הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

שיטת שלמות המוח בדם בדרוזופילה מלאנוסטר

8.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60233

⸱

18 בספטמבר 2019

 ,  , 
1Department of Biology, Loyola University Chicago

במאמר זה

סיכום

שלמות מכשול הדם במוח. היא קריטית לתפקוד מערכת העצבים בדרוזופילה מלאנוסטר, מכשול המוח בדם נוצר על ידי תאי גלאל במהלך הembryogenesis המאוחרות. פרוטוקול זה מתאר שיטות לטיפול בתפקוד ותחזוקה של מחסומי מוח בדם בד. מלאנוגסטר עוברים והזחלים השלישי.

תקציר

התפתחות מערכת העצבים הנכונה כוללת את היווצרות מכשול הדם-מוח, מכשול הדיפוזיה המסדיר את הגישה למערכת העצבים ומגן על רקמת העצבים מפני רעלים ופתוגנים. פגמים בהיווצרות מכשול זה היו מתואמים neuropathies, ואת התמוטטות של מכשול זה נצפתה במחלות ניווניות רבות. לכן, חיוני לזהות את הגנים המסדירים את היווצרות והאחזקה של מחסום הדם-מוח כדי לזהות מטרות טיפוליות פוטנציאליות. כדי להבין את התפקידים המדויקים גנים אלה לשחק בהתפתחות העצבית, יש צורך לעבד את ההשפעות של ביטוי גנים שונה על השלמות של מכשול המוח בדם. רבים מהמולקולות הפועלות בהקמת המכשול ממוח הדם נמצאו להיות שמרו על פני מינים איקריוטית, כולל זבוב הפירות, drosophila ילה מלאנוגסטר. זבובי פירות הוכחו כמערכת מודל מצוינת לבדיקת המנגנונים המולקולריים המסדירים פיתוח ותפקוד של מערכת העצבים. פרוטוקול זה מתאר הליך צעד-אחר-צעד לצורך שלמות מכשול המוח בדם במהלך השלבים העובריים והזחל של ד. מלאנוגסטר פיתוח.

מבוא

במהלך הפיתוח, תקשורת תא תא ואינטראקציות הן קריטיות להקמת מבנה רקמות ואיברים ותפקוד. במקרים מסוימים, אינטראקציות תא תא אלה ממקכבות איברים מהסביבה הסובבת כדי להבטיח את תפקוד האיברים התקין. זהו המקרה של מערכת העצבים, אשר מבודדת על ידי מכשול הדם-מוח (BBB). תפקוד של BBB בבני אדם נקשר הפרעות נוירולוגיות כולל אפילפסיה, ואת התמוטטות של המכשול נצפתה מחלות נוירוניווניות כולל טרשת נפוצה amyotrophic לרוחב1. ב יונקים, bbb נוצר על ידי הצמתים הדוקים בין תאים אנדותל2,3. בעלי חיים אחרים, כולל זבוב הפירות, דרוזופילה מלאנוסטר, יש bbb מורכב מתאי גלאל. אלה תאים גליה טופס מכשול חדיר סלקטיבי לשלוט בתנועה של חומרים מזינים, פסולת מוצרים, רעלים, ומולקולות גדולות לתוך ומתוך מערכת העצבים4. הדבר מאפשר שמירה על מעבר אלקטרוכימי הנחוץ לירי בפוטנציאל הפעולה המאפשר ניידות ותיאום4. ב D. melanogaster, the glia להגן על מערכת העצבים מן האשלגן עשיר, כמו דם המוליקמ5.

במערכת העצבים המרכזית (cn) ומערכת העצבים ההיקפית (היקפית) של D. melanogaster, שתי שכבות גליה החיצוני, את subperineurial glia ואת perineurial glia, כמו גם רשת חיצונית של מטריצה החילוץ, הנוירולה העצבי, הטופס המוליקמ-המוח המוליש-מחסום העצב6, המכונה bbb לאורך מאמר זה. במהלך פיתוח subperineurial glia להיות פוליפואיד ולהגדיל כדי להקיף את מערכת העצבים5,6,7,8,9,10,11 . הצמתים subperineurial glia טופס septate, אשר מספקים את מכשול הדיפוזיה העיקרי בין המוליקמ ומערכת העצבים5,6,12. הצמתים הללו דומים מאוד לצמתים בעלי החוליות הדומות, שנמצאו בפרפודות של המייאלוציה של גליה, והוא מבצע את אותו התפקיד כצמתים הדוקים ב-bbb של יונקים13,14, מיכל בן 15 , מיכל בן 16 , 17. perineurial glia הפער, לגדול, ולעטוף סביב subperineurial glia כדי לווסת את הדיפוזיה של מטבוליטים ומולקולות גדולות6,10,18,19. היווצרות bbb הושלם על ידי 18.5 h לאחר הנחת ביצה (ח) ב -25 ° c5,8. מחקרים קודמים זיהו גנים כי הם הרגולטורים קריטיים של היווצרות bbb20,21,22. כדי להבין טוב יותר את התפקידים המדויקים של גנים אלה, חשוב לבחון את ההשפעה של מוטציה של הרגולטורים הפוטנציאליים האלה על שלמות BBB. בעוד שמחקרים קודמים מתארים גישות למתן שלמות bbb בעוברים ובזחלים, פרוטוקול מקיף לצורך שיטת מחקר זו טרם תואר5,7. פרוטוקול זה, שלב אחר שלב, מתאר שיטות לגבי שלמות BBB במהלך שלבי הזחל העובריים והשלישי של מלאנוגסטר .

