השיטה מתארת דלקת-רגישות ארוי-איסכמי ופגיעה המוח hyperoxic ב P17 חמוס למודל האינטראקציה המורכבת בין דלקת ממושכת ופגיעה המוח חמצוני מנוסה במספר תינוקות טרום לטווח מאוחר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל של החמוס של דלקת-מארוי מאוחר לטווח קדם-הסכמי פגיעה במוח
במאמר זה
סיכום
תקציר
יש צורך מתמשך מודלים רלוונטיים קלינית של זיהום היפואטאטאל, hypoxia-איסכמיה (HI) שבו לבדוק התערבויות טיפוליות לתינוקות עם הרצף הנוירולוגי של טרום בגרות. חמוסים הם מועמדים אידיאליים למידול המוח האנושי הטרום-לטווח, כפי שהם נולדים lissencephalic ולפתח מוחות מוחיים באופן מוחי. בלידה, התפתחות המוח החמוס דומה לעובר האנושי של 13 שבועות, עם postnatal יום (P) 17 ערכות נחשב להיות שווה ערך לתינוק ב 32-36 שבועות הריון. אנו מתארים מודל פציעה ב P17 חמוס, שם הממשל ליפופוליל מלווה באיסכמיה מוחית דו צדדית, היפוקסיה, ו hyperoxia. זה מדמה את האינטראקציה המורכבת של דלקת ממושכת, איסכמיה, היפוקסיה, ומתח חמצוני מנוסים במספר neonates המפתחים פציעה במוח. בעלי חיים פצועים להציג מגוון של חומרת הפציעה ברוטו, עם שינויים מורפולוגיים במוח כולל היצרות של מספר מודורי הקורטיתיים ו sulci הקשורים. בעלי חיים פצועים גם מראים פיתוח רפלקס איטי, מהירות איטית יותר ומשתנה יותר של תנועה במסלול הדוגמנות אוטומטי, והירידה בחיפושי בשדה פתוח. מודל זה מספק פלטפורמה שבה לבחון את הטיפולים לתינוקות עם אנצפלופתיה התינוק הקשורים בדלקת ושלום, מנגנוני המחקר של פציעה המשפיעים על פיתוח קליפת הגוף, ולחקור מסלולים המספקים עמידות חיות לא מושפעות.
מבוא
יש צורך מתמשך של מודלים בעלי חיים גדולים המשקפים את הפתופסולוגיה של טרום בגרות ולאחר ההיפוקסיה-איסכמיה שבה התערבויות טיפוליות לתינוקות יכולים להיבדק. ב 2017, 9.93% מתוך 382,726 תינוקות שנולדו בארצות הברית נולדו לטווח, ו 84% של תינוקות אלה נולדו בין 32 ו-36 שבועות של הריון1. בזמן התינוקות מוקדם, החשיפה לזיהום או דלקת היא נפוצה, שם הפעלה החיסונית אימהית בשל פתוגנים נגיפי או חיידקי יכול ליזום העבודה טרום לטווח. Postnatally, תינוקות טרום לטווח נמצאים בסיכון גבוה של מוקדם או מאוחר התפרצות אלח דם2. תינוקות preterm גם לעתים קרובות חווים תקופות של היפוקסיה, לחץ דם, ו עידות בשל מערכת הקרדיוכלתית הילדותית שלהם, מתח חמצן מוגבר באטמוספירה יחסית לאלה מנוסים ברחם, והחשיפות האיגניים. בנוסף, בתינוקות טרום לטווח, הגנות נוגד חמצון הם בלתי בוגרים3 ו-pro-האפוטוטיים גורמים הם באופן טבעי upregulated4. מתח חמצוני ומוות תאים להוביל הפעלה של מערכת החיסון ודלקות ניווניות. גורמים אלה משולבים נחשבים לתרום לפגיעות התפתחותית ופיזיולוגית של המוח, ולגרום או להחריף את האנצפלופתיה הקשורים בתוצאות התפתחותיות עניות בתינוקות טרום לטווח5,6,7.
