מאמר שיטה

קביעת יחסי התאימות של העצמי והאינטר-(ב) משמש שילוב יד-האבקה, מיקרוסקופיה וניתוחים גנטיים

DOI:

10.3791/60241

⸱

16 ביוני 2020

 ,  ,  , 
1Unidad de Hortofruticultura, Centro de Investigación y Tecnología Agroalimentaria de Aragón (CITA), 2Instituto Agroalimentario de Aragón - IA2 (CITA-Universidad de Zaragoza), 3Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea La Mayora (IHSM La Mayora-UMA-CSIC)

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים מתודולוגיה להקמת הצרכים של האבקה של משמש (שזיף armeniaca L.) המשלבים את התאימות העצמית (in) של מיקרוסקופ הקרינה הפלואורסצנטית עם זיהוי של ה-S-גנוטיפ על ידי ניתוח PCR.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אי-סבילות עצמית ב ורדיים נקבעת על ידי מערכת התאמה עצמית של Gamet Tic (GSI) כי הוא נשלט בעיקר על ידי multiallelic לוקוס S. בשמש, הקביעה של יחסי התאימות העצמית והבין (in) היא חשובה יותר ויותר, שכן שחרורו של מספר חשוב של זנים חדשים הביא לגידול זנים עם דרישות האבקה לא ידועות. כאן, אנו מתארים מתודולוגיה המשלבת את ההגדרה של התאמה עצמית (בתוך) באמצעות המאביקים ומיקרוסקופ עם זיהוי של ה-S-גנוטיפ על ידי ניתוח PCR. בקביעת תאימות עצמית (in), הפרחים הנמצאים בשלב בלון מכל זנים נאספו בשדה, מואבקים בתוך המעבדה, קבועים ומוכתמים בכחול אנילין להתבוננות בהתנהגות שפופרת האבקה תחת המיקרוסקופיה הפלואורסצנטית. להקמת יחסי התאמה בין זנים, דנ א מכל זנים הופק מעלים צעירים ו-S-alleles זוהו על ידי ה-PCR. גישה זו מאפשרת להקים קבוצות אי-תאימות ולהבהיר קשרי אי-תאימות בין זנים, המספקים מידע רב ערך לבחירת המאביקים המתאימים בעיצוב מטעים חדשים ולבחירת הורים מתאימים בתוכניות רבייה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אי-סבילות עצמית היא אסטרטגיה של צמחים פורחים כדי למנוע האבקה עצמית ולקדם את המעבר1. ב ורדיים, מנגנון זה נקבע על ידי מערכת התאמה עצמית של Gamet Tic (GSI) כי הוא נשלט בעיקר על ידי multiallelic לוקוס S2. בסגנון, הגן rnase מקודד את דטרמיננטה s-sטיילר, rnase3, בעוד חלבון בקופסה F, אשר קובע את הדטרמיננטה של אבקה, הוא מסווג על ידי גן sfb 4. האינטראקציה עצמית אי-תאימות מתרחשת דרך עיכוב של צמיחת שפופרת אבקה לאורך הסגנון מניעת הפריה של הביצית5,6.

בשמש, התקיימה התחדשות בין-שנים ברחבי העולם בשני העשורים האחרונים7,8. הקדמה זו של מספר גדול של זנים חדשים, מתוכניות הרבייה הציבוריות והפרטיות השונות, הביאה לגידול זנים משמשים בעלי דרישות האבקה לא ידועות8.

שיטות שונות שימשו לקביעת דרישות ההאבקה בשמש. בתחום, ניתן ליצור תאימות עצמית (in) על-ידי המאביקים מבוקרים בעצי בכלוב או בפרחים מסורס ולאחר מכן מקליטים את אחוז הפרי שהוגדר9,10,11,12. בנוסף, המאביקים מבוקרים בוצעו במעבדה על ידי vivo למחצה ב תרבות של פרחים וניתוח של התנהגות שפופרת אבקה תחת מיקרוסקופ הזריחה8,13,14,15,16,17. לאחרונה, טכניקות מולקולריות, כגון ניתוח PCR ורצף, הרשו לאפיון של קשרי אי-תאימות המבוססים על חקר הגנים של rnase ו- sfb 18,19. בשמש, 33 S-alleles דווחו (s1 עד S20, s22 אל s30, s52, s53, sv, sx), כולל alleles אחד הקשורים בתאימות עצמית (Sc)12,18,20,21,22,23,24. עד עכשיו, 26 קבוצות אי-סבילות הפכו לאורווה במין זה על פי ה- S-גנוטיפ8,9,17,25,26,27. זנים עם אותו ס-אללים הם בלתי-תואמים, בעוד שהזנים עם שינוי s-alleles אחד לפחות, וכתוצאה מכך, מוקצים בקבוצות שונות שאינן תואמות, הן תואמות.

