מאמר שיטה

הערכה סטריאוולוגית של אורך סיבים Cholinergic בגרעין באסליס של מיינרט של המוח עכבר

DOI:

10.3791/60405

⸱

5 בפברואר 2020

 ,  , 
1Laboratory for Alzheimer's Disease and Aging Research, Kansas City Veterans Affairs Medical Center, 2Department of Neurology, University of Kansas Medical Center, 3Department of Molecular and Integrative Physiology, University of Kansas Medical Center, 4The University of Kansas Alzheimer's Disease Center

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אורך סיבים עצביים בתוך מבנה תלת מימדי של אזור המוח הוא פרמטר אמין כדי לכמת שלמות מבנית נוירואליות ספציפית או ניוון. מאמר זה מפרט שיטת כימות סטריאוולוגית למדידת אורך סיבים cholinergic בתוך הגרעין של מיינרט בעכברים כדוגמה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אורך הcholinergic או מגוון עצבי באזורי מוח שונים מתואמים לעתים קרובות לתפקוד הספציפי של האזור. סטריאולוגיה היא שיטה שימושית לכמת פרופילים עצביים של מבני מוח שונים. כאן אנו מספקים פרוטוקול סטריאולוגי מבוסס תוכנה כדי להעריך את האורך הכולל של סיבי cholinergic בגרעין באסליס של מיינרט (NBM) של המוח הקדמי הבסיס. השיטה משתמשת בחללית כדור חלל עבור הערכות אורך. הסיבים cholinergic הם דמיינו על ידי כולין acetyltransferase (צ'אט) חיסוני עם החזרת peroxidase-diaminobenzidine (מערכת האיתור ההרפ). פרוטוקול הצביעת תקף גם עבור שערוך מספר סיבים ותאים באזורי מוח שונים באמצעות תוכנת סטריאולוגיה. פרוטוקול סטריאולוגיה יכול לשמש להערכת כל הפרופילים הליניריים כגון סיבי האמנואיטיב, סיבים דואמיאנרגיות/catecholaminergic, סיבים מואריגיים, תהליכים אסטוניים, או אפילו פרופילי כלי דם.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אומדנים כמותיים של אורך ו/או צפיפות סיבי עצב במוח הם פרמטרים חשובים של מחקרים נוירופתולוגיים. אורך הcholinergic, הדוגיים והאקסזיות באזורי מוח שונים מתואמים לעתים קרובות לפונקציות הספציפיות של האזור. מכיוון שהפצת אקסונים אלה הוא בדרך כלל הטרוגנית, עיצוב מבוסס סטריאולוגיה משמש כדי למנוע הטיה במהלך הדגימה. בדיקת כדור החלל של סטריאולוגיה תוכננה לספק מדדים יעילים ואמינים של מבנים כמו שורה כגון סיבים עצביים באזור של עניין1. הבדיקה עושה כדור וירטואלי כי הוא מוטל בשיטתיות ברקמה כדי למדוד צמתים קו עם פני השטח של הגשוש. מכיוון שאי אפשר לשים בדיקות כדור ברקמה לניתוח, התוכנה הזמינה מסחרית מספקת כדור תלת-מימדי וירטואלי (3D), שהוא בעצם סדרה של עיגולים קונצנטריים של קטרים שונים המייצגים את פני השטח של לווין הספירה.

נוירוניוון cholinergic סלקטיבי הוא אחד המאפיינים העקביים של מחלת אלצהיימר (AD)2,3,4. שידור cholinergic לקוי נחשב לגורם סיבתי לירידה קוגניטיבית ב-AD. חוסר תפקוד Cholinergic ניכר גם בהפרעות נפשיות רבות אחרות כגון פרקינסון, התמכרות, סכיזופרניה. היבטים שונים של cholinergic נוירוניוון הם לומדים בדגמי בעלי חיים (g., הפחתת אצטילכולין5, שיחה חלבון6, cholinergic סיבים נוירוניוון בקרבת שלטי עמילואיד6, ולהקטין את cholinergic סיבים ו הסינפטיות הסינפטית7,8). ניוון סיבים הוא האמין להתרחש מוקדם יותר מאשר אובדן עצבי, כי cholinergic הפסד עצבי לא תמיד נצפתה במחקרים. רוב הנוירונים הcholinergic הם במוח הקדמי הבסיס ואת גזע המוח, ואת הפרויקט אקסונים שלהם אזורי המוח שונים כגון מערבולות וההיפוקמפוס. NBM ממוקם המוח הקדמי הבסיס והוא נמצא אחד מאזורי המוח המושפעים בדרך כלל ב-AD.

