הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ניתוח פתולוגי של גרורות ריאות בעקבות הזרקת וריד זנב לרוחב של תאים סרטניים

9.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61270

⸱

20 במאי 2020

 ,  ,  , 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center, 2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

במאמר זה

הודעת תיקון

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

סיכום

הזרקה תוך ורידי של תאים סרטניים משמשת לעתים קרובות במחקר גרורות, אבל נטל הגידול גרורתי יכול להיות קשה לנתח. כאן, אנו מדגימים מודל הזרקת וריד זנב של גרורות וכוללים גישה חדשנית לניתוח נטל גידול הריאות גרורתי שנוצר.

תקציר

גרורות, הגורם העיקרי לתחלואה ותמותה עבור רוב חולי הסרטן, יכול להיות מאתגר למודל פרה-אקליני בעכברים. מעט מודלים ספונטניים של גרורות זמינים. לכן, מודל גרורות ניסיוני מעורבים הזרקת וריד זנב של קווי תאים מתאימים הוא עמוד התווך של מחקר גרורות. כאשר תאים סרטניים מוזרקים לווריד הזנב לרוחב, הריאה היא האתר המועדף עליהם של קולוניזציה. מגבלה פוטנציאלית של טכניקה זו היא כימות מדויק של נטל גידול הריאות גרורתי. בעוד כמה חוקרים לספור macrometastases של גודל מוגדר מראש ו / או לכלול micrometastases בעקבות חתך של רקמות, אחרים קובעים את האזור של נגעים גרורתיים ביחס לאזור הרקמה הרגיל. שתי שיטות הכימות האלה יכולות להיות קשות מאוד כאשר הנטל גרורתי גבוה. להלן, אנו מדגימים מודל הזרקה תוך ורידי של גרורות ריאות ואחריו שיטה מתקדמת לכימות נטל הגידול גרורתי באמצעות תוכנת ניתוח תמונה. תהליך זה מאפשר לחקור פרמטרים מרובים של נקודת קצה, כולל גודל גרורות ממוצע, מספר גרורות כולל ואזור גרורות כולל, כדי לספק ניתוח מקיף. יתר על כן, שיטה זו נבדקה על ידי לוח פתולוג וטרינרי מוסמך על ידי המכללה האמריקאית לפתולוגים וטרינריים (SEK) כדי להבטיח דיוק.

מבוא

למרות היותו תהליך מורכב מאוד ולא יעיל1, גרורות הוא תורם משמעותי לתחלואה ותמותה של חולי סרטן2. למעשה, רוב מקרי המוות הקשורים לסרטן מיוחסים להתפשטות גרורתית של מחלות3,4. על מנת שתאי הגידול יצאו גרורות בהצלחה, עליהם להתנתק מהאתר הראשי, לפלוש דרך סטרומה סמוכה, לחדור למחזור הדם או ללימפטיקה, לנסוע למיטה נימית של אתר משני, להזרים לרקמה המשנית, ולהתרבות או לגדול כדי ליצור נגעים גרורתיים5. השימוש במודלים של עכברים היה קריטי לקידום ההבנה של המנגנונים המולקולריים האחראים על זריעה גרורתית וצמיחה6,7. כאן, אנו מתמקדים גרורות סרטן השד, אשר הן מודלים עכבר מהונדסים גנטית, כמו גם שיטות השתלה משמשים לעתים קרובות – כל אחד עם סט משלהם של יתרונות ומגבלות.

מודלים של גידולי החלב מהונדסים גנטית עושים שימוש ביזמים ספציפיים לבלוטת החלב, כולל MMTV-LTR (חוזרים על טרמינל ארוך של וירוס החלב של העכבר) ו- WAP (חלבון חומצי מי גבינה), כדי להניע ביטוי של טרנסג'נים באפיתל החלב8. אונקוגנס כולל אנטיגן T בינוני פוליומה (PyMT), ErbB2 / Neu, c-Myc, Wnt-1, ווירוס simian 40 (SV40) באו לידי ביטוי באופן זה9,10,11,12,13, ובעוד מודלים גנטיים אלה שימושיים לחקר חניכת גידול ראשוני והתקדמות, מעטים בקלות גרורות לאיברים רחוקים. יתר על כן, מודלים אלה של עכבר גנטי הם לעתים קרובות יותר זמן ועלות אוסרת מאשר מודלים גרורות ספונטניות או ניסיוניות. בהתחשב בהגבלתם של רוב המודלים של גידולי האם מהונדסים גנטית לחקר גרורות, טכניקות השתלה הפכו לשיטות אטרקטיביות לחקר תהליך מורכב זה. זה כולל אורתוטופיה, וריד זנב, תוך לב, הזרקה תוך גולגולתית של קווי תאים מתאימים.

למרות מספר שורות תא סרטן השד בקלות גרורות בעקבות הזרקה אורתוטופית לתוך כרית שומן חלב14,15, עקביות ושחזור של נטל הגידול גרורתי יכול להיות אתגר, ואת משך המחקרים האלה יכול להיות בסדר של מספר חודשים. להערכת גרורות ריאות, בפרט, הזרקה תוך ורידי לתוך הווריד הזנב היא לעתים קרובות שיטה לשחזור ויעילה יותר עם התפשטות גרורתית המתרחשת בדרך כלל בתוך טווח של כמה שבועות. עם זאת, מאז מודל הזרקה תוך ורידי עוקף את השלבים הראשוניים של מפל גרורתי, יש לנקוט זהירות בפירוש התוצאות של מחקרים אלה. בהדגמה זו, אנו מראים הזרקת וריד זנב של תאי גידול מאמרי יחד עם שיטת ניתוח מדויקת ומקיפה.

למרות שקהילת המחקר התקדמה משמעותית בהבנת התהליך המורכב של גרורות סרטן השד, ההערכה היא כי מעל 150,000 נשים יש כיום סרטן שד גרורתי16. מתוך אלה עם סרטן השד בשלב IV, >36% מהחולים יש גרורות ריאות17; עם זאת, התבנית הספציפית לאתר והשכיחות של גרורות יכולות להשתנות בהתאם לתת-סוג מולקולרי18,19,20,21. חולים עם גרורות ריאות הקשורות לסרטן השד יש הישרדות חציונית של רק 21 חודשים המדגיש את הצורך לזהות טיפולים יעילים סמנים ביולוגיים חדשניים עבור מחלה זו17. השימוש במודלים גרורתיים ניסיוניים, כולל הזרקה תוך ורידי של תאים סרטניים, ימשיך לקדם את הידע שלנו על אתגר קליני חשוב זה. בשילוב עם פתולוגיה הדמיה דיגיטלית ואת השיטה של ניתוח נטל גידול ריאות גרורתי המתואר בפרוטוקול זה, זריקות וריד זנב הם כלי רב ערך לחקר גרורות סרטן השד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

השימוש בבעלי חיים פעל על פי תקנות משאבי בעלי חיים של המעבדה האוניברסיטאית (ULAR) במסגרת הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים (IACUC)-שאושרה פרוטוקול 2007A0120-R4 (PI: ד"ר ג'ינה סייזמור).

1. הזרקת וריד זנב של תאים סרטניים בשד

  1. הכנת תאים ומזרק להזרקה
    1. צלחת מספר מתאים של תאים בהתבסס על מספר העכברים וריכוז התאים שיש להשתמש בהם.
      הערה: מספר התאים המוזרקים והזמן להתפתחות גרורות יהיו תלויים בקו התא המשמש ויהיה צורך למטב אותו. בהדגמה זו, 1 x 106 תאי מד"א-MB-231 מוזרקים תוך ורידי לתוך NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ (NSG) עכברים, ונגעים ריאות מקרוסקופיים נצפים לא יאוחר מ 24 ימים לאחר הזרקה. עבור קו תא הגידול mVT1 מורין mammary17, 3 x 106 תאים מוזרקים לעכברי FVB / N המוכשרים למערכת החיסון עם גרורות ריאות רבות שנצפו על ידי 14 ימים22,23.
    2. שאפו מדיה ושטפו לוחות תאים עם PBS 1x. Trypsinize תאים בנפח מינימלי, הוסף נפח מדיה מתאים וספור תאים באמצעות המטוציטומימטר או שיטה מועדפת אחרת. ניתן להשתמש בכחול טריפן (0.4%) או בצבעים אחרים של תאים חיים/מתים כדי לקבוע ספירת תאים בת קיימא.
    3. כדורי תאים על ידי ספינינג ב 180 x g במשך 5 דקות.
    4. Resuspend מספר מתאים של תאים סטרילי 1x PBS כך נפח של 100 μL מוזרק לכל עכבר. שמור על השעיית תא על קרח כדי לשמור על הכדאיות.
    5. לפני ההזרקה, ביסודיות resuspend תאים עם 200 μL או 1 מ"ל pipette כדי למנוע גושים. צייר 100 μL במזרק אינסולין 28 גרם (ראה טבלה של חומרים).
    6. לחסל את כל בועות האוויר על ידי שמירה על המזרק אנכי, הקשה על המזרק, ולאט לאט להתאים את הבוכנה. הזרקת בועות אוויר לווריד עלולה לגרום לתסחיף אוויר/גז שעלול להיות קטלני.
  2. הזרקת וריד זנב לרוחב
    הערה: לבדיקות גרורות ניסיוניות של סרטן השד, זריקות מבוצעות על > 6 שבועות עכברים נשיים.
    1. טפל בעכבר בזנב והחלק את החיה לתוך צינור מחורץ / התקן ריסון בגודל מתאים (עיין בטבלת החומרים עבור התקן איפוק המשמש).
    2. הכנס את חלק התקע של התקן האיפוק והצב את העכבר על צידו כך שווריד הזנב הצדדי שלו יהיה קל לצפייה. לעכבר עורק גחון בהתאם לאיבר המין, וריד גפי ושני ורידים לרוחב.
    3. נקה את פני השטח של זנב העכבר עם ניגוב אספטי. תפוס את הזנב בין האצבע והאגודל ביד לא דומיננטית והחל מתח קל.
    4. החל בחלק הדיסטלי של הזנב, הכנס את המחט במקביל לווריד עם שיפוע בסופו של דבר.
    5. אם מותר, בזהירות לסכם את המחט ולהתכופף לזווית של 20-30°. מומלץ מאוד לגשת לבד או להתקן סיכום מחטים.
      הערה: אין צורך לשאוף כמו זה עלול לגרום לווריד לקרוס. עם זאת, הבזק קטן של דם ניתן לראות כאשר הוצב לראשונה. המחט תתקדם בצורה חלקה לתוך הווריד עם מיקום נכון.
    6. לאט לאט לחלק את הנפח המלא לתוך הווריד. לא צריכה להיות התנגדות כאשר הבוכנה נדחפת.
    7. אם כל התנגדות מורגשת, מיד להסיר את מחט המזרק. במידת הצורך, הכנס מחדש את המחט (באופן אידיאלי לא יותר מ 3 ניסיונות) נע לכיוון הקצה הפרוקסימלי של הזנב או וריד לרוחב מנוגד.
    8. סביר להניח שנפח קטן של דם ייעקר לאחר ההזרקה. יש למרוח לחץ עדין עם גזה סטרילית ולנגב עם מגבון אספטי.
    9. יש להיפטר מיד ממזרק במיכל חדות מתאים.
    10. החזר את העכבר לכלוב נקי ומאוורר ופקח על סימני מצוקה.
    11. לפקח על עכברים 2-3x/שבועי לסימנים של היווצרות גרורות (נשימה מאומצת, יציבה כפופה, ירידה במשקל) ומצוקה כללית. הזמן להתפתחות גרורות יהיה תלוי קו התא ומתח העכבר.
    12. אם משתמשים במכשיר הדמיה חיה חיה של in vivo, עכברי תמונה מיד לאחר הזרקת וריד הזנב כדי לאשר הזרקה מוצלחת של תאים ולקבל נתוני זמן "אפס" (פרטים ספציפיים על הדמיית ביולומינציה של vivo אינם כלולים כאן, אלא מתוארים על ידי יאנג ואח '24).