כדי להגדיר את דרישות ההאבקה של זנים משמש, אנו מתארים מתודולוגיה המשלבת את התאימות העצמית (בתוך) של מיקרוסקופ הקרינה הפלואורסצנטית עם זיהוי של ה-S-גנוטיפ על ידי ניתוח PCR בזנים משמש. גישה זו מאפשרת להקים קבוצות אי-תאימות ולהבהיר קשרי אי-תאימות בין זנים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. קביעת תאימות עצמית (in)

  1. . לדגום את הפרחים בשדה יש צורך לאסוף את הפרחים בשלב הבלון (איור 1א), המתאים לשלב 58 בסולם bbch עבור משמש28, כדי למנוע האבקה קודמת לא רצויה.
  2. המאביקים במעבדה
    1. הסירו את האנונים של הפרחים על במת בלון ומניחים אותם על פיסת נייר להתייבש בטמפרטורת המעבדה.
    2. לאחר 24 שעות, מסננת את גרגרי האבקה באמצעות רשת משובחת (0.26 מ"מ) (איור 1ב).
    3. מחליש קבוצה של 30 פרחים באותו שלב בלונים לכל האבקה עצמית והאבקה ומניחים את הpistils על קצף פרחים במים בטמפרטורת המעבדה (איור 1ג).
    4. יד המאביק את הpistils בעזרת מכחול עם אבקה מפרחים של זנים זהה 24 שעות אחרי אה. בנוסף, המאביק קבוצה אחרת של pistils של כל זנים עם אבקה מפרחים של מאביק תואם כפקד (איור 1ד).
    5. לאחר 72 h, לתקן את pistils בתמיסה קבע של אתנול/חומצה אצטית (3:1) לפחות 24 h ב 4 ° c29. ואז למחוק את הקבע ולהוסיף 75% אתנול להבטיח כי הדגימות הן לגמרי שקוע בפתרון. ניתן לשימור דוגמאות בתמיסה זו ב-4 ° c עד לשימוש ב-8,17,30,31,32.
  3. הערכת הכדאיות של אבקה דרך נביטה של אבקה מחוץ לגופית
    1. כדי להכין את המדיום נביטה, משקל 25 גרם של סוכרוז, 0.075 g של חומצה בורית (H3בו3) ו 0.075 g של סידן חנקתי (Ca (NO3)2)33.
    2. הוסיפו את רכיבי המדיום ב-250 mL של מים מזוקקים והתמוססות לחלוטין.
    3. לחזק את המדיום הוספת 2 גרם של agarose ולערבב על ידי מתערבל.
    4. בדוק את ה-pH של המדיום באמצעות מד pH ולהתאים את הערך 7.0 עם פתרון NaOH או HCl.
    5. לחיטוי התערובת כדי לחטא את המדיום.
    6. לאחר הניקוי האוטומטי, הצנן את המדיום והפץ אותו לתוך מנות פטרי במכסה זרימה סטרילי.
    7. פזר את גרגרי האבקה של אותם זנים ששימשו להמאביקים הנשלטים במדיום נביטה של האבקה המתמצקת ולהתבונן בהם תחת המיקרוסקופ לאחר 24 שעות6.
      הערה: כדי לעקר את כיסוי הזרימה המבינארי, נקה את המשטח עם 70% אתנול והפעל את מנורת ה-UV במהלך 10 דקות.
    8. יש לאחסן את מנות פטרי במקרר ב-4 ° צ' עד השימוש.
  4. תצפיות מיקרוסקופיה
    1. רוחצים את הpistils שלוש פעמים עבור 1 h עם מים מזוקקים ולהשאיר אותם ב 5% נתרן גופרית ב 4 ° c. לאחר 24 שעות, האוטובים אותם ב 1 ק"ג/cm2 במהלך 10 דקות ב נתרן גופרית כדי לרכך את הרקמות34.
    2. המקום pistils בלוק על שקופית זכוכית, בעזרת אזמל, להסיר את trichomes סביב השחלה כדי לקבל ויזואליזציה טובה יותר של שפופרות אבקה. ואז, למחוץ את הpistils עם זכוכית כיסוי.
    3. הכינו 0.1% (v/v) הכתם כחול אנילין: לערבב 0.1 mL של כחול אנילין ב 100 mL של 0.1 N אשלגן פוספט tribasic (K3הפו4). החל טיפה של כחול אנילין על פני ההכנות להכתים כתמים התצהירים במהלך צמיחת שפופרת אבקה.
    4. להתבונן את הצינורות אבקה לאורך הסגנון על ידי מיקרוסקופ עם האפיפלואורסצנטית UV באמצעות 340-380 bandpass ו 425 longpass מסננים.

