מאמר שיטה

קוונפיקציה של הדבקה תא הגידול בצומת לימפה קריוסעיפים

DOI:

10.3791/60531

⸱

9 בפברואר 2020

 ,  ,  , 
1Molecular Oncology Center, Hospital Sírio-Libanês

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה וזולה המאפשרת כימות של תאים סרטניים דבק לצומת לימפה (LN) קריודורים. In-חסיד תאים סרטניים מזוהים בקלות על ידי מיקרוסקופ אור ואישר על ידי שיטה מבוססת-פלואורסצנטית, מתן אינדקס הדבקה החושף את הזיקה של תא הגידול מחייב לתוך הכריכה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גידול בלוטות לימפה ניקוז (LNs) הם לא רק מסננים של פסולת המיוצר הגידול. הם אחד האתרים האזוריים הנפוצים ביותר של מגורים זמניים של תאים סרטניים המופץ בחולים עם סוגים שונים של סרטן. הזיהוי של תאים אלה המתגוררים בתוך הגידול הוא בסמנים חשובים הקשורים פרוגנוזה גרועה החלטות הטיפול הפסיקה. מודלים העכבר האחרונות הצביעו על תאים סרטניים בתוך המתגוררים יכול להיות מקור משמעותי של תאים ממאירים עבור גרורות מרוחקות. היכולת לכמת את הadהיסוס של תאי הגידול לתוך מכימומה הוא מד קריטי במחקר ניסיוני המתמקד בזיהוי של גנים או איתות מסלולים הרלוונטיים הפצת הלימפה/גרורתית. מכיוון LNs הם מבנים תלת-ממדיים מורכבים עם מגוון רחב של הופעות ויצירות בסעיפים רקמות בהתאם למישור של סעיף, מטריצות שלהם קשה לשכפל ניסויים בתוך מבחנה באופן מלא בשליטה. כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה וזולה המאפשרת את הקוונפיקציה של תאים סרטניים דבק כדי בהקפאה חלקים. שימוש במקטעים סידוריים של אותו LN, אנו להתאים את השיטה הקלאסית שפותחה על ידי Brodt להשתמש בתוויות לא רדיואקטיביות ולספור ישירות את מספר תאים הגידול הקפדה על פני השטח בשטח. In-חסיד תאים סרטניים מזוהים בקלות על ידי מיקרוסקופ אור ואישר על ידי שיטה מבוססת על-ידי זריחה, מתן אינדקס הדבקה החושף את הזיקה לתא-מחייב ב-LN, אשר היא עדות מרמזת של שינויים מולקולריים באיגוד האהדה של אינטגרציה להתאים שלהם ב-ligands ליגנדס.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גרורות סרטן היא הסיבה העיקרית לכישלון הטיפול ואת ההיבט הדומיננטי סכנת חיים של סרטן. כפי היסוד 130 לפני שנים, התפשטות גרורתית תוצאות כאשר האליטה של תאי הגידול הפיצו (DTCs, "זרעים") לרכוש יכולות ביולוגיות ספציפיות המאפשרות להם להתחמק אתרים עיקריים ולהקים צמיחה ממאיר באתרים מרוחקים ("האדמה")1. לאחרונה, מספר מושגים חדשניים לגבי היחסים "זרעים וקרקע" הופיעו, כגון אינדוקציה של נישות גרורתית (המשגיחה כ "אדמה פורייה" הדרושה "זרעים" כדי לשגשג), הזריעה עצמית של גידולים ראשוניים על ידי dtcs, "זרע" תרדמה באיברים משניים ומודל מתקדמות מקבילי של גרורות2.

עבור ממאירות מוצק ביותר, DTCs יכול לשכון ולהתגלות באיברים רבים mesenchymal, כגון מח עצם ובלוטות הלימפה (LNs) בחולים עם או בלי ראיות של גרורות קליני. מכיוון LNs ניקוז הגידול הם המיקום הראשון של התפשטות האזור של DTCs, במצב LN הוא אינדיקטור תחזיות חשוב והוא משויך לעיתים קרובות עם החלטות טיפול בפסיקה3. עבור חלק מסוגי הגידולים, הקורלציה בין במעמד ותוצאות גרועות יותר היא חזקה, כולל ראש וצוואר4,5, שד6, הערמונית7, ריאה8, קיבה9, המעי הגס10,11 בלוטת התריס סרטן12.

