הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ויזואליזציה של קולטני אסטרוגן נקודותיים של עכברים עם TNBS המושרה מחלת קרוהן באמצעות Immunofluorescence

6.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60813

⸱

12 במרץ 2020

 ,  ,  ,  , 
1Department of Cytobiochemistry, Faculty of Biology and Environmental Protection, University of Lodz, 2Department of Biochemistry, Faculty of Medicine, Medical University of Lodz, 3Laboratory of Microscopic Imaging and Specialized Biological Techniques, Faculty of Biology and Environmental Protection, University of Lodz

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול מציג מודל מאומת TNBS המושרה מלאה של מחלת קרוהן ושיטות עבור ויזואליזציה של קולטני אסטרוגן על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות immunofluorescence מקטעים נקודתיים קבוע מוטבע פרפין.

תקציר

קרוהן היא הסוג האובחן ביותר של מחלת המעי הדלקתית. דלקת כרונית המתפתחת במעי מוביל להפרעה הפריסטלזיס ולנזק של רירית המעי ונראה להיות משויך לסיכון מוגבר של שינוי המעי הגס הנאופלסטי. צבירת ראיות עולה כי אסטרוגנים וקולטנים אסטרוגן להשפיע לא רק רקמות הורמונלי רגיש, אלא גם רקמות אחרות לא קשור ישירות אסטרוגנים, כגון הריאות או המעי הגס. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקול לצביעת החיסונית מוצלחת של קולטני אסטרוגן במעי הגס המתקבל ממודל murine של מחלת קרוהן המושרה. פרוטוקול מפורט אינדוקציה של מחלת קרוהן בעכברים והכנה למעיים מסופק, כמו גם צעד אחר צעד אימונוהיסטוכימיקלים הליך באמצעות formalin קבוע-מקטעים המעי מוטבע. השיטות שתוארו הם לא רק שימושי לזיהוי קולטן אסטרוגן החקירה איתות אסטרוגן ב vivo אבל יכול גם להיות מיושם על חלבונים אחרים אשר עשויים להיות מעורבים בפיתוח של קוליטיס.

מבוא

קרוהן (CD) היא מחלת מעיים דלקתית (IBD) הנראית כמו דלקת המעי כרונית. האטיולוגיה של תקליטור הוא הבין בצורה גרועה, אבל יש כמה גורמים עיקריים שנראים להיות אחראי על פיתוח תקליטורים, כולל microbiota המעי, וגורמים גנטיים וסביבתיים, כגון דיאטה או מתח1. להבנה טובה יותר של הפתוגנזה של מחלת קרוהן, מודלים שונים של דלקת במעיים שימשו2,3,4,5,6,7. במאמר זה, אנו מציגים את התוצאות שהתקבלו מ 2, 4, 6-trinitrobenzene נזן חומצה sulfonic (TNBS)-מודל murine המושרה של תקליטור.

זה תועד כי אסטרוגנים מסוגלים למודולט דלקת מעיים כרונית8,9,10,11,12. הפעילות הביולוגית של אסטרוגנים מתווכת על ידי קולטנים קנצוני, ביניהם הם קולטני אסטרוגן גרעיני (ERs), כלומר, erα (ג ' ין ESR1) ו ERβ (גנים ESR2), כמו גם G חלבון מצמידים קולטן אסטרוגן, כלומר, gper (גנים GPER1), המכונה ממברנה מאוגד ER13,14. ישנן מספר שיטות לקביעת רמת קולטני אסטרוגן, אבל רק מעטים יכולים לשמש כדי להמחיש אותם במעי.

אימונוהיסטוכימיה (IHC) היא שיטה נפוצה במחקרים קליניים ובסיסיים לאיתור אנטיגנים מסוימים בתאים או ברקמות עם נוגדנים מצוונים fluorochrome. IHC נראה שיטה חשובה הדמיית מבנה רקמות, כמו גם זיהוי ולוקליזציה של חלבונים ספציפיים, אשר עשוי להיות קריטי להבנת ההתפתחות של קוליטיס. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מלא ומאומת עבור הדמיה אימונוהיסטוכימיה של קולטני אסטרוגן במעי באמצעות immunofluorescence.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקרי בעלי חיים נערכו בהסכמת הוועדה האתית המקומית (28/ל2016) בהתאם לצו 2010/63/האיחוד האירופי של הפרלמנט האירופי ולמועצת ספטמבר 22, 2010 והמלצות מוסדיים.

