הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אפיון מאקרו-ריאולוגיה של ריר גיל רייקר בקרפיון הכסף, היפופתלמיכטיס מוליטריקס

2.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61379

⸱

10 ביולי 2020

 ,  , 
1Department of Mechanical and Aerospace Engineering, The George Washington University

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מציג שיטה לביצוע אפיון ריר של ריר הנימק על זימים rakers (GRs) של קרפיון כסף. מאפיינים ויסקולאסטיים של GR-ריר, המתקבלים על ידי מדידת צמיגות, אחסון ואובדן מודולי, מוערכים עבור מתח התשואה לכאורה כדי להבין את מנגנון האכלת המסנן ב- GRs.

תקציר

קרפיון הכסף, Hypophthalmichthys molitrix, הוא דג מאכיל פלנקטיבים פולשניים שפשטו על נתיבי המים הטבעיים של אגן נהר המיסיסיפי העליון בשל מנגנון האכלת המסננים היעיל ביותר שלו. האיברים האופייניים הנקראים זימים rakers (GRs), נמצא רבים כאלה מסננים מזינים, להקל על סינון יעיל של חלקיקי מזון כגון פיטופלנקטון כי הם של כמה מיקרונים בגודל.

המוטיבציה לחקור את הריאולוגיה של ריר GR נובעת מהרצון שלנו להבין את תפקידה בסיוע לתהליך האכלת המסנן בקרפיון הכסוף. הנוזל העשיר ולר, במצב 'עבה ודביק' עשוי להקל על הידבקות של חלקיקי מזון. חלחלות ותחבורה דרך קרום GR מתאפשרים על ידי פעולה של כוחות גיסת חיצוניים הגורמים שיעורי זנית שונים. לכן, ריר rheology יכול לספק רמז חיוני לאופי outcompeting עצום של קרפיון כסף בתוך הבריכה של מסנן האכלת דגים. בהתבסס על כך הועלתה כי ריר GR עשוי לספק פונקציית דבק לחלקיקי מזון ולשמש כרכב תובלה כדי לסייע בתהליך האכלת המסנן.

המטרה העיקרית של הפרוטוקול היא לקבוע את לחץ התשואה של הריר, המיוחס ללחץ הגניסה המינימלי הנדרש כדי ליזום זרימה שבה עיוות פלסטיק בלתי הפיך נצפה לראשונה על פני חומר צמיג מובנה. בהתאם לכך, תכונות ריאולוגיות של ריר GR, כלומר, צמיגות, אחסון, ואובדן מודולי, נחקרו על אופיו הלא ניוטוני, גיסת דילול באמצעות ריומטר סיבובי.

פרוטוקול המוצג כאן משמש כדי לנתח את המאפיינים הרולוגיים של ריר שחולצו מ rakers זימים של קרפיון כסף, דג במיקום הארט קריק של נהר מיזורי. הפרוטוקול שואף לפתח אסטרטגיה יעילה לבדיקות רולוגיות ואפיון חומרי של ריר הניח להיות חומר צמיג מובנה.

מבוא

קרפיון הכסף, Hypophthalmichthys molitrix, הוא מאכיל מסננים פלנקטיבים ומין פולש שחדר למספר נתיבי מים טבעיים בארצות הברית. מין זה הוצג בתחילה באגן נהר המיסיסיפי העליון כדי לשלוט בפריחת האצות1,2,3. קרפיון הכסף הוא מאכיל יעיל ביותר. בדרך כלל, גדלי חלקיקי המזון המתכלים שלה נעים בין 4 ל 20 מיקרומטר לזואופלנקטון גדול יותר שהם סביב 80 מיקרומטר3,4,5. מין זה עלה על דגים מקומיים אחרים ועלול לגרום נזק עצום לנתיבי מים מקומיים על ידי הגבלתהמשאבים הזמינים 1,2,6. לכן, מסנן האכלת דגים כגון קרפיון כסף קרפיון bighead מהווים איום גדול על האגמים הגדולים1,2,6,7,8.

