הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים

6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60847

⸱

13 באוגוסט 2020

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Thoracic Surgery, The First Hospital of Jilin University, 2The Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Department of Pharmaceutical Sciences, University of Colorado Anschutz Medical Campus, 3Key Laboratory of Zoonoses Research, Ministry of Education, Jilin University, 4Department of Cardiology, China-Japan Union Hospital of Jilin University, 5Department of Gastrointestinal, Colorectal and Anal Surgery, China-Japan Union Hospital of Jilin University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול מתואר על הפרזיה באתרו של גוף העכבר התחתון, כולל שלפוחית השתן, הערמונית, איברי מין, עצם, שרירים ועור כף הרגל.

תקציר

לשעבר vivo זלוף הוא כלי פיזיולוגי חשוב כדי ללמוד את הפונקציה של איברים מבודדים (למשל, הכבד, הכליות). באותו זמן, בשל הגודל הקטן של איברי העכבר, לשעבר vivo זלוף של העצם, שלפוחית השתן, העור, הערמונית, ואיברי הרבייה הוא מאתגר או לא ריאלי. כאן, אנו מדווחים בפעם הראשונה בתוך מעגל באתרו התחתון הגוף בתוך עכברים הכולל את הרקמות הנ ל, אבל עוקף את איברי הסיווג הראשי (כליות, כבד, טחול). המעגל מבוסס על ידי canנולגאת אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנחותים והוריד מעל עורק כסל וריד ומצרוב כלי דם היקפיים. פרזיה מבוצעת באמצעות משאבה פריסטטית עם זרימה מעשית הנשמרת עד 2 שעות. בשנת באתרו עם הפלורסנט לקטין ופתרון הואכסט אישר כי המיקרו-בלטורה בוצעה בהצלחה. מודל זה של העכבר יכול להיות כלי שימושי מאוד לחקר תהליכים פתולוגיים, כמו גם מנגנונים של משלוח התרופה, הגירה/גרורות של במחזור תאים סרטניים לתוך/מתוך הגידול, ואינטראקציות של מערכת החיסון עם איברים ורקמות מבשם.

מבוא

האיבר הבודד זלוף פותחה במקור כדי ללמוד פיזיולוגיה איברים עבור השתלת1,2,3, ו הבנה מאופשר של פונקציות של האיברים ללא הפרעות ממערכות גוף אחרות. לדוגמה, כליה בודדה ופרפיוז הלב היה שימושי מאוד להבנת עקרונות בסיסיים של הומודינמיקה והשפעות של סוכני vasoactive, בעוד זלוף הכבד היה חשוב להבין את תפקוד חילוף החומרים, כולל מטבוליזם הסמים ברקמה בריאה וחולה4,5,6,7. בנוסף, מחקרי פרזיה היו קריטיים בהבנת הכדאיות ותפקוד האיברים המיועדים להשתלה. ב מחקר הסרטן, מבודד זלוף הגידול תוארה על ידי מספר קבוצות באמצעות העכבר, עכברוש, ו מרקמות האדם טרי resected8,9. ב מסוימים perfusion הגידול בודד, הגידול היה מושתל במשטח שומן השחלה כדי לכפות את התפתחותם של הגידול המספק כלי דם מעורק מצע המעי10. הקבוצה הג ביצעה לימודי חלוצי באמצעות זלוף מבודדים של המעי הגס אדנוקרצינומות כדי להבין הומודינמיקה הגידול גרורות8,11,12,13. הגדרות אחרות vivo ex הנדסה לשעבר כוללים 96 התקן זלוף מבוסס על הצלחת לתרבות האדם הראשי מיאלומה נפוצה תאים14 ו תא זרימה מודולרי לאדריכלות מח עצם הנדסה ומחקר פונקציה15.

בנוסף לחקר הפיזיולוגיה והפתולוגיה, שימש העוגב לחקר העקרונות הבסיסיים של אספקת סמים. כך, קבוצה אחת תיאר בודד הגפיים האיבר מבודדים ולמד הצטברות של ליפוזומים בסרקומות16מושתל, בעוד קבוצה אחרת ביצע את זלוף הכליה האנושית כדי ללמוד את המיקוד האנדותל של חלקיקים17. טרנוללו ואח ' השתמשו בכנף עור אנושית מבודדת כvivo מדגם של מודל18.

למרות הפיתוחים הללו בפרזיה של איברים גדולים ורקמות, לא היו דיווחים על מודלים באתרו של היתוך בעכברים כי: a) לעקוף את אברי הסיווג כגון כבד, טחול וכליות; ב) כוללים איברי אגן, עור, שריר, איברי הרבייה (בזכר), שלפוחית השתן, מח העצם והערמונית. בשל הגודל הקטן של האברים הללו והזנת המערכת, הצינורית הvivo לשעבר והקמתה של מעגל פרפיוז לא היתה אפשרית. העכבר הוא מודל החיות החשוב ביותר בחקר הסרטן והאימונולוגיה, ומסירת סמים. היכולת של איברי עכבר קטנים לאפשר שאלות מעניינות לגבי מסירת סמים לאיברים אלה, כולל גידולים מושתלים באגן (שלפוחית השתן, ערמונית, שחלה, מח עצם), להיות נענה, כמו גם מחקרים של פיזיולוגיה בסיסית ואימונולוגיה של מחלות של איברים אלה. כדי לענות על מחסור זה, פיתחנו מעגל באתרו בתוך עכברים שעלולים למנוע פגיעה ברקמות, והוא הרבה יותר מתאים למחקר פונקציונלי מאשר פרזיה איברים מבודדים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הטיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת קולורדו ולהשתמש בוועדה (IACUC).

1. לחמם מראש את מערכת ההיתוך

  1. הכינו את מערכת הפרפיוז לפני הניתוח על-ידי הפעלת מקלחת מים ב37 ° c עבור כל הרכיבים בעלי מכסה המים (מאגר לחות, תא לח וכסוי) כפי שמוצג בתצורה מותאמת אישית באיור 1A. ודא שאבובים נקי ולהחליף במידת הצורך. כדי להגביל את נפח השימוש, השתמש במלכודת בועה בתוך תא לח כמאגר המים (איור 1B-6).

2. צנתור כלי דם

  1. לגרום הרדמה ב-8-10 בשבוע הישן BALB/c העכבר באמצעות מכונת הרדמה וטרינרית isofלאנה עם 3-5% isof, ושיעור זרימת החמצן ב 0.3 L/min. כחלופה, השתמש קטמין/xylazine או כל סוג אחר של הרדמה בתוך הצפק. להעריך את עומק ההרדמה על ידי 2 שיטות: לצבוט הבוהן רפלקס המצמוץ.
  2. להרטיב המשי תפר 4-0 עם מחט במים כפולים מזוקקים.
  3. מניחים את העכבר מורדם במיקום פרקדן על לוח קלקר עם הראש מול המנתח ומשתק את הגפיים האחוריות עם קלטת. לנגב את הבטן עם אלכוהול איזופרופילי ולחתוך את הבטן לאורך קו האמצע בצורת "T" עם מספריים. הפסיקו לדמם מסביב לקצה החתך על ידי האלקטרוקרישת (הקאוזציה).
  4. לדחוף את הבטן, מעי ונקודתיים בצד ימין של הבטן כדי לחשוף את אבי העורקים הבטני, הבנה קאווה, ואת העורקים הנפוצים כסל ו iliol, וורידים.
  5. תחת מיקרוסקופ לנתיחה, למצוא ולאתר את העורק הליאולרומבה/וריד בזכר, השחלות עורק/וריד ועורק iliolרומבה/וריד בנקבה באמצעות 4-0 בתפרים משי (איור 2 קווים צהובים).
  6. תחת מיקרוסקופ לנתיחה, לולאה 2 4-0 משי תפרים מתחת העורקים הבטן והוריד הראשי הנחותים (כ 1 ס מ מעל עורק כסל והווריד, 1 מ"מ בנפרד, איור 2), ולעשות קשר רופף בתפר הקרוב ביותר ספינות כסל (איור 2, לבנים מנוקד קו). לחילופין, תפר משי 6-0 יכול לשמש לקשר זה.
  7. תחת מיקרוסקופ לנתיחה, ליישר אופקית ולמתוח הן את העורק הנחותים ואת אבי העורקים הבטני עם פורט-אייגיללה. השתמש 24 G כנפיים מסוכך קטטר אינפוזיה לנקב את אב העורקים הבטן, ללחוץ על הכפתור כדי למשוך את ליבת המחט ולהכניס את הצנתר על 5 מ"מ לתוך כלי.
    1. חזור על אותו ההליך עם הורד המטה הנחות ולקשור קשרים של שני תפרים סביב כלי הצנתור.
      הערה: המחט יכולה לנקב בקלות דרך כלי הדם; לכן, שמרו על הכלים מתוחים ומחטים מקבילים לכלי. למשוך את ליבת המחט ברגע המחט חודר על 1 מ"מ לתוך כלי. העורקים הבטני הוא מתחת לבנה קאווה נחותים הרבה יותר רזה ואלסטי יותר בשל היותו עטוף רקמת חיבור. לכן, העורקים יכול "להחזיק" על הצנתר, ולכן צריך להיות צנתור לפני האובקאווה כדי להפחית את הסבירות של הקטטר לחמוק.
  8. החלת דבק מיידי כדי לשתק את הקטטרים של האריקטור spinae, להחליף את איברי הבטן, ולסיים את הניתוח תוך שמירה על ההרדמה.
    הערה: איברים שאינם יכולים להיות מוחלפים לחלוטין בחלל הבטן יצטרכו להיות לחלח באופן תקופתי במדיום הפרפיוז במהלך תהליך הפרזיה.

3. הגדר את המערכת הפרפיוז

  1. העבר את העכבר לחדר לחות המים כיסה מראש עד 37 ° c על משטח סיליקון והשתק את כנפי הקטטר אל הלוח עם 19 מחטים G.
  2. למלא את הקצה של קטטר העורקים (כניסת) עם מאגר פרהפיוז מראש (תמיסת לקטט של צלצול בתוספת 5% bsa), ולאחר מכן לחבר את קצה הקטטר עם אבובים זלוף באמצעות מחבר בורג (איור 1b, חץ אדום).
    הערה: החזק את המחבר עם מלקחיים הומוסטטי והשתק את האבובים באמצעות הקלטת כדי להימנע מהזזת הקטטרים.
  3. כוונן את קצב הזרימה הפריסטטי ל-0.6 mL/min ושמור על זרימה יוצאת (איור 1B, חץ כחול) פתוח הסתיים עבור 5-10 דקות כדי לשטוף את הדם דרך צנתר הורידים. יהיו כמה קרישי דם בצנתר השקע; לרוקן את הקרישי דם עם מאגר מבשם לפני סגירת מעגל זלוף.
  4. לחבר את הקצה של קטטר ורידי עם אבובים שקע באמצעות מחבר בורג על מנת לסגור את המעגל (איור 1B). בשלב זה, לבצע2 גז המתת חסד ולוודא על ידי ניקוב החזה או כל שיטה אחרת.
  5. כסו את החדר הלח עם המכסה החומם. בדוק את רמת האופן מעת לעת והוסף יותר במידת הצורך. ניתן לבצע את perfusion עד 2 שעות.
    הערה: 5 מ ל של מבשם יהיה צורך להקים את מערכת הפרפיוז הסגורה. אם אין דליפה או בצקת, נפח הדרך יהיה ירידה בפחות מ-1 מ ל ומאגר נוסף לא יהיה צורך. כדי למנוע בצקת שנגרמה על ידי הטרובוס היקפי מחזורי, מאגר זלוף המכיל 0.002% הפארין ניתן להשתמש ב -10 דקות הראשונות של הפרזיה, אבל יש לשנות כדי לאגור ללא הפארין כדי למנוע את הדליפה בקצה החתכים.
  6. במקרה הצורך, הוסיפו את האפשרות הכימית לתוך מאגר ההיתוך או ליציאת ההזרקה בכל עת (איור 1ב -5). לדוגמה, 10 μL של 10 מ"ג/mL Hoechst33342 ניתן להוסיף לתוך המיבשם להכתים את גרעיני התא 2 h לפני סוף perfusion, או 50 μL של 1 מ"ג/mL DyLight 649-lectin כדי להכתים את התאים של כלי הדם האנדותל מזערי לפני סוף perfusion.
    הערה: אם מנסים להכתים את מח העצם עם פתרון הואכסט, עכברים יצטרכו להיות מוזרק מראש 30 דקות לפני הניתוח.
  7. לאחר זלוף עם ריאגנטים פלורסנט, לשטוף עם מאגר זלוף במשך 10 דקות נוספות כדי למזער את הזריחה הרקע.