בשל הדמיון הפיזי וההתפתחותי כי המוח החמוס מניות עם המוח האנושי, החמוס הוא זן אטרקטיבי שבו למודל פגיעה במוח8,9,10,11,12. חמוסים הם גם מועמדים אידיאליים כדי לדגמן את המוח האנושי לטווח הארוך, כפי שהם נולדים lissencephalic ולפתח מוחות באופן שוטף, אשר מספק חלון שבו כדי לחשוף את המוח המתפתח עלבונות כי לחקות את אלה מנוסים על ידי תינוקות נולד לטווח. בלידה, התפתחות המוח החמוס דומה העובר 13 שבוע האדם, עם postnatal יום (P) 17 ערכות נחשב שווה ערך לתינוק ב 32 – 36 שבועות של ההריון13.
הקבוצה שלנו פרסמה לאחרונה מודל של טרום לטווח (< 28 שבועות הריון) פגיעה במוח P10 חמוס על ידי שילוב של רגישות דלקתית עם es chia coli ליפופוליד (lps) עם חשיפה בעקבות היפוקסיה ו עידות12. בפרוטוקול הבא, אנו מתארים כעת מודל טרום לטווח מאוחר ב P17 חמוס, שם הרגישות LPS הוא אחריו בעקבות איסכמיה מוחית דו צדדית, היפוקסיה, ו hyperoxia. התוצאה היא פציעה חמורה יותר בקבוצת משנה של בעלי חיים, ומודלים הדוק יותר את האינטראקציה המורכבת של דלקת ממושכת, איסכמיה, היפוקסיה, ומתח חמצוני מנוסים מספר תינוקות טרום לטווח המפתחים פציעה במוח.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הליכים בוצעו בהתאם למדריך NIH לטיפול ולשימוש בבעלי חיים מעבדתיים וכחלק מפרוטוקול מאושר על ידי הוועדה המייעצת לטיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת וושינגטון.
1. הכנה ומינהל LPS
הערה: התייחס לאיור 1 עבור ציר זמן של ההליכים.
- לפני תחילת ההליך, לאטום, לעקר לחיטוי כל כלי ניתוח וילונות כירורגי. הכן תרופות טרום-ניתוח. בבקבוקונים סטריליים לחשב את קצב הזרימה הנדרש כדי להחליף את האוויר בחדר היפוקסיה/hyperoxia עם הגז ניסיוני בתוך 8 – 10 דקות.
- הכינו את ליפופוליסכד (LPS מסוג E. coli 055: B5) בתמיסת מלח סטרילית כדי לייצר ריכוז של 1 מ"ג/mL. להסיר ערכות P17 החמוס מהחוליים שלהם. . שוקלים ומספרים אותם לאקראי בעלי חיים על ידי המלטה והמין לשלוט או פצועים (או טיפול) קבוצות.
- באמצעות 300 μL מזרק אינסולין, מנהל 3 מ"ג/ק"ג של LPS intraperitoneally כדי ערכות בקבוצת הפציעה, וכמות שווה ערך של רכב מלוחים סטרילי (3 μL/g) כדי לשלוט בעלי חיים.
- מניחים בעלי חיים בחדר בתוך מרחץ מים ב-37-40 ° c על מנת לשמור על טמפרטורת מטרה רקטלית של 36 עד 37 ° c במהלך ההליכים המנתחים.
2. הרדמה
- במהלך ההליך, לעקוב ללא הרף טמפרטורה, קצב נשימה, ואת קצב הלב של החיה.
- ניהול בופרנורפין (0.05 מ"ג/ק"ג) תת-עורי 30 דקות לפני ההליך הכירורגי. לגרום הרדמה בתערובת של 3% isof, מאוזנת עם 100% חמצן. להסיר את הערכה מן התא אינדוקציה ומקום זה פרקדן על שמיכה מכוסה מים כירורגי להגדיר 37 ° c. העבר הרדמה לחרוט האף ולהפחית את רמת isofלאנה 2 – 3%.