דגי סינון יש איברים מיוחדים הנקראים זימים rakers (GRs) עם שכבה דקה של ריר המתגורר על פני השטח שלהם. איברים אלה לשפר את היעילות של סינון וצבירה של חלקיקים קטנים מן הנוזל הנכנס. מטרת הפרוטוקול המוצג כאן היא לאפיין את הנכס החומרי הלא-ניוטוני, גיסת דילול ולהניב מתח של ריר GR שנרכש מפני השטח הפנימיים של rakers זימים בקרפיון הכסף. הערך של לחץ התשואה של ריר GR, התברר באמצעות rheometer סיבובי, הוא עניין במחקר זה. לחץ התשואה הנמדד המכונה גם "לחץ התשואה לכאורה" תלוי בשיטות הבדיקה כגון קצב גיליון יציב - או זן תנודות דינמי סוג9,10. דילול הגיסה, 'נוזל תשואה-מתח', עובר מעבר מהתנהגות מוצקה דמוית נוזל בלחץ יישומי קריטי9,11. לחץ התשואה לכאורה הוא לחץ הגיסה המינימלי הנדרש כדי ליזום זרימה או שבו עיוות פלסטיק בלתי הפיך נצפה לראשונה כאשר הריר עובר מחומר דמוי ג'ל לחומר דמוי נוזל. התנהגות זו ניתן לראות בחומרים צמיגים מובנים. המעבר מהתנהגות דמוית ג'ל להתנהגות דמוית נוזל של ריר GR כרוך בשתי פונקציות כלומר, תפקיד דבק לאיסוף חלקיקי מזון ותפקיד רכב תובלה כדי לסייע בתהליך המסירה והסינון החלקיקים. הפונקציה המורחבת של הריר כוללת יצירת מחסומי דיפוזיה בעמידות למחלות ונשימה, מתן שחרור מבוקר של גורמים תזונתיים, רכיבים רעילים ופרישה, יצירת מסלולים מטבוליים להאכלה וקינון, סיוע בהגנה מפני טורפים, והפקת שינויים בשכבת הגבול המשפרים את הקטר ויעילות ההנעה12,13,14.

שלא כמו נוזלים פשוטים, נוזלים מורכבים כמו ריר יש תכונות המשתנות עם תנאי הזרימה ודורשים פרמטרי מדידה נוספים כדי להגדיר את ההתנהגות הגופנית בקנה מידה בתפזורת שלהם. כדי לפקח על הצמיגות ואת הלחץ התשואה של ריר GR, מדידות רולוגיות מבוצעות באמצעות rheometer סיבוב. הרומד הסיבובי מחיל מתח או מאמץ גיזום יציבים או מתנדנדים באמצעות דיסק מסתובב במגע עם דגימת הנוזל ומודד את תגובתו. הרציונל מאחורי שימוש במכשיר וטכניקה זו הוא כי rheometer יכול לספק קבוצה של מדידות כדי לתאר את המאפיינים החומריים של ריר GR של קרפיון הכסף, אשר לא ניתן להגדיר על ידי צמיגות בלבד.

הריר הוא חומר ויסקולאסטי ותגובתו המכנית לעיוות שנכפה היא בין זו של מוצק טהור (הנשלט על ידי חוק האלסטיות של הוק) לבין זה של נוזל טהור (הנשלט על ידי חוק הצמיגות שלניוטון) 15,16. הרשת המקרומולקולרית המורכבת הכלולה בתוך הריר יכולה להימתח ולכוון מחדש בתגובה לכוחות חיצוניים או לעיוות. רומטר סיבובי מורכב מגיאומטריית חרוט ולוח פלטייה כפי שמוצג באיור 1 ובאיור 2 (ראו טבלה 1 למפרט מכשור). מטרת המחקר הזה הייתה לפתח פרוטוקול כדי לקבוע את המאפיינים הרוולוגיים של ריר GR. יתרון של ריומטר הסיבוב על פני ויסקומטר הוא היכולת שלו לבצע מדידות דינמיות באמצעות אמצעי אחסון מדגם קטנים. נפח דגימת הריר GR במחקר זה היה כ 1.4 מ"ל. הצמיג, לעומת זאת, מוגבל לשיעורי גיזום קבועים ודורש נפחי דגימה גדולים.

המאפיינים הרולוגיים של הריר צפויים להשתנות מאוד בתוך האנטומיה קרפיון כסף. לדוגמה, המאפיינים של הריר המתגורר על משטחי GR עשויים להיות שונים מהאיבר האפיברנצ'י. כדי להסביר את השונות הפוטנציאלית של תכונות ריר באזורים שונים של הדג, מדגם ריר GR שנרכש היה מדולל, ופתרונות של שלושה ריכוזים נוצרו ונבדקו באמצעות rheometer הסיבוב.. הנתונים והתוצאות לגבי ריר rheology שדווחו לאחר ביצוע הפרוטוקול הדגימו את היעילות של טכניקת המדידה. נתוני ההמחשה המוצגים במאמר זה אינם אמורים להיות כלליים בכל אוכלוסיית קרפיון הכסף. הפרוטוקול המוצג כאן ניתן להרחיב כדי לחקור rheology ריר על פני ערכות מדגם גדולות יותר כדי לבדוק השערות אחרות.

