אינדוקציה של שינוי תאי לטומנאנואל באמצעות הזרקה בתוך החלק האחר

סיכום

אנו מתארים הזרקה תאיים כי מעסיקה מחט כפוף בקצה כי ניתן לייצב את הגולגולת, ובכך לחסל את הסיכון של נזק על הבסיס הבסיסי. הגישה יכולה לשמש למיפוי הגורל הגנטי ומניפולציות של תאים לטומאנעיים ולמעקב אחר תנועת נוזל מוחי שדרתי.

תקציר

הפרוטוקול המתואר כאן מתאר כיצד להזריק בביטחה ובאופן ידני פתרונות דרך הcisterna מגנה תוך סילוק הסיכון לנזק על הבסיס הבסיסי. פרוטוקולים שפורסמו בעבר ממליצים באמצעות מחטים ישר כי יש להוריד למקסימום של 1-2 מ"מ מהמשטח ריר. ירידה פתאומית התנגדות פעם קרום ריר כבר נוקב מקשה לשמור על המחט במצב קבוע. השיטה שלנו, במקום זאת, מעסיקה מחט כפופה לקצה שניתן לייצב כנגד עצם העורף של הגולגולת, ובכך למנוע ממזרק לחדור לתוך הרקמה לאחר ניקוב הקרום הריר. הנוהל הוא פשוט, מנוכל, ואינו גורם לאי נוחות ארוכת טווח בבעלי החיים המופעלים. אנו מתארים את אסטרטגיית ההזרקה תאיים בהקשר של מיפוי הגורל הגנטי של תאי כלי דם ללפטואנגים. אותה טכניקה יכולה, יתר על כן, להיות מנוצל כדי להתמודד עם מגוון רחב של שאלות מחקר, כגון בדיקה את התפקיד של לטומאנטינוגים ב-נוירופיתוח והתפשטות של דלקת קרום המוח בקטריאלי, באמצעות צריבה גנטית של גנים מעורבים בתופעות אלה. בנוסף, ההליך יכול להיות משולב עם מערכת אינפוזיה יצרנית עבור מסירה קבועה משמש למעקב אחר התנועה נוזל מוחי באמצעות הזרקה של מולקולות המסומנת באופן פלואורוסקופים.

מבוא

תאים לטומאננטאל הם האוכלוסייה הדומה ביותר של תאים מאורגנים בשכבה דקה על ידי הנחת המוח וביטוי גנים מעורבים קולגן הקישור (g., dcn ו לאם), ובהקמת מחסום מאנקרום המוח (g, Cldn11)^1,2. תאים לטומניניאל מעורבים במגוון רחב של תפקודים פיזיולוגיים, החל משליטה קפדנית על ניקוז נוזל השדרה השדרתי³ להדרכה של ושלתי עצביים במוח המתפתח^4,5. מחקר שנערך לאחרונה הציע גם כי לפטטואנגים ב היילוד עשוי הנמל הרדיאלי של התאים הרדיאליים להגר למוח בתוך מתוך מעגל ולהתפתח נוירונים בקליפת כליה⁶.

פרוטוקול

הליכים כירורגיים שהוצגו בזאת אושרו על ידי Stockholms Norra Dnförssetiska Nämnd ובוצע בהסכמה עם מפרטים שסופקו על ידי מכון המחקר (Karolinska מכון, שוודיה).

הערה: הזרקת התאיים ניתן להתאים בגמישות למטרות מחקר מרובים. אנו מציגים להלן הליך שפותח ביעילות תווית לטומטואנגים לפני מיפוי הגורל מבוסס על הזרקה של אנדוקסיפן בקו העכבר הטרנסגניים נושאת R26R-tdTomato¹² ו creer, האחרון תחת Cx30 יזם¹³. ניתן להשיג התוויות של אוכלוסיה זו של תאים באמצעות הזרקה של מבנים ויראליים באמצעות אותו ההליך המתואר להלן. לבסוף, גישה זו יכולה להיות מועסק עבור מעקב אחר זרימת נוזל מוחי שדרתי, על ידי אינפוזיה של מע....

תוצאות

הזרקה התאיים של אנדוקסיפן בעכברים טרנסגניים המבטא CreER תחת Cx30 יזם¹³ ו עיתונאי פלורסנט inducible מאפשר שילוב מסוים של תאים לטומאנואנציטים ללא תיוג השכנה Cx30-המבטא השכנות ו-משטח astrochymal בקליפת המוח (איור 1). על מנת לקבל גישה לcisterna מגנה, בעל החיים מורדם ממוקם עם הגוף והראש שלה בזווית של כ 120 °, ובכך, המאפשר את גב הצוואר שלה להיות נמתח (איור 1א). החלק atlanto-העורף של קרום ריר הוא.......

דיון

הפרוטוקול המתואר כאן מציג הליך פשוט וברור לתייג תאים לטומאנציאל מיפוי הגורל. אנו משתמשים הזרקה תאיים של אנדוקסיפן, מטבוליט פעיל של טממוקסיפן, כדי לגרום לביטוי של כתבת פלורסנט tdTomato ב Cx30-CreER; . R26R. עכברים^12,13-

לעומת פרוטוקולים אחרים המשמשים לקבלת גישה לנוזל שדרתי באמצעות cisterna מגנה⁹, הגישה שלנו מבטיחה מנהל ידני בטוח הודות לשימוש של מחט מכופף כי ניתן לייצב את עצם העורף של הגולגולת. לאחר הקרום הריר של .......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
יחידת הרדמה	Univentor 410	8323102	שלם של וופורייזר, תא וצינורות המתחברים לתא ולמחזיק ראש עכבר
הרדמה (איזופלורן)	בקסטר רפואי AB	000890
בטדין	סיגמא-אולדריץ'	PVP1
קרפרופן	אוריון פארמה AB	014920	שם מסחרי דבק Rymadil
Cyanoacrylate	קארל רוט	0258.1	השתמש בתפרי משי 5-0, בחלופה
דבק רקמות	Medbond Stoelting	50479
DMSO	Sigma-Aldrich	D2650
אנדוקסיפן	סיגמא-אולדריץ'	E8284
אתנול 70%	היסטולאב	01370
מזרק המילטון (מחט משופעת 30 גרם)	המילטון	80300
מחזיק ראש עכבר Lidocaine	Aspen Nordic	520455
	Narishige International	SGM-4	עם פיה לאנסטטיקה בשאיפה. לחלופין, השתמש במסגרת סטריאוטקטית
מספריים	Fine Science Tools	15009-08
מכונת גילוח	Aesculap	GT420
חניתות ספיגה סטריליות	Fine Science Tools	18105-01	ספוגיות כותנה סטריליות הן גם אופציה טובה
מפריד כירורגי	מכשיר דיוק עולמי	501897
פינצטה	Dumont	11251-35
ויסקוטירס	באוש & לומב נורדי AB	541760