, ולאחר מכן להסיר אותו מהתנור ולתת לנוח 15 דקות.
    2. הוסף 10 μL של 4% Igepal ומניחים אותו על האינקובטור רועד עבור 5 דקות.
  4. הסרה ושחרור של גליקנים
    1. הוסף 20 μL של 5x PBS ו 30-35 μL של 0.1 מול/L NaOH כדי לווסת pH של 8.0, ולערבב על ידי vortexing. הוסף 4 μL של האנזים של PNGase F ומערבבים על ידי vortexing. לאחר מכן, מודטה עבור 18-20 h באמבט מים 37 ° c.
    2. מכניסים את הגליקנים המשוחררים לייבוש בתנור ב-60 ° c עבור 2.5-3.0 h.
    3. שמרו את הגליקנים המשוחררים ב-80 ° c עד למדידה נוספת.
      הערה: שלב זה הוא קריטי. המפתח כדי גליקן לשחרר הוא שיפור הפעילות של האנזים PNGase F כדי למקסם את היעילות שלה.

3. גליקן מתייג ומאפשר טיהור

  1. הכן את 2-האמינאמיד (2-AB) תיוג מגיב עם 0.70 מ"ג של 2-AB, 10.50 μL של חומצה אצטית, 6 מ ג של נתרן cyanoboroהידריד (NaBH3CN), ו 24.50 μl של diמתיל סולפוקסיד (dmso) (נפח כולל = 35 μl). לאחר מכן, להוסיף חומצה אצטית, 2-AB, ו NaBH3CN לתוך dmso בסדר.
  2. לתייג את הגליקנים באמצעות 35 μL של 2-AB תיוג מגיב, להעביר את הגליקנים המסומנים ל-מתנד עבור 5 דקות, העברה לתנור עבור 3 h ב 65 ° c, לאחר מכן העברה RT עבור 30 דקות.
    הערה: יש לבצע את השלבים הניתנים לתיוג כולו תוך הגנה מפני אור.
  3. לטיפול pretreat 0.2 יקרומטר מסנן לוחית עם 200 μl של 70% אתנול, 200 μl של מים אולטרה טהורים, ו-200 μl של 96% acetonitrile (4 ° c), ולאחר מכן להסיר פסולת באמצעות משאבת ואקום.
  4. טיהור של 2-AB מתויג גליקן
    1. הוסף 700 μL של 100% aceton, לתוך 2-AB המסומן גליקן והעבר לאינקובטור רועד עבור 5 דקות.
    2. צנטריפוגה ב 134 x g עבור 5 דקות (4 ° c).
    3. העבר את המדגם לצלחת מסנן 0.2 יקרומטר ghp עבור 2 דקות ולהסיר את פילטרט (נוזל זורם) באמצעות משאבת ואקום.
  5. לשטוף 2-AB התווית גליקן עם 200 μl של 96% acetonitrile (4 ° c) ולהסיר את פילטרט (נוזל זורם) באמצעות משאבת ואקום 5x-6x.
  6. לאליוט 2-AB התווית גליקן עם 100 μL של מים אולטרה טהורים 3x.
  7. להעביר את הגליל 2-AB המסומן לתוך תנור להתייבש ב 60 ° c עבור 3.5 h.
  8. שמרו את ה- N-גליפחיות המסומנות ב-80 ° c עד למדידה נוספת.

4. הידרופילי-כרומטוגרפיה וניתוח של גליקנים

  1. מיזוג מכשירי הכנת שלבים ניידים
    1. הכנת שלבים ניידים כולל ממס A: 100 mM אמוניום (pH = 4.4), ממס B: 100% acetonitrile, ממס C: 90% אולטרה טהור מים (10% מתנול), ומס D: 50% מתנול (אולטרה טהור מים).
    2. פתח את התוכנה כדי לשלוט בשלבים הניידים.
    3. לשטוף את הכלים של ה-, הזרמת מכשירים בקצב הזרימה של 0.2 mL/min (50% מממס B ו50%) איזון עבור 30 דקות, ולאחר מכן בקצב זרימה של 0.2 mL/min (25% ממס A ו-75% מומס B) איזון עבור 20 דקות, אז קצב הזרימה של 0.4 mL/min איזון.
  2. מפזר את התווית N-גליקנים עם 25 μl של תערובת של 100% acetonitrile ומים אולטרה טהורים ביחס 2:1 (v/v). לאחר מכן, צנטריפוגה ב 134 × g עבור 5 דקות (4 ° c) וטען 10 μl של N-גליקות מתויג לתוך כלי המכשירים.
  3. הפרד את התוויות N-גליקות בקצב הזרימה של 0.4 mL/min עם מעבר הדרגתי ליניארי של 75% עד 62% acetonitrile עבור 25 דקות. לאחר מכן, בצע ניתוח אנליטי על-ידי סולם כיול תוספי/העמודה גליקואפיד ב-60 ° צ' (כאן, שמרו דגימות ב -4 ° צ' לפני ההזרקה).
  4. לזהות N-גליניתן זריחה ב עירור ו גל פליטה אורכי של 330 ננומטר ו 420 nm, בהתאמה.
  5. שילוב הגליקנים המבוססים על מיקום שיא וזמן שמירה.
  6. לחשב את הערך היחסי של כל גליקן שיא (GP)/כל גליקן פיקס (באחוזים,%) כדלקמן: GP1: GP1/GPs * 100, GP2: GP2/GPs * 100, GP3: GP3/GPs * 100, וכו '.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כפי שמוצג באיור 1, מנתחים Igg N-גליקנים לתוך 24 הראשונים igg גליקן הפסגות (GPs) מבוסס על מיקום שיא וזמן השמירה. מבני N-גליקן זמינים דרך זיהוי ספקטרומטר המסה לפי מחקר קודם (שולחן 1)15. כדי להבטיח כי התוצאות היו דומות, החלה נורמליזציה בשטח כולל, שבה כמות הגליקנים בכל שיא ביטאו כאחוז מהשטח המשולב הכולל.

כדי להעריך את החזרה והיציבות של השיטה, הד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הוא משמש כשיטה לניתוח יחסי כמותי5,15. התוצאות מצביעות על כך שהוא טכנולוגיית גילוי יציבה עם השגות ודיוק כמותי יחסית. כמות הגליקנים בכל שיא מתבטאת כאחוז של השטח המשולב הכולל באמצעות ה-, המהווה את הערך היחסי. הקוונפיקציה היחסית משפרת את יכולת ההשוואה של דגימות הבדיקה. בנוסף, 96 באיכות חלבון G לוחיות משמשות כדי לטהר IgG עם 96 דגימות בבת אחת עבור זיהוי תפוקה גבוהה. היכולת של חלבון G לאגד igg היא גדולה מזו של חלבון A, כפי שמתואר במחקרים קודמים15...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מן הלאומי המדע הטבעי הקרן של סין (81673247 & 81872682) ו אוסטרליה-סין מענק שיתופי (NH & MRC-APP1112767-NSFC 81561128020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2-aminobenzamide, 2-ABSigma, סין
96-באר איסוף צלחתAXYGEN
96-באר צלחת סינוןPol0.45 אום GHP
96-באר צלחת מונוליטיתBIA הפרדות
96-באר צלחתרוטור Eppendorf Co., Ltd, גרמניהT_1087461900
חומצה אצטיתסיגמאסין
AcetonitrileHuihai Keyi Technology Co., Ltd, סין
אמוניום ביקרבונטShenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין
אמוניום פורמטבייג'ינג Minruida Technology Co., Ltd.
חממת טלטול מתמדת / נדנדהZhicheng מכשיר אנליטי ייצור ושות', בע"מ, סיןZWY-10313
Dextran כיול סולם / גליקופפטיד עמודוואטס טכנולוגיה ושות', בע"מ, סיןBEH עמוד
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)סיגמא, סין
דיסודיום פוספטShenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין
תנורים חשמלייםמכשירי בודק ושות', בע"מ202-2AB
העצמה 3.0ווטרס טכנולוגיה ושות', בע"מ, אמריקה
אתנולHuihai Keyi טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין
חומצה פורמיתסיגמה, סין
GlycoProfile 2-AB ערכת תיוגסיגמא, סין
HClJunrui Biotechnology Co., Ltd, סין
צנטריפוגה במהירות גבוההEppendorf Co., Ltd, גרמניה5430
IgepalSigma, סין
צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכהEppendorf Co., Ltd, גרמניה
מקרר בטמפרטורה נמוכהצ'ינגדאו Haier ושות', בע"מ
סעפת 96-באר צלחתטכנולוגיית וואטס ושות', בע"מ, סין186001831
מתנולHuihai Keyi טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין
Milli-Q מד מים טהוריםMillipore ושות', בע"מ, אמריקהיתרון A10
NaOHShenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין
בודק PHSartorius ושות', בע"מ, גרמניהPB-10
פוספט חוצץ מלח, PBSShenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין
PipetteEppendorf Co., Ltd, גרמניה4672100, 0.5-10μ l & 10-100μ l & 20-200μ l & 1000μ l
PNGase F אנזיםסיגמא, סין
אשלגן דימימן פוספטShenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין
פרופן-2-olHuihai Keyi טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין
SDSסיגמא, סין
נתרן כלורידShenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין
נתרן ציאנובורוהידריד (NaBH3CN)סיגמא, סין
ספקטרופוטומטרשנחאי Yuanxi מכשיר ושות', בע"מB-500
העברת אקדח נוזליSmer Fell מדע וטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין4672100
TrisAmresco, אמריקה
מקרר בטמפרטורה נמוכה במיוחדThermo Co., Ltd, אמריקהMLT-1386-3-V; MDF-382E
כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה ביצועיםוואטס טכנולוגיה ושות', בע"מ, סיןAcquity MLtraPerformance LC
משאבת ואקוםוואטס טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין725000604
מכונת נידוף / מייבשEppendorf ושות', בע"מ, גרמניהT_1087461900
מערבולתצ'אנגג'ואו Enpei מכשיר ושות', בע"מ, סיןNP-30S
מים-אמבטייתבודק מכשירים ושות', בע"מDK-98-IIA
איזון שקילהשנחאי Jingke Scientific Instrument Co., Ltd.MP200B
,

מקורות

  1. Kolarich, D., Lepenies, B., Seeberger, P. H. Glycomics, glycoproteomics and the immune system. Current Opinion in Chemical Biology. 16, 214(2012).
  2. Cummings, R., Pierce, J. M. The Challenge and Promise of Glycomics. Chemistry Biology. 21 (1), (2014).
  3. Shade, K. T. C., Anthony, R. M. Antibody Glycosylation and Inflammation. Antibodies. 2, 392(2013).
  4. Gudelj, I., Lauc, G., Pezer, M. Immunoglobulin G glycosylation in aging and diseases. Cellular Immunology. 333, 65(2018).
  5. Huffman, J. E., et al. Comparative performance of four methods for high-throughput glycosylation analysis of immunoglobulin G in genetic and epidemiological research. Molecular Cellular Proteomics. 13, 1598(2014).
  6. Stockmann, H., Adamczyk, B., Hayes, J., Rudd, P. M. Automated, high-throughput IgG-antibody glycoprofiling platform. Analytical Chemistry. 85, 8841(2013).
  7. Kristic, J., et al. Glycans are a novel biomarker of chronological and biological ages. Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences Medical Sciences. 69, 779(2014).
  8. Nikolac, P. M., et al. The association between galactosylation of immunoglobulin G and body mass index. Progress in Neuropsychopharmacology Biological Psychiatry. 48, 20(2014).
  9. Liu, D., et al. The changes of immunoglobulin G N-glycosylation in blood lipids and dyslipidaemia. Journal of Translational Medicine. 16, 235(2018).
  10. Lemmers, R., et al. IgG glycan patterns are associated with type 2 diabetes in independent European populations. Biochimica Biophysica Acta General Subjects. 1861, 2240(2017).
  11. Wang, Y., et al. The Association Between Glycosylation of Immunoglobulin G and Hypertension: A Multiple Ethnic Cross-Sectional Study. Medicine (Baltimore). 95, e3379(2016).
  12. Liu, D., et al. Ischemic stroke is associated with the pro-inflammatory potential of N-glycosylated immunoglobulin G. Journal of Neuroinflammation. 15, 123(2018).
  13. Russell, A. C., et al. The N-glycosylation of immunoglobulin G as a novel biomarker of Parkinson's disease. GLYCOBIOLOGY. 27, 501(2017).
  14. Bones, J., Mittermayr, S., O'Donoghue, N., Guttman, A., Rudd, P. M. Ultra performance liquid chromatographic profiling of serum N-glycans for fast and efficient identification of cancer associated alterations in glycosylation. Analytical Chemistry. 82, 10208(2010).
  15. Pucic, M., et al. High throughput isolation and glycosylation analysis of IgG-variability and heritability of the IgG glycome in three isolated human populations. Molecular Cellular Proteomics. 10, M111(2011).
  16. Berruex, L. G., Freitag, R., Tennikova, T. B. Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24, 95(2000).
  17. Ren, S., et al. Distribution of IgG galactosylation as a promising biomarker for cancer screening in multiple cancer types. Cell Research. 26, 963(2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

N IgGProtein GEndoglycosidase FTwo AminobenzimideUPLC
אימונוגלובולין G N-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.