המטרה של מאמר זה היא לתאר שיטה מעודנת של צנרור העכבר המעבדה. השיטה אינה פולשנית, ולכן אידיאלית למחקרים הדורשים ניטור סדרתי של תפקודי הנשימה ו/או הערכת טיפולים בריאה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
הספרות מתארת מספר שיטות לצנרור העכבר המחייב הדמיה של הגלוטיס דרך חלל הפה או החתך בצוואר הגחוני לאישור ישיר של צינורית המיקום בקנה הנשימה. הקושי היחסי או טראומת הרקמה הנגרמת לנושא על ידי הליכים כאלה יכול להיות מכשול ליכולת של חוקר לבצע לימודי אורך. מאמר זה ממחיש טכניקה שבה מניפולציה פיזית של העכבר בעקבות השימוש דפילציה כדי להסיר שיער מפני הצוואר הגחוני היתרי ויזואליזציה של קנה הנשימה עבור צנרור הקנה מידה ללא קשר למידת העור פיגמנטציה. שיטה זו אינה מזיק לנושא ומושגת בקלות בהבנה מוגבלת של אנטומיה מורבית. גישה מעודנת זו מקלה על צנרור חוזר, אשר עשוי להיות נחוץ לניטור ההתקדמות של המחלה או החוסר הטיפול בטיפולים. שימוש בשיטה זו עלול לגרום לירידה של מספר בעלי החיים והמיומנות הטכנית נדרש למדוד את תפקוד הריאות בדגמי העכבר של מחלת הנשימה.
מבוא
עכבר המעבדה הוא מודל נפוץ בעלי חיים למחלת הנשימה האנושית. לפיכך, ישנן מספר שיטות שפורסמו עבור צנרור העכבר לצורך הן החוסר של טיפולים ומדידה של מכניקת הנשימה. רוב ההליכים המתוארים דורשים ויזואליזציה של glottis דרך חלל הפה עם ציוד מיוחד כגון לרינגוסקופ או מקור האור סיבים אופטיים1,2,3,4,5,6,7. עם זאת, זה יכול להיות קשה כאשר צינורית גדולה יחסית נדרש, כפי שהוא יכול לטשטש את ההשקפה של החוקר. לימוזין ואח '8 התייחסו דאגה זו עם שיטה של צנרור שבו חתך עורית קטן מורכב לאורך קו האמצע של הצוואר הגחוני המאפשר ויזואליזציה של קנה הנשימה. בעקבות ההליך, החתך סגור עם דבק רקמה.
למחקרים הדורשים הזנה חוזרת ונשנית של האתר, מחייב ביתור וסגירה רצופים של שולי העור ופגיעת רקמות בצוואר הגחון. מטרת הגישה ויזואליזציה של קנה הנשימה הטרנסעורית לצנרור אוראלי היא לספק טכניקה מעודנת, לא פולשנית המתאימה במיוחד למחקרי צנרור חוזרות ולאירועי צנרור בודדים בעכברים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הפעילויות בעלי חיים המתוארים כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) של אוניברסיטת אוהיו ונערכו במתקנים מוסמכים AAALAC.
1. הכנה לפרוצדורה
- . בנו את פלטפורמת הצנרור כדי להשיג את מדרון הפלטפורמה המתאים, השתמש באוגדן בגודל 3 אינץ ' (7.6 ס מ). מקפלים 15 כדי 20 ס מ באורך של 3-0 משי או חומר חוט אחר במחצית ולדבוק את קצות החוט לחלק העליון של פלטפורמת נוטה עם קלטת ליצור לולאה ההשעיה (איור 1).
- בחרו צינורית בגודל ובאורך המתאימים.
הערה: עבור a 20-30 גרם עכבר, a 1-1.5 אינץ ' (2.5-3.8 ס מ) ארוך קטטר עד 18 G ניתן להשתמש. עבור מחקר זה, 18 שבוע נקבה BALB/c ו 10-שבוע-בן C57BL/6 עכברים (n = 3 של כל זן) שימשו. מעטפת קטטר לבן אטום מספק את ההדמיה הטוב ביותר טרנסעורית. - חותכים שיקוע בקצה המרוחק של הצנתר ולהחליק את המשטח לחתוך עם נייר מחוספס כדי ליצור קצה משופע מעוגל. בעדינות ליצור עיקול קל בצינורית בערך 1 ס מ שיקוע (איור 2).
הערה: קטטר חדש צריך לשמש עבור כל עכבר. - להפחית את העכבר עם קטמין (5.4 mg/g משקל הגוף) ו xylazine (16 μg/g הגוף משקל) מנוהל intraperitoneally. החלת משחה סטרילית בעיניים.
הערה: עומק הרדמה נכונה מושגת על ידי חוסר תגובה של העכבר לצבוט הבוהן המשרד. - להשעות את העכבר במיקום פרקדן על פלטפורמת צנרור ידי חיבור חותכות העליון סביב חוט המשי בחלק העליון של משטח זוויתי (איור 3). ברגע שהעכבר ממוקם במיקום הנכון, בעדינות לתפוס את הבסיס של הזנב ולמשוך את הזנב לכיוון השולחן. מניחים פיסת קלטת מעל בסיס הזנב כדי לאבטח את העכבר.
- החלת קרם להסרת (טבלת חומרים) לאזור צוואר הרחם הגחוני עבור 30-45 לאחר מכן להסיר את כל קרם דפילציה מאזור צוואר הרחם באמצעות גזה יבש. חזור על תהליך היישום במידת הצורך. לשטוף ביסודיות את העור עם מים מלוחים או מזוקקים כדי להסיר כל שאריות ואז לנגב יבש.
2. נוהל צנרור
- השתמש ישר, מלקחיים שטוח ביד לא דומיננטי כדי למשוך בעדינות את הלשון באופן מספיק פותח את הפה למבוא של צינורית.
הערה: מלקחיים שן עכברוש לא צריך לשמש כמו זה יגרום נזק ללשון. - עם היד הדומיננטית, הקדם את הצינורית לתוך הפה כך שהקצה המרוחק לעיקול הקטן הוא כנגד הגג של פיו של הנבדק.
- שחררו את הלשון והחליקו את הקצה השטוח של מלקחיים סגורים לאורך הצוואר הגחוני עד לנובריום. ומשטחת את השריר. המכסה את קנה הנשימה קנה הנשימה מופיע כtranscutaneously קו לבן (איור 3A). במקרה הצורך, לסובב את המלקחיים בכיוון הגולגולת תוך שמירה על המתח על העור בכיוון caudal כדי לגרום בלוטות הרוק החוצה למעלה לשיא. תמרון זה יוצר ניגוד רב יותר סביב קנה הנשימה (איור 3B).
הערה: הימנע כוח מופרז על הצוואר הגחוני כפי שהוא יכול לכווץ את קנה הנשימה ולפגוע בנשימה. - מראש את הצינורית תוך כדי לדוג את הקצה המרוחק של הצינורית באמצעות גמישות של היד הדומיננטית באופן סימולטני על פרק כף היד.
- המיקום הנכון של הצינורית מצוין על ידי ויזואליזציה של הצינורית האטומה בקנה הנשימה (איור 4ב, ד). אם הצינורית מתקדמת מעבר לרמה של מקור שריר הלעיסה וההדמיה של הצינורית בקנה הנשימה לא אושרה, משכי את הצינורית והתנסה שוב את התמרון.
- אשר מיקום הצינורית הנכונה על ידי חיבור הנורה האינפלציה הריאה לצינורית והתבוננות התרחבות בית החזה עם דיכאון בו של המכשיר.
- מבלי לחלק את הצינורית, שחרר בזהירות את החותכות של העכבר מפלטפורמת הצנרור. הזז את העכבר לפלטפורמה אופקית (טבלת חומרים) והכנס את הצינורית למתאם על המאוורר. בעקבות האינפלציה העמוקה, לאוורר את העכבר על 60 s ולאחר מכן למדוד עמידות לנשימה.
3. שחזור
- לאחר ההליך הושלם, להזיז את העכבר לפלטפורמה מחומם. לספק גירוי קבוע באמצעות הבוהן או הזנב צובט לעודד נשימה ספונטנית.
- האקסון יכול להתרחש כאשר העכבר רק מתחיל ללעוס. אחוז בצינורית ברמת הרכזת ומשוך בעדינות את גולגולת הצינור והרחק מהעכבר עד שהצינורית תוסר לחלוטין מפיו של הנבדק.