מטרת מחקר זה היא להדגים את השונות של תכונות ריר GR עם שלושה ריכוזי ריר שונים (400 מ"ג / מ"ל, 200 מ"ג / מ"ל ו 100 מ"ג / מ"ל). ריכוז 400 מ"ג/מ"ל מייצג את דגימת הריר הגולמית שנקצרה מהדג GRs. מים דהיוניים (DI) שימשו לדלל את דגימת הריר הגולמי ל-200 מ"ג/מ"ל ו-100 מ"ג/מ"ל. דילול דגימות הריר אפשר להעריך את מידת דילול הגיסה ואת לחץ התשואה לכאורה כפונקציה של ריכוז וקביעת הריכוז שבו ריר GR עובר להתנהגות לא ניוטון. שייקר שימש כדי לשבור כל גושים גדולים של ריר בדגימות כדי למתן שגיאות בנתונים הרוולוגיים עקב אי-תום לב.

ברוב בעלי החוליות, כולל דגים, המקרומולקולים היוצרים ריר הם גליקופרוטאין (מוצינים) הנוטים להתנפח במים על ידי הסתבכויות או הצלבה כימית וליצור חומר דמוי ג'ל12,13,17,18,19,20. המקרומולקולרים בעלי המשקל המולקולרי הגבוה, הג'ל ותכולת המים הגבוהים משקפים את החלקלקות בריר13. רמה גבוהה של אינטראקציות בין-מקרומולקולריות מובילה להיווצרות ג'ל ואילו רמות נמוכות יותר של אינטראקציות בין-מקרומולקולריות או קשרים שבורים גורמים לנוזלים בעלי צמיגות גבוהה21.

התהליכים של סינון חלקיקי מזון בדגים האכלת מסנן נעזרים בתכונות הקשורות לריק GR כגון לכידות וצמיגות הקובעים את הפוטנציאל שלה הידבקות וטקטיקה22. כוח ההידבקות על בסיס ריר תלוי באינטראקציות בין-מולקולריות, אלקטרוסטטיות או הידרופוביות ספציפיות23. סנדרסון ואח'24 ערכו מחקר האכלה השעיה בדגים שחורים שבו הם מצאו את הראיות להדבקה על בסיס ריר. הם ציינו כי הידבקות של חלקיקי מזון מושעים עם משטח רירי מלווה בהובלה של גושים מצטברים של חלקיקים הקשורים יחד עם ריר על ידי זרימת מים מכוונת הפועלת עליו24. הריר החשוף לשיעורי זני הגיהה הנוצרים מזרימת מים מאפשר משלוח של חלקיקי מזון לאברי העיכול. טכניקות אנדוסקופיות שימשו להתבונן חלקיקים מסוננים24.

ספרות על מגוון שיעורי הגינוע והגבלות המעשיות בבדיקה הרולוגית של ריר GR היא נדירה. לכן, התבקש הדרכה ממחקרים רולוגיים על קיבה, אף, ריר צוואר הרחם והריאות, ריר עור סלמון, רפש דגי ים, חומר סיכה משטח מפרק העצם שבו האפיון הרואיולוגי ותכונות לא ניוטוניות נחקרו11,12,25,26,27,28,29,30,31. לאחרונה, ההשפעה של ריר עור דגים על קטר ויעילות הנעה נחקרה באמצעות צמיגות קצב הגניסה קבוע. מחקרי ריר עור (ללא כל דילול או הומוגניזציה) הנוגעים לסיברם, בס ים והתנהגות דלה הדגימו התנהגות לא ניוטון בשיעורי גיזמה נמוכים בדרך כלל14.  במחקר אחר הקשור, דגימות ריר העור הגולמי מצדי גב וגחון של הסוליה הסנגלית נמצאו להפגין התנהגות לא ניוטון, המציין צמיגות גבוהה יותר של ריר הגחון בכל שיעורי הגניסה נחשב32. פרוטוקולים ריולוגיים אחרים הנוגעים להתפתחות פיגום הידרוג'ל ועל השעיות מרוכזות מאוד באמצעות ויסקומטר קצב גיסא קבוע דווחו גם בספרות33,34.