Lns הם איברים קטנים דמוי של מערכת הלימפה, כי הם מכוסים בתאים רשתית מוקף עם כלי הלימפה. איברים אלה נחוצים בהחלט לתפקוד מערכת החיסון13. LNs לפעול כפלטפורמות מושכים עבור תאים מחזורי החיסונית, להביא את לימפוציטים ו אנטיגן הצגת תאים יחד14. עם זאת, LNs גם למשוך תאים סרטניים במחזור. לאורך עשורים, LNs היו בתמונה כמסלולים פסיבי של הובלה תאים סרטניים גרורתי. עם זאת, מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי תאים סרטניים עשוי גם להיות מונחה לכיוון LNs על ידי כימוטקטיק (נוגדנים) ו/או האפוטוטקטיק (אלמנטים מטריקס מושג) רמזים מופרש על ידי אנדותל הלימפה15. כדוגמאות, ביטוי יתר של קולטן CCR7 בתאי הגידול מקלה על ההדרכה של תאים מלנומה גרורתית לקראת הגידול-LNs מרוקן16. בנוסף, מסחטות חלבונים ב-LN לספק פיגום דבק עבור גיוס והישרדות של תאים סרטניים במחזור17. למעשה, מרוקן הגידול LNs לספק קרקע פורייה לזריעה של DTCs, אשר ניתן לשמור במדינות מתרבים או רדום על ידי מסוים בתוך אותות סביבתיים מיקרו18. גורלם הסופי של פקדי הזמן המתגוררים בעיר הוא שנוי במחלוקת; כמה עבודות מציעות כי תאים אלה הם אינדיקטורים פסיבי של התקדמות גרורתית19, בעוד אחרים מציעים כי הם בסבירות גבוהה יותר מייסדי ההתנגדות (על-ידי לזריעה עצמית אתרים ראשיים) ו/או לפעול כמאגרים סלולריים עבור גרורות (הפצת "זרעים" לצמיחת סרטן שלישוני)20,21. לאחרונה, שימוש במודלים פרה-קליניים, זה הוכיח כי חלק של אלה בתוך המתגוררים DTCs באופן פעיל הפולשים כלי הדם, נכנס למחזור הדם והכובש את הריאות21.

בהתחשב בכך נוכחות של תאים סרטניים ב LNs הוא סמן עבור תוקפנות סרטן והחלטיות, במחקר זה, אנו אופטימיזציה שיטה קלאסית שפותחה על ידי Brodt22 כדי כימות הגידול למדוד בלתי מותאם למדידת הגידולים לתאי מבחנה. השימוש בכדאיות מבוססת-פלואורסצנטית איפשר לנו לפתח פרוטוקול בעלות נמוכה, מהירה, רגישה וידידותית לסביבה (לא רדיואקטיבית) לאיתור שינויים דביקים בין תאי גידול לבין מקטעי בהקפאה. באמצעות התאים של סרטן השד MCF-7 המבטא רמות שונות של ביטוי גנים NDRG4 ועכברוש בסעיפים קפואים להדגים את השיטה, הראנו כי פרוטוקול זה איפשר מתאם טוב בין הדבקה תא הגידול כדי LNs בתוך מבחנה בתוך גרורות שנצפו בחולי סרטן השד24.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

LNs התגלו מגוויות טרי של מבוגר בריא חולדות Wistar הוקרב על ידי פריקה צוואר הרחם. עקבנו אחר הנחיות NIH לכאב ומצוקה בחיות מעבדה וכל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה ומחקר בעלי חיים של מכון המחקר והחינוך של בית החולים Sírio-Libanês (CEUA P 2016-04).

הערה: כל הרקמות הקפואות הטריות נחשבות לחומרים ביולוגיים ויש לטפל בהן באמצעות אמצעי זהירות מתאימים לבטיחות ביולוגית.