3. הכנה כירורגית
- שימוש בקוצץ חיות קטן להסיר את כל השיער על אזור הצוואר הגחוני. להתגלח בתבנית מלבנית עם טיפול כדי למנוע לקשור את העור או לייצר פריחה תער. ניהול הרדמה מקומית לאזור מגולח באמצעות לידוקאין העורי (4 מ"ג/ק"ג) ו bupi, 2.5 mg/ק"ג).
- הכינו את הצוואר על ידי יישום מתחלף של povidone-יוד ו 70% אתנול לשפשף עם מטליות כותנה סטרילית. חזור על ניקוי כזה povidone-יוד ו 70% אתנול הם כל אחד להחיל 3x בצורה מתחלפים.
- לאשר עומק של הרדמה באמצעות העדר רפלקס הבוהן. לשמור על רמת isofלאנה באחוזים המינימלי הנדרש עבור מישור כירורגי של הרדמה. באמצעות וילונות סטרילי חד פעמי לחשוף את אזור הצוואר, לעטוף את החיה.
4. ליטל עורק הראש הדו
- עם להב האזמל #11 לשימוש יחיד, לבצע חתך באמצע של 1.5 ס מ במרכז הצוואר. . מנתחים בדרך לעורק הראש השמאלי מנתח את העורק הרחק. מצרור הנוירונימי המקושר
- באמצעות זוג של מלקחיים עדינים מעוקל, לעבור בלולאה 10 ס"מ אורך של תפר מ5-0 המשי סטרילי מתחת לעורק. . תחתוך את התפר לחצי ליגייט העורק על ידי קשירת מאובטח שני אורכי תפר, עוזב לפחות 2 מ"מ בין הקשרים. , מעביר את עורק הראש השמאלי בין התפרים. מטפל בהשארת העצבים ללא פגע
- . חזור על הניתוח בצד ימין הפיכה בעורק הראשי הימני עם אחד סטרילי 1/8 אינץ ' הטבור. סגרו את הפצע בעזרת אטבי עור כירורגיים.
- אפשר לבעל החיים להתאושש באמבט מים מבוקר טמפרטורה לפחות 30 דקות לפני היפוקסיה.
הערה: אם העורקים אינם מבודדים לחלוטין משאר הצרור נוירונימי, התמותה מוגברת ניתן לראות לפני או במהלך היפוקסיה מאוחר יותר.
5. היפוקסיה סדרתית, Hyperoxia, ו היפוקסיה
- במהלך היפוקסיה ו hyperoxia, לשנות את הטמפרטורה באמבטיה מים לפי הצורך כדי לשמור על טמפרטורה רקטלית במהלך היפוקסיה ב 37 ° c ב הזקיף בעלי חיים (s).
- מניחים בעלי חיים בקבוצת הפציעה בחדר אטום בתוך אמבט מים. ברציפות לפקח על ריכוז החמצן בתוך החדר, כמו גם טמפרטורה רקטלית לפחות חיה אחת זקיף. רוקן את החדר עם מחולל לחות 9% חמצן (91% חנקן) ולאחר מכן לשמור על קצב הזרימה של 3-5 L/min, תלוי בגודל קאמרית. ברגע שריכוז החמצן בחדר הגיע ל -9%, המשך 30 דקות.
- לאחר 30 דקות, להחליף את אספקת הגז ל 80% מחולל חמצן (20% חנקן), ולאפשר לחדר להגיע לריכוז היעד מבוסס על קצב הזרימה ואת גודל החדר. המשך 30 דקות של hyperoxia. פתח את התא כדי לאפשר לו להגיע במהירות רבה יותר normoxia על ידי שיווי אוויר בחדר.
- אטום את החדר, ורוקן. עם 9% חמצן מחולל ברציפות לפקח על כל בעלי החיים חזותית, לשים לב של בעלי חיים המציגים ברולינאה. ברגע שריכוז החמצן בחדר הגיע ל -9%, המשך 30 דקות. אם התמותה פנים-ארוי (מעצר נשימתי) בכל בעלי החיים הוא ראה לפני סוף התקופה 30 דקות, לסיים היפוקסיה מיד.