2. הפקת דנ א

  1. לדוגמה 2-3 עלים בשדה באביב. מומלץ לדגום את העלים בשלבים צעירים מאז ה-DNA המתקבל הוא באיכות גבוהה יותר רמות נמוכות של תרכובות פנופילית לעומת עלים ישנים.
  2. לחלץ דנ א גנומית בעקבות השלבים המתוארים בערכה מסחרית זמין (ראה טבלת חומרים).
  3. לנתח את הכמות והאיכות של ריכוזי DNA באמצעות ספקטרוסקופיה UV-vis (260 nm).

3. S-allele זיהוי

  1. הקמת תגובות ה-PCR
    1. הכינו דילול 50 ng/μL במים מזוקקים של כל דגימת ה-DNA.
    2. להפשיר את החומרים הPCR. לאט ולהשאיר אותם על הקרח תשאיר את הדנ א פולימראז. במקפיא עד שיהיה צורך
    3. הכינו את תגובות ההגברה באמצעות צירופים שונים של התחל. צור את המיקס של תגובת ה-PCR על-ידי שילוב הרכיבים בטבלה 1. וורטקס התגובה של ה-PCR מערבבים היטב ומפיצים את אמצעי האחסון המצוין עבור השילובים השונים של התחל לכל היותר בצלחת ה-PCR. לאחר מכן, הוסף 1 μL של דילול ה-DNA בכל באר.
    4. הציבו את צלחת ה-PCR בציקלוניר והפעל את תוכנית ה-PCR המתאימה בטבלה 1.
  2. לנתח את השברים מוגבר. ישנן בעיקר שתי דרכים שונות לנתח את החלקיקים המגבתים של ה-PCR: אלקטרופורזה קפינגית (לסה נ) עם התחל המסומנת בצבעי פלורסנט או כמגביר הדמיה של אלקטרופורזה בג ג'ל בצבעי היסוד שאינם מתויג.
    1. אלקטרופורזה קפילר
      1. כדי להכין את מאגר הטעינה, לערבב 35 μL של הטופסשינוי עם 0.45 μL של התווית שינוי גודל סטנדרטי. מערבולת הכימית לערבב היטב, ולאחר מכן לוותר 35.5 μL לתוך הבאר של לוחית הקורא.
      2. הוסף 1 μL של מוצר ה-PCR לתוך הבאר. בנוסף, להוסיף טיפה של שמן מינרלי כדי למנוע אידוי מים.
      3. הכן את לוחית ההפרדה הוספת מאגר הפרדה.
      4. השתמש בתוכנה המסחרית הכלולה במנתח הגנים (ראה טבלת חומרים). צור צלחת מדגם חדש ולשמור את שמות לדוגמה עבור כל הבארות על הצלחת.
      5. בחר את שיטת הניתוח. במקרה זה, לשלב את הדגימות ב 90 ° c עבור 120 s, להזריק ב 2.0 kV עבור 30 s, ונפרד ב 6.0 kV עבור 35 min.
      6. הכנס את שני הצלחות. לתוך מנתח הגנים ממלאים את מערך נימי עם מים מזוקקים.
      7. העמיסו את ג'ל פוליאקרילמיד (LPA) הפטנט ליניארי. לבסוף, לחץ על הפעל.
    2. ג'ל אלקטרופורזה
      1. הכן 1% agarose ג'ל הוספת 1.5 g של ביולוגיה מולקולרית כיתה agarose ב 150 מ ל של 1 x טאה (טריס-אצטט-EDTA) אלקטרופורזה במאגר (40 mM Tris, 20 מ"מ חומצה אצטית, ו 1 מ"מ EDTA ב-pH 8.0). מתמוסס את הצמח על ידי חימום מיקרוגל עבור 2-3 דקות.
      2. כדי להמחיש את ה-DNA, להוסיף 4 μL של כתם חומצה גרעין (ראה לוח חומרים) ולערבב בעדינות.