1. Lymphadenectomy וקריוסיסיב

  1. מניחים גוויות טריים של חולדות Wistar למבוגרים (180-220 g) שוכב בתוך שכיבה על לוח חיתוך נקי בטמפרטורת החדר.
    הערה: LNs יש לאסוף עד 30 דקות לאחר המתת חסד.
  2. רסס את גופת החולדה עם אלכוהול איזופרופילי 70% והשתמש בכלים מעוקרים לקציר.
  3. הרם את עור הבטן בעזרת מלקחיים ופתח חלל עם חתך אמצעי מבלי לפגוע ברקמה הבסיסית, תוך חשיפת מעיים הבטן. משוך החוצה את המעי, LNs החזה ואת הבטן להיות גלוי (איור 1).
  4. השתמש במספריים של מספריים בעלי עצות בוטה כדי להימנע מפגיעה בעורק הראשי העליון השוכב מאחור.
    הערה: בהתאם למיקום של הצומת לימפה מחדש, יש צורך לנקות רקמות אחרות דבקה אותו, כגון רקמה מצע.
  5. הקציר LNs לתוך 15 מ ל צינורות חרוטי המכיל 5 מ ל של מלוחים סטרילי מאגור פוספט (PBS).
  6. להשליך כראוי את גוויות החולדה.
  7. להסיר LNs טרי מ-PBS, רול ולייבש את הצומת על נייר סינון יבש. מניחים אותו בצלחת פטרי קטנה ולהוסיף פתרון הטבעה של דגימות רקמות קפואות (O.C.T.) עבור 2 דקות.
  8. להעביר ולהתמצא הפנים למטה במיקום הרצוי בבסיס של הקריוזקן, עם מספיק בדיוק O. C כדי לכסות את זה. להימנע בועות ליד הרקמה. משטח הקרקע הוא. החלק התחתון של הקריומיושן
  9. באופן מיידי להקפיא את הקריומד במקרר קלקר עם קרח יבש. כאשר יש עדיין חלק קטן של O.C.T. הקפואה (~ 20-35 s), להעביר את המדגם לרדיד אלומיניום ולמקם אותו קריר עם קרח יבש תוך המשך להקפיא דגימות אחרות. בסוף, לאחסן את כל הדגימות ב-80 ° c עד הפחתת.
  10. מקטע את LN עם עובי התאמת מקטע התאמה ל 5-8 μm. העברת הקפאה של שקופיות על מיקרוסקופ.
    הערה: לפני שאתה מוותר, הסר את הדגימות הקפואות ממקפיא-80 ° c ואפשר להם לתקן את הטמפרטורה בחדר המיקרו-מיקרו-סטטיסטיקה ב-22 ° c עבור כ -30 דקות. ניתן לאחסן את השקופיות המכילות ב-80 ° c עד חודש אחד.

2. תיוג סלולארי עם צבעי פלורסנט

הערה: צבעי פלורסנט נמצאים בשימוש נרחב בביולוגיה של תאים. אנחנו מעדיפים להשתמש התיוג הארוך שרשרת התוויות (dii (C18), עירור 549 nm, פליטה 565 nm) כי הם בהירים, יציב ניתן להוסיף ישירות לתקשורת התרבות, אינו משפיע על הכדאיות התא או המאפיינים דבק תא25,26.

  1. תאים המונתק גדלים תחת תנאים אידיאליים (כלומר, במדיום מלא) ולהשעות מחדש בינונית ללא סרום בצפיפות של 106 תאים/mL.
  2. הוסף 1 מ ל של השעיית תא (106 תאים) לצינור a15 mL ו תווית עם דיל (C18) (2 μg/mL) עבור 10 דקות ב 37 ° c.
    הערה: לאחר 5 דקות, בעדינות מתפרעים את הצינורות כדי למנוע משקעי תאים וכתמים של תאי ממדים. צפיפויות גדולות יותר דורשות זמני דגירה ארוכים יותר עבור כתמים אחידים. זמן דגירה אופטימלי עבור הצביעת התא משתנה עם קו התאים. זה יכול להיות יותר כימות באמצעות FL2 המקובלת זרימה cy, לנסות ערוץ זיהוי (איור 2א).
  3. צנטריפוגה את שפופרות ההשעיה בתווית ב 300 x g עבור 4 דקות.
  4. הסר את הסופרנטנט ושטוף פעמיים ב -10 מ ל של מדיום ללא סרום. לשחזר את התאים כדורי אדום. השהה מחדש את התאים בגודל של 106 תאים/mL ב-סרום ללא מדיום עם 0.1% בסרום (bsa).