1. TNBS המושרה מודל מורטין של מחלת קרוהן

הערה: פרוטוקול זה משתמש בעכברים מסוג BALB/C ששוקל 25-28 g. בעלי חיים שוכנו בטמפרטורה קבועה (22-24 ° c) ו, לחות יחסית 55 ± 5%, ומתוחזק 12 h אור/כהה מחזור עם גישה חופשית כדורי אוכל רגיל ברז מים לחות המודעה.

  1. הניחו את העכבר לתוך חדר האינדוקציה וסגרו את המכסה בחוזקה. בקיצור העכבר בקצרה עם isofלוריאן (25% O2 עם o2 שיעור זרימה ב 1.5-2 L/דקות).
    הערה: קצב הנשימה צריך להישאר קצבי ואיטי מהרגיל, ולא לשנות תגובה לגירוי רעילים.
  2. להחדיר 4 מ"ג של TNBS ב 0.1 mL של 30% אתנול ב 0.9% הנאל או 0.1 mL של 30% אתנול בשנת 0.9% בתור שליטה ברכב לתוך המעי הגס דרך קטטר.
    הערה: הקטטר צריך להיות הציג בקפידה כ 3 ס מ לתוך פי הטבעת.
  3. נטר את העכבר מדי יום מהיום השני עד שמונה עבור פרמטרים קליניים כולל משקל הגוף, דימום רקטלי, שרפרף עקביות ותמותה.
  4. ביום השמיני, המתת החסד. של העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם

figure-protocol-1
איור 1: ציר הזמן עבור המודל המושרה TNBS של מחלת קרוהן. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

2. הפרדת המעי הגס והפקרוסקופי

הערה: יום אחד לפני הפרדת המעי הגס, לדלל 100 μL של אנטיביוטיקה ב 1 מ ל של המלח מאגר פוספט (PBS) ולצאת ב 4 ° c הלילה.

  1. נקה את העור מעל הבטן באמצעות 75% אתנול וגזה סטרילית.
  2. חותכים את קיר הבטן מעצם החזה לפי הטבעת באמצעות מספריים ופינצטה סטרילית.
  3. לחתוך את המעי הגס קרוב ככל האפשר פי הטבעת ו cecum.
  4. מניחים את המעי הגס על צלחת פטרי. חותכים את המעי הגס לאורך פי הטבעת לסוף מעי. נקה ושטוף את המעי הגס 2-4 פעמים בפתרון אנטיביוטי-PBS קר.
  5. בצע הערכה מאקרוסקופית באמצעות קליבר לפי לוח 1.
    הערה: הדבקה רקמות* ואודם/דימום,דם צואה ושלשול כפופים להערכה חזותית.# # * הדבקה רקמות להעריך באמצעות סולם שלוש נקודות (0: נקודתיים ללא הדבקה רקמות, 1: קולון עם הדבקה רקמת בינונית, 2: קולון עם הדבקה רקמה נרחבת); מבוססעל היעדרות (0) או נוכחות (1) של אריתמה/דימום, דם צואה ושלשול.
הדבקה*שאריתמה/דימוםדם צואהשלשולאורך הכיבעובי נקודתייםאורך נקודתיים
נקודות (0 – 2)נקודות (0 – 1)נקודות (0 – 1)נקודות (0 – 1)ס מ/נקודותmm/נקודותס מ/נקודות
0 – נעדר0 – נעדר0 – נעדר0 – נעדר0.5 ס"מ = 0.5 נקודה n מ"מ = n נקודות0 – < 10% קצר יותר מהפקד
1 – בינוני1 – הווה1 – הווה0.5 – שרפרף קל/רופף1 – מ-10 עד 20% קצר יותר מהפקד
2 – הווה1 – הווה2 – מעל 20% קצר יותר מאשר הפקד

טבלה 1: מקרוסקופי הניקוד של המעי של עכברים עם מודל המושרה TNBS של מחלת קרוהן.