      3. הוסיפו מסרק ג'ל, עם בארות מספיקות לסולמות, שולטת ודוגמיות, למגש ג'ל. ואז, לשפוך לאט את התערובת לתוך באמצע מגש ג'ל ולהימנע בועות.
      4. תנו לג להתקרר למשך 30-45 דקות בטמפרטורת החדר עד שהג התחזק לחלוטין. להציג את הג בחדר האלקטרופורזה, להסיר את המסרק ג'ל ולמלא את התא עם מספיק 1x מאגר טה כדי לכסות את ג'ל.
        הערה: בדוק את מיקום הג. יש להציב את הבארות קרוב לקוטב השלילי מאז שהוא מחויב לעבר הקתודה.
      5. הוסף 5 μL של מאגר טעינה (0.1% (v/v) ברומאופנול כחול) למוצרי ה-PCR וערבבו היטב.
      6. כדי להעריך את גודל הלהקות, טען 5 μL של סולם משקל מולקולרי DNA (ראה טבלת חומרים).
      7. העמיסו את הדגימות לתוך בארות נוספות של ג'ל.
      8. לאחר כל הדגימות ואת הסולם דנ א מולקולרית משקל טעונים, להפעיל את הג ב 90 V עבור 1-1.5 h, עד קו הצבע הכחול הוא כ-75% אורך של ג'ל.
      9. דמיינו את הלהקות בתוך ממאיר לחומצות גרעין.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לימודי האבקה בשמש דורשים שימוש בפרחים בשלב הבלון המאוחר יום לפני התזה (איור 1א). שלב זה נחשב לחיובי ביותר עבור האוסף האבקה והפיסטיל, שכן מבנים פרחוניים הם כמעט בוגרים, אבל הדחיניות עדיין לא התרחשה. זה מונע הפרעה של אבקה בלתי רצויה, לא רק של אבקה מאותו פרח אלא גם מפרחים אחרים, מאז הכותרת הסגורה לעכב את הגעתו של חרקים נושאת אבקה חיצונית. גרגרי האבקה מלאים בקלות באמצעות רשת משובחת (איור 1ב) מביתההארחה, שהונח בעבר על פיסת נייר בטמפר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באופן מסורתי, זנים מסחריים משמשים באירופה היו בעלי תאימות עצמית36. למרות זאת, השימוש בזנים של צפון אמריקה בלתי-מתאימים לעצמי כהורים בתוכניות רבייה בעשורים האחרונים הביא לשחרורו של מספר גדל והולך של זנים חדשים שאינם תואמים לעצמי עם דרישות האבקה מוכרות7,8,37. לפיכך, הקביעה של יחסי התאימות העצמית והבין (in) בזנים משמש חשובה יותר ויותר. זה מודגשת באותם אזורים שבהם החורף מצמרר הוא הפחתת, מאז השנה הגבוהה וריאצי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

. למחברים אין מה לגלות

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי Ministerio de Ciencia, האוניברסיטה האירופית לפיתוח האזור האירופי, האיחוד האירופי (AGL2016-77267-R, ו AGL2015-74071-ג'ין); המכון הלאומי לשימור (RFP2015-00015-00, RTA2017-00003-00); הקרן האירופית למדעי החברה, האיחוד האירופי (גריפו באסדדו A12_17R), Biodiversidad, וAgroseguro דרום אמריקה