במחקר זה, תכונות ריר GR נחקרו באמצעות שיעור זן מבוקר, rheometer סיבובי כי כבר בשימוש נרחב בניסויים rheology על נוזלים ביולוגיים מורכבים25. עבור נוזלים ניוטון, הצמיגות לכאורה נשארת קבועה, היא עצמאית בקצב הגיסתי והלחצים הגניים משתנים באופן ליניארי עם שיעורי המתח הגיזלי(איור 3A,B). עבור נוזלים שאינם ניוטון (כגון נוזלים מדללים) צמיגות תלויה קצב גיסה או תלוית היסטוריה מעוותת(איור 3A, B). אובדן מודולוס (G) מייצג את המידה שבה החומר מתנגד לנטייה לזרום ומייצג צמיגות נוזלים (איור 4). מודולוס האחסון (G') מייצג את הנטייה של החומר לשחזר את צורתו המקורית בעקבות עיוות שנגרם מלחץ והוא שווה ערך לגמישות (איור 4). זווית הפאזה (δ) או ערך משיק אובדן, מחושבת מהטנגנס ההופכי של G"/G'. הוא מייצג את האיזון בין אובדן אנרגיה לאחסון והוא גם פרמטר נפוץ לאפיון חומרים ויסקולאסטיים (δ = 0° עבור מוצק Hookean; δ = 90° עבור נוזל צמיג; δ < 45° עבור מוצק ויסקולאסטי δ > 45° עבור נוזל צמיג) (איור 4)25. לחץ התשואה לכאורה (σy) בנוזלים מובנים מייצג שינוי מצב שניתן לראות בנתונים ריולוגיים מטאטא מצב יציב ומתח דינמי גורף10. אם הלחץ החיצוני מוחל הוא פחות מלחץ התשואה לכאורה, החומר יהיה מעוות אלסטי. כאשר הלחץ עולה על לחץ התשואה המסתמן (מסומן כ"לחץ ממוצע" באיור 3B), החומר יעבור מעיוות אלסטי לפלסטיק ויתחיל לזרום במצבו הנוזלי35. מדידת מודולוס האחסון (G') ואובדן מודולוס (G) בתנאי לחץ מתנדנד (או זן) כימתה את השינוי במצב החומרי מהתנהגות דמוית ג'ל להתנהגות דמוית נוזל ויסקולאסטית.

סוגי בדיקות הרומד המבוצעות לניטור נתונים הנוגעים מודולוס אחסון (G'), מודולוס אובדן (G) וצמיגות לכאורה (η) מתוארים כאן. בדיקות התנודה הדינמיות (מטאטא זן ותדירות גורפת) ניטור G ' ו- G " תחת תנודה מבוקרת של גיאומטריית חרוט. בדיקות סריקת המתח הדינמיות קבעו את האזור הצמיגי הליניארי (LVR) של הריר על ידי ניטור התגובה החומרית המהותית (איור 4). מאמץ גורף שימשו כדי לקבוע את ההתנהגות המניבה בתדירות תנודה מתמדת וטמפרטורה. בדיקות סריקת התדרים הדינמיות עקבו אחר התגובה החומרית להגברת התדירות (קצב העיוות) במשרעת מתמדת (זן או מתח) וטמפרטורה. המתח נשמר באזור הצמיגי הליניארי (LVR) לבדיקות סריקת התדרים הדינמיות. מבחני קצב הגיור של מצב יציב עקבו אחר הצמיגות לכאורה (η) תחת סיבוב קבוע של גיאומטריית החרוט. ריר GR היה נתון לצעדי לחץ מצטברים וצמיגות לכאורה (η, Pa.s) היה במעקב עבור קצב גניסיה משתנה (ý, 1/s).

הפרוטוקול המוצג במאמר זה מתייחס ריר GR כחומר מובנה מורכב של צמיגות לא ידועה עם טווח תגובה צמיגי ליניארי מסוים. ריר הדגים חולץ מהרופאים הכלליים של קרפיון הכסף במהלך מסע דיג במיקום הארט קריק בנהר מיזורי על ידי פרופסור ל. פטרישיה הרננדז (המחלקה למדעי הביולוגיה, אוניברסיטת ג'ורג ' וושינגטון) 1,2,36.  באיור 5A מוצג מערך של GRs בתוך פיו של קרפיון כסף, וציור סכמטי מוצג באיור 5B. GR שנכרת מוצג באיור 5C.  הפקת ריר מ- GRs של קרפיון הכסף מוצגת כדוגמה בציורים הסכמטיים, איור 5D, E. כל בדיקות הרומטר בוצעו בטמפרטורה קבועה ומבוקרת של 22 ± 0.002 מעלות צלזיוס, הטמפרטורה שנרשמה באתר הדיג1,2,36.  כל דגימת ריר נבדקה שלוש פעמים עם הרומד, והתוצאות הממוצעות מוצגות יחד עם סרגלי השגיאה הסטטיסטיים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנת פתרונות הריר בריכוזים שונים

הערה: שלושה ריכוזים של פתרון ריר (400 מ"ג / מ"ל, 200 מ"ג / מ"ל ו 100 מ"ג / מ"ל עם כרכים משוערים, 1 מ"ל, 1 מ"ל, ו 2 מ"ל, בהתאמה) מוכנים לניסוי זה.