שיטת השבר של סטריאולוגיה מבוססת על דגימה אקראית שיטתית של רקמה ברמות מרובות. שבר דגימת מקטע (SSF) הוא דגימה שיטתית של מקטעים שאינם מבוססי מחשב עבור שיטת השבר של סטריאולוגיה. שבר בדגימת שטח (ASF) הוא משבר של אזור באזור העניין במקטע. שבר בדגימת עובי (TSF) הוא השבר של עובי המקטע. בדיקת כדור החלל מאפשרת לנו לכמת פרופילים של עניין בתחום תלת-ממדי במקומות שעברו שבירה. כאן אנו משתמשים כדור חלל בדיקה להערכת האורך הכולל של סיבי cholinergic ב NBM של המוח העכבר כדי להמחיש את ההליכים. הפרוטוקול הנוכחי מספק פרטים על עיבוד רקמות, שיטות דגימה עבור סטריאולוגיה, מכתים אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן צ'אט, סטריאולוגיה משוחדת להערכת אורך סיבים cholinergic וצפיפות סיבים ב NBM של המוח העכבר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים לשימוש בעלי חיים אלה אושרו על-ידי קנזס סיטי ותיקי מרכז רפואי המרכז לטיפול בבעלי חיים מוסדיים הוועדה לשימוש. שמונה עשרה חודשים-עכברים המבטאים מוטציה שוודית בטא עמילואיד מקודמי חלבון (APPswe) ו C57/BL6 WT שלהם שימשו בעבר לניסויים. פרטי הרבייה והגנוטיפים מקבלים ב-הוא ואח '8.

1. הפרזיה ועיבוד רקמות

  1. עכברים מורדם באמצעות הזרקה תוך הצפק עם קטמין (100 מ"ג/ק"ג) ו xylazine (10 מ"ג/ק"ג). צביטה בבהונות כדי לאשר חוסר תגובה לפני שתמשיך9.
  2. לאחר מעשה עם ~ 50 mL של קרח קר 0.1 M מלוחים של Dulbecco פוספט באגירה (DPBS) ואחריו 4% פאראפורמלדהיד (בתחתית) ב 0.1 מטר פוספט מאגר (PB)10.
    התראה: הכיוון הכדורגלן רעיל. השתמש בציוד הגנה אישי (PPE) כאשר עובדים עם הלגון.
  3. להסיר מוחות10 ולטבול ב 4% בלרוק ב 0.1 M PB ב 4 ° c עבור הקיבעון עבור 24 שעות. לשטוף עם dpbs 3x.
  4. שינוי ל 15% סוכרוז פתרון ב 0.1 DPBS לילה ולאחר מכן 30% סוכרוז פתרון ב 0.1 M DPBS עבור עוד 48 h ב 4 ° c.
  5. הסירו את הרקמה מפתרון הסוכות והקפא בחדר מוגדר מראש לטמפרטורה של 20 ° c. ניתן לאחסן דגימות קפואות בצינורות אטומים ב-80 ° c עד לאחר בנייה.
  6. הטמע רקמות מיטבי הטבעה חיתוך טמפרטורה בינונית (ראה טבלת חומרים) והר על דיסק דגימה. גזור סדרתי 30 יקרומטר סעיפים עבים במישור ילתית באמצעות קריוטום ולאסוף את כל הסעיפים כתוצאה מכך 24 לוחיות התרבות מילא עם פתרון כימיות (30% גליצרול, 30% אתילן גליקול, 40% dpbs; איור 1א – ג). . חנות במקפיא של 20 ° c
    הערה: סעיפים עבים יותר (לדוגמה, 50 μm) עדיפים כאשר הם אפשריים. ודא שהסעיפים נשמרים בסדר גזירה וכל המקטעים מכימיות לחלוטין. צלחת 96 הבאר יכול לשמש כחלופה 24 לוחות טוב לאסוף מקטעים.
  7. לכסות את הבארות עם איטום צלחת כדי למנוע אידוי וייבוש. צלחות בחנות ב-20 ° c עד לשימוש נוסף. מקטעים המאוחסנים ב-20 ° c הם יציבים למשך מספר חודשים עבור הצ האימונוהיסטוכימיה.

