מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.
מאמר שיטה
מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.
דגמי בעלי חיים הם בעלי חשיבות עליונה במחקר של ימפתית על מנת להבין את הפתופסולוגיה של המחלה, אלא גם כדי לחקור אפשרויות טיפול פוטנציאליות. מודל זה של העכבר מאפשר לחוקרים לגרום ימפתית משמעותי מתמשך לפחות 8 שבועות. ימפתית הוא המושרה באמצעות שילוב של הקרנות שבירה ואבלציה כירורגית של lymphatics. מודל זה דורש כי העכברים לקבל מנה של 10 אפור (Gy) קרינה לפני ואחרי הניתוח. החלק הכירורגי של המודל כולל הארכה של שלושה כלי הלימפה החילוץ של שני בלוטות הלימפה מתוך הגוף החוצה העכבר. לאחר גישה לכלי מיקרו כירורגי מיקרוסקופ חיוני, בשל מבנים אנטומיים קטנים של עכברים. היתרון של מודל זה הוא שהוא יוצר ימפתית משמעותיים סטטיסטית, אשר מספק בסיס טוב להערכת אפשרויות טיפול שונות. זוהי גם אפשרות גדולה וזמינה בקלות עבור הכשרה מיקרוכירורגית. המגבלה של מודל זה היא כי ההליך יכול להיות ארוך זמן, במיוחד אם לא לתרגל מראש. המודל מביא לימפתית באופן אובייקטיבי בעכברים, מבלי לגרום לתחלואה קשה ונבדק בשלושה פרויקטים נפרדים.
ימפתית מאופיין על ידי הצטברות של נוזל הלימפה המובילה נפיחות רקמות מקומי, אשר מתרחשת בעיקר בשל לקויי או זרימה של נוזל הלימפה בכלי הלימפה1. זרימת הלימפה יכול להיות לקוי או מופרת על ידי זיהום, חסימה, פציעה או פגמים מולדים במערכת הלימפה2. אלה התוצאה הסופית של הצטברות של נוזל הלימפה, אשר מוביל למצב כרוני של דלקת, וכתוצאה מכך פיברוזיס הבאים, כמו גם התצהיר של רקמת האדיפוז3. ניתן לסווג את ימפתית כימפתית ראשי או משני. ראשי ימפתית נגרמת על ידי חריגות התפתחותיות או מוטציה גנטית2,4. ימפתית משנית מתרחשת בשל מחלה מערכתית הבסיסית, ניתוח או טראומה2,4. ימפתית משנית היא הצורה הנפוצה ביותר של ימפתית בעולם2. במדינות מפותחות, הגורם השכיח ביותר של ימפתית משנית הוא טיפול אונלוגי כגון הקרנות שדון ובלוטות הלימפה לנתיחה5. ימפתית הוא הנפוץ ביותר בקרב חולי סרטן השד, אבל יכול גם לפתח בחולים עם גניקולוגיות, מלנומה, שמין או סרטן צווארשישה. זה הציע כי מתוך כל הנשים שאובחנו עם סרטן השד, 21% יפתחו ימפתית7.
ימפתית יכול להיות מלחיץ את המטופל הן פיזית ופסיכולוגית. חולים עם ימפתית יש סיכון מוגבר של זיהום5,8,9, איכות ירודה של החיים והוא יכול לפתח חרדה חברתית ותסמינים של דיכאון10. הסיבוכים של ימפתית כרונית להוביל לעלות גבוהה של טיפול ונטל מחלות מוגברת9,11. ממצאים הציעו גם כי ימפתית עשוי להיות משויך לסיכון מוגבר למוות לאחר טיפול בסרטן השד12. ניהול שמרני כגון דחיסה של האזור המושפע, ניקוז לימפה ידני וטיפוח כללי להישאר הגישה הקו הראשון. כרגע אין טיפול מרפא6. למרות שההתקדמות נעשתה בתחום הטיפול הכירורגי והרפואי, עדיין יש מקום לשיפור. מחקר נוסף, מתן תובנה הפתופסולוגיה והתקדמות של המחלה, יש צורך לאפשר לרופאים כדי לספק אפשרויות טיפול טוב יותר עבור חולים5.