6. ביטול הארכה של עורק העורק הימני
- להחזיר בעלי חיים לאזור כירורגי, ולגרום הרדמה בתערובת של 3% isof, מאוזנת עם 100% חמצן. להעביר הרדמה לחרוט האף ולהפחית את רמת isofלאנה 2 – 3%. להסיר את הפצע כירורגי קליפים ולהכין מחדש את אזור הפצע עם povidone-יוד. לאשר עומק של הרדמה באמצעות העדר רפלקס הבוהן. לשמור על רמת isofלאנה באחוז המינימלי הנדרש עבור מישור כירורגי של הרדמה. באמצעות וילונות סטרילי חד פעמי לחשוף את אזור הצוואר, לעטוף את החיה.
- באמצעות מלקחיים מעוקלים, לזהות ולהתיר את קלטת הטבור מעורק העורק הימני. סגרו את הפצע בעזרת אטבי עור כירורגיים.
7. ניהול שחזור וטמפרטורה
- להחזיר את כל הקיטים שלהם עבור 60 דקות, עבור סיעוד והתאוששות. לאחר 60 דקות, החזר בעלי חיים פצועים למרחצאות המים ב-37-40 ° c עבור 6 שעות, התאמת טמפרטורת המים לפי הצורך, כדי לשמור על טמפרטורה פי שישה בגובה 36 ° c. . החזר ערכות לאלה שלהם
- הסר קליפים כירורגיים 10 – 14 ימים לאחר הניתוח (P27 – P31).
8. בדיקת רפלקס
- בצע את כל בדיקות הרפלקס מדי יום מ P21 – P28, ו לפחות 3 x בשבוע מ P28 – P42, בעוד שנשאר עיוור לחשיפה (או טיפול) הקבוצה. לפני בדיקות רפלקס, מקום ערכות בחדר עם סיוע בחום (37 מעלות צלזיוס, משטח חום, וכו ') עבור 1 h. עבור כל בדיקה, השלם את כל המבחנים לכל ערכה לפני בדיקת הערכה הבאה.
- גאומוניות שליליות (25 °)
- הצב לוח שטוח (16 1/2 ב-. x 12 בתוך.) עטוף במגן שולחן סופג מתחת לאובייקט כך שהלוח יוצר זווית של 25 ° עם הטבלה. מניחים ערכה על הלוח נוטה ופונה במורד הגבעה, כ 75% מהדרך במעלה הלוח.
- ודא כי הגוף של הקיט הוא ישר וכי יש לו את כל ארבע כפות הרגליים כנגד הלוח לפני שחרורו. ברגע הערכה ממוקם, להתחיל את הערכת הזמן.
- להקליט את הזמן שבו הקיט מצליח לסובב את הגוף שלה 90 ° ביחס למיקומו ההתחלתי. להקליט את הזמן שבו הקיט מסתובב הגוף שלה 180 ° ולוקח צעד שלם לקראת החלק העליון של הלוח. בצע 3 מבחנים בשיפוע של 25 ° לפני המעבר אל המבחן הבא.
- גאומוניות שליליות (45 °)
- בצע 3 מבחנים של הבדיקה שלילית שתוארה בעבר geotaxis שוב, הפעם עם הלוח להגדיר זווית 45 °.
- שנאת הצוק
- מניחים פלטפורמה מרופד סביב 1 רגל מתחת למדף כדי למזער את הפציעה ערכות אם הם נופלים.
- הניחו ערכה הפונה, ובניצב לקצה ספסל המעבדה. ודא שהגוף של הערכה ישר, וכפות הרגליים הקדמיות שלו מורידות את הקצה. להתחיל בהערכת זמן מרגע הערכה ממוקם. לדאוג להבדיל בין תנועה מודעת הרחק מן הצוק ותנועות ספונטניות אחרות שאינן כרוכות הליכה מתואמת.
- הקלט את הזמן שבו הערכה מזיז את גופה מהקצה (מוגדר כערכה מגבה, מפנה את גופה, או מזיז את איבריו הקדמיים הרחק מהקצה). הקלט את הזמן שערכה משלימה את הצעד הראשון שלה בכיוון ההפוך של הקצה (מוגדר כיוון או זווית מעבר לסיבוב 90 ° ממיקומה ההתחלתי מול הקצה).