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Agarose D1 Low EEOConda8010.22
BIOTAQ DNA פולימראז ערכתBiolineBIO-21060
מיקרוסקופ שדה בהירLeica MicrosystemsDM2500
CEQ תוכנת מערכתבקמן קולטר
DNeasy Plant Mini KitQIAGEN69106
dNTP סט, 4 x 25 ומיקרו; molBiolineBIO-39025
GenomeLab DNA גודל ערכה סטנדרטית - 400בקמן קולטר608098
GenomeLab GeXP מערכת ניתוח גנטיבקמן קולטר
GenomeLab מאגר הפרדהבקמן קולטר608012
GenomeLab ג'ל הפרדה LPA-1בקמן קולטר391438
HyperLadder 100bpBiolineBIO-33029
HyperLadder 1kbBiolineBIO-33025
מערכת ניתוח תמונותLeica Microsystems
Molecular Imager VersaDoc MP 4000 system Bio-Rad170-8640
NanoDrop ספקטרופוטומטר אחדתרמו פישר מדעי13-400-518
pH-meter BASIC 20Crison
Phusion  ערכת PCR בנאמנות גבוההתרמו פישר מדעיF553S
פאוור פאק פ 25 Tביומטריה
פריימר קדימהאיזוגן מדעי
פריימר הפוךאיזוגן מדעי
כמות תוכנה אחתביו-ראד
מיקרוסקופ סטריאוסקופילייקה מיקרוסיסטמסMZ-16
תת-תא GTBio-Rad
SYBR בטוח DNA ג'ל כתםתרמו פישר סיינטיפיקS33102
T100 Thermal CyclerBio-Rad1861096
Taq DNA פולימראזQIAGEN201203
מעמד אנכי חיטויJP Selecta
החייםהחיים

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Silva, N. F., Goring, D. R. Mechanisms of self-incompatibility in flowering plants. Cellular and Molecular Life Sciences. 58, 1988-2007 (2001).
  2. Charlesworth, D., Vekemans, X., Castric, V., Glémin, S. Plant self-incompatibility systems: A molecular evolutionary perspective. New phytologist. 168, 61-69 (2005).
  3. Tao, R., et al. Identification of stylar RNases associated with gametophytic self-incompatibility in almond (Prunus dulcis). Plant and Cell Physiology. 38, 304-311 (1997).
  4. Ushijima, K., et al. Structural and transcriptional analysis of the self-incompatibility locus of almond: Identification of a pollen-expressed F-box gene with haplotype-specific polymorphism. The Plant cell. 15, 771-781 (2003).
  5. Bedinger, P. A., Broz, A. K., Tovar-Mendez, A., McClure, B. Pollen-Pistil Interactions and Their Role in Mate Selection. Plant Physiology. 173, 79-90 (2017).
  6. Guerra, M. E., Rodrigo, J. Japanese plum pollination: A review. Scientia Horticulturae. 197, 674-686 (2015).
  7. Zhebentyayeva, T., Ledbetter, C., Burgos, L., Llacer, G. Apricot. Fruit Breeding. Badenes, M. L., Byrne, D. , Springer. Boston, MA. 415-458 (2012).
  8. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing Production in the New Generation of Apricot Cultivars: Self-incompatibility, S-RNase Allele Identification, and Incompatibility Group Assignment. Frontiers in Plant Science. 9, 527(2018).
  9. Egea, J., Burgos, L. Detecting Cross-incompatibility of Three North American Apricot Cultivars and Establishing the First Incompatibility Group in Apricot. Journal of the American Society for Horticultural Science. 121, 1002-1005 (1996).
  10. Rodrigo, J., Herrero, M. Effects of pre-blossom temperatures on flower development and fruit set in apricot. Scientia Horticulturae. 92, 125-135 (2002).
  11. Julian, C., Herrero, M., Rodrigo, J. Flower bud differentiation and development in fruiting and non-fruiting shoots in relation to fruit set in apricot (Prunus armeniaca). Trees. 24, 833-841 (2010).
  12. Muñoz-Sanz, J. V., Zuriaga, E., López, I., Badenes, M. L., Romero, C. Self-(in)compatibility in apricot germplasm is controlled by two major loci, S and M. BMC Plant Biology. 17, 82(2017).
  13. Burgos, L., Berenguer, T., Egea, J. Self- and Cross-compatibility among Apricot Cultivars. HortScience. 28, 148-150 (1993).
  14. Rodrigo, J., Herrero, M. Evaluation of pollination as the cause of erratic fruit set in apricot "Moniqui". Journal of Horticultural Science. 71, 801-805 (1996).
  15. Milatović, D., Nikolić, D., Krška, B. Testing of self-(in)compatibility in apricot cultivars from European breeding programmes. Horticultural Science. 40 (2), 65-71 (2013).
  16. Milatović, D., Nikolić, D., Fotirić-Aksić, M., Radović, A. Testing of self-(in)compatibility in apricot cultivars using fluorescence microscopy. Acta Scientiarum Polonorum, Hortorum Cultus. 12 (6), 103-113 (2013).
  17. Herrera, S., Rodrigo, J., Hormaza, J. I., Lora, J. Identification of Self-Incompatibility Alleles by Specific PCR Analysis and S-RNase Sequencing in Apricot. Int J Mol Sci. 19, 3612(2018).
  18. Romero, C., et al. Analysis of the S-locus structure in Prunus armeniaca L. Identification of S-haplotype specific S-RNase and F-box genes. Plant Molecular Biology. 56, 145-157 (2004).
  19. Halász, J., Pedryc, A., Hegedus, A. Origin and dissemination of the pollen-part mutated SC haplotype which confers self-compatibility in apricot (Prunus armeniaca). New Phytologist. 176, 792-803 (2007).
  20. Halász, J., Hegedus, A., Hermán, R., Stefanovits-Bányai, É, Pedryc, A. New self-incompatibility alleles in apricot (Prunus armeniaca L.) revealed by stylar ribonuclease assay and S-PCR analysis. Euphytica. 145, 57-66 (2005).
  21. Vilanova, S., Romero, C., Llacer, G., Badenes, M. L., Burgos, L. Identification of Self-(in)compatibility Alleles in Apricot by PCR and Sequence Analysis. Journal of the American Society for Horticultural Science. 130, 893-898 (2005).
  22. Feng, J., et al. Detection and transcript expression of S-RNase gene associated with self-incompatibility in apricot (Prunus armeniaca L.). Molecular Biology Reports. 33, 215-221 (2006).
  23. Zhang, L., et al. Identification of self-incompatibility (S-) genotypes of Chinese apricot cultivars. Euphytica. 160, 241-248 (2008).
  24. Wu, J., et al. Identification of S-haplotype-specific S-RNase and SFB alleles in native Chinese apricot (Prunus armeniaca L). Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 84, 645-652 (2009).
  25. Szabó, Z., Nyéki, J. Blossoming, fructification and combination of apricot varieties. Acta Horticulturae. 293, 295-302 (1991).
  26. Halász, J., Pedryc, A., Ercisli, S., Yilmaz, K. U., Hegedűs, A. S-genotyping supports the genetic relationships between Turkish and Hungarian apricot germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135, 410-417 (2010).
  27. Lachkar, A., et al. Identification of self-(in)compatibility S-alleles and new cross-incompatibility groups in Tunisian apricot (Prunus armeniaca L.) cultivars. The Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 88, 497-501 (2013).