מודלים בעלי חיים נמצאים בשימוש במחקרים פרה-קליניים כדי להבין את הפתופסיולוגיה של מחלות ולפתח אפשרויות טיפול פוטנציאליות. מספר מודלים ימפתית בעלי חיים שונים הוקמו כלבים13,14, ארנבים15, כבשים16, חזירים17,18 ומכרסמים19,20, . 21,22,23,24 המודל מכרסם נראה המודל החסכוני ביותר, כאשר בחקירת שחזור של תפקוד הלימפה, בשל מכרסמים נגיש בקלות יחסית נמוכה במחיר25. רוב המודלים עכברים התמקדו גרימת ימפתית בזנב של עכברים21,22,23. מודל הזנב הוא מאוד אמין, אבל את הטכניקה כירורגית מדויקת לגרימת ימפתית משתנה באופן משמעותי בחומר שפורסם קודם לכן. התוצאה היא תנודות במשך ובחוסן של הימפתית המפותחות שהוצגו בשנת הארגז הידוע25. טכניקות שונות משמשות גם לגרימת ימפתית במודל הגוף החדש והם גם להניב תוצאות משתנות, אבל המודל החדש עשוי להיות קל יותר להבין מנקודת מבט טרנסלבית. הדגמים הקודמים ימפתית כבר ה על ידי החלטה ספונטנית ימפתית ולכן מודל ימפתית להיות לאחר וקבע צריך25. החוקרים ניסו בעבר להגדיל את מינון הקרינה, כדי למנוע את הרזולוציה ימפתית ספונטנית, אבל זה הוביל לעתים קרובות לתחלואה חמורה הבאים25.
מודל זה מביא לימפתית משמעותיים מבחינה סטטיסטית, מבלי לגרום לתחלואה חמורה, על ידי שילוב מיקרו-ניתוחים עם קרינה. המודל תוקן ממודל כירורגי קודם על ידי הוספת מנה של הקרנה הגורמת ימפתית, מבלי לגרום לתחלואה קשה26. הוא גם מציע הזדמנות מצוינת להכשרה מיקרוכירורגית. לאחר גישה לציוד מיקרו כירורגי מיקרוסקופ הוא הכרחי, בשל מבנים אנטומיים קטנים של העכברים. הליך כירורגי ניתן לבצע כאשר המשתמש כבר לימד טכניקות מיקרו כירורגי בסיסיות, כגון תפירה עם כלי מיקרו כירורגי. המפעילים כי ביצעו את ההליך הזה כל קטעי וידאו הדרכה שנצפו על ידי acland על תנאי מראש של מיומנויות יקרוכירורגית (1981) וטכניקה מיקרותפר בסיסי (1985). אנו ממליצים לתרגל את ההליך הכירורגי 8-10 פעמים לפני השימוש בו במחקר. תרגול ההליך מבטיח כי בוצעו פחות טעויות ושהתהליך יכול להתבצע ביתר יעילות. כאשר שולט, ההליך הכירורגי ניתן לבצע בתוך 45 דקות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בעלי חיים היו שוכנו באוניברסיטת דרום דנמרק מתקן טיפול בעלי חיים לפי הנחיות מוסדי. כל ההליכים הכרוכים בנושאי בעלי חיים אושרו על ידי ניסויים בבעלי חיים Inspectorate, משרד הסביבה והמזון של דנמרק.
1. הקרנה טרום-ניתוח
הערה: הקרנה טרום ניתוח מתקיימת 7 ימים לפני הניתוח.
2. התקנת ציוד
הערה: יש לבצע את הניתוח בחדר המוקדש להליכים כירורגיים. . המשטח הפעיל חייב להיות עקר
3. הכנה
4. כירורגיה
הערה: בדוגמה זו, האיבר האחוריות השמאלי (כאשר העכבר מוצג במצב פרקדן), נבחר עבור ההליך.