  1. כדי לחשב את המסה של הריר, למדוד את המסה הממוצעת של הבקבוקונים עם (Mעם ריר; מ"ג) וללא ריר (מבקבוקונים M ; מ"ג). לאחר מכן להחסיר את המסה של הבקבוקונים עם ריר עם זה ללא ריר (ריר M = M עםריר - Mבקבוקונים ; מ"ג).
  2. לדלל את הריר לשלושה ריכוזים (400, 200, 100, מ"ג / מ"ל) עם מים deionized (DI).
    1. הכן את הריכוז הראשון של פתרון ריר, 400 מ"ג / מ"ל על ידי הוספת 0.6 מ"ל DI מים לריר באמצעות micropipette.
      הערה: מאז הנפח המשוער של ריר שחולץ היה 1.4 מ"ל, הפתרון 400 מ"ג / מ"ל יהיה נפח כולל של ~ 2 מ"ל.
    2. מניחים את 400 מ"ג / מ"ל פתרון פתרון ריר על שייקר כדי לוודא כי פתרון הריר הוא הומוגני כראוי, וכל agglomeration חלקיק ריר הוא מקל.
    3. הכן את הריכוז השני של פתרון הריר, 200 מ"ג / מ"ל, על ידי ציור מחצית הנפח של פתרון ריר הריכוז הראשון לתוך מחילה חדשה באמצעות micropipette והוספת 1 מ"ל של מים DI לתוך המשחקון החדש.
    4. חזור על שלב 1.2.2 עבור הבקבוקונים הראשונים והשניים עם פתרונות ריר.
    5. הכן את הריכוז השלישי של פתרון הריר, 100 מ"ג / מ"ל, על ידי ציור מחצית הנפח (1 מ"ל) של פתרון 200 מ"ג / מ"ל לתוך מקטורון חדש באמצעות micropipette ולהוסיף של מי DI לתוך המשחקון החדש.
    6. חזור על שלב 1.2.2 עבור כל שלושת הריכוזים של פתרונות ריר בבקבוקונים המתאימים שלהם (ראה איור 1 משלים).
    7. יש לאחסן את בקבוקוני פתרון הריר במקרר עד לביצוע כיול ובדיקת הרימון.

2. מדידות ורכישת נתונים באמצעות מד רימונים

הערה: התוכנה המשמשת בפרוטוקול זה לבקרת מכשירים ורכישת נתונים עם מד שורשים נרשמות בטבלת החומרים. תוכנה זו תיקרא 'תוכנת בקרת מכשיר ריומטר'.

  1. הגדר וכייל את מכשיר הרומד.
    1. הפעל את אספקת האוויר הדחוסה לרומטר וודא שהטבלה הפנאומטית ומד הרומטר מאוזנים באמצעות מד בועה. לסובב את מכסה המגן על פיר rheometer ולהחזיק פיר עדיין תוך כדי פתיח.
    2. הפעל את המתגים הראשיים של הרומד כדי להפעיל את המסבים המגנטיים על מד הרומאים.
    3. הפעל את מחשב בקרת הרומטר עם תוכנת בקרת מכשיר הרומטר המותקנת בו והפעל את תוכנת בקרת מכשיר הרומטר (ראה איור 2 משלים).
    4. בצע כיול מכשירים על-ידי בחירת הכרטיסיות 'כיול | מכשיר' מחלון התוכנה. בחר באפשרות 'כלי '. לחץ על 'כיול' תחת 'אינרציה'. הקלט את ערך הכיול של אינרציה של המכשיר ב- μN.m.s2 וכיול חוזר לפחות פי 3 כדי להבטיח שערכי הכיול נמצאים בטווח של 10% זה מזה (ראה איור משלים 3).
  2. התקן את גיאומטריית הרומטר על פיר הרומד.
    1. לחץ על הכרטיסיה 'גיאומטריות' בתוכנת בקרת כלי הרומד.
    2. נקו את החרוט בגיאומטריה הרצויה (קוטר 40 מ"מ, קוטר 1◦ 0' 11'' ) וצלחת פלטייה עם איזופרופנול (ראו טבלה 1, טבלת חומרים, איור 1 ואיור 2).
      הערה: צלחת פלטייה מגיעה מותקנת על הרומטר; זה יכול להיות ניקה עם איזופרופנול בזמן שהוא קבוע ישירות rheometer.
    3. ודא כי גוף צלחת פלטייה הוא ללא כל אבק גלוי ונקי, במידת הצורך, עם איזופרופנול. התקן את צלחת פלטייה אם היא אינה מותקנת מראש ברומד ולחבר את חיבורי כיור החום.
    4. לחץ על 'לחצן הנעילה' ברומטר לפיר המנעול המחובר לגיאומטריית החרוט. זה עוצר את המיקום של הפיר, אבל זה יכול להסתובב בחופשיות בעמדה.
    5. לחץ על '| החלפה חכמה מופעל' בכרטיסיית תוכנת בקרת מכשיר ריומטר כדי לאפשר זיהוי אוטומטי של הגיאומטריה (ראה איור משלים 4).
    6. סובב את הפיר על גבי מד הרומטר כדי לדפוק על גיאומטריה. התוכנה תזהה את קוטר 40 מ"מ, 1◦ 0 ' 11 '' גיאומטריה זווית חרוט בשלב זה (ראה טבלה 1 וטבלת חומרים).
    7. חזור על שלבים 2.2.5 – 2.2.6 כדי להבטיח שהגאומטריה תזוהה.
    8. בחר 'פער' תחת 'לוח הבקרה' של תוכנת בקרת כלי הרומטר, לחץ על סמל 'אפשרויות' ובחר באפשרות 'כוח צירי'. הגדר כוח צירי ל'ניוטון 1'; זאת כדי להבטיח שגיאומטריית החרוט תיגע בלוח פלטייה לאפס אתחול פערים (ראו איור 5 משלים).
  3. בצע את כיול גיאומטריית הרומטר.
    1. בחר את הכרטיסיה 'גיאומטריה' מחלון התוכנה. לחץ על 'כיול' תחת 'אינרציה'. הקלט את ערך הכיול של אינרציה גיאומטריה ב- μN.m.s2 וחזר על ערך זה 2-3 פעמים כדי להבטיח שערכי הכיול נמצאים בטווח של 10% זה מזה.
    2. לחץ על 'כיול' תחת 'חיכוך' בחלון התוכנה. הקלט את ערך הכיול של חיכוך הגיאומטריה ב- μN.m/(rad/s) וחזור על זה 2-3 פעמים כדי להבטיח שערכי הכיול נמצאים בטווח של 10% זה מזה (ראה איור משלים 6).
  4. ביצוע אתחול אפס רווח
    הערה: מכיוון שלא ניתן להעלות במדויק את הגיאומטריה מעל צלחת פלטייה כדי לבצע מדידות ללא מיקום "אפס" הפניה, מתבצע אתחול אפס פער. למטרות המדידה, לגיאומטריה יש פער גיאומטרי מובנה של 24 מיקרומטר ופער חיתוך של 28 מיקרומטר. מרווח הקיצוץ מוגדר לנקות ביעילות את הנוזל העודף שעלול להישפך מחוץ לשטח הפנים של הגיאומטריה. פערים אלה הכרחיים למדידה מדויקת של נתונים באמצעות המדגם ומד הרומד. השלב 2.4.1 נדרש בהחלט כדי לוודא כי הגיאומטריה מוגדרת אפס פער להשגת הגיאומטריה ולצמצם פערים של 24 מיקרומטר ו 28 מיקרומטר, בהתאמה.