- בצע 3 משפטי שסלידה מצוק לכל ערכה לפני המעבר אל המבחן הבא.
- רפלקס הצתה
- מניחים ערכת פרקדן על הספסל, מחזיק אותו בעדינות בתנוחה הזאת לפני שחרורו ובמקביל להתחיל את הסטופר. להקליט את הזמן כי הקיט מביא את עצמו לנוח עם כל ארבע כפות הרגליים בו זמנית מול הספסל בתנוחות נושאת משקולות. להקליט את הזמן כאשר הערכה לוקח צעד שלם בכל כיוון (מוגדר כמיקום של כל ארבע כפות הרגליים כדי להשיג התקדמות כיוון נתון ללא ספינינג או גרירה של הגוף).
- לבצע 5 מבחנים של בדיקת רפלקס הצתה לכל חיה.
- לאחר כל ערכה השלימה את 5 משפטי רפלקס הורדה, להחזיר את הפסולת לג.
9. בדיקת המסלול
- ב P42, להסיר ערכות מתוך ג'יל. ערכות מקום בכלובים פלסטיק כ 10 דקות לפני בדיקה, כך שהם יכולים התאקלם לסביבה. כבה את האורות בחדר הבדיקות כדי להבטיח שתאורת הסביבה לא תשפיע על תפקוד המסלול.
- צור ניסוי חדש בתוכנה הרלוונטית. התאם את ההגדרות הנסיוניות כך שמשך ההפעלה המירבי לא יעלה על 10.00 s ומשך ההפעלה המינימלי אינו קטן מ-1.50 s. הגדר את וריאציית המהירות המירבית כך שהיא לא תעלה על 60%. קבע דרישת מינימום של שלושה מסלולים תואמי עבור כל חיה.
- התאימו את רוחב השביל יחסית לגודל של בעל החיים, כך שהוא יוכל לlocomote בחופשיות מבלי לגעת בקירות תוך שהוא נותר צר מספיק כדי להרתיע את הסובבים אותו. הוסף הגדרת זיהוי חדשה בכרטיסיה פרופילי הגדרות זיהוי באמצעות זיהוי אוטומטי. השתמש באותן הגדרות זיהוי עבור כל הליטות ובעלי חיים בגיל נתון.
- לנקות ביסודיות את המעבר עם רקמת נייר דל כמוך ו 70% אתנול לפני ואחרי כל חיה. לנקות את הכפות של החמוס בקביעות כדי לשפר את הדיוק של זיהוי וסיווג. , ברגע שמעבר ובעלי החיים מוכנים. התחילו ברכישת משפט
- הפסקה הרכישה כדי לנקות את המסלול אם הרגליים להצטבר על הזכוכית, או אם בעלי חיים עוברים שתן או צואה. הפסק את הרכישה לאחר שתוכנת המסלול זיהתה שלושה מסלולים תואמי המבוססים על הגדרות הניסוי שנקבעו מראש.
10. בדיקת שדה פתוחה (P42)
- השתמש בתיבת אקריליק שאינה נקבובי (55 ס מ x 55 ס"מ x 40 ס מ גבוה) צבוע מאט-לבן. הצב את המצלמה כך שהיא ממורכזת ישירות מעל התיבה וכל ארבעת הקירות נלכדים. נקה את זירת הבדיקות עם 70% אתנול לפני השימוש הראשון ובין בעלי חיים.
- בתוכנה הרלוונטית, בחר ' חדש מתבנית ' והחל תבנית שהוגדרה מראש. המשך בהליך ההגדרה על-ידי בחירה באופן רציף של סוג נושא: אחר; תבנית ארנה: שדה פתוח, ריבוע; תבנית אזור: מרכז, גבול, פינות; תכונות למעקב: נקודת מרכז.
- פתח את הגדרות ארנה ולתפוס את תמונת הרקע מקלט המצלמה, וודא כי צמרות של קירות הזירה גלויים. כיול את ממדי הזירה באמצעות הכלי קנה המידה.