3. מנות מקדימות עם פתרון פולי-L-ליזין או BSA כבקרת זריעה (אופציונלי)

הערה: השתמשנו מנות תרבות התא מצופה מראש עם PLL כמו משטחי טעינה חיוביים שליטה כדי להבטיח כי קבוצות נסיוניות שונות של תאים סרטניים הופרה באותו מספר, כמו גם משטחים מצופי BSA כפקדים שליליים.

  1. בתנאים סטריליים, כדי להכין את PLL-or BSA-מצופה בארות, להוסיף 300 μL של PLL (0.1% w/v ב H2o) או bsa (מדולל ב 2.5% w/v ב h2o) ישירות לצלחת 24-הבאר ו מודלת לילה ב 4 ° c.
  2. להסיר את הפתרון על ידי השאיפה, לשטוף בעדינות את פני השטח עם PBS סטרילי ומייבשים את הצלחת בטמפרטורת החדר במכסה העור-רקמה לפני זריעת התאים.
    הערה: הכרכים הסופיים של PLL או BSA חייבים להיות מותאמים בהתאם לאזור של צלחות היטב שונות.

4. זריעת פלורסנט-התווית תאים סרטניים על בתוך בהקפאה או PLL/BSA-מצופה בארות

הערה: כפקדים ניסיוניים, השתמשנו (1) מנות תרבות התא מצופות מראש עם PLL או BSA ו-(2) מקטעים רצופים של אותו b לניסוי (ראה פירוט זה באיור 2D), שבו האחרון יהיה למזער וריאציות אזוריות בהרכב מטריצה (ecm) של כל מקטע LN, אשר בתורו יכול להכתיב את קצב עבור שיטת הדבקה של תא הגידול הבא, בחר באיכות גבוהה ורציפים מקטעי בהקפאה.

  1. שוטפים בעדינות את הקריודורים פעמיים עם PBS ומייבשים עם PBS במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.
  2. חסימת הדבקה לא ספציפית לקריודורים עם 2.5% BSA עבור 30 דקות ב-37 ° c. השתמש בתאי השטיפה האימונוהיסטוכימיה ובעריסות לאמינה כדי להבטיח כי כל ה-O. C. T הוסר במהלך השטיפה והincubations.
  3. מסננים את ה-BSA העודפים על מגבת נייר יבשה, מייבשים את המתאר של מקטעי LN בעזרת מטלית כותנה וממקיפים את המקטעים באמצעות עט פאפ.
  4. עבור שיטת הדבקה של תא הגידול, להוסיף 100 μL של השעיית תא (משלב 2.4) לכל מקטע LN מוקף או גם בצלחות 24-היטב PLL-מצופה ולמקם אותו בארון מחולל לחות עבור 1-2 h ב 37 ° c בחממה המקובלת בתרבות התא.
    הערה: הנפח הסופי של השעיית תאים צריך להיות מותאם על פי השטח של LNs שונים מוקפים.
  5. שטוף בעדינות את התאים הלא מחסיד ארבע פעמים עם PBS. תקן את התאים הפלורסנט הנותרים חסיד עם 3.7% פורמלדהיד ב-PBS עבור 15 דקות בטמפרטורת החדר.