2. בחירת מקטעים סיסטמטית עבור IHC

הערה: מחקר פיילוט צריך להיעשות כדי לדעת את המספר הכולל של סעיפים הנדרשים כדי להשיג מקדם מקובל של שגיאה (לסה נ). ערך ה-CE הוא ביטוי לכמות השגיאה הכוללת בשגרת הדגימה. הערך הנמוך ביותר מייצג את השגיאה המינימלית וערך CE נמוך מ-0.1 נחשב למקובל על-ידי התוכנה המשמשת כאן (ראה טבלת חומרים)11.

  1. זיהוי הסעיפים הראשונים והאחרונים עבור כל מוח על-ידי השוואת תכונות מורפולוגיות עם אטלס המוח הרגיל של העכבר כגון פרנקלין ו Paxinos. NBM מתחיל בברגמה-0.0 מ"מ ומסתיים ב-1.6 מ"מ. לכן, כ 50 סעיפים מכילים NBM. המספר הכולל של סעיפים הוא אחד הפרמטרים הדרושים במהלך סטריאולוגיה. הבחירה של כלמקטע 8 (ssf = 1/8) נתן מספר כולל של 6-7 סעיפים עבור הניתוח והניב CE מקובל עבור שערוך אמצעי האחסון ושערוך אורך סיבים במחקר הפיילוט שלנו.
  2. התחל באופן אקראי באחד משמונת המקטעים הראשונים ולאחר מכן הפעל לדוגמה כל מקטע8 עד למקטע האחורי האחרון המכיל את nbm (איור 1ג).

3. אימונוהיסטוכימיה

  1. העבר את החלקים הקריוגרפים לטמפרטורת החדר בכימיות ולאחר מכן 0.1 מטר פוספט מאגר (PB) ב 6 צלחות היטב.
  2. שטוף 3 x ב-PB.
  3. דגירה ב 0.3% H2O2 ב מתנול עבור 15 דקות.
  4. לשטוף את 3x ב מלוחים טריס באגירה (TBS).
  5. מודטה ב 0.25% טריטון X-100 ב TBS עבור 30 דקות.
  6. לחסום עם 10% סרום השור רגיל (NBS) ב 0.1% טריטון X-100 ב TBS עבור 30 דקות.
  7. דגירה עם 1:1000 דילול של עז אנטי אדם נוגדנים בצ הראשי (ראה טבלת חומרים) ב-TBS עם 0.1% טריטון X-100 ו 1% nbs עבור 48 h ב 4 ° c.
  8. שטוף 3x ב-TBS בטמפרטורת החדר. בצע את כל הדגירה הנוספת וכביסה בטמפרטורת החדר.
  9. מודשה עם הנוגדן המשני של שור אנטי עז (ראה טבלת חומרים) עבור 1 h.
  10. שטוף 3x ב-TBS.
  11. מכון דגירה עם avidin-ביוטין – peroxidase קומפלקס (ראה טבלת חומרים).
  12. שטוף 3x ב-TBS.
  13. פיתוח תוך שימוש בתמיסה משופרת peroxidase מצע (ראה טבלת חומרים) על פי המלצות היצרן.
    התראה: הנגיעה היא גורם מסרטן חשוד. הוא רעיל על ידי מגע ואינהלציה. השתמש ב-PPE כאשר אתה עובד עם האפשרות.
  14. לשטוף את הקטע כמה פעמים עם מים מזוקקים לשמור על טריס pH = 7.6.
  15. טעינת המקטעים בשקופיות הgelatinized. ניתן לשים את כל המקטעים מרקמה אחת באותה שקופית. האוויר יבש את הסעיפים, מייבשים 2x עבור 5 דקות כל אחד עם 70%, 90%, 95%, ו 100% אתנול, ולאחר מכן לנקות את הסעיפים עם 2 10 מינימום שוטף שטיפת. כיסוי הסעיפים באמצעות הרכבה בינונית (ראה טבלת חומרים).
    הערה: זמן העיבוד של התייבשות וניקוי משפיע על עובי הסעיפים. לכן יש להשתמש באותם תנאים עבור כל המקטעים. במחקר הנוכחי, את הערך הממוצע עבור עובי הסופי היה 21.11 ± 0.45 μm.
  16. . השאר את החלקים במכסה המנוע יבשים החלקים היבשים מוכנים לסטריאולוגיה.