- כוונן את אזורי הזירה המוגדרים מראש על ידי שינוי גודל קווי המתאר כדי להתאים את אזורי הקיר (NW, NE, SW, SE) ואזורי הרצפה (שמאל, למעלה, למעלה, ימין למעלה, שמאל באמצע, מרכז, ימין באמצע, שמאל, התחתית האמצעית, הימנית התחתונה). אמת את ההגדרה כדי לוודא שאזורים לא חופפים.
- פתח את חלון הרכישה ולחץ על התחל רכישה. מניחים את החמוס במרכז זירת הבדיקות המכוונת באופן עקבי לכל נושא מבחן. לאפשר לחמוס לנוע בחופשיות ברחבי הזירה לתקופה של 5 דקות. בתום תקופת הבדיקה, לחץ על ' הפסק רכישה'. . חזור על ההליך עם החמוס הבא
הערה: כל הניסויים בחדר צריכים להציב את עצמם כבלתי ניתן להשתקה על ידי החמוס ולהישאר בשקט בתקופת הבדיקה.
11. קיבעון-פרזיה
- ב-P42, ערכות מורדם עמוקות. עם 5% בלבד ניהול מנת יתר פנטוברביטל (120 – 150 מ"ג/ק"ג כיתה). להבטיח הרדמה עמוקה על ידי חוסר תגובה הבוהן צביטה ואובדן של תנועות הנשימה.
- . להעביר את החיה למכונית מתחת למכסה המנוע פתח את החזה והצמד את העורקים היורדים באמצעות הטסטטיסטיקה עדינים. . תחתוך את הפרוזדור הימני באמצעות משאבת זלוף, מבשם החדר השמאלי עם 60 mL של תמיסת מלח סטרילי בקצב של 30 מ"ל/min. משכן עם 60 ml של פורמלין (10% פורמלדהיד) בקצב של 30 מ"ל/min.
- ומסירים את המוח מהגולגולת באמצעות מספריים, מלקחיים, רונדל ומרית. קחו תצלומים ברזולוציה גבוהה של ההיבטים הצדדיים, הגמיים והרוחביים של כל מוח. לאחר תיקון המוח בפורמאלין לפחות 48 h.
12. לאקס Vivo מדידה המוח
- מסירים את המוח מפורמאלין (שלב 11.3) ומניחים על מגבת נייר כדי לקלוט נוזל עודף.
- באמצעות קליבר אלקטרונית, למדוד את גובה המוח על ידי הצבת קצות החוגה על ההיבטים הגאליים והגאליים של המוח. מדוד את אורך המוח על-ידי הצבת קצות הקפר בנורת הריח והגבול האחורי ביותר של האונה העורפית. למדוד את רוחב המוח על ידי הצבת קצות הקליבר בחלקים הצדדיים ביותר של האונות הטמפורלית. . שוקלים את המוח
- למדוד את החיתוך האורך (קדמי ואחורי אל הצלב החוצה), sulcus לרוחב, suprasylvian sulcus, ילתית sulcus, פסבדו sulcus, ansinate sulcus, הצלב sulcus, מראש sulcus, לרוחב, שיפראסיביאן gyri, סיגמואיד וראיד הגירי ( קדמי ואחורי), הפיתול הקדמי והאחורי, והגילרי האורטוסיאלי. למדוד את כל sulci מההתחלה והסוף של החלק הייחודי ביותר של sulci המקביל. למדוד את כל gyri מן ההיבט הרחב ביותר של כל gyri המקביל.
- מדדו את כמות המוח הקצר שנחשף על ידי הצבת קצה אחד של הקליבר בנקודה האחורי ביותר של הקרע האורך והצבת קצה אחר של הקליבר בחלק האחורי ביותר של המוח הקצר.
הערה: אטלס המוח חמוס, כפי שנמצא בביולוגיה ומחלות של החמוס14, שימש לפיתוח מדידות המוח vivo לשעבר החמוס.
13. ניקוד ברוטו
- באמצעות התמונות שצולמו בשלב 11.3., להחיל את הקריטריונים הניקוד בצעדים 13.2 – 21.5 להעריך את הפגיעה במוח ברוטו (0-9 סולם) תוך שנשאר עיוור לחשיפה (או טיפול) קבוצות.