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. אוסף דגימות

  1. אוסף עובר
    1. בכל כלוב של אוסף העובר, השתמש במינימום של 50 נקבות בתולה עם 20-25 זכרים לגבייה. מודיית אלה זבובים בבקבוק עם אוכל תירס-אגר מזון (שולחן חומרים) עבור 1 על 2 ימים לפני תחילת אוספים23.
      הערה: ניתן להשתמש בזבובים נוספים, אך יש לשמור על היחס הנשי לזכר ב-2:1.
    2. לוחות תפוח מחמם לחות (שולחן 1) ב -25 ° c ללילה.
      הערה: זה נדרש עבור ההיערכות הנכונה של עוברים. אם הצלחות מתייבשות במהירות, הוסיפו קערה עם מים לחממה כדי להגביר את הלחות של החדר.
    3. מעבר בין שלב 1.1.1 באמצעות CO2 והעברת זבובים לכלוב הגבייה. מניחים לפני מחמם מיץ תפוחים צלחת אגר עם מכתם קטן של שמרים להדביק על הקצה הפתוח בטוח לכלוב עם השרוול האדום (לוח חומרים). כדי לנקות עוברים מבוגרים, לאפשר זבובים להטיל העוברים/ביצים על צלחת התפוח אגר הלוח עבור 1 h ב 25 ° c.
    4. הסר את כלוב הגבייה מהאינקובטור. להפוך את הכלוב שינוי בצד למטה ולהקיש זבובים למטה לתחתית הכלוב. החלף את מיץ התפוחים אגר עם צלחת חדשה לקדם חמם תפוח לוחית עם מכתם קטן של שמרים להדביק. . להשליך את הצלחת הראשונה
    5. אפשר זבובים להטיל העוברים/ביצים על הצלחת החדש של מיץ התפוח אגר עבור 1 h ב 25 ° c. למחוק את הצלחת הבאה בעקבות אוסף 1 h ולהמשיך לשלב הבא כדי לאסוף עוברים להזרקה.
    6. כדי לאסוף את השלב המאוחר 17 עוברי (20-21 h), לאפשר זבובים של גנוטיפ הרצוי משלבים 1.1.1-1.1.5 לשכב על מחמם חדש מחומם תפוח לוחות עם מכתם קטן של שמרים להדביק ב 25 ° צ' עבור 1 h. צלחת גיל עבור 19 h ב חממה 25 ° c , כך שעוברים יהיו 20 עד 21 מגיל בזמן ההדמיה.
      הערה: ניתן לחזור על שלב זה בהתאם לצורך עבור סיבובים מרובים של איסוף, הזרקה והדמיה של דוגמה.
    7. לאסוף את העוברים מן הצלחות לתוך מסננת תא 70 עם רשת PBTx יקרומטר ניילון על ידי הוספת מלוחים מואגור פוספט (PBS) עם 0.1% nonionic חומרים (; שולחן 1) לכסות את פני הצלחת ולשחרר את העוברים מהמשטח באמצעות מברשת צבע.
    8. עוברים deכורonate שנאספו בתוך מסננת התא בתמיסה 50% אקונומיקה (טבלה 1) בצלחת פטרי 100 מ"מ עבור 5 דקות עם עצבנות מדי פעם בטמפרטורת החדר. לשטוף את העוברים 3x על ידי מתערבל תא מסננת ב PBTx בצלחת פטרי, באמצעות מאכל טרי של PBTx בכל פעם.
    9. אם כל העוברים הם מסוג גנוטיפ הנכון, המשיכו ישירות לשלב 1.1.10. אם הדור של העוברים של גנוטיפ נכון דורש צלב עם זבובים heterozygous, לבחור עוברים של גנוטיפ נכון באמצעות נוכחות או העדר של כרומוזומים מאזן המסומנים באור פלואורוסקופים. השתמש בstereomicroscope עם יכולות פלורסנט עבור בחירת גנוטיפ.
      הערה: כרומוזומים מאזן המסומנים עם חלבון פלורסנט מעוות-צהוב; קרופל-Gal4, חלבון פלורסנט ירוק (gfp); טוויסט-Gal4, uas-gfp לעבוד היטב עבור בחירת גנוטיפ ב מאוחר embryogenesis (שולחן 2)24,25,26.
    10. באמצעות פיפטה זכוכית, העברת עוברים ב PBTx 2% agarose לוח ג'ל (שולחן 1). הסר את הנוזל העודף באמצעות נייר סינון. יישר ~ 6-8 עוברים על הלוח השני% ג'ל עם האחוריים לימין והצד האחורי כלפי מעלה (איור 1B).
      הערה: המיקרופייל, החור הקטן שדרכו נכנסים אל הביצה, ממוקם בקצה הקדמי של העובר. . הקצה האחורי מעוגל יותר קנה הנשימה נראה לבן והוא ממוקם בתוך העובר, ומאפשר את ההבחנה של הצדדים הגדודים של העובר (איור 1ב).
    11. הכן שקופית עם חתיכה אחת של קלטת דו-צידית. לחץ בחוזקה על השקופית מעל העוברים כדי להעבירם לקלטת הדו.
    12. התייבשות עוברים על ידי דגירה בטמפרטורת החדר עבור ~ 25 דקות (לא התייבשות משמש). , בעקבות התייבשות. מכסים עוברים עם שמן הלוקרבון
      הערה: תקופות התייבשות עשויות להשתנות בהתאם לטמפרטורה, ללחות ולאוורור בחדר. תקופת הדגירה צריכה לשמש כדי להגדיר את המנגנון להזרקה ואת המיקרוסקופ קונפוקלית וקד לדימות, כפי שמתואר בסעיפים 2 ו 3 של פרוטוקול זה.
  2. אוסף זחל
    1. להקים צלב עם 5-10 בתולה זבובים נקבה של גנוטיפ הרצוי וחצי כמו זכרים רבים של גנוטיפ הרצוי בבקבוקון עם אוכל תירס-אגר מזון ו דגירה ב 25 ° c23.
    2. לאחר 5 שבעה ימים, בהתאם גנוטיפ, לאסוף הזחלים הנודדים השלישי מתוך הבקבוקון בעדינות עם מלקחיים. לשטוף את הזחלים ב-1x PBS כדי להסיר את המזון נדבק הזחלים. העברת הזחלים לצלחת מיץ תפוחים אגר עבור גנוטיפים כמתואר בשלב 1.1.9 במידת הצורך.
    3. מגלגלים זחלים על רקמה באמצעות מברשת צבע כדי לייבש אותם. העבר 6-8 הזחלים לשקופית שהוכנו על ידי קלטת דו צדדית באמצעות מלקחיים.