  28. Pérez-Pastor, A., Ruiz-Sánchez, M. C., Domingo, R., Torrecillas, A. Growth and phenological stages of Búlida apricot trees in South-East. Agronomie. 24, 93-100 (2004).
  29. Williams, J. H., Friedman, W. E., Arnold, M. L. Developmental selection within the angiosperm style: using gamete DNA to visualize interspecific pollen competition. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96, 9201-9206 (1999).
  30. Julian, C., Herrero, M., Rodrigo, J. Anther meiosis time is related to winter cold temperatures in apricot (Prunus armeniaca L.). Environmental and Experimental Botany. 100, 20-25 (2014).
  31. Guerra, M. E., López-Corrales, M., Wünsch, A., Rodrigo, J. Lack of Fruit Set Caused by Ovule Degeneration in Japanese Plum. Journal of the American Society for Horticultural Science. 136 (6), 375-381 (2011).
  32. Guerra, M. E., Wünsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Flower Emasculation as the Cause for Lack of Fruit Set in Japanese Plum Crosses. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (6), 556-562 (2010).
  33. Hormaza, J. I., Pinney, K., Polito, V. S. Correlation in the tolerance to ozone between sporophytes and male gametophytes of several fruit and nut tree species (Rosaceae). Sexual Plant Reproduction. 9, 44-48 (1996).
  34. Alcaraz, M. L., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Pistil Starch Reserves at Anthesis Correlate with Final Flower Fate in Avocado (Persea americana). PLOS ONE. 8 (10), 78467(2013).
  35. Tao, R., et al. Molecular typing of S-alleles through Identification, Characterization and cDNA cloning for S-RNases in Sweet Cherry. Journal of the American Society for Horticultural Science. 124, 224-233 (1999).
  36. Burgos, L., et al. The self-compatibility trait of the main apricot cultivars and new selections from breeding programmes. Journal of Horticultural Science. 72, 147-154 (1997).
  37. Hormaza, J. I., Yamane, H., Rodrigo, J. Apricot. Genome Mapping and Molecular Breeding in Plants, Volume 4 Fruits and Nuts. Kole, C. , Springer. New York, NY. 171-187 (2007).
  38. Benmoussa, H., Ghrab, M., Ben Mimoun, M., Luedeling, E. Chilling and heat requirements for local and foreign almond (Prunus dulcis Mill.) cultivars in a warm Mediterranean location based on 30 years of phenology records. Agricultural and Forest Meteorology. 239, 34-46 (2017).
  39. Rodrigo, J., Herrero, M., Hormaza, J. I. Pistil traits and flower fate in apricot (Prunus armeniaca). Annals of Applied Biology. 154, 365-375 (2009).
  40. Williams, R. R. Techniques used in fruit-set experiments. Towards Regulated Cropping. Williams, R. R., Wilson, D. , Grower Books. London. 57-61 (1970).
  41. Sutherland, B. G., Robbins, T. P., Tobutt, K. R. Primers amplifying a range of Prunus S-alleles. Plant Breeding. 123, 582-584 (2004).
  42. Murray, M. G., Thompson, W. F. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA. Nucleic Acids Research. 8, 4321-4325 (1980).
  43. Porebski, S., Bailey, L. G., Baum, B. R. Modification of a CTAB DNA Extraction Protocol for Plants Containing High Polysaccharide and Polyphenol Components. Plant Molecular Biology Reporter. 15 (1), 8-15 (1997).
  44. Rogers, S. O., Bendich, A. J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues. Plant Molecular Biology. 5 (2), 69-76 (1985).
  45. Hormaza, J. I. Molecular characterization and similarity relationships among apricot (Prunus armeniaca L.) genotypes using simple sequence repeats. Theoretical and Applied Genetics. 104, 321-328 (2002).
  46. Sonneveld, T., Tobutt, K. R., Robbins, T. P. Allele-specific PCR detection of sweet cherry self-incompatibility (S) alleles S1 to S16 using consensus and allele-specific primers. Theoretical and Applied Genetics. 107, 1059-1070 (2003).
  47. Hegedus, A., Lénárt, J., Halász, J. Sexual incompatibility in Rosaceae fruit tree species: molecular interactions and evolutionary dynamics. Biologia Plantarum. 56 (2), 201-209 (2012).
  48. Fernández i Martí, A., Gradziel, T. M., Socias i Company, R. Methylation of the Sf locus in almond is associated with S-RNase loss of function. Plant Molecular Biology. 86, 681-689 (2014).
  49. Company, R. S. i, Kodad, O., Martí, A. F. i, Alonso, J. M. Mutations conferring self-compatibility in Prunus species: From deletions and insertions to epigenetic alterations. Scientia Horticulturae. 192, 125-131 (2015).
  50. Boskovic, R., Tobutt, K. R. Correlation of stylar ribonuclease zymograms with incompatibility alleles in sweet cherry. Euphytica. 90, 245-250 (1996).
  51. Cachi, A. M., Wünsch, A. S-genotyping of sweet cherry varieties from Spain and S-locus diversity in Europe. Euphytica. 197 (2), 229-236 (2014).
  52. Zuriaga, E., et al. An S-locus Independent Pollen Factor Confers Self-Compatibility in "Katy" Apricot. PLoS ONE. 8 (1), 53947(2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Self IncompatibilityFluorescence MicroscopyPCR AnalysisS Allele IdentificationCapillary ElectrophoresisAniline Blue StainingPollen Tube GrowthIncompatibility GroupsApricot Cultivars

מאמרים קשורים