5. קוונפיקציה ידנית של המדד הדביק

הערה: המדד הדביק (כלומר, תאים סרטניים/in mm2) הושג באמצעות מטרה 10x ובאופן ידני לספור את מספר התאים הסרטניים, מזוהה בקלות על ידי מיקרוסקופ אור ואישר על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטית (איור 2ד), באזורים הלימפה לימפה של מספר שדות עצמאיים (השיג באמצעות

  1. השתמש במיקרוסקופ פלורסנט עם מטרה 10x לקחת תמונות TIFF נפרדות בשני ערוצים המתאימים לשדות הבהירים והמוארים בצבע אדום (איור 2ד). שם ושמור תמונות אלה באופן שיטתי.
  2. הפעל את ImageJ/פיג'י, פתח את התמונות וקבע את קנה המידה. יש להשתמש בסולם כיול (לדוגמה, שליט מיקרומטר 1 מ"מ) (איור 2ג).
  3. פתח את התמונה של סרגל המיקרומטר (או מיקרומטר שלב), בחר את כלי הקו הישר וצייר קו ישר המגדיר מרחק ידוע.
  4. בתפריט ' ניתוח ', בחר ' קבע קנה מידה'. המרחק בפיקסלים יתמלא בהתאם לאורך (בפיקסלים) של הקו שצויר בשלב 5.3. המרחק הידוע יתמלא במרחק האמיתי (במקרה זה, במילימטרים) וביחידת האורך בשדה ' יחידת אורך ' (במקרה זה, במילימטרים).
  5. לחץ על הלחצן הכללי (כיול זה חל על כל התמונות שנפתחו בהפעלת imagej/פיג'י) ולחץ על אישור.
  6. הלימפה האזור הצומת כימות: בחר את הכלי שרביט ועל ידי לחיצה כפולה, לפתוח את הגדרות הכלי מטה . הגדר מצב כמחוברל-8. לחץ בתמונה והגדר את הסובלנות עד לבחירת כל בלוטות הלימפה בתמונה ולחץ על אישור. כדי למדוד את האזור, פתח את ' נתח ' | מדידה (CTRL + M). האזור מבוטא ביחידות שנקבעו קודם לכן.
  7. תא הגידול כימות: לפתוח את מיקרוסקופ אור/תמונות זריחה בתוכנת פיג'י. בחר תוספים | לנתח את | מונה תאים | . מונה תאים לחץ על התמונה כדי להיות כמותית ולחץ על לחצן אתחול בחלון מונה התא. בחר סוג מונה (1-8) ולחץ על התאים בתמונה. כדי לאתחל את התמונה הבאה, לחץ על לחצן איפוס בחלון המונה של התא, פתח את התמונה החדשה וחזור על כל השלבים.
    הערה: המדד האדהזיה מבוטא כמספר תאי גידול מחסיד לכל אזור LN (תאים/mm2).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו ממחישים את היכולת על ידי הערכת הפוטנציאל הדביק LN של פלורסנט אדום MCF-7 סרטן השד ביטוי רמות שונות של הגן NDRG4 (המכונה NDRG4-חיוביים ו NDRG4-שלילי תאים), מאפטור שלילי של beta1 אינטגרציה באשכולות במשטח התא24, על ידי בחינת שברים של בתאי הגידול החולדה in-חסיד. דוגמאות לתמונות הגלם של פרוטוקול זה מוצגות באיור 2. כפי שנצפה באיור 2ב, המבנה של התאים החסיד מעוגל בצורת, והם מפוזרים באופן מאוד ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מערכת הלימפה הפצת תאים סרטניים דורש מגוון של אירועים מונחה תאים מורכבים. הם ליזום עם ניתוק התאים מהגידול העיקרי ואת שיפוץ של מטריצה החילוץ (ecm) האדריכלות, והם נתמכים על ידי כימוצ מתמשך הגירה פעילה דרך כלי לימפה lymphatics en בדרך הזקיף lns. אם תאים סרטניים לדבוק ולשרוד LNs, הם יכולים בקלות להתפשט לאיברים משניים אחרים. כאן נתאר שיטה קלה לניתוח פונקציונלי מהיר ובעלות נמוכה של אינטראקציות דביקות ספציפיות בין תאי גידול לבין LNs קפואים.