4. סטריאולוגיה

הערה: עיין בטבלת החומרים למיקרוסקופ ולתוכנה שבשימוש. מטרה טבילה עם פתח מספרי (NA) > 1.2 יהיה שימושי ויש להשתמש בו אם נדרש. יש לקבץ שקופיות לפי מסוג גנוטיפ או קבוצת טיפול ומקודד. סטריאולוגיה מלאה עבור מחקר אחד צריך להתבצע על ידי אותו אדם והאדם ביצוע סטריאולוגיה צריך להיות עיוור לזהות של שקופיות בודדות או קבוצה נבדק1,12,13.

  1. פתח מחקר חדש בתוכנה. (קובץ > מחקר חדש). תיבת הדו 'אתחול מחקר' תיפתח. מלא את פרטי הלימוד, באמצעות ריבוי רמות (מבוסס שבר) (איור 2א).
  2. לחץ פעמיים על 'עוצמה' תחת פרמטרים, אשר יפתח את תיבת הדו ' עוצמה '. ציין את שם תכונת הריבית ובחר באפשרות 'אזור נקודה ספירה'. לחץ על הבא.
  3. לחיצה כפולה על הפרמטר הבא, 'אורך'.
    1. ספק שם של התכונה (למשל, 'L') בחר 'ספירה' בדיקה ולחץ על הבא.
  4. לאחר מכן, לחץ על תיבת הדו 'אתחול מחקר', שתפתח את התיבה 'אתחול מקרה'. מלא את פרטי התיק. יש לקודד את הקבוצות לפני תחילת המחקר. המספר הכולל של המקטעים הוא מספר המקטעים החל מהמקטע הראשון המכיל את אזור העניין למקטע האחרון המכיל את אזור הריבית (ראה שלב 2.1). מרווח הדגימה של המקטע הוא שמונה, מכיוון שכלמקטע 8 נבחר עבור כתמים של ihc.
  5. לחיצה על הבא פותחת את תיבת הדו 'אתחול בדיקה', אשר תגדיר באופן אוטומטי את ההגדלה הנמוכה ביותר עבור בחירת האזור ושערוך אמצעי האחסון. אשר את ההגדרות ובדוק אם ניתן לזהות את אזור הריבית בהגדלה הנמוכה שנבחרה. לחיצה כפולה על 'אמצעי אחסון ' ומילוי 50,000 יקרומטר3 לכל נקודה עבור שבר אמצעי האחסון באזור. לחץ על בוצע.
  6. תחת הגדלה של אובייקט (גבוהה), הגדר אורך ב-63 x או 100x. לחץ פעמיים על 'אורך' כדי לפתוח את תיבת הדו הספרה אורך ולהגדיר את קוטר הספרה 10 Μm. לחץ בוצע.
    הערה: אזור השמירה צריך להיקבע בהתאם לעובי הממשי של המקטעים. על המפעיל לבדוק את עובי הסעיפים באתרים מרובים כדי למנוע נזק כלשהו. במידת הצורך, התאימו את עובי אזור השמירה בהתאם לעובי המקטע.
  7. הגדר ערכים מתאימים עבור אזור מסגרת, גובה מסגרת, אזור שמירה וריווח מסגרות.
    הערה: ערכים אלה תלויים בטרוגניות של פרופילי האובייקטים (סיבים) באזור הלמידה. אזור מסגרת של 400 יקרומטר2, גובה מסגרת של 10 יקרומטר, אזור השמירה של 2 יקרומטר, ומרווח מסגרת של 300 יקרומטר נותן ערכים מקבילים CE להערכת אורך סיבים ב-nbm. יש לבצע מחקר פיילוט עם ערכים אלה לפני שהוא מתקדם למקרה הבא.
  8. בצע את ההוראות המסופקות על-ידי התוכנה לאחר כל שלב. ההוראות מופיעות כתיבת דו-שיח ו/או בתחתית המסך.
  9. הוסף את סעיף 1.
  10. בהגדלה נמוכה (5x), הגדר את אזור הריבית על-ידי יצירת גבול שרירותי סביב ה-NBM. לחץ על הלחצן הבא בפינה השמאלית של חלון הווידאו. בצע את ההוראות ולאשר את כל הנקודות הירוקות הן ב-NBM. הנקודות ניתן לכלול או נשלל על ידי לחיצה על הנקודות.
    הערה: לא קיים גבול מוגדר מסביב ל-NBM. הבחירה מוגדרת בעיקר על ידי חוקר. הצ + cholinergic נוירונים של NBM ניתן לצפות הקפסולה הפנימי (ic) ו גלובוס pallidus (GP). בפרוטוקול זה, ic עם צ'אט + cholinergic נוירונים והתחזיות שלהם (סיבים) ו GP כולו כלול ב NBM (איור 1D).
  11. בצע את ההוראות והחלף ל-63 x עבור מדידות סיבים בשבר הנוכחי. תיבת הדו 'עובי מקטע' מופיעה על המסך. הגדר את המשטח העליון והתחתון של המקטע כדי למדוד את העובי הממשי של המקטע. יש להשתמש בתנועת ציר Z הידנית. לחץ על בוצע.
    הערה: אם אין סיבים באזור, ניתן לדלג על השלב כדי לעבור למיקום השבר הבא.
  12. הזז את ציר Z לאט מלמעלה למטה בגובה המסגרת של המקטע וסמן את כל הסיבים המצטלבים על פני השטח של לווין הכדור הווירטואלי (איור 3). כשתסיים, לחץ על הבא כדי לעבור למיקום הבא.
  13. לאחר השלמת כל השברים, התוכנה תבקש להוסיף את הסעיף הבא. חזור על שלבים 4.9 – 4.12 עבור כל ששת או שבעה חלקים של הרקמה.
    1. בסוף, התוכנה תיצור תוצאה עבור האירוע המציג את ערכי CE (איור 4). אם ה-CE מקובל, המשך למקרה הבא. קובץ > מקרה חדש. אם ה-CE אינו מקובל (איור 4א), התוכנה מספקת המלצות לשינוי חלק מהפרמטרים. במקרים רבים, הפחתת מרווח המסגרת מקטינה את ערכי ה-CE לטווח קביל (איור 4ב').
  14. לאחר השלמת כל המקרים, ליצור תוצאות עבור כל מקרה וקבוצה (קובץ ≫ תוצאות).

5. ניתוח וסטטיסטיקה

  1. התוכנה מספקת נתונים עבור כל מדגם וכל קבוצה. התוכנה עצמה מחשבת שברים כגון SSF, ASF ו-TSF, ומספק את עוצמת ההתייחסות הכוללת (VREF) ואת האורך הכולל (L) של הסיבים באזור הייחוס (במקרה זה, nbm) (איור 4ב). יצא את הנתונים ושמור או העתק לתוכנה הסטטיסטית של בחירה בין ניתוח קבוצתי. Table 1 מציג נתוני תוצאות טיפוסיים עבור ניתוח סטטיסטי. ניתוח צפיפות סיבים (Lv) על ידי חלוקת אורך הסיבים הכולל עם עוצמת ההתייחסות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תוצאות הנציג מוצגות בטבלה 1 ובאיור 5. קבוצה ג', שפוענחו כקבוצת appswe (APP), הייתה נמוכה באופן משמעותי באורך הסיבים (איור 5B) וצפיפות אורך סיבים (איור 5ג) לעומת הטיפוסים הפראיים שלהם (פראי). התוצאות הראו כי לא היה הבדל משמעותי בעוצמת ה-NBM בין שתי הקבוצות שנותחו (איור 5א).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו להדגים שיטה כדי להעריך את הצפיפות של סיבים cholinergic ב NBM באמצעות כדור החלל (ספירה) בדיקה. בדיקה זו מעריכה את אורך הסיבים הכולל באזור הריבית. האורך הכולל יכול להיות מחולק על ידי נפח של האזור כדי לקבל את צפיפות סיבים. כדי להעריך את עוצמת הקול של האזור, נעשה שימוש בפעולת השירות count של נקודות בצורת Cavalieri. שיטת מספר הנקודות של Cavalieri היא מערך מיותר משוחד ויעיל של אמצעי אחסון הפניה תלת-ממדי עבור כל אזור. השיטה מחשבת הערכה של האזור על משטח חתוך של מקטע על-ידי ספירת נקודות (המייצגים שברים באזור) ולאחר מכן מכ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

. למחברים אין מה לגלות

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו היתה נתמכת על ידי מענקים W.Z.S. ממחקר ופיתוח רפואי שירות, המחלקה לעניינים ותיקי (הצטיינות סקירה 1I01 BX001067-01A2), האגודה לאלצהיימר (NPSPAD-11-202149), ומשאבים מן המערב הביו רפואי . קרן המחקר

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת ABCVector LaboratoriesPK6100
נוגדן נגד ChATMillipore, MA, ארה"בAB144P
בקר נגד עזים IgG-BSantacruz ביוטכנולוגיהSC-2347
סרום בקר,סיגמא-אולדריץ' למבוגרים, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בB9433
CryostatLieca Microsystems, באפלו גרוב, אילינוי, ארה"ב
Dulbecco's Phosphate Buffered מלחSigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בD5652
אתילן גליקולסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב324558
גליצרולסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בG2025
מי חמצןסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בH1009
ערכת Immpact-DABמעבדות וקטורSK4105תמיסת מצע פרוקסידאז DAB משופרת
קטמיןווסטוורד פרמצבטיקה, ניו ג'רזי, ארה"ב0143-9509-01
מיקרוסקופLieca Microsystems, באפלו גרוב, אילינוי, ארה"בAF6000מצויד בבמה ממונעת ומצלמה דיגיטלית צבעונית IMI-tech
טמפרטורת חיתוך אופטימלית (O.C.T.) הטמעת מדיוםמדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית, פנסילבניה, ארה"ב62550-12
ParaformaldehydeSigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"בP6148
Permount הרכבהבינונית מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית, PA, ארה"ב17986-01
Stereologer SoftwareStereology Resource Center, Inc. סנט פטרסבורג, פלורידה, ארה"בStereologer2000מותקן במחשב שולחני של Dell.
טריטון X-100סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בT8787
בסיס טריזמהסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בT1503בסיס טריסמה
הידרוכלורידסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בT5941טריס הידרוכלוריד
קסילזיןבאייר, לברקוזן, גרמניהרומפון
קסילנס, כיתה היסטולוגיתסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, MO534056

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mouton, P. R., Gokhale, A. M., Ward, N. L., West, M. J. Stereological length estimation using spherical probes. Journal of Microscopy. 206, Pt 1 54-64 (2002).
  2. Whitehouse, P. J., Price, D. L., Clark, A. W., Long Coyle, J. T., DeLong, M. R. Alzheimer disease: evidence for selective loss of cholinergic neurons in the nucleus basalis. Annals of Neurology. 10 (2), 122-126 (1981).
  3. Davies, P., Maloney, A. J. Selective loss of central cholinergic neurons in Alzheimer's disease. The Lancet. 2 (8000), 1403(1976).
  4. Bartus, R. T., Dean, R. L., Beer, B., Lippa, A. S. The cholinergic hypothesis of geriatric memory dysfunction. Science. 217 (4558), 408-414 (1982).
  5. Savonenko, A. Episodic-like memory deficits in the APPswe/PS1dE9 mouse model of Alzheimer's disease: relationships to beta-amyloid deposition and neurotransmitter abnormalities. Neurobiology of Disease. 18 (3), 602-617 (2005).
  6. Perez, S. E., Dar, S., Ikonomovic, M. D., DeKosky, S. T., Mufson, E. J. Cholinergic forebrain degeneration in the APPswe/PS1DeltaE9 transgenic mouse. Neurobiology of Disease. 28 (1), 3-15 (2007).
  7. Stokin, G. B. Axonopathy and transport deficits early in the pathogenesis of Alzheimer's disease. Science. 307 (5713), 1282-1288 (2005).
  8. He, M. GRK5 Deficiency Leads to Selective Basal Forebrain Cholinergic Neuronal Vulnerability. Scientific Reports. 6, 26116(2016).
  9. JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance. Journal of Visualized Experiments. , Cambridge, MA. (2019).
  10. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).
  11. Mouton, P. R. Unbiased Stereology-A Concise Guide. , Johns Hopkins University Press. (2011).
  12. West, M. J. Getting started in stereology. Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (4), 287-297 (2013).
  13. West, M. J. Space Balls Revisited: Stereological Estimates of Length With Virtual Isotropic Surface Probes. Frontiers in Neuroanatomy. 12, 49(2018).
  14. Nikolajsen, G. N., Kotynski, K. A., Jensen, M. S., West, M. J. Quantitative analysis of the capillary network of aged APPswe/PS1dE9 transgenic mice. Neurobiology of Aging. 36 (11), 2954-2962 (2015).
  15. Gutierrez-Jimenez, E. Disturbances in the control of capillary flow in an aged APP(swe)/PS1DeltaE9 model of Alzheimer's disease. Neurobiology of Aging. 62, 82-94 (2018).
  16. Gundersen, H. J., Jensen, E. B., Kieu, K., Nielsen, J. The efficiency of systematic sampling in stereology--reconsidered. Journal of Microscopy. 193, Pt 3 199-211 (1999).
  17. Zhang, Y. Quantitative study of the capillaries within the white matter of the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease. Brain and Behavior. 9 (4), 01268(2019).
  18. McNeal, D. W. Unbiased Stereological Analysis of Reactive Astrogliosis to Estimate Age-Associated Cerebral White Matter Injury. Journal of Neuropathology Experimental Neurology. 75 (6), 539-554 (2016).
  19. Liu, Y. Passive (amyloid-beta) immunotherapy attenuates monoaminergic axonal degeneration in the AbetaPPswe/PS1dE9 mice. Journal of Alzheimer's Disease. 23 (2), 271-279 (2011).
  20. Gagnon, D. Evidence for Sprouting of Dopamine and Serotonin Axons in the Pallidum of Parkinsonian Monkeys. Frontiers of Neuroanatomy. 12, 38(2018).
  21. Boncristiano, S. Cholinergic changes in the APP23 transgenic mouse model of cerebral amyloidosis. Journal of Neuroscience. 22 (8), 3234-3243 (2002).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

ChATHRP DAB

מאמרים קשורים