2. הכנת מחטים והזרקת דגימה

  1. משוך מחטים על פולר מיקרופיפטה לפני החניכה של פרוטוקול זה. מאובטח צינורות קפילר לתוך המחט משוך על פי הצורה המחט הסטנדרטית פרמטרים עבור D. מלאנוגסטר זריקות (שולחן 3)27. לאחסן מחטים בצלחת פטרי על ידי עיגון חימר עד השימוש להזרקה.
  2. טען מחט עם 5 μl של 10 kda תוספי מצומנת sulforhodamine 101 חומצה כלוריד (טבלה של חומרים) באמצעות 20 μl ג'ל טעינת הצנרת במהלך תקופת התייבשות 25 דקות לעוברים (שלב 1.1.12), או מיד לאחר העברת זחלים לשקופית (שלב 1.2.3).
  3. לטעון את המחט לתוך מחזיק מחט ומיקום במיקרומניפולציה מאובטח לבסיס פלדה (טבלת חומרים).
    הערה: המחט צריכה להיות כמעט מקבילה לשלב המיקרוסקופ להזרקת העובר ובזווית מעט כלפי מטה לזריקות זחל.
  4. הגדר את מנגנון ההזרקה (לוח חומרים) עד 50 psi, 5-10-ms עם מגוון של 10.
    הערה: ייתכן שיהיה צורך לשנות הגדרות אלה עבור מנגנון ההזרקה המסוים הנמצא בשימוש.
  5. הנח את השקופית על הבמה ועל קצה המברשת של המחט כנגד קצה הקלטת הכפולה בזווית 45 ° כדי ליצור קצה שבור ובזווית.
    הערה: עבור עוברים יש צורך רק לשבור את הטיפ מספיק כדי לאפשר זרימה של 10 kDa dextran. מחט מושלמת יש טיפ בזווית מעט ורק טיפה קטנה של צבע תצא עם כל זריקה. עבור הזחלים, יש צורך לשבור את הטיפ יותר, אבל עם קצה בזווית לחדור את קיר הזחל הגוף. . טיפה גדולה יותר של צבע תצא החוצה
  6. משאבה דוושת הרגל עד הצבע הוא בקצה המחט.
  7. יישר את המחט כך שהוא יהיה מקביל עם העובר או זוויתי מעט למטה לעבר הזחל.
  8. להעביר את המחט לנקב את הקצה האחורי של הדגימה ולהזריק את הדגימה על ידי שאיבת דוושת הרגל. הזרק ~ 2 nL של צבע לעוברים, ו ~ 220 nL של צבע לתוך הזחלים.
    הערה: העובר או הזחל צריך להציף בצבע אם הזריקה מוצלחת.
  9. שימו לב לזמן ההזרקה למטרות דגירה. העוברים הדגירה במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. . בטמפרטורת החדר
  10. המשך בשקופית כדי להזריק דגימות נוספות, וציין את זמן ההזרקה עבור כל אחד מהדגימות.
    הערה: בהתאם למהירות שבה ניתן לבצע את שלבי הניתוח וההדמיה הבאים, יש להזריק 4/8 דגימות בכל פעם.

3. הכנת דגימות להדמיה

  1. הדמיה של עוברים
    1. לאחר ההזרקה, הכינו עוברים להדמיה. להחיל ג'לי נפט עם המוליך כותנה משופעת על צד ימין ושמאל של דגימות על השקופית כמו מרווח כדי למנוע נזק לעוברים בעת הצבת שמיכות.
    2. דגימות תמונה באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלית וקד לאורך כל עומק העובר עם מטרה 20x. לחשב את אחוז הדגמים הכולל עם צבע נצפתה בחוט העצב הגחוני (VNC) באמצעות המשוואה הבאה:% של דגימות עם BBB נפרץ = מספר דגימות עם הצטברות צבע של VNC/מספר כולל של דגימות.
  2. חיתוך והדמיה של הזחלים
    1. הכן שקופיות לדגימות. זחל לפני הזמן הר שני שמיכות במרווחים כ 0.5 ס מ מלבד השקופית עם לק ציפורניים.
      הערה: הכיסויים מתפקדים כרווחים עבור המוח, כך שהוא לא ניזוק במהלך תהליך ההרכבה.
    2. בעקבות הדגירה של 30 דקות, מנתחים את הזחלים ב-1x PBS ישירות על השקופית שישמשו בהדמיה. ראשית, השתמש זוג אחד של מלקחיים כדי לתפוס את הזחל במחצית הגוף זחל, ולהשתמש זוג שני של מלקחיים כדי להפריד את החצאים הקדמי והאחורי של הזחל.
    3. הבא, להשתמש בזוג אחד של מלקחיים כדי לתפוס את האזור הקדמי של ווים בפה, ולהשתמש זוג שני של מלקחיים כדי להפוך את קיר הגוף על קצה של הלקחיים מרתק את הפה ווים. המוח ו VNC יהיה חשוף.
    4. הפרד את המוח ואת VNC מן הקיר הגוף על ידי ניתוק העצבים, ולהסיר את קיר הגוף מהשקופית (איור 1ג, ד). הסרת דיסקי imaginal במידת הצורך.
    5. לכסות את המדגם עם 10 μL של 80% גליצרול ומניחים שמיכות על גבי המדגם עבור הדמיה.
    6. תמונה דרך עומק רקמת מערכת העצבים באמצעות מטרה 20x. לחשב את אחוז הדגימות הכולל עם צבע נצפתה ב VNC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השיטות המתוארות כאן מאפשרות הדמיה של שלמות BBB ברחבי ה-CN ב D. מלאנוגסטר עוברים וזחלים (איור 1). עם השלמת היווצרות BBB בסוף embryogenesis, פונקציות BBB להוציא מולקולות גדולות מהמוח ו VNC5. פרוטוקול זה מנצל פונקציה זו כדי לאשר את היווצרות BBB. כאשר פראי סוג (אורגון R) בשלב מאוחר 17 (20-21 h הישן) העוברים הוזרקו עם 10 kda תוספי מצופני sulforhodamine 101 חומצה כלוריד פלורסנט, המולקולה תוספי גדול נשלל מן VNC, כצפוי (איור 2א

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מספק תיאור מקיף של השלבים הדרושים לטיפול בשלמות BBB במהלך שלבי הזחל המאוחרים והשלישי של התפתחות D. מלאנוגסטר . גישות דומות תוארו במקום אחר כדי לקיים את שלמות bbb במהלך הפיתוח, כמו גם למבוגרים בשלבים5,7,29,30. עם זאת, תיאורים של הליכים בחומרים ובסעיפים לעתים קרובות רחבים בטבע וחסרים מספיק פרטים לצורך ביצוע קל, המחייב פתרון בעיות משמעותי מטעם החוקר. פרוטוקול זה מספק תיאור מקי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

המחברים מודים לד ר פ. בריאן פיקט וד ר רודני דייל לשימוש בציוד להזרקה. עבודה זו ממומנת על ידי מימון מחקר מאוניברסיטת לויולה שיקגו ל-md, D.T., ו-ג'יג'י

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
10 kDa sulforhodamine 101 acid chloride (Texas Red) DextranThermoFisher ScientificD1863Dextran ב-ddH2O חיטוי לריכוז של 25 מ"ג/מ"ל.
20 μ L קצות פיפטה לטעינת ג'לEppendorf22351656
100% אתנול (200 הוכחה)Pharmco-Aaper11000200
שמרים יבשים פעיליםכוכב
אגרפישר סיינטיפיקBP1423
AgaroseFisher ScientificBP160-500
מדחס אווירDeWaltD55140
מיץ תפוחיםטבעי של מוט מיץ
אקונומיקהביתית אקונומיקה1-5% היפוכלוריט
בורוסיליקט זכוכית נימי מכשיריםמדויקים בעולם1B100F-4
תקעי בקבוקיםפישר סיינטיפיקAS-277
מסנני תאיםBD פלקון352350
מיקרוסקופ קונפוקלידוגמאות אולימפוסFV1000שצולמו באמצעות אובייקט 20x (UPlanSApo 20x/ 0.75)
מוליך כותנהPuritan19-062614
סרט דו צדדי 1/2 אינץ'סקוטית
דומונט; דפוס #5; .05 x .01 מ"מ טיפRobozRS-5015
בקבוקי מזון זבובפישר סיינטיפיקAS-355
בקבוקוני מזון זבובפישר סיינטיפיקAS-515
רגל דוושתהליכון IIT-91-S גלגלית
ג'לBio-Rad1704422
מגש ג'לBio-Rad1704436
זכוכית פיפטהVWR14673-010
גליצרולפישר סיינטיפיקBP229-1
מגורעןנרכש במכולת.
שמן הלוקרבוןסיינטיפיק, בע"מFLY-7000
מקור אורSchottAce I
מעמד מניפולטורWorld Precision InstrumentsM10
MicromanipulatorWorld Precision InstrumentsKITE-R
Micropipette PullerSutter Instrument Co.P-97
מחזיק מחטמכשירים מדויקים בעולםMPH310
Nightsea סטים סינוןאלקטרונים מדעSFA-LFS-CYלהדמיה של YFP
Nightsea מערכת מתאם מלא עם ראש אור צבע כחול רויאלמיקרוסקופיה אלקטרונית מדעSFA-RBלהדמיה של מברשת GFP
פשוט סימונסאזמל בלנדר #6
PipetterFisher Scientific13-683C
משאבה פנאומטיתמכשירים מדויקים בעולםPV830זה מכונה גם מיקרו-מזרק או ווסת לחץ. מכיוון שהמודל ששימש במחקר שלנו אינו זמין עוד, זוהי חלופה אחת.
אשלגן כלוריפישר מדעיBP366-500
אשלגן פוספט דו-בסיסיפישר מדעיBP363-500
כלובי איסוף עוברים קטניםGenesee Scientific59-100
נתרן כלוריפישר מדעיBP358-212
נתרן פוספט דו-בסיסינטול מים פישר מדעיBP332-500
לוחית בסיס פלדהWorld Precision Instruments5052
סטריאומיקרוסקופCarl ZeissStemi 2000משמש לדיסקציה של רקמות.
סטריאומיקרוסקופ עם מקור אור מועברBaytronixמשמש להזרקה.
Tegosept (חומצה p-hydroxybenzoic, מתיל אסטר)GeneseeScientific20-258
Triton X-100Fisher ScientificBP151-500Nonionic
פעילי שטח בקבוקון פקקיםפישר סיינטיפיקAS-273
יש לדלל אדוםתפוחים פינצטה סוכר מעבדת