    1. לחץ על הסמל 'אפס פער' תחת הכרטיסיה 'פער' ב'לוח הבקרה' בחלון התוכנה. האתחול הושלם כאשר הכוח האקסיאלי שחווה הגיאומטריה גדול או שווה ל- 1 N, כשהוא נוגע בלוח פלטייה. ודאו שהפער בריומטר מאופס כך שמיקום הייחוס שלו מדויק (ראו איור משלים 7 ואיור משלים 8).
    2. לחץ על פקדי 'חץ למעלה ולמטה' במכשיר הרומד או על סמלי 'גיאומטריה מעלים ומנמיכים' תחת הלשונית 'גאפ' בתוכנת בקרת מכשירי הרומד כדי להעלות את הגיאומטריה לכל גובה שרירותי. מסך הבקרה במכשיר הרומד ולוח הבקרה של תוכנת בקרת מכשיר הרומד יציגו את גובה הפער (הזהה).
  5. הגדר את ההליך הניסיוני בתוכנת בקרת מכשירים rheometer. בצע את האפיון של תכונות rheological באמצעות חרוט על פלטייה צלחת גיאומטריה ב 22 °C (50 °F).
    הערה: אתר המכון הגיאולוגי של ארה"ב שימש כדי לברר את נהר טמפרטורת מי הנהר ב -20 בספטמבר 2018, כאשר קרפיון הכסף המשמש לניסויי ריר GR נדגו במיקום הארט קריק36. הטמפרטורה של הריר יכולה להשפיע על המאפיינים הראיולוגיים. המשמעות של התאמת הערכים לטמפרטורת הנהר היא להתאים בערך את הטמפרטורה שתחתיה ניתן להעריך באופן מציאותי את תכונות הריר.
    1. בחר בכרטיסיה 'ניסויים' בתוכנת בקרת כלי הרומטר ומלא את המידע הרלוונטי כגון 'שם', 'אופרטור', 'פרוייקט' וכו '.  (ראו איור 9 משלים)
    2. בחר את הכרטיסיה 'גיאומטריה' וודא שהמידע מסכים עם שלבים 2.2.5. - 2.2.7. (ראו איור 10 משלים).
    3. בחר בכרטיסיה 'שגרה' והשתמש בהליך המקשים המוגדר '1: משרעת תנודה'. (ראו איור 11 משלים).
    4. אתחל הגדרות'בקרת איכות הסביבה'כדלקמן: 'טמפרטורה = 22 °C'; 'זמן טבילה = 120 s' וסמן את התיבה 'המתן לטמפרטורה' (ראה איור משלים 11).
    5. אתחל הגדרות'פרמטרי בדיקה'כדלקמן: 'תדירות = 1 הרץ'; הגדר 'סריקה לוגריתמית'; 'מנומנט = 10 עד 10000 μN.m'; 'נקודות לעשור = 5' (ראו איור 11 משלים).
  6. הגדר את הניסוי כדי לקבוע את הטווח הצמיגי הליניארי (LVR) של ריר הריכוז הידוע (100 מ"ג / מ"ל)
    1. באמצעות מיקרופיפט מתאים וטיפ פיפטה לצייר כ 0.3 מ"ל של פתרון ריר דגים של ריכוז 100 מ"ג / מ"ל (ראה שלב 1.2, טבלת החומרים).
    2. הציגו את פתרון הריר על צלחת פלטייה באמצעות המיקרופיט (ראו איור 2).
    3. לחץ על לחצן 'חתוך גאפ' על ריומטר כדי להוריד את הגיאומטריה על צלחת פלטייה. לחלופין, לחץ על הסמל 'חתוך פער' תחת הכרטיסיה 'פער' באפשרות 'לוח הבקרה' בתוכנת בקרת מכשיר ריומטר (ראה איור 12 משלים).
    4. השתמש micropipette עם קצה pipette כדי להסיר כל פתרון ריר עודף ולוודא כי הנוזל נמצא מתחת לגיאומטריה ללא כל שפיכה ליד הפריפריה של הגיאומטריה.
      הערה: טעינה לא נכונה של הנוזל תוביל לשגיאות במדידות. תחת מדגם מלא יוריד את התפלגות המומנטים ומעל מדגם מלא יוביל התפלגות מתח שגויה עקב שפיכה לאורך הקצוות.
    5. בחר בכרטיסיות 'מנוע' ו'מהירות' ל- 5 ראד/s ו- 0 rad/s לסירוגין, עד שיהיו אינרציה ומהירות מינימליות במדגם שמתחת לגיאומטריה. מסך הבקרה במכשיר הרומד ולוח הבקרה של תוכנת בקרת מכשיר הרומד יציגו את המהירות (ראו איור 13 משלים).
    6. לחץ על לחצן 'גיאומטריה גאפ' על מד הרומטר כדי להקטין את הגיאומטריה לפער המתאים המוגדר מראש לכל גיאומטריה ספציפית. לחלופין, לחץ על הסמל 'פער גיאומטריה' תחת הכרטיסיה 'פער' באפשרות 'לוח הבקרה' בתוכנת בקרת מכשיר ריומטר (ראה איור 14 משלים).