4. ניתוח איברים

  1. איסוף איברים כולל ביקורות, ערמונית, שלפוחית השתן, עצם הירך, שריר, ועור (למשל, רגליים). בלו חתיכת איבר על 1 מ"מ3 ומשטח בין שתי שקופיות זכוכית.
    1. מחקר מתחת למיקרוסקופ פלורסנט הפוך באמצעות DAPI/Cy5 עירור ומסנני פליטה (עירור לייזרים: DAPI, 405 ננומטר; Cy5, 640 ננומטר). השתמש לפחות במטרה להגדלה של 200x עם מיפתח מספרי 0.45.
    2. לחילופין, לתקן את האיברים עם 4% פורמלדהיד פתרון עבור 24 שעות ולבצע המטאוקסילין-אאוזין כתמים19.
  2. כדי ליצור חלון עצם עבור התבוננות מח עצם שלמים, לשתק את שני הקצוות של עצם הירך או השוקה ולגרד את העצם קליפת המוח עם הקצה לרוחב של המחט G 19 כדי לחשוף את הקרום; לדאוג לשמור על שכבה דקה של עצם שיורית. עצם מניחים על מכסה כיסוי עם החלון מול זכוכית ותמונה עם מיקרוסקופ הפוכה קונפוקלית וקד באמצעות dapi ו Cy5 ערוצי כפי שמתואר לעיל. התאים והרשת כלי הדם בחלל מח העצם ניתן להבחין בקלות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הגדרת מערכת היתוך מעגל סגור באמצעות צינורית של אבי העורקים הבטן ואת האובקאווה הנחותים של 8-10 שבוע עכברים הישן תוך שמירה על נפח של מאגר זלוף פחות מ 10 mL. איור 3A מראה תמונות מיקוד לאחר מבשם רקמות עם הפתרון של הכפיל המכיל Hoechst 33342 ו dylight 649-לקטין. שריר, מח עצם, ביקורות, שלפוחית השתן, הערמונית, ואת העור ברגל להראות יעיל כתמים גרעיניים וסקולרית. איור 3B מראה המטאוקסילין-אאוזין כתמים של איברים לאחר 3 שעות של מיקרופון nor.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המעגל המתואר ניתן להשתמש כדי לחקור שאלות מחקר שונות, למשל את התפקיד של מרכיבי סרום שונים מחסומי רקמות באספקת סמים, או החיסונית והגזע הסחר בתאים. ניתן להוסיף מערכות שונות לאספקת סמים (למשל, ליפוזומים וחלקיקים) כדי להבין את התפקיד של גורמים פיזיולוגיים וביוכימיים במסירה. משך הפרזיה יכול להשתנות, תלוי ברקמה שנחקרה, מטרות מדעיות והלחנה של מבשם. אנו מציגים כאן את התוצאות של מיזוג עד 2 h באמצעות מדיה זלוף בסיסי המורכב של הפתרון של המצלצל עם לקטט ו אלבומין. יש לציין כי מטרת העבודה הנוכחית הייתה להקים את מעגל הפרפיוז במקום לפתח ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

המחקר היה נתמך על ידי המענק NIH CA194058 כדי DS, Skaggs בית הספר להענקת מרקחת המגמה הזרע תוכנית (DS); הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (גרנט No. 31771093), הפרויקט של שיתוף פעולה בינלאומי של מחוז ג'ילין (No 201180414085GH), קרנות המחקר הבסיסי של האוניברסיטאות המרכזיות, התוכנית JLU מדע וטכנולוגיה מחקר חדשני הצוות (2017TD-27, 2019TD-36).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>ציוד
3.5x-90x מיקרוסקופ זום סטריאו על מעמד בום עם תאורת LEDאמסקופמק"ט: SM-3BZ-80S
פחמן דו חמצני, USPAirgas healthcare19087-5283
מיקרוסקופ קונפוקליNIKONECLIPSE Ti2
עט קוטר סטרילי חד פעמי עם FIABבטמפרטורה גבוההF7244
מלכודת בועות בתא לח (חלק 6 באיור 1)מכשיר הרווארד733692מותאם אישית כמיכל הפרפיסט; אפשר גם זלוף בלחץ קבוע
כיסוי תא לח עם חלון קוורץ (חלק 3 באיור 1)מכשירי הרווארד733524לשמור על טמפרטורת החדר
תא לח עם מחליף חום צינור מתכתמכשיר הרווארד732901תא לח מצופה מים עם מכסה לשמירה על טמפרטורת הפרפוזה והעכבר
מחזיקי מחטים Olsen-Hegar עם חותכי תפריםכלי מדע עדינים (FST)125014
C2649150AE06USPAirgas
(חלק 4 באיור 1)מכשירי הרווארד730113לספק פרפוזה לצינורית בתא
הלחבקרת סרוו של SCP plugsys F/Perfusion (חלק 1 באיור 1)מכשיר הרווארד732806לשלוט במהירות הטיהור
כרית סיליקוןהרווארד
סט צינורות סיליקון (חצים באיור 1)מכשיר הרווארד (TYGON)733456
מלקחיים דפוס סטנדרטי לסטודנטיםכלי מדע עדינים (FST)91100-12
מספרייםכירורגייםכלי מדע עדינים (FST)14001-14
שולחן לתא לחמכשיר הרווארד734198
Thermocirculator (חלק 2 באיור 1)מכשיר הרווארד724927אמבט מים במחזור לכל הרכיבים המעטפים במים
תא עצירה תלת כיווני (חלק 5 באיור 1)Cole-Palmer30600-02
מכונת הרדמה וטרינריתהיילנדHME109
<חזק>חומרים
19-G BD מחט PrecisionGlideBD305186 לשיתוק המחט המכונפת של Insyte Autoguard ולגירוד עצם קליפת המוח
4-0 תפרי משיKeebomed-Hopemedical427411
6-0 תפרי משימסנן 427401
( 0.2 ומיקרו; m)ThermoFisher42225-CAעבור 5% BSA-RINGER'
סמן קבועStaedtler342-9
(10 מ"ל)פישר סיינטיפיק14-823-2E
(60 מ"ל)מסנן BD309653ל-5% BSA-RINGER' S
ריאגנטים
1% כחול אוונס (w/v) בתמיסת מלח עם חוצץ פוספט (PBS, pH 7.5)Sigma314-13-6
10% פורמליןvelleyvet36692
עכברי BALB/c (בני 8-10 שבועות)צ'ארלס ריבר
בקסטר Viaflex לקטט הפתרון של רינגרEMRN Medical Supplies Inc.JB2324
אלבומין סרום בקרThermo Fisher11021-037
דבק ציאנואקרילטדבק Krazy
Vector Laboratories, Inc.ZB1214
אתנול (70% (נפח/נפח))Pharmco111000190
Hoechst33342Life TechnologiesH3570
IsofluranePiramal Enterprises Limited66794-017-25
פוספט חוצץמלח Gibco10010023
משאבת רולר בריאות מכשיר Keebomed-Hopemedical מסנן S מזרק מזרק DyLight-649-לקטין

מקורות

  1. Ghaidan, H., et al. Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion. Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125(2019).
  2. Kabagambe, S. K., et al. Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation. Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).
  3. Knaak, J. M., et al. Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts. Journal of Visualized Experiments. (90), e51419(2014).
  4. Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A. Gluconeogenesis in the perfused rat liver. Biochemical Journal. 101 (2), 284-292 (1966).
  5. Nielsen, S., et al. Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).
  6. Sutherland, F. J., Hearse, D. J. The isolated blood and perfusion fluid perfused heart. Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).
  7. Schreiter, T., et al. An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).
  8. Sevick, E. M., Jain, R. K. Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity. Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).
  9. Duyverman, A. M., et al. An isolated tumor perfusion model in mice. Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).
  10. Sears, H. F., et al. Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody. J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).
  11. Duda, D. G., et al. Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).
  12. Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft. Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).
  13. Sevick, E. M., Jain, R. K. Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure. Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).
  14. Zhang, W. T., et al. Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche. PLoS One. 10 (5), (2015).
  15. Di Buduo, C. A., et al. Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function. Biomaterials. 146, 60-71 (2017).
  16. Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia. Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).
  17. Tietjen, G. T., et al. Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys. Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).
  18. Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).
  19. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986(2008).
  20. Hekman, M. C., et al. Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study. Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).
  21. Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777. Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

In SituHoechst
הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.