2. קיבוע רקמת ריאה וניתוח נטל גידול ריאות גרורתי

  1. אינפלציית רקמת ריאה כדי לשמור על הפורמט המבני של הריאות עבור היסטופתולוגיה
    1. לאחר נהלי המתת חסד מאושרים (למשל פחמן דו חמצני ב 30 - 70% תזוזה של נפח התא / דקה) הם אחריו, לאבטח את פגר העכבר ללוח ניתוח עם סיכות. או לרסס או להחיל 70% אתנול כדי לשמור על פרוות העכבר מהדרך במהלך הניתוח.
      הערה: חנק דו תחמוצת הפחמן יכול לגרום לדימום ריאתי כמו נגע רקע צפוי, במיוחד בקצבי זרימה איטיים יותר.
    2. פתחו את בית החזה עם חתך בקו האמצע, הרחיבו את החתך באופן קרני/קאודלי דרך הציפק, וחתכו את הסרעפת על ידי אחיזת תהליך הקסיפיד.
    3. באמצעות קבוצה נפרדת של מספריים כדי לא לעמעם את הלהבים, לחתוך את הצלעות לאורך כל צד של בעצם החזה ולהסיר בזהירות כלוב צלעות משאיר מקום לריאות להתרחב.
    4. לבודד את קנה הנשימה על ידי הסרת בלוטות רוק תת-קרקעיות ושרירים אינפרהיואידים. הצבת סיכות משני צדי קנה הנשימה יכולה למנוע תנועה לא רצויה במהלך החדרת מחט.
    5. מלא מזרק 26 G עם 2-3 מ"ל של 10% פורמלין חוצץ נייטרלי ולהכניס לתוך קנה הנשימה.
    6. לאט להזריק פורמלין ולצפות הריאות להתרחב (בדרך כלל דורש ~ 1.5 מ"ל של פורמלין).
    7. ברגע שפורמלין מתחיל לדלוף מהריאות (הימנעו מאינפלציה יתר), צבוטו את קנה הנשימה עם זוג מלקחיים, הסירו מחט מזרק וניתקו את כל מערכת הנשימה. מניחים ריאות, לב וכו 'ישירות לתוך פורמלין כמו גיזום נוסף של רקמות יכול להיעשות לאחר קיבעון.
    8. עיבוד מלא, הטבעה, חתך של רקמות, המטוקסילין ו- eosin (H&E) מכתימים בשיטות סטנדרטיות.
  2. ניתוח נטל גידול ריאות גרורתי
    1. סרוק מקטעי ריאות מוכתמים H&E בסורק שקופיות ברזולוציה גבוהה בהגדלה של פי 40 (איור 3).
    2. יבא תמונות לתוכנת ניתוח תמונה (לדוגמה, Visiopharm Image Analysis) לכימות גרורות ריאות.
      הערה: אנו ממליצים למשתמשים חדשים לקבל הדרכה באתר או באינטרנט כדי להשתמש בתוכנת ניתוח התמונות. סמינרים מקוונים רבים זמינים גם דרך דף האינטרנט המסחרי.
    3. בחר את אפליקציית גרורות הריאות של Visiopharm 10118 מתוך ספריית היישומים של התוכנה.
      הערה: מטרת אפליקציה זו היא לתייג ולכומת גרורות ריאות בשקופיות מוכתמות ב- H&E. כחלק מאפליקציית גרורות הריאות H&E 10118, שלב עיבוד התמונה הראשון מפלח את רקמת הריאה באמצעות אפליקציית זיהוי הרקמות. שלב עיבוד התמונה השני משתמש ביישום זיהוי גרורות המזהה את גרורות בתוך רקמת הריאה. גרורות מזוהות באמצעות צורה יחד עם אזורים שהם מעוותים מדי, אדומים מדי או דלילים מדי לזיהוי כגרורות.
    4. התאם את הפרמטרים המגדירים צורה ודלילות כך שיתאימו בצורה הטובה ביותר לתמונות מייצגות. אזורים מקוטעים של גרורות גידול ורקמת ריאה רגילה ניתן להציג באמצעות תוויות צבע שונות עבור כל סוג רקמה.
      הערה: במקרה שהאפליקציה אינה יכולה להפריד במדויק גרורות מרקמת ריאה רגילה, ייתכן שיהיה צורך לכתוב אפליקציה מותאמת אישית המשתמשת בתוכנית Visiopharm Decision Forest כפי שנעשה עבור הניסויים (ראה איור 2 ואיור 3). להלן פרטים לכתיבת אלגוריתם מותאם אישית. אחרת, המשך לשלב 2.2.9.
    5. פתח את תוכנית יער ההחלטות, הפועלת על ידי אימון שיעורים מרובים [כלומר, רקמת ריאה (לא ניאופלאסטית), גרורות, תאי דם אדומים, אפיתל ו/או חלל לבן] על תמונה רצויה. באיור 2, גרורות הגידול הן כחולות, רקמה רגילה ירוקה ואפיתל הסימפונות צהוב. כמו כן, תאי דם אדומים נמצאים בחללים אדומים ואוויר בוורוד.
    6. בצע את הסדרה המתבקשת של שאלות כן או לא כדי לאמן כראוי כל כיתה לתמונה. הדיוק של האלגוריתם יקבע את מספר שאלות כן/לא. לצורך הניתוח, האלגוריתם/האפליקציה המותאמים אישית נכתבו בדיוק מוגדר ל- 50 (טווח 0-100).
    7. התאם תכונות עבור כל מחלקה על-ידי החלת מסננים כדי לחדד, לטשטש, למיין לפי צורה וכו' כדי לשפר את הדיוק של האלגוריתם/אפליקציה. Visiopharm מציג כל מחלקה דרך עדשות אחת או מרובות המכונות תכונות. התכונות משנות את האופן שבו הכיתה רואה את התמונה כדי להוציא צבעים או עוצמות מסוימים.
      הערה: עבור האלגוריתם המותאם אישית, גרורות מדידה 8500 μm2 ומעלה מסומנות ונמדדות כגרורות. זה מסביר את סטיית הגודל והגרורות קטנות מכדי לזהות. אזורים קטנים מעוותים ואזורים גרורתיים קטנים מתחת 8500 מיקרומטר 2 נכללו כימות הרקמה הרגיל.
    8. שמור את ההגדרות שהשתנו מהאפליקציה או מהאלגוריתם המותאם אישית ולאחר מכן, החל את האלגוריתם/אפליקציה על ערכה שלמה או סדרה של רקמות מוכתמות ב- H&E.
    9. לבסוף, יצא את כל משתני הפלט, הכוללים את משתני הפלט המפורטים בטבלה 1. שטח במיקרונים בריבוע (μm2) ניתן לכמת עבור כל סוג רקמה ואחוזים נגזרים מדגם שטח רקמה נטו הכולל (כלומר, רקמה כוללת פחות שטח אוויר).
    10. בעת יצירת אלגוריתם מותאם אישית, סקור סימוני רקמות בהתייעצות עם לוח פתולוגים וטרינריים המאושר על ידי המכללה האמריקאית לפתולוגים וטרינריים כדי להבטיח מדידות מדויקות ולהבדיל בין סוגי רקמות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

אם משתמשים בתאים לא מתובלים להזרקת ורידים בזנב, ייתכן שיהיה קשה לאשר קולוניזציה של ריאות עד (1) זמן הנמק אם ניתן לצפות במקרומטסטאזים או (2) בעקבות ניתוח היסטולוגי אם קיימים גרורות מיקרוסקופיות. עם נטל גידול גרורתי נרחב בריאות, לעכברים תהיה נשימה מאומצת. כמו בכל מחקר גידול, עכברים צריכים להיות במעקב קפדני לאורך כל המחקר. השימוש בתאים מסומנים הוא דרך קלה לאשר הזרקת וריד זנב מוצלחת; מכאן השימוש בתאי מד"א-MB-231 מתויגים לוציפראז בהדגמה. עם זאת, בהדמיית vivo לא תמיד אפשרי או הכרחי בהתאם לעיצוב הניסיוני וגורמים אחרים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ככל שהחוקרים ממשיכים להשתמש בהזרקה תוך ורידי של תאים סרטניים כמודל ניסיוני לגרורות, חסרים פרקטיקות סטנדרטיות לניתוח נטל הגידול גרורתי שנוצר. במקרים מסוימים, הבדלים משמעותיים בנטל הגידול גרורתי על מניפולציה של קווי תאים מסוימים ו /או שימוש בתרכובות כימיות ניתן לראות מקרוסקופית. עם זאת, במקרים אחרים, הבדלים עדינים זריעה גרורתית וצמיחה ניתן להתעלם או לפרש לא נכון ללא ניתוח פתולוגי יסודי. מחקר זה מקדם פרוטוקולי הזרקת ורידים זנב שפורסמו בעבר על ידי הכללת שיטה מקיפה של ניתוח נטל גידול ריאות גרורתי. חשוב לציין, שיטה זו של ניתוח...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