5. טיפול פוסט-פעיל
6. הקרנה לאחר הניתוח
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הליך זה שימש בעבר בשלושה ניסויים נפרדים. כל הניסויים נעשו על ידי חוקרים מובילים שונים אשר כולם מחברים שותפים של מאמר זה. בכל שלושת הניסויים, הטיפול הגדול נלקח לדבוק באותו תהליך כפי שמתואר בפרוטוקול זה. בכל שלושת הניסויים, ימפתית משנית המושרה באחד הגפיים האחרון בעוד האיבר הקודם השני שימש שליטה. אמצעי האחסון של הגפיים היו התוצאה העיקרית בכל שלושת הניסויים. איור 1 ממחיש את עיצוב המחקר.
כל העכברים עברו ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
קיימים מספר שלבים קריטיים בפרוטוקול זה. ראשית, חשוב כי החוקרים לנקוט אמצעי זהירות בטיחות כאשר עובדים עם רדיואקטיביות. שנית, במהלך הניתוח של פרוטוקול זה, חשוב להתחיל את ההליך ברגע שהעכבר מורדם ולסיים אותו ללא הפסקות מיותרות. זה חשוב להימנע מתקופה כירורגית ארוכה מדי עבור בעל החיים כדי למנוע את ההרדמה מאבדים אפקט במהלך הניתוח. מומלץ לנהל רק הזרקת בולוס אחת של הרדמה ולהשלים את ההליך הכירורגי בישיבה אחת. זהו גם צעד קריטי, לא לנהל יותר מדי פטנטים כחול V, כמו עודף פטנט כחול V יהיה לטשטש את הרקמה המקיפה את כלי הלימפה. אם הרקמה ש...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
. למחברים אין מה לגלות
המחברים מודים פיטר בוללן, ראש המעבדה ביו-רפואי להלוואות את הציוד הדרוש כדי להקליט את המדה לראות דרך מיקרוסקופים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 10-0 תפר ניילון | S& T | 12051-10 | |
| 6-0 תפר ניילון - Dafilon | B בראון | C0933112 | |
| קרישה - ICC 50 | ERBE | ||
| אפליקטורים עם קצה כותנה | Yibon medical co | ||
| ניתוח מלקחיים | לוטון | 09-0190 | |
| מחזירים אלסטיים | בית החולים | ||
| חשמל קליפר | Aesculap | GT420 | |
| פנטניל 0,315 מ"ג/מ"ל | מטריקס | ||
| - PhysioSuite | Kent Scientific Corp. | ||
| Isoflurane 1000mg Attane | Scan Vet | ||
| Isoflurane וופורייזר - PPV | Penlon | ||
| מיקרו מלקחיים | לוטון | 1405-05 | |
| מחזיק מחט מיקרו | לוטון | 25679-14 | |
| מספריים מיקרו | לוטון | 10128-15 | |
| מלקחיים מיקרו קשירה | לוטון | 43953-10 | |
| מזרק Microfine U-40 0,5 מ"ל | BD | 328821 | |
| מזרק מיקרולנס 25 גרם | BD | ||
| מזרק מיקרולנס 27 גרם | BD | ||
| Midazolam 5 מ"ג/מ"ל (המלן) | מטריקס | ||
| - עץ מעגל | לוטון | 08-0065 | |
| ספוגיות לא ארוגים | Selefa | ||
| Opmi pico microscope F170 | Zeiss | ||
| Patent Blue V - 25 מ"ג/מ"ל | Guerbet | ||
| - Joseph | BD | RH1630 | |
| Siemens INVEON multimodality סורק פרה-קליני | פתרונות | ||
| מקור קרינה - D3100 | Gulmay | ||
| Stata תוכנה סטטיסטית: מהדורה 15 | StataCorp LLC | ||
| Temgesic - 0,2 מ"ג | Indivior | ||
| Vet - ויסקוטירות | Bausch & לומב |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה