פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור כריתת למינקטוע מדויקת עבור אינדוקציה של פגיעה יציבה בחוט השדרה מסוג transection במודל העכבר, עם נזק משני מינימלי למחקר פגיעה בחוט השדרה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אינדוקציה של פגיעה מלאה בחוט השדרה מסוג טרנס-פעולה בעכברים
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
פגיעה בחוט השדרה (SCI) מובילה במידה רבה לאובדן תפקוד בלתי הפיך וקבוע, הנפוץ ביותר כתוצאה מטראומה. מספר אפשרויות טיפול, כגון שיטות השתלת תאים, נחקרים כדי להתגבר על המוגבלויות מתישה הנובעות SCI. רוב הניסויים בבעלי חיים פרה-קליניים נערכים במודלים של מכרסמים של SCI. בעוד מודלים חולדה של SCI כבר בשימוש נרחב, מודלים עכבר קיבלו פחות תשומת לב, למרות מודלים עכבר יכול להיות יתרונות משמעותיים על מודלים חולדה. הגודל הקטן של עכברים משווה לעלויות תחזוקה נמוכות יותר של בעלי חיים מאשר לחולדות, והזמינות של דגמי עכבר טרנסגניים רבים היא יתרון עבור סוגים רבים של מחקרים. פגיעה חוזרת ומדויקת בבעלי החיים היא האתגר העיקרי למחקר SCI, אשר מכרסמים קטנים דורש ניתוח דיוק גבוה. מודל הפציעה מסוג transection היה מודל פציעה נפוץ בעשור האחרון למחקר טיפולי מבוסס השתלה, עם זאת שיטה מתוקמנת לזימת פציעה מלאה מסוג transection בעכברים אינה קיימת. פיתחנו פרוטוקול כירורגי לגרימת פציעה מלאה של סוג התרדמות בעכברים C57BL/6 ברמת בית החזה 10 (T10). ההליך משתמש במקדחת קצה קטנה במקום rongeurs כדי להסיר במדויק את ה למינה, לאחר מכן להב דק עם קצה חיתוך מעוגל משמש כדי לגרום לתנופה של חוט השדרה. שיטה זו מובילה לפציעה מסוג transection לשחזור מכרסמים קטנים עם נזק מינימלי לשרירים ולעצם, ולכן ממזערת גורמים מבלבלים, במיוחד כאשר ניתחו תוצאות תפקודיות התנהגותיות.
מבוא
פגיעה בחוט השדרה (SCI) היא בעיה רפואית מורכבת התוצאה היא שינויים דרסטיים בבריאות ואורח החיים. אין תרופה ל-SCI, והפתופיזיולוגיה של SCI אינה מובנת היטב. מודלים של בעלי חיים SCI, במיוחד דגמי מכרסמים, מציעים כלי יקר ערך לניסויים בטיפולים חדשים, והשתמשו בהם כדי לחקור SCI במשך עשרות שנים. עד כה, מעל 72% של מחקרים פרה-קליני SCI העסיקו מודלים חולדה, לעומת רק 16% שהשתמשו בעכברים1. למרות חולדות, בשל גודלם גדול יותר ונטייה ליצור חללים דומה SCIs אנושי, היו באופן מסורתי חיות המודל המועדף לחקר גישות טיפוליות חדשניות, עכברים (כולל מודלים רבים של עכבר טרנסגניים) נמצאים כעת בשימוש בתדירות גבוהה יותר כדי ללמוד מנגנונים תאיים ומולקולריים של SCI2....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים בוצעו באישור הוועדה לאתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת גריפית' (ESK/04/16 AEC ו-MSC/04/18 AEC) על פי ההנחיות של המועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של אוסטרליה.
1. הליך התעוות בעלי חיים לניתוח
- להנהים ולייצב את החיה.
- השתמש בעכברים בני 8-10 שבועות C57BL/6. השתמש 5% isoflurane ב 1 L/min חמצן עבור אינדוקציה של הרדמה. לצורך תחזוקה של הרדמה, יש להשתמש ב-1.5%-2% isoflurane ב-1 ל'/דקה חמצן. אשר הרדמה מתאימה על ידי ביסוס חוסר רפלקס כאב בזנב ובכפות האחוריים.