הנתונים הייצוגית מומנו באמצעות המכון הלאומי לסרטן (K22CA218549 ל- S.T.S). בנוסף לסיועם בפיתוח שיטת הניתוח המקיפה המדווחת כאן, אנו מודים למרכז הסרטן המקיף של אוניברסיטת אוהיו ולמשאב המשותף של פנוטיפינג עכבר (מנהל – קריסטה לה פרל, DVM, PhD) על שירותי היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה ולליבת ההדמיה הפתולוגית לפיתוח וניתוח אלגוריתמים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
רפידות הכנה לאלכוהולפישר סיינטיפיק22-363-750<חזק>לניקוי זנב לפני הזרקה
דיסקציהפישר סיינטיפיק08-951-5<חזק>לדיסקציה של עכבר וניפוח רקמת ריאה
DMEM עם L-גלוטמין, 4.5 גרם/ליטר גלוקוז ונתרן פירובטפישר סיינטיפיקMT10013CVבסיס מדיה לתרבית תאים עבור קווי תאים MDA-MB-231 ו-MVT1
תמיסת מלח חוצצת פוספט של Dulbecco 1xFisher ScientificMT21030CVהמשמשת להשעיית תאי גידול להזרקת
אתנול (תמיסה של 70%)OSUהמשמש למזעור פרוות העכבר במהלך הדיסקציה; היזהר - צבע כחול דליק
של אווןMillipore SigmaE2129משמש ב-1% ב-PBS סטרילי לתרגול בשיטת הזרקת וריד זנב; היזהר - מגיב מסוכן
סרום בקר עובריMillipore SigmaF4135תוסף מדיה לתרבית תאים; משמש ב-10% במלקחיים DMEM
פישר סיינטיפיק10-270לדיסקציה וניפוח רקמות ריאה
עכברי FVB/NJמעבדת ג'קסון001800זן עכבר סינגני לתאי MVT1
המציטומטר (Bright-Line)Millipore SigmaZ359629לשימוש בתרבית תאים להשגת ספירת תאים
מזרק אינסולין (28 גרם)פישר סיינטיפיק14-829-1Bלהזרקות וריד זנב (BD 329424)
תאי MDA-MB-231ATCCקו תאי סרטן שד אנושי
MVT1 תאיגידול עכבר מחטי תאי גידול חלב
(26 גרם)פישר סיינטיפיק14-826-15המשמש לניפוח העכבר ריאות
פורמלין ניטרלי בופר (10%)Fisher Scientific245685משמש כמקבע רקמות ולניפוח רקמת ריאה; היזהר - מגיב מסוכן
NOD. עכברי Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG)מעבדת ג'קסון005557 מתוחזקת על ידי OSUCCC Target Validation Shared
Resource Penicillin Streptomycin 100xThermoFisher15140163 תוסף מדיה לתרבית תאים גזה
סטריליתפישר סיינטיפיקNC9379092למריחת לחץ על זנב העכבר אם מתרחש דימום
מזרק (5 מ"ל)פישר סיינטיפיק14-955-458משמש לניפוח רקמת ריאות של עכבר
מסנן וריד זנבBraintree Scientific, Inc.TV-150 STDהמשמש לריסון עכבר להזרקות וריד זנב
טריפן כחול (0.4%)ThermoFisher15250061משמש בתרבית תאים להערכת כדאיות
טריפסין-EDTA 0.25ThermoFisher25200-114משמש בתרבית תאים לניתוק תאי גידול מהצלחת
%

מקורות

  1. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews: Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
  2. Steeg, P. S. Targeting metastasis. Nature Reviews: Cancer. 16 (4), 201-218 (2016).
  3. Gupta, G. P., Massague, J. Cancer metastasis: building a framework. Cell. 127 (4), 679-695 (2006).
  4. Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nature Medicine. 12 (8), 895-904 (2006).
  5. Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. A perspective on cancer cell metastasis. Science. 331 (6024), 1559-1564 (2011).
  6. Eckhardt, B. L., Francis, P. A., Parker, B. S., Anderson, R. L. Strategies for the discovery and development of therapies for metastatic breast cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 11 (6), 479-497 (2012).
  7. Gomez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. Mouse models of metastasis: progress and prospects. Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).
  8. Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Research. 8 (4), 212(2006).
  9. Schoenenberger, C. A., et al. Targeted c-myc gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammary tumours with constitutive milk protein gene transcription. EMBO Journal. 7 (1), 169-175 (1988).
  10. Nusse, R., Varmus, H. E. Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome. Cell. 31 (1), 99-109 (1982).
  11. Muller, W. J., Sinn, E., Pattengale, P. K., Wallace, R., Leder, P. Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene. Cell. 54 (1), 105-115 (1988).
  12. Lin, E. Y., et al. Progression to malignancy in the polyoma middle T oncoprotein mouse breast cancer model provides a reliable model for human diseases. American Journal of Pathology. 163 (5), 2113-2126 (2003).
  13. Green, J. E., et al. The C3(1)/SV40 T-antigen transgenic mouse model of mammary cancer: ductal epithelial cell targeting with multistage progression to carcinoma. Oncogene. 19 (1), 1020-1027 (2000).
  14. Iorns, E., et al. A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis. PloS One. 7 (10), 47995(2012).
  15. Kim, I. S., Baek, S. H. Mouse models for breast cancer metastasis. Biochemical and Biophysical Research Communications. 394 (3), 443-447 (2010).
  16. Mariotto, A. B., Etzioni, R., Hurlbert, M., Penberthy, L., Mayer, M. Estimation of the Number of Women Living with Metastatic Breast Cancer in the United States. Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. 26 (6), 809-815 (2017).
  17. Xiao, W., et al. Risk factors and survival outcomes in patients with breast cancer and lung metastasis: a population-based study. Cancer Medicine. 7 (3), 922-930 (2018).
  18. Smid, M., et al. Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse. Cancer Research. 68 (9), 3108-3114 (2008).
  19. Kennecke, H., et al. Metastatic behavior of breast cancer subtypes. Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).
  20. Soni, A., et al. Breast cancer subtypes predispose the site of distant metastases. American Journal of Clinical Pathology. 143 (4), 471-478 (2015).
  21. Leone, B. A., et al. Prognostic impact of metastatic pattern in stage IV breast cancer at initial diagnosis. Breast Cancer Research and Treatment. 161 (3), 537-548 (2017).
  22. Pei, X. F., et al. Explant-cell culture of primary mammary tumors from MMTV-c-Myc transgenic mice. In Vitro Cellular and Developmental Biology: Animal. 40 (1-2), 14-21 (2004).
  23. Mathsyaraja, H., et al. CSF1-ETS2-induced microRNA in myeloid cells promote metastatic tumor growth. Oncogene. 34 (28), 3651-3661 (2015).
  24. Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. Mouse models for tumor metastasis. Methods in Molecular Biology. 928, 221-228 (2012).
  25. La Perle, K. M. D. Comparative Pathologists: Ultimate Control Freaks Seeking Validation. Veterinary Pathology. 56 (1), 19-23 (2019).
  26. Blomberg, O. S., Spagnuolo, L., de Visser, K. E. Immune regulation of metastasis: mechanistic insights and therapeutic opportunities. Disease Models & Mechanisms. 11 (10), (2018).
  27. Gonzalez, H., Hagerling, C., Werb, Z. Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression. Genes and Development. 32 (19-20), 1267-1284 (2018).
  28. Borowsky, A. D., et al. Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: two closely related cell lines with divergent metastatic behavior. Clinical and Experimental Metastasis. 22 (1), 47-59 (2005).
  29. Yang, Y., et al. Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis. Oncotarget. 8 (19), 30621-30643 (2017).
  30. Resch, M., Neels, T., Tichy, A., Palme, R., Rulicke, T. Impact assessment of tail-vein injection in mice using a modified anaesthesia induction chamber versus a common restrainer without anaesthesia. Laboratory Animals. 53 (2), 190-201 (2019).
  31. Rashid, O. M., et al. Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model. Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).
  32. Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry. Cytometry Part A. 75 (4), 344-355 (2009).
  33. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
  34. Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804(2016).
  35. Simmons, J. K., et al. Animal Models of Bone Metastasis. Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).
  36. Liu, Z., et al. Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method. Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).
  37. Kodack, D. P., Askoxylakis, V., Ferraro, G. B., Fukumura, D., Jain, R. K. Emerging strategies for treating brain metastases from breast cancer. Cancer Cell. 27 (2), 163-175 (2015).
  38. Brown, D. L. Practical Stereology Applications for the Pathologist. Veterinary Pathology. 54 (3), 358-368 (2017).
  39. Aeffner, F., et al. Digital Microscopy, Image Analysis, and Virtual Slide Repository. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 59 (1), 66-79 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תיקון


Formal Correction: Erratum: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/02/2020. Citeable Link.

An erratum was issued for: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells. The author list was updated.

The author list was updated from:

Katie A. Thies1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

to:

Katie A. Thies1, Sarah Steck1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

תגיות

H E
ניתוח פתולוגי של גרורות ריאות בעקבות הזרקת וריד זנב לרוחב של תאים סרטניים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.