מבנית, LNs הם בדידים ספוג, כמו ההמונים של רשתות צפופה ונרחבת ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

. למחברים אין מה לגלות

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים לד ר רוסאנה דה לימה פאגאנו ואנה קרולינה Pinheiro קמפוס לסיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מ: FAPESP-סאו פאולו מחקר קרן (2016/07463-4) ולודוויג המכון לחקר הסרטן (LICR).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
15 מ"ל צינורות חרוטייםקורנינג352096
2-פרופנולMerck109634
ספסל למינרי זרימהאסקו סל תרבית
לדיסקLeica14020139126
סרום בקר אלבומיןסיגמא-אולדריץ'A9647-100
בקבוק תרבית תאים T-25 ס"מ2Corning430372
CryostatLeicaCM1860 מברשת
עם מגנטLeica14018340426
DiIC18בדיקות מולקולריותV-22885
סרום בקר עוברי (FBS)Life Technologies12657-029
מיקרוסקופ פלואורסצנטיNikon Eclipse 80
חממת Forma Series II CO2 ThermoScientific
FormaldehydeSigma-Aldrich252549
סכין גילוח חד פעמי בפרופיל גבוהLeica14035838926
קוביית דגירה (IHC)KASVIK560030
מיקרוסקופ הפוךאולימפוסCKX31
איזופלורן 100 מ"לCristá lia
Liquid Bloquer Super Pap PenAbcam, ריאגנטים למדעי החייםab2601
תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית "OCT"Sakura4583
תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)Life Technologies70011-044
פולי-L-ליזיןסיגמא-אולדריץ'P8920
RPMIGibco31800-022
פיפטות סרולוגיות 1 מ"לJet BiofilGSP010001
פיפטות סרולוגיות 10 מ"לJet BiofilGSP010010
פיפטות סרולוגיות 2 מ"לJet BiofilGSP010002
פיפטות סרולוגיות 5 מ"לJet BiofilGSP010005
פיפטות סרולוגיות 50 מ"לJet BiofilGSP010050
פיפטור סרולוגי Easypet 3Eppendorf
Tissue-Tek cryomoldSakura4557
Trypan Blue 0.4%InvitrogenT10282
TrypsinInstituto Adolfo Lutzטרקטורון
תאים קריוסטט UV לצבע Cell Traker

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paget, S. The distribution of secondary growths in cancer of the breast. Cancer and Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).
  2. Liu, Q., Zhang, H., Jiang, X., Qian, C., Liu, Z., Zuo, D. Factors involved in cancer metastasis: a better understanding to seed and soil hypothesis. Molecular Cancer. 16 (1), 176(2017).
  3. Padera, T. P., Meijer, E. F., Munn, L. L. The Lymphatic System in Disease Processes and Cancer Progression. Annual Review of Biomedical Engineering. 18, 125-158 (2016).
  4. Leemans, C. R., Tiwari, R., Nauta, J. J., van der Waal, I., Snow, G. B. Regional lymph node involvement and its significance in the development of distant metastases in head and neck carcinoma. Cancer. 71 (2), 452-456 (1993).
  5. Kowalski, L. P., et al. Prognostic significance of the distribution of neck node metastasis from oral carcinoma. Head & Neck. 22 (3), 207-214 (2000).
  6. McGuire, W. L. Prognostic factors for recurrence and survival in human breast cancer. Breast Cancer Research and Treatment. 10 (1), 5-9 (1987).
  7. Gervasi, L. A., et al. Prognostic significance of lymph nodal metastases in prostate cancer. The Journal of Urology. 142 (2 Pt 1), 332-336 (1989).
  8. Naruke, T., Suemasu, K., Ishikawa, S. Lymph node mapping and curability at various levels of metastasis in resected lung cancer. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 76 (6), 832-839 (1978).
  9. Sasako, M., et al. D2 lymphadenectomy alone or with para-aortic nodal dissection for gastric cancer. The New England Journal of Medicine. 359 (5), 453-462 (2008).
  10. Chang, G. J., Rodriguez-Bigas, M. A., Skibber, J. M., Moyer, V. A. Lymph node evaluation and survival after curative resection of colon cancer: systematic review. Journal of the National Cancer Institute. 99 (6), 433-441 (2007).
  11. Watanabe, T., et al. Extended lymphadenectomy and preoperative radiotherapy for lower rectal cancers. Surgery. 132 (1), 27-33 (2002).
  12. Machens, A., Dralle, H. Correlation between the number of lymph node metastases and lung metastasis in papillary thyroid cancer. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 97 (12), 4375-4382 (2012).
  13. Dijkstra, C. D., Kamperdijk, E. W. A., Veerman, A. J. P. Normal Anatomy, Histology, Immunohistology, and Ultrastructure, Lymph Node, Rat. Hemopoietic System. Jones, T. C., Ward, J. M., Mohr, U., Hunt, R. D. , 129-136 (1990).
  14. Gretz, J. E., Anderson, A. O., Shaw, S. Cords, channels, corridors and conduits: critical architectural elements facilitating cell interactions in the lymph node cortex. Immunological Reviews. 156, 11-24 (1997).
  15. Podgrabinska, S., Skobe, M. Role of lymphatic vasculature in regional and distant metastases. Microvascular Research. 95, 46-52 (2014).
  16. Wiley, H. E., Gonzales, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma. Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).
  17. Chen, J., Alexander, J. S., Orr, A. W. Integrins and their extracellular matrix ligands in lymphangiogenesis and lymph node metastasis. International Journal of Cell Biology. 2012, 853703(2012).
  18. Müller, M., Gounari, F., Prifti, S., Hacker, H. J., Schirrmacher, V., Khazaie, K. EblacZ tumor dormancy in bone marrow and lymph nodes: active control of proliferating tumor cells by CD8+ immune T cells. Cancer Research. 58 (23), 5439-5446 (1998).
  19. Cady, B. Regional lymph node metastases; a singular manifestation of the process of clinical metastases in cancer: contemporary animal research and clinical reports suggest unifying concepts. Annals of Surgical Oncology. 14 (6), 1790-1800 (2007).
  20. Klein, C. A. The systemic progression of human cancer: a focus on the individual disseminated cancer cell-the unit of selection. Advances in Cancer Research. 89, 35-67 (2003).
  21. Pereira, E. R., et al. Lymph node metastases can invade local blood vessels, exit the node, and colonize distant organs in mice. Science. 359 (6382), 1403-1407 (2018).
  22. Brodt, P. Tumor cell adhesion to frozen lymph node sections-an in vitro correlate of lymphatic metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 7 (3), 343-352 (1989).
  23. Badylak, S. F. Xenogeneic extracellular matrix as a scaffold for tissue reconstruction. Transplant Immunology. 12 (3-4), 367-377 (2004).
  24. Jandrey, E. H. F., et al. NDRG4 promoter hypermethylation is a mechanistic biomarker associated with metastatic progression in breast cancer patients. NPJ Breast Cancer. 5, 11(2019).
  25. Honig, M. G., Hume, R. I. Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing. Trends in Neurosciences. 12 (9), 333(1989).
  26. Costa, E. T., et al. Intratumoral heterogeneity of ADAM23 promotes tumor growth and metastasis through LGI4 and nitric oxide signals. Oncogene. 34 (10), 1270-1279 (2015).
  27. Song, J., et al. Extracellular matrix of secondary lymphoid organs impacts on B-cell fate and survival. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), E2915-E2924 (2013).
  28. Kramer, R. H., Rosen, S. D., McDonald, K. A. Basement-membrane components associated with the extracellular matrix of the lymph node. Cell and Tissue Research. 252 (2), 367-375 (1988).
  29. Sobocinski, G. P., Toy, K., Bobrowski, W. F., Shaw, S., Anderson, A. O., Kaldjian, E. P. Ultrastructural localization of extracellular matrix proteins of the lymph node cortex: evidence supporting the reticular network as a pathway for lymphocyte migration. BMC Immunology. 11, 42(2010).
  30. Pathak, A. P., Artemov, D., Neeman, M., Bhujwalla, Z. M. Lymph Node Metastasis in Breast Cancer Xenografts Is Associated with Increased Regions of Extravascular Drain, Lymphatic Vessel Area, and Invasive Phenotype. Cancer Research. 66 (10), 5151-5158 (2006).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DiIPBS

מאמרים קשורים