  1. להמיר את אורך הכיב בסנטימטרים לסולם נקודה, כלומר, כל 0.5 ס מ של כיב הוא נספר כנקודת 0.5. להמיר את עובי המעי הגס במילימטרים לסולם נקודה, כלומר, כל n mm מתאים n נקודות.
  2. המר את אורך הנקודתיים בסנטימטרים בקנה מידה של שלוש נקודות. אורך המעי הגס שהושג מכל עכבר עם tnbs המושרה מחלת קרוהן מוערך ביחס לאורך המעי הגס הממוצע עבור קבוצת הביקורת (0: < 10% קצר יותר מאשר הפקד, 1: מ 10 עד 20% קצר יותר מאשר הפקד, 2: מעל 20% קצר מכן ה שליטה).
  3. לחשב את הציון המקקרוסקופי הכולל על פי המשוואה: ציון כולל מאקרוסקופי = הדבקה (נקודות) + אריתמה/דימום (נקודות) + דם בצואה (נקודות) + שלשול (נקודות) + אורך של כיב (נקודות) + נקודתיים עובי (נקודות) + המעי הגס אורך (נקודות).

3. הכנה לדגימת קולון

  1. חותכים את המעי הגס לתוך 1-2 ס מ קטעי ומניחים כל על ספוג בקלטת היסטולוגית הנכונה המסומנת.
    הערה: ספוגים לקלטות היסטולוגית מונעות קיפול קולון במהלך התייבשות ודגירה של פרפין נוזלי.
  2. מניחים את מקטע המעי הגס 4% פורמלדהיד ו הדגירה לפחות 24 h ב 4 ° c.
  3. להכין ולתכנת את מעבד הרקמה עבור 1 h של דגירה ב 50%, 70%, 90%, 95%, 100% אתנול, קסילן/100% אתנול (1:1; v/v), ו קסילן בלבד, כמו גם עבור לפחות 3 h של דגירה בפרפין נוזלי.
    הערה: התייבשות יש לבצע בריכוזים גוברת של אתנול ו xylene, אבל את הריכוז של אתנול ניתן לשנות. תערובת קסילן/אתנול מומלצת אך אינה נדרשת.
  4. העבר את קטע המעי הגס לתיבה היסטולוגית ומקום במעבד הרקמה המתוכנת מראש.
  5. . תריץ את מעבד הרקמה
  6. לאחר שלבי דגירה, מניחים את רסיס המעי הגס בתבנית מתכת, כך שני הקצוות של המעי הגס הם בתנוחה זקופה ולמלא שליש העובש עם פרפין נוזלי.
  7. מניחים את העובש באזור הקירור (5 ° c) לכמה שניות, ולאחר מכן מזיז את התבנית לאזור ההתחממות (70 ° c). מקום בחלק התחתון של התיבה היסטולוגית ולכסות את שבר המעי הגס כולו עם פרפין נוזלי.
  8. השאירו את עובש המתכת עם רסיס המעי הגס בפרפין לכמה דקות באזור הקירור. להסיר את תבנית המתכת מבלוק פרפין ו הדגירה לפחות 24 h ב 4 ° c.
  9. להסיר פרפין עודף מן הבלוק ולהכניס אותו לתוך מיקרוטומה אוטומטית לחלוטין.
    הערה: בלוק הפרפין עשוי להיות מאוחסן ב-20 ° c לכמה דקות לפני שלב זה.
  10. חותכים את קטע המעי הגס לתוך 5 יקרומטר סעיפים.
  11. העבר את חתך המעי הגס לאמבט מים מחומם עד 40 ° c.
  12. השתמש בשקופית הזכוכית המסומנת כדי להסיר את מקטע הנקודתיים מאמבט המים.
    הערה: מקטעי המעי הגס צפים על המים. שימו את שקופית הזכוכית המסומנת במים מתחת לסעיף המעי הגס ולמשוך את שקופית הזכוכית בזהירות.
  13. השאירו את מגלשת הזכוכית 24 שעות בטמפרטורת החדר. לאחסון לטווח ארוך, שמרו על שקופית הזכוכית ב -4 ° c לאחר 24 שעות של דגירה בטמפרטורת החדר.

4. אימונוהיסטוכימיה עם מכתים מאימונולובורנציה

הערה: אל תאפשר למקטע הנקודתיים להתייבש בכל שלב במהלך השגרה.

  1. הסרת פרפין על ידי דגירה את שקופית הזכוכית קסילן עבור 5 דקות. חזור על שלב זה שלוש פעמים.
  2. מניחים את שקופית הזכוכית xylene/100% אתנול (1:1; v/v) עבור 5 דקות. חזור על שלב זה שלוש פעמים.
  3. מחדש את מקטע המעי הגס בסדרה של ריכוזי אתנול הפחתת, כלומר, 70%, 50%, 30% ו 10% אתנול עבור 5 דקות.. חזור על כל שלב שלוש פעמים
  4. לשטוף את שקופית הזכוכית תחת מים זורמים עבור 5 דקות.
  5. מחממים מאגר אחזור אנטיגן (10 מ"מ נתרן ציטראט; 0.05% רצף 20, pH 6.0) עד 95-98 ° צ' ומחממים את שקופית הזכוכית בתמיסה הרתיחה של האנטיגן במשך 10 דקות.
    הערה: שלב אחזור האנטיגן הוא אופציונלי אך מומלץ. פתרון ללא מיסוך צריך להיות ממוטב בהתאם לנוגדן המשמש את הניסוי.
  6. ציירו עיגול סביב מקטע המעי הגס בעזרת עט הידרופובי.
    הערה: שלב זה הוא אופציונלי אך מומלץ. העט ההידרופובי מונע בזבוז של ריאגנטים על ידי שמירה על נוזלי במאגר בנפח קטן בתוך מסומן במעגל.
  7. מודטה את הסעיף ב 3% המים פתרון של מימן peroxidase עבור 10 דקות.
  8. לשטוף את הפתרון כביסה (50 mM טריס-HCl, pH 7.4; 150 mM הנאל; 0.05% רצף 20) עבור 5 דקות.
  9. דגירה בפתרון חסימה (5% סרום עז רגיל; 50 mM טריס-HCl, pH 7.4; 150 mM הנאל; 0.05% טריטון X-100) עבור 1 h בטמפרטורת החדר.
    הערה: בפתרון החסימה, הנסיוב הרגיל חייב להיות מאותו זן כמו הנוגדן המשני. בשלבים שבהם נדרשת דגירה, הניחו את שקופית הזכוכית בחדר לחות כדי למנוע התאיידות מוגזמת.
  10. להסיר את הפתרון חסימה ולהוסיף 20-50 μL של הנוגדן העיקרי נגד ERα, ERβ או GPER מדולל ב 1% בסרום פרה אלבומין עם 50 mM טריס-HCl, pH 7.4, 150 mM הנאל, 0.05% טריטון X-100.
    הערה: דילול מומלץ של נוגדנים ראשוניים מוצגים בטבלה 2.
סוג נוגדןנוגדן נגדClonalityמין מארחפעילות מחודשת במיניםדילול
ראשימיכל שלמהפוליבטייםארנבאדם1:100
עכבר
צב
קפיברה
ERβפוליבטייםארנבאדם
קוף
עכברוש
עכבר
כבשים
חזיר
מיכל הגופרפוליבטייםארנבאדם
עכברוש
עכבר
שנידילייט 650פוליבטייםעזארנב1:250

שולחן 2: מאפייני הנוגדנים.

  1. מודלת עם נוגדן ראשוני לילה ב 4 ° c בחשיכה.
  2. הסר את פתרון נוגדן ולשטוף בפתרון כביסה (50 mM טריס-HCl, pH 7.4; 150 מ"מ הנאל; 0.05% רצף 20) עבור 5 דקות. חזור על שלב זה שלוש פעמים.
  3. הוסף 20-50 μL של DyLight 650 נוגדן משני מדולל ב 1% בסרום שור אלבומין (המכיל 50 mM טריס-HCl, pH 7.4, 150 מ"מ הנאל, 0.05% טריטון X-100). דגירה עם נוגדן משני מעלה עם צבע עבור 1 h בטמפרטורת החדר בחשכה.
    הערה: הדילול המומלץ של הנוגדן המשני מוצג בטבלה 2.
  4. הסר את פתרון נוגדן ולשטוף בפתרון כביסה (50 mM טריס-HCl, pH 7.4, 150 mM הנאל, 0.05% רצף 20) עבור 5 דקות. חזור על שלב זה שלוש פעמים.
  5. הוסף 2% DiOC6 (3) מדולל 50 mM טריס-HCl, pH 7.4, 150 mM הנאל ו דגירה עבור 10 דקות בטמפרטורת החדר בחשכה.
  6. הסר את הפתרון ולשטוף בתמיסה כביסה (50 mM טריס-HCl, pH 7.4, 150 mM הנאל, 0.05% רצף 20) עבור 5 דקות. חזור על שלב זה שלוש פעמים.
  7. הוסיפו כמה טיפות מנוזל גליצרול המבוסס על DAPI ישירות על החלק הנקודתיים וכיסו בזהירות בשקופית כיסוי. מחלקת המעי הגס לפחות 24 שעות ב -4 ° c.
    הערה: הימנע מבועות אוויר בעת כיסוי הרקמה עם שקופית המכסה.
  8. לנתח את מקטע המעי הגס תחת מיקרוסקופ קונפוקלית וקד שמציעות 20x או 63 מטרות וטבילה שמן באמצעות תוכנה ייעודית.
    הערה: טבלה 3 רשימות מאפיינים של fluorochromes בשימוש זה מחקר.
סוג פלואורואוכדוםאורך הגל (nm)צבע
עירורפליטה
דאפי405460 – 480כחול
DiOC6 (3)485538 – 595ירוק
דילייט 650654660 – 680אדום

שולחן 3: מאפייני fluorochromes.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

המאפיינים המקסקופיים של נקודתיים בעכברים עם מחלת קרוהן הנגרמת על ידי TNBS
תמונות מייצגות של נקודתיים שנלקחו מהפקד ועכברים שטופלו ב-TNBS מוצגים באיור 2. בעכברים עם מודל TNBS המושרה של מחלת קרוהן, אורך המעי הגס מופחת בעוד רוחב המעי הגס הוא גדל.

figure-results-1
איור 2: נקודתיים מייצגים שהתקבלו מעכברי הבקרה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ישנם מודלים רבים של בעלי חיים עבור בדיקה פתופסולוגיה IBD, כולל גנטי, מודלים אימונולוגיים או ספונטנית, כמו גם דגמים המושרה כימית15. בין מספר סוגים של מודלים בעלי חיים של קוליטיס, כימית המושרה מודלים כגון מודל TNBS המושרה המתואר בפרוטוקול זה, הם זולים יחסית וקל להשיג. המודל המושרה TNBS של קוליטיס יש כמה תסמינים קליניים הקשורים בסיס פתולוגי של תקליטור. בעלי חיים בעלי קוליטיס מושרה מאופיינים בהיווצרות צואה לא עקבית, שלשול מדמם ואובדן משקל הגוף. עם זאת, אין זה אומר כי מודל זה ניתן להשתמש כדי ללמוד CD e...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

העבודה פורסמה בזכות התמיכה הכספית של הרשויות באוניברסיטת לודז ': סגן הרקטור למחקר מדעי, סגן הרקטור לשיתוף פעולה לאומי ובינלאומי ודיקן הפקולטה לביולוגיה והגנת הסביבה. דמיאן ז'זניק נתמך על ידי מענקים (2017/24/T/NZ5/00045 ו-2015/17/N/NZ5/00336) מהמרכז הלאומי למדעים, פולין.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכברי Animals
BALB/Cאוניברסיטת לודז'NA
strong>Equipment
CaliperVWR62379-531
בלוק קרטוןNA
NA מיקרוסקופ קונפוקלי - TCS SP8Leica BiosystemsNA
מיקרוטום סיבובי אוטומטי לחלוטין - RM2255Leica BiosystemsNA
שקופית זכוכיתThermo ScientificJ1800BMNT
מודול הטמעת פרפין מחומם - EG1150 HLeica BiosystemsNA
קופסה היסטולוגיתMarfourLN.138747
עט הידרופוביSigma-AldrichZ377821
איזון מעבדהRadwagWL-104-0048
LAS X תוכנהLeica BiosystemsNA
תבנית מתכתMarfourCP.5105
גזה סטריליתNA
NA מספריים סטרילייםNA
פינצטה סטרילית
מעבד רקמות NA - TP1020Leica BiosystemsNA
strong>Reagents
2, 4, 6-trinitrobenzene sulfonic acidSigma-Aldrich92822
אלבומין סרום בקרSigma-AldrichA3294
DiOC6 (3)Sigma-Aldrich318426
DyLight 650 נוגדן משניAbcamab96886
ERα נוגדן ראשוניAbcamab75635
ERβ נוגדן ראשוניAbcamab3576
אתנולאוונטור חומרי ביצועים פולין396480111
פורמלדהידאוונטור פרפורמנס פולינס פולין432173111
GPER נוגדן ראשוניAbcamab39742
חומצה הידרוכלוריתAvantor Performance Materials פולין575283421
מימן פרוקסידאזAvantor Performance Materials פולין885193111
איזופלורן (פוראן)בקסטר1001936040
סרום עיזים רגילGibco16210064
פרפיןLeica Biosystems39602012
Petrie dishNest Scientific705001
Phosphate buffer מלחSigma-AldrichP3813
תמיסת מלח פיזיולוגיתSigma-Aldrich7982
פרימוצין (אנטיביוטיקה)Invitrogenant-pm-1
ProLong Diamond Antifage Mountant עם DAPI (נוזל מבוסס גליצרול עם DAPI)InvitrogenP36971
נתרן כלוריChempurWE/231-598-3
נתרן ציטראטאוונטור חומרי ביצועים פולין795780429
TrisAvantor Performance Materials פולין853470115
Triton X-100Sigma-AldrichT8787
Tween 20Sigma-AldrichP9416
XyleneAvantor Performance חומרים פוליןBA0860119
< NA NA <

מקורות

  1. Zhang, Y. Z., Li, Y. Y. Inflammatory bowel disease: pathogenesis. World Journal of Gastroenterology. 20 (1), 91-99 (2014).
  2. Morris, G. P., et al. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).
  3. Okayasu, I., et al. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
  4. Boirivant, M., Fuss, I. J., Chu, A., Strober, W. Oxazolone colitis: a murine model of T helper cell type 2 colitis treatable with antibodies to interleukin 4. Journal of Experimental Medicine. 188 (10), 1929-1939 (1998).
  5. Morrissey, P. J., Charrier, K., Braddy, S., Liggitt, D., Watson, J. D. CD4+ T cells that express high levels of CD45RB induce wasting disease when transferred into congenic severe combined immunodeficient mice. Disease development is prevented by cotransfer of purified CD4+ T cells. Journal of Experimental Medicine. 178 (1), 237-244 (1993).
  6. Kühn, R., Löhler, J., Rennick, D., Rajewsky, K., Müller, W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 75 (2), 263-274 (1993).
  7. Sundberg, J. P., Elson, C. O., Bedigian, H., Birkenmeier, E. H. Spontaneous, heritable colitis in a new substrain of C3H/HeJ mice. Gastroenterology. 107 (6), 1726-1735 (1994).
  8. Harnish, D. C., et al. Beneficial effects of estrogen treatment in the HLA-B27 transgenic rat model of inflammatory bowel disease. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 286 (1), 118-125 (2004).
  9. Pierdominici, M., et al. Linking estrogen receptor β expression with inflammatory bowel disease activity. Oncotarget. 6 (38), 40443-40451 (2015).
  10. Włodarczyk, M., et al. G protein-coupled receptor 30 (GPR30) expression pattern in inflammatory bowel disease patients suggests its key role in the inflammatory process. A preliminary study. Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases. 26 (1), 29-35 (2017).
  11. Mohammad, I., et al. Estrogen receptor α contributes to T cell-mediated autoimmune inflammation by promoting T cell activation and proliferation. Science Signaling. 11 (526), eaap9415(2018).
  12. Jacenik, D., et al. G protein-coupled estrogen receptor mediates anti-inflammatory action in Crohn's disease. Scientific Reports. 9 (1), 6749(2019).
  13. Prossnitz, E. R., Barton, M. The G protein-coupled estrogen receptor GPER in health and disease. Nature Review Endocrinology. 7 (12), 715-726 (2011).
  14. Yaşar, P., Ayaz, G., User, S. D., Güpür, G., Muyan, M. Molecular mechanisms of estrogen-estrogen receptor signaling. Reproductive Medicine and Biology. 16 (1), 4-20 (2016).
  15. Pizarro, T. T., Arseneau, K. O., Bamias, G., Cominelli, F. Mouse models for the study of Crohn's disease. Trends in Molecular Medicine. 9 (5), 218-222 (2003).
  16. Neurath, M. F., Fuss, I., Kelsall, B. L., Stüber, E., Strober, W. Antibodies to interleukin 12 abrogate established experimental colitis in mice. Journal of Experimental Medicine. 182 (5), 1281-1290 (1995).
  17. Ikeda, M., et al. Simvastatin attenuates trinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis, but not oxazalone-induced colitis. Digestive Diseases and Sciences. 53 (7), 1869-1875 (2007).
  18. Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation. Journal of Oral Maxillofacial Pathology. 16 (3), 400-405 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

TNBSDAPI
ויזואליזציה של קולטני אסטרוגן נקודותיים של עכברים עם TNBS המושרה מחלת קרוהן באמצעות Immunofluorescence
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.