הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

עכברוש עורק הראש מבוקר לחץ על פגיעה בבלון מגזרי עם יישום טיפולי Periadventitial

5.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60473

⸱

9 ביולי 2020

 , 

במאמר זה

סיכום

הפציעה בבלון עורק התרדמה של החולדה מחקה את הליך האנגיופלסטיקה הקליני המבוצע כדי לשחזר את זרימת הדם בכלי טרשת עורקים. מודל זה גורם לתגובת פגיעה עורקית על ידי התנפצות דופן העורקים, ו denuding את השכבה האינטימית של תאי אנדותל, בסופו של דבר גורם שיפוץ ותגובה היפרפלסטית מולדת.

תקציר

מחלות לב וכלי דם נשאר הגורם המוביל למוות ונכות ברחבי העולם, בין השאר עקב טרשת עורקים. לוחית טרשת עורקים מצמצמת את שטח הפנים הזוהר בעורקים ובכך מפחיתה זרימת דם נאותה לאיברים ולרקמות דיסטליות. קלינית, נהלי revascularization כגון אנגיופלסטיקה בלון עם או בלי מיקום סטנט שואפים לשחזר את זרימת הדם. למרות הליכים אלה מחדש את זרימת הדם על ידי הפחתת נטל פלאק, הם פוגעים בקיר כלי הדם, אשר יוזם את תגובת ריפוי העורקים. תגובת הריפוי הממושכת גורמת לרסטנוזיס עורקי, או להצטמצם מחדש, ובסופו של דבר מגבילה את ההצלחה ארוכת הטווח של הליכי revascularization אלה. לכן, מודלים פרה-קוליניים של בעלי חיים הם חלק בלתי נפרד מניתוח המנגנונים הפתופיזיולוגיים המניעים את restenosis, ומספקים את ההזדמנות לבחון אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. דגמי מורין זולים וקלים יותר לתפעול מאשר מודלים גדולים של בעלי חיים. בלון או פגיעה תיל הם שני אופני פציעה מקובלים בשימוש במודלים מורין. מודלים של פגיעת בלון במיוחד מחקים את הליך האנגיופלסטיקה הקלינית וגורמים נזק הולם לעורק להתפתחות restenosis. בזאת אנו מתארים את הפרטים הכירורגיים לביצוע וניתוח היסטולוגי של מודל הפגיעה בבלון עורק הראש של עכברושים שעבר שינוי, הנשלט בלחץ. בנוסף, פרוטוקול זה מדגיש כיצד יישום periadventitial המקומי של טיפולים יכול לשמש כדי לעכב היפרפלזיה ניאוינטימיאלית. לבסוף, אנו מציגים מיקרוסקופיית פלואורסצנטיות של יריעות אור כגישה חדשנית להדמיה ותדמיינות של הפגיעה העורקית בשלושה ממדים.

מבוא

מחלות לב וכלי דם (CVD) נשאר הגורם המוביל למוות ברחבי העולם1. טרשת עורקים היא הגורם הבסיסי לרוב התחלואה והתמותה הקשורות ל- CVD. טרשת עורקים היא הצטברות של פלאק בתוך העורקים שתוצאתו לומן צר, מעכב זלוף דם תקין לאיברים ורקמות דיסטליות2. התערבויות קליניות לטיפול טרשת עורקים חמורה כוללים אנגיופלסטיקה בלון עם או בלי מיקום סטנט. התערבות זו כרוכה בקידום קטטר בלון לאתר של פלאק, וניפוח הבלון כדי לדחוס את השלט לקיר העורקים, הרחבת האזור הזוהר. הליך זה פוגע בעורק, עם זאת, ייזום תגובת פגיעה עורקית3. הפעלה ממושכת של תגובת פציעה זו מובילה לרסטנוזיס עורקי, או להצטמצמות מחדש, משנית להיפרפלזיה ניאו-ינטילית ולשיפוץ כל....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של אוניברסיטת צפון קרוליינה בצ'אפל היל.

1. הליכים טרום ניתוחיים

  1. לעקר מכשירים כירורגיים. אוטוקלאב כל המכשירים הכירורגיים לפני הניתוח. אם אתם מבצעים מספר ניתוחים באותו יום, יש לעקר מכשירים בין ניתוחים באמצעות מעקר חרוזים יבש.
  2. הכן טיפולית 25% פלורוניק-127 ג'ל (מדולל במים מזוקקים סטריליים).
  3. הגדר קטטר בלון פוגרטי 2F כדי insufflator ומניחים את קצה הבלון של הקטטר במזרק 1 מ"ל מלא תמיסת מלח.
  4. לגרום להרדמה על ידי הצבת החולדה בתא עם 5% isoflurane.
    1. תוציא את החולדה מהתא ותקליט את משקל החולדה. השתמש קוצץ שיער כדי לגלח פרווה ע....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 1 מציג את כל החומרים והכלים הכירורגיים המשמשים לביצוע ניתוח זה. המטוקסילין & אאוסין (H&E) הכתמת חתכים עורקיים פצועים של שבועיים מאפשרת הדמיה ברורה של היפרפלזיה ניאוינטילית. איור 2 מציג תמונות מייצגות של חתכי עורקים מוכתמים ב-H&E של עורק בריא, פצוע ומטופל. איור 2 מתאר גם כיצד לכמת את רמת ההיפרפלזיה הניאו-ינטילית בעורק פצוע באמצעות ImageJ, תוכנה נפוצה לעיבוד תמונה. באמצעות גישה זו, ההיקף של הניאוינטימה, כמו גם הלאמינה.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הפציעה בבלון עורק הראש של החולדה היא אחד המודלים הנפוצים ביותר שנחקרו בבעלי חיים. הן מודל פגיעת הבלון המקורי3 והן וריאציית הפציעה הסגמנטית הנשלטת על ידי לחץשונה 10 הודיעו היבטים רבים של תגובת הפגיעה בעורקים המתרחשת גם בבני אדם, כאשר המגבלות המעטות הן כי פקקת עשירה בפיברין מתפתחת לעתים רחוקות ודלקת מקומית היא מינימלית בהשוואה לדגמי פציעה אחרים כגון ארנב היפרכולסטרולמי או מודלים חזיריים9,22. החולדות יכולות גם להיות מו.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים בנוגע לפרסום כתב יד זה.

תודות

N.E.B נתמכה על ידי מענק הכשרה מהמכון הלאומי למדעי בריאות הסביבה (5T32ES007126-35, 2018), ומלגת קדם דוקטורט של איגוד הלב האמריקאי (20PRE35120321). E.S.M.B. היה חוקר KL2 נתמך חלקית על ידי UNC קליני ותרגום מדע פרס-K12 חוקרים תוכנית (KL2TR002490, 2018), ואת הלב הלאומי, ריאות, מכון הדם (K01HL145354). המחברים מודים לד"ר פבלו אריאל מהמעבדה לשירותי מיקרוסקופיה של UNC על הסיוע ב-LSFM. מיקרוסקופיית פלואורסצנטיות של יריעות אור בוצעה במעבדה לשירותי מיקרוסקופיה. המעבדה לשירותי מיקרוסקופיה, המחלקה לפתולוגיה ורפואת מעבדה, נתמכת בחלקה על ידי P30 CA016086 מרכז סרטן מרכז הליבה תמיכה מענק למרכז הסרטן מקיף UNC Lineberger.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1 מ"ל מזרקפישר14955450
1 מ"ל מזרק עם מחטBD309626
2 קטטר צרפתי לכריתת תסחיף בלון פוגארטיEdwards LifeSciences120602F
4-0 Ethilon (ניילון) תפרEthicon Inc662H
4-0 Vicryl SutureEthicon IncJ214H
7-0 תפר פרולןEthicon Inc8800H
70% אלכוהול
אנטי-ארנב Alexa Fluor 647Thermo Fisher ScientificA21245
Atropine SulfateVedco Incלשימוש וטרינרי
Cotton SwabsPuritan806-WC
Curved HemostatsFine Science Tools13009-12
מלקחיים מעוקלים עדיניםכלי מדע עדינים11203-25
מספריים עדיניםכלי מדע עדינים14090-11
גזהCovidien2252
IHC-Tek מדלל (pH 7.4)IHC WorldIW-1000
InsufflatorMerit MedicalIN4130
תמיסת
יודמשחת עיניים סיכהDechraלשימוש וטרינרי
מאיו מספרייםמדע עדינים14010-15
מיקרו סרפינסכלי מדע עדינים18055-05
מספריים מיקרו-דיסקציהכלי מדע עדינים15004-08
מהדק מיקרו-סרפין מריחת מלקחייםכלי מדע עדינים18057-14
מחזיק מחטFine Science Tools12003-15
Pluronic-127 (מדולל במים סטריליים)Sigma-AldrichP244325% מוכן
ארנב אנטי-CD31Abcamab28364
מפסקמהדקי נייר מכופפים עובדים היטב
רימדיל (קרפרופן)Zoetis Incלשימוש וטרינרי
תמיסתמלח
מלקחיים סטנדרטייםFine Science Tools11006-12
וילון סטריליDynarex4410
פיני
אתילי כלי T

מקורות

  1. American Heart Association. Cardiovascular Disease: A Costly Burden for America, Projections Through 2035. American Heart Association CVD Burden Report. , (2017).
  2. Singh, R. B., Mengi, S. A., Xu, Y. J., Arneja, A. S., Dhalla, N. S. Pathoge....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

פגיעה בבלון בעורק התרדיפגיעה בבלון תחת בקרת לחץמיקרוסקופיה פלואורסצנטית בלוח אורניתוח היפרפלזיה ניאואינטימליתטכניקת סגירה של כלי דםשיטת חתך ארטריוטומיההעורק התרדי המשותףניתוח היסטולוגי של עורקיםיישום ג'ל טיפולי