- לנהל buprenorphine (0.03 מ"ג/ ק"ג משקל גוף) עבור משכך כאבים ו enrofloxacin (10 מ"ג/ ק"ג משקל גוף) עבור כיסוי אנטיביוטיקה, תת עורית על פי משקל הגוף.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
השיטה המתובררת כפי שמתוארת באיור 1, כרוכה בייצוב הולם של העכבר(איור 1A) והדמיהטובה של עמוד השדרה ורקמותמצנחי דם (איור 1B). תהליך קוצני ולמינה ניתן לדמיין בבירור עם ניתוח שרירים מינימלי ואובדןדם (איור 1C,אזור מודגש). קידוח הקצה ים ים מבוצע כפי שמתואר איור 1D, כדי ליצור חלון כריתת למינקטה כפי שמתואר על ידי המלבן. חלון כריתת ה למינקטוברית שנוצרת ברור ומאפשר הדמיה ישירה וגישה ל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטה זו גורמת לפציעה מלאה של סוג ההתזזה ברמת החוליות T10 בעכברים, מה שגורם לשיתוק מוחלט של בעל החיים, מתחת לרמת הפציעה. בסך הכל, שיטה זו גורמת לדימום מינימלי, נזק משני זניח ופציעה יציבה, לשחזור. בהשוואה לשיטות שפורסמו בעבר של transection ללא כריתת למינקטוע10, שיטה זו מציעה את היתרונות במונחים של הדמיה ישירה מבלי לתמרן את העקמומיות של עמוד השדרה, שליטה טובה יותר על שלמות הפציעה, ויכולת משופרת לשלוט דימום ולהשיג hemostasis. היתרון של שיטה זו הוא כי הפרוטוקול ניתן לשנות לשימוש בכל רמות חוליות אחרות מ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לסופרים אין מה לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי סטודנט בינלאומי באוניברסיטת גריפית '(PhD) קצבה RR, פרי קרוס קרן מענק JE ו JSJ, מענק קרן קלם ג'ונס JSJ ו JE, ומענק ועדת ביטוח תאונות דרכים של קווינסלנד JSJ ו JE.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Baytril הזרקה 50 מ"ג/מ"ל, 50 מ"ל | Provet | BAYT I | תרופה לטיפול לאחר הניתוח |
| Betadine 500 מ"ל | Provet | BETA AS | |
| מחזיק מחט מתכלה Castroviejo, נעילת | לשימוש חוזר | ProSciTech | T149C |
| , עגול עם דפנות חדות, קצה יחיד, זוויתי | ProSciTech | TXD101A-X | |
| צמר גפן לשימוש חוזר ( 5 יחידות) | Multigate | 21-893 | מתכלה |
| Dremel Micro | DREMEL | 8050-N/18 | כלי סיבובי אלחוטי |
| מלקחיים חבישה עדינים | Multigate | 06-306 | חד פעמיים לשימוש חד פעמי |
| Kemmer Prä zision | SM 32 M 0550 070 | ||
| מלקחיים לשימוש חוזר Dumont #7b | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| פינצטה Dumont | ProSciTech | T05-822 | |
| גוזם פרווה | WAHL | WA9884-312 | גוזם שיער אפס חפיפה |
| מספריים איריס, Ti, קצות חדים, ישר, 90 מ"מ | ProSciTech | TY-3032 | לשימוש חוזר |
| איזופלורן איזותזיה NXT 250 | Provet | ISOF 00 HS | חומר הרדמה |
| Colibri Retractor - 4 ס"מ | Fine Science Tools | 17000-04 | |
| ידית אזמל | ProSciTech | T133 | |
| כפפות כירורגיות לטקס לשימוש חוזר בגודל 7.5 | Medline | MSG5475 | |
| נתרן כלורי מתכלה 0.9% | STS | PHA19042005 | מתכלה |
| חבילת חבישה סטרילית | Multigate | 08-709 | |
| וילון חד פעמי נוזל סטרילי אטום לשימוש חד פעמי 60x60 ס"מ | Multigate | 29-220 | חד פעמי |
| רוח כירורגית חד פעמית 100 מ"ל | Provet | # SURG SP | מתכלה |
| - SILK BLK 45 ס"מ 5/0 FS-2 | Johnson & ג'ונסון מדיקל | 682G | תפר משי |
| - Vicryl 70 ס"מ 5-0 S/A FS-2 | Johnson & Johnson Medical | VCP421H | Vicryl Suture |
| Temgesic 0.3 מ"ג ב-1 מ"ל, x 5 אמפולות (תרופה מסוג S8) | Provet | TEMG I | תרופה לטיפול לאחר הניתוח |
מקורות
- Sharif-Alhoseini, M., et al. Animal models of spinal cord injury: a systematic review. Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).
- Lee, D. H., Lee, J. K. Animal models of axon regeneration after spinal cord injury. Neuroscience Bulletin. 29 (4), 436-444 (2013)....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