הערה: עדיף לספק תמיכה בדרכי הנשימה עם צינורית נוקשה למשך זמן רב ככל האפשר במהלך תהליך ההחלמה. - ברגע שהוא הועבר, להעביר את העכבר לכלוב שחזור נקי עם תמיכה בחום. ברציפות לפקח על העכבר עד שהוא אמבולטורי באופן מלא, והתאוששות הושלמה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ניטור טורי של פונקציית הריאות הבסיסית
שמונה עשר שבועות נקבה BALB/c ו 10-שבוע בן C57BL/6 עכברים (n = 3 של כל זן) השתמשו בשיטה המתוארת ביום 0, 3, 10, ו -17. בעקבות צנרור בכל יום, הנושא היה מחובר מאוורר מכני שסופקו עם 100% חמצן (טבלת חומרים). עמידות בדרכי הנשימה (Rrs) נמדדה באמצעות טכניקת התנודה הנכפית עבור 60 s בעקבות אינפלציה עמוקה ל -25 ס"מ בגודל2O שנערך עבור 5 s. אין שגיאות תוכנה המשויכות לנשימה מתמשכת זו יחד עם ערכי Rrs בטווח הפיסיולוגי מספקים תמיכה נוספת למיקום תקין של ה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
צנרור באמצעות טכניקת ההדמיה הטרנסעורית מציעה גישה מעודנת לשיטת חתך העור הסטנדרטית. בתשומת לב מיוחדת למספר שלבים מרכזיים, ניתן להשיג צנרור בקלות ובמהירות. החיה חייבת להיות ממוקם הגון בתוך שכיבה על פלטפורמת הצנרור עם העכבר מאובטח בנסיגה עדינה. זה יהיה להאריך את בעל החיים ליישור אנכי מיקום נכון עבור צנרור. בנוסף, הקרם לא צריך להישאר במגע עם העור של בעל החיים במשך יותר מ 30-45 ש ח ויש לשטוף ביסודיות כדי להסיר את כל שאריות. מגע העור המורחבת עם קרם להסרת שיער יגרום לכאב מיותרים עבור בעלי החיים והכאובים יכול לחסום את ההשקפה של ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
המחברים מודים לוצ Rosas, לורן דוליטל, ליסה ג'וזף ולינדזי פרגוסון על הסיוע הטכני שלהם ועל משאבי בעלי חיים מעבדה באוניברסיטה עבור תמיכה בבעלי חיים שלהם. עבודה זו ממומנת על ידי NIH T35OD010977 ו-R01-HL102469.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 18 גרם x 1 1/4 אינץ' קטטר תוך ורידי, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | צינורית לאינטובציה |
| 70% אתנול, 10 ליטר | Fisher Scientific | 25467025 | ניקוי צינורית |
| נייר שוחק (נייר זכוכית) | הכנת צינורית 74001201 Porter-Cable | הזרקת | |
| AnaSed (תמיסה סטרילית קסילזין) (100 מ"ג/מ"ל) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | |
| סרט תיוג כחול הרדמה (0.5 אינץ' x 14 יארד) | Fisher Scientific | 15966 | ריסון על פלטפורמת אינטובציה |
| תפר משי קלוע ללא מחט, לא סטרילי, (3-0) | הנרי שיין | פריט #1007842 | פלטפורמת אינטובציה |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | ויסות חום והתאוששות עכבר |
| Deltaphase הפעלה Board | Braintree Scientific | 39OP | התאוששות עכבר (לפני הוצאת צינורות) |
| מים מזוקקים | ThermoFisher | 15230253 | ניקוי עכבר לאחר אפילציה |
| מספריים לעיניים, זוויתית, חדה/חדה | מכשיר הרווארד | 72-8437 | הכנת צינורית |
| FlexiVent (מודול FX 2) | Scireq | N/A | רשום נתוני תפקודי ריאות (לא נדרש לביצוע הליך, המשמש במחקר זה לאימות הליך) |
| ספוגי גזה | פישר מדעי | 13-761-52 | הסרת שיער |
| כבד 3 אינץ' 3 טבעות View קלסרים | סיכות | 24690CT | פלטפורמת אינטובציה |
| תוכנת Instat | Graphpad | N/A | תוכנת ניתוח סטטיסטי |
| מזרק אינסולין (0.5 סמ"ק, U100) | פישר | מינהל הרדמה | 329461 |
| הזרקת קטמין HCl, USP (100 מ"ג/מ"ל) | Llyod Laoratories | מס' 4871 | |
| נורת ניפוח ריאות | מכשיר הרווארד | 72-9083 | אשר את מיקום הצינורית |
| מיקרו מלקחיים, מעוקל וחלק | מכשיר הרווארד | 72-0445 | החזר את הלשון וצור מתח על הצוואר להדמיית צינורית |
| Nair (תחליב להסרת שיער), בקבוק 9 אונקיות | Church & דווייט | 42010440 | הסרת שיער |
| מלח סטריליים (0.9%), 10 מ"ל | פישר סיינטיפיק | NC9054335 | הרדמה, ניקוי העור לאחר הסרת שיער |
מקורות
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179(1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964(2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107(2013).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