- . העריכו את הקרע באורך אם הוא נראה רגיל, הקצה תוצאה של 0. אם הוא מורחב במקצת (כ 2x ברוחב נורמלי), אבל העלייה ברוחב הוא לא שלם לאורך הסדק, להקצות ציון 1. אם הוא מורחב במתינות (כ 2 – 3x רגיל), להקצות ציון של 2. אם הוא מורחב במידה ניכרת, עם פער גלוי > רוחב רגיל של 3 x לאורך רוב הקרע, להחיל ציון של 3.
- הערכת הערכה sulci לרוחב. אם הם מראים הגדרה נורמלית, עם הפרדת הנגירי לרוחב ו suprasylvian, להקצות ציון 0. אם הגדרה חד צדדית מתון או דו צדדי של sulcus נתפסת, במיוחד בחלק caudal, עם היצרות מינימלית של האונות הקדמית והטמפורלית ביחס לאונות העורף, להקצות ציון של 1.
- אם ההגדרה מופחתת בינוני של sulci נראה, עם דיכאון של הגירי suprasylvian, היצרות של gyri ו ectosylvian, והיצרות קלה של האונות הקדמית והטמפורלית ביחס לאונות העורף, להקצות ציון של 2. אם הניוון פיברוזיס חד צדדית נראה, עם שינוי מינימלי של חצי הכדור הצדדי הצלעות, להקצות ציון של 3. אם ההגדרה המסכנה של sulci לרוחב קיים, עם סיסטיק פיברוזיס או חמורה של האונות העורף והזמני, להקצות ציון של 4.
- הערכת החלק הנראה של המוח הנמצא. אם הוא נראה רגיל, עם (< 75% של vermis ו < 66% של האונות גלוי, להקצות ציון 0. אם 75 – 90% של vermis ו ≥ 66% של האונות גלויים, להקצות ציון 1. אם רוב המוח הזעיר הוא גלוי, מראה את כל vermis ו ≥ 66% של האונות, להקצות ציון של 2.
14. ניתוח נתונים
- עבור נתונים בדיקת רפלקס, להקצות כשלים ציון של 61 s כדי לאפשר להם להיות מושווה להצלחות בסוף הזמן (60 s), אבל עם דירוג גרוע יותר בניתוח הסטטיסטי. חישוב אזור מתחת לעקומה עבור כל חיה לאורך זמן בכל אחד מבדיקות הרפלקס.
- כוונן את נתוני המסלול הכרוכים בגודל כף הלחץ במשקל של בעל החיים.
- ניתוח נתונים באמצעות שיטות סטטיסטיות שאינן פרמטרית, המתארות נתונים באמצעות טווח החציון והבין-רבעוני (IQR).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
של 34 (n = 18 זכרים, n = 16 נקבות) בעלי חיים משישה לוחמים חשופים לעלבון, שמונה בעלי חיים (24%; n = 4 זכרים, n = 4 נקבות) בקבוצה הפצועה מתו בתקופת ההיפוקסיה השנייה (n = 5), במהלך ניהול הטמפרטורה (n = 2), או לילה לאחר העלבון ( בקבוצה הפצועה, תשעה מתוך 26 ניצולים (35%) היתה פציעה מגעילה בלתי נראית. חמשבעליחיים (n = 5 זכרים) היו בעלי פציעה מתונה, וארבע בעלי חיים (n = 2 זכרים, n = 2 נקבות) היתה פגיעה קשה, הוגדרה כעשרות פתולוגיה ברוטו של 2 – 5 ו 6-9, בהתאמה (איור 2א). בעלי חיים שנ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בשל קווי הדמיון הפיזיים וההתפתחותיים בין המוח החמוס למוח האנושי, החמוס משמש יותר ויותר למודל של פגיעה מוחית מבוגרת והתפתחותית. . שמונה,תשע,עשר,11,12 עם זאת, מחקר עד היום מרמז כי המוח החמוס הוא גם עמיד בפני פציעה ראשונית, כמו גם מאוד פלסטיק, עם הנזק התנהגותי הפוחתת לאורך זמן גם במסגרת הפגיעה הפתולוגית נראה10,...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
פיתוח המודל היה ממומן על ידי ביל ומלינדה גייטס, כמו גם על ידי NIH גרנט 5R21NS093154-02.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 80% חמצן | Praxair | ||
| 9% חמצן | Praxair | ||
| מגן ספסל סופג | Kimtech | 7546 | |
| מסלול מסלול אוטומטי | Noldus | ||
| Betadine קרצוף | |||
| Bupivacaine | Patterson וטרינרי | 07-888-9382 | |
| קליפרים בופרנורפין | |||
| מוצרי מדידה SRA | ME-CAL-FP-200 | טווח 200 מ"מ, רזולוציה 0.01 מ"מ | |
| כותנה גזה ספוג | פישר מדעי | 22028556 | |
| מעוקל מעוקל עדין המוסטט | Roboz | RS-7101 | |
| מלקחיים מעוקלים | מכשירי דיוק עולמיים | 501215 | |
| תפר מעוקל קשירת המוסטט | Roboz | RS-7111 | |
| Ethovision תוכנת מעקב | Noldus | ||
| עין סיכה | רוגבי | NDC 0536-1970-72 | |
| חמוסים (Mustela putorius furo) | Marshall Biosciences | Outbred (ללא זן ספציפי) | |
| פורמלין | פישר סיינטיפיק | SF100-4 | 10% (מאגר פוספט/מוסמך) |
| קוצץ שיער | מזרקי אינסולין Conair | GMT175N | |
| BD | 329461 | 0.3 סמ"ק 3 מ"מ 31 גרם | |
| איזופלורן | פיראמל | 66794-017-25 | |
| לידוקאין | פטרסון וטרינרי | 07-808-8202 | |
| רשימת LPS | ביולוגית | LPS Ultrapure #423 | |
| חיישן חמצן | BW התראת גז | GAXT-X-DL-2 | |
| תא פלסטיק פנטוברביטל | |||
| Tellfresh | 1960 | 10 ליטר; 373 x 270 x 135 מ"מ3 | |
| תמיסת מלח, 0.9% | Hospira | RL-4492 | |
| להב אזמל | Integra Miltex | 297 | |
| אזמל | World Precision Instruments | 500236 | #3, 13 ס"מ |
| תפר סטרילי | עדין Science Tools | 18020-50 | משי קלוע, 5/0 |
| מוליך קליפ כירורגי | Fine Science Tools | 12020-09 | |
| מסיר קליפס כירורגי | Fine Science Tools | 12023-00 | |
| וילונות כירורגיים | Medline Unidrape | VET3000 | |
| כפפות כירורגיות | Ansell Perry Inc | 5785004 | |
| Surigical Clips | Fine Science Tools | 12022-09 | |
| מדחום (פי הטבעת) | YSI | Precision 4000A | |
| מדחום (מים) | Fisher Scientific | 14-648-26 | |
| סרט טבור | Grafco | 3031 | |
| אמבט מים | Thermo Scientific | TSCOL19 | 19 ליטר |
מקורות
- Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. Births: Final Data for 2017. National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).
- Vanhaesebrouck, P., et al. The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium. Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).
- Raju, T. N., et al. Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health. Journal of Pediatrics. , (2016).
- Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes. Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).
- Bennet, L., et al. Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain. Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).
- Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. Hyperoxia and the Immature Brain. Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).
- Galinsky, R., et al. Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury. Developmental Medicine & Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).
- Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury. International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).
- Snyder, J. M., et al. Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret. International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).
- Schwerin, S. C., et al. Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret. Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).
- Rafaels, K. A., et al. Brain injury risk from primary blast. Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).
- Wood, T., et al. A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity. Developlemental Neuroscience. , (2019).
- Barnette, A. R., et al. Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging. Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).
- Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. Biology and Diseases of the Ferret. , WIley. (2014).
- Eklind, S., et al. Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury. European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).
- Falck, M., et al. Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner. Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).
- Osredkar, D., et al. Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury. Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).
- Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR. Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).
- Christensson, M., Garwicz, M. Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives. Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).
- Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets. eNeuro. 5 (5), (2018).
- Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