מקורות

  1. Obermeier, B., Daneman, R., Ransohoff, R. M. Development, maintenance and disruption of the blood-brain barrier. Nature Medicine. 19 (12), 1584-1596 (2013).
  2. Brightman, M. W., Reese, T. S. Junctions between intimately apposed cell membranes in the vertebrate brain. Journal of Cell Biology. 40 (3), 648-677 (1969).
  3. Tietz, S., Engelhardt, B. Brain barriers: Crosstalk between complex tight junctions and adherens junctions. Journal of Cell Biology. 209 (4), 493-506 (2015).
  4. Hindle, S. J., Bainton, R. J. Barrier mechanisms in the Drosophila blood-brain barrier. Frontiers in Neuroscience. 8, 414(2014).
  5. Schwabe, T., Bainton, R. J., Fetter, R. D., Heberlein, U., Gaul, U. GPCR signaling is required for blood-brain barrier formation in drosophila. Cell. 123 (1), 133-144 (2005).
  6. Stork, T., et al. Organization and function of the blood-brain barrier in Drosophila. Journal of Neuroscience. 28 (3), 587-597 (2008).
  7. Unhavaithaya, Y., Orr-Weaver, T. L. Polyploidization of glia in neural development links tissue growth to blood-brain barrier integrity. Genes & Development. 26 (1), 31-36 (2012).
  8. Schwabe, T., Li, X., Gaul, U. Dynamic analysis of the mesenchymal-epithelial transition of blood-brain barrier forming glia in Drosophila. Biology Open. 6 (2), 232-243 (2017).
  9. Von Stetina, J. R., Frawley, L. E., Unhavaithaya, Y., Orr-Weaver, T. L. Variant cell cycles regulated by Notch signaling control cell size and ensure a functional blood-brain barrier. Development. 145 (3), dev157115(2018).
  10. von Hilchen, C. M., Beckervordersandforth, R. M., Rickert, C., Technau, G. M., Altenhein, B. Identity, origin, and migration of peripheral glial cells in the Drosophila embryo. Mechanisms of Development. 125 (3-4), 337-352 (2008).
  11. Beckervordersandforth, R. M., Rickert, C., Altenhein, B., Technau, G. M. Subtypes of glial cells in the Drosophila embryonic ventral nerve cord as related to lineage and gene expression. Mechanisms of Development. 125 (5-6), 542-557 (2008).
  12. Bellen, H. J., Lu, Y., Beckstead, R., Bhat, M. A. Neurexin IV, caspr and paranodin--novel members of the neurexin family: encounters of axons and glia. Trends in Neurosciences. 21 (10), 444-449 (1998).
  13. Baumgartner, S., et al. A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function. Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).
  14. Banerjee, S., Pillai, A. M., Paik, R., Li, J., Bhat, M. A. Axonal ensheathment and septate junction formation in the peripheral nervous system of Drosophila. Journal of Neuroscience. 26 (12), 3319-3329 (2006).
  15. Bhat, M. A., et al. Axon-glia interactions and the domain organization of myelinated axons requires neurexin IV/Caspr/Paranodin. Neuron. 30 (2), 369-383 (2001).
  16. Faivre-Sarrailh, C., et al. Drosophila contactin, a homolog of vertebrate contactin, is required for septate junction organization and paracellular barrier function. Development. 131 (20), 4931-4942 (2004).
  17. Salzer, J. L., Brophy, P. J., Peles, E. Molecular domains of myelinated axons in the peripheral nervous system. Glia. 56 (14), 1532-1540 (2008).
  18. von Hilchen, C. M., Bustos, A. E., Giangrande, A., Technau, G. M., Altenhein, B. Predetermined embryonic glial cells form the distinct glial sheaths of the Drosophila peripheral nervous system. Development. 140 (17), 3657-3668 (2013).
  19. Matzat, T., et al. Axonal wrapping in the Drosophila PNS is controlled by glia-derived neuregulin homolog Vein. Development. 142 (7), 1336-1345 (2015).
  20. Limmer, S., Weiler, A., Volkenhoff, A., Babatz, F., Klambt, C. The Drosophila blood-brain barrier: development and function of a glial endothelium. Frontiers in Neuroscience. 8, 365(2014).
  21. Ho, T. Y., et al. Expressional Profiling of Carpet Glia in the Developing Drosophila Eye Reveals Its Molecular Signature of Morphology Regulators. Frontiers in Neuroscience. 13, 244(2019).
  22. DeSalvo, M. K., et al. The Drosophila surface glia transcriptome: evolutionary conserved blood-brain barrier processes. Frontiers in Neuroscience. 8, 346(2014).
  23. BDSC Cornmeal Food. , Bloomington Drosophila Stock Center. Available from: https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.html (2017).
  24. Le, T., et al. A new family of Drosophila balancer chromosomes with a w- dfd-GMR yellow fluorescent protein marker. Genetics. 174 (4), 2255-2257 (2006).
  25. Casso, D., Ramirez-Weber, F. A., Kornberg, T. B. GFP-tagged balancer chromosomes for Drosophila melanogaster. Mechanisms of Development. 88 (2), 229-232 (1999).
  26. Halfon, M. S., et al. New fluorescent protein reporters for use with the Drosophila Gal4 expression system and for vital detection of balancer chromosomes. Genesis. 34 (1-2), 135-138 (2002).
  27. Miller, D. F., Holtzman, S. L., Kaufman, T. C. Customized microinjection glass capillary needles for P-element transformations in Drosophila melanogaster. BioTechniques. 33 (2), 366-372 (2002).
  28. Luong, D., Perez, L., Jemc, J. C. Identification of raw as a regulator of glial development. PLoS One. 13 (5), e0198161(2018).
  29. Pinsonneault, R. L., Mayer, N., Mayer, F., Tegegn, N., Bainton, R. J. Novel models for studying the blood-brain and blood-eye barriers in Drosophila. Methods in Molecular Biology. 686, 357-369 (2011).
  30. Love, C. R., Dauwalder, B. Drosophila as a Model to Study the Blood-Brain Barrier. Blood-Brain Barrier. Barichello, T. , Humana Press. New York, NY. 175-185 (2019).
  31. Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of Fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13 (3), 507-523 (1994).
  32. Sepp, K. J., Schulte, J., Auld, V. J. Peripheral glia direct axon guidance across the CNS/PNS transition zone. Developmental Biology. 238 (1), 47-63 (2001).
  33. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118 (2), 401-415 (1993).
  34. Devraj, K., Guerit, S., Macas, J., Reiss, Y. An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers. Journal of Visualized Experiments. 132, e57038(2018).
  35. Fairchild, M. J., Smendziuk, C. M., Tanentzapf, G. A somatic permeability barrier around the germline is essential for Drosophila spermatogenesis. Development. 142 (2), 268-281 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

איסוף עובריםהזרקה לזחליםנגזרת דקסטראןמיקרוסקופיה קונפוקליתייבוש עובריםדיסקציה של זחליםביטוי גנים
שיטת שלמות המוח בדם בדרוזופילה מלאנוסטר
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.