  7. הפעל את הניסוי כדי לקבוע את הטווח הצמיגי הליניארי (LVR) של ריר הריכוז הידוע (100 מ"ג / מ"ל).
    1. לחץ על סמל'התחל'בתוכנת בקרת כלי הריומטר (ראה איור 15 משלים).
      הערה: הרומטר מבצע מדידות אוטומטיות; לאחר לחיצה על לחצן 'התחל', ייקח לרומטר כ - 20 דקות כדי להשלים את הבדיקה. ההגדרה 'נקודות לעשור' בשלב 2.5.5 קובעת כמה זמן יצטרכו הרומטר כדי להשלים מדידות.
    2. הפעל את הניסוי על ידי לחיצה על 'כן' בתיבה המוקפצת שמופיעה ומציעה להקטין את מרווח הגיאומטריה למרחק הנכון כדי להתחיל את הניסוי, אם לא כבר הונמך.
    3. שים לב לחלקה בזמן אמת שנוצרה על ידי rheometer המדווח על האחסון (G') ואובדן (G'') מודולי.
      הערה: G ' ו- G " הם מודולי אחסון ואובדן, בהתאמה. מודולוס האחסון מייצג את הנטייה של החומר לשחזר את צורתו המקורית בעקבות עיוות המושרה בלחץ והוא שווה ערך לגמישות. מודלוס האובדן מייצג את המידה שבה החומר מתנגד לנטייה לזרום ומייצג צמיגות נוזלים (ראו איור 4).
    4. הגדר את ציר ה- X של העלילה ל'אחוז המתח של התנודה'. כדי לעשות זאת, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על הגרף המוצג ובחרבכרטיסיה 'משתני גרף' (ראה איור משלים 16).
    5. הקלט את טווח אחוזי המתח התנודה מההתוויה לפני שהחומר נכנס לטווח הצמיגי הלא ליניארי, לאחר השלמת הבדיקה.
    6. לחץ על פקדי 'חץ למעלה ולמטה' במכשיר הרומד או על סמלי 'גיאומטריה מעלים ומנמיכים' תחת הלשונית 'גאפ' בתוכנת בקרת מכשירי הרומד כדי להעלות את הגיאומטריה לכל גובה שרירותי מעל לוח פלטייה.
    7. שמור את הקובץ המכיל הן את ההליך הניסיוני והן את התוצאות בתבנית הקובץ המקורית של תוכנת בקרת מכשיר הרומד כדי לברר את האזור הצמיגי הליניארי (LVR) של דגימת הריר.
      הערה: ניתן לעשות זאת על ידי הגדרת ציר ה- X של העלילה כדי לסנן משרעת (%) ו /או מתח תנודה משוואת שיווי משקל סטטי, סמל מתח (σ̄), דיאגרמה; מפתח במכניקה. לפני שהנתונים נכנסים לאזור הצמיגי הלא ליניארי (NLVR) (ראה איור 16 משלים).
  8. הפעל את הסריקות הדינמיות וניסויי בדיקת קצב גיסת מצב יציב בטווח ויסקולאסטי ליניארי (LVR) עבור ריר של ריכוז ידוע 100, mg/mL כדי להפיק תוצאות משלוש דגימות ריר עצמאיות של 100 מ"ג / מ"ל. בצע שלבים אלה על דגימות ריכוז ריר זמין בנפרד.
    1. חזור על שלבים 2.5.1 – 2.5.4.
    2. אתחל הגדרות'פרמטרי בדיקה'כדלקמן: 'תדירות = 1 הרץ'; הגדר 'סריקה לוגריתמית'; 'זן % = 100 עד 10000 %; 'נקודות לעשור = 10'.
    3. בחר בכרטיסיה'שגרה'והשתמש בשגרת מקשי החצים שהוגדרה '2: תדירות תנודה'.
    4. אתחל הגדרות'בקרת איכות הסביבה'כדלקמן: 'טמפרטורה = 22 °C'; "זמן טבילה = 0.0".
    5. אתחל הגדרות'פרמטרי בדיקה'כהגדרות הבאות: 'מסנן % = 1 %'; הגדר 'סריקה לוגריתמית'; 'תדירות = 20 עד 1 הרץ'; 'נקודות לעשור = 10'.
    6. בחר בכרטיסיה 'שגרה' והשתמש בהליך '3: סריקת זרימה' של מקשי החצים.
    7. אתחל הגדרות'בקרת איכות הסביבה'כדלקמן: 'טמפרטורה = 22 °C'; "זמן טבילה = 0.0".
    8. אתחל הגדרות'פרמטרי בדיקה'כדלקמן: 'קצב הגהה = 1 עד 10000 1/s'; 'נקודות לעשור = 10'; תיבת הסימון 'חישת מצב יציבה'.
    9. חזור על שלבים 2.7.1 – 2.7.2 והמתן עד להשלמת הניסוי, כ-45 דקות.
    10. לחץ על פקדי'חץ למעלה ולמטה'במכשיר הרומד או על סמלי 'גיאומטריה מעלה ומטה' תחת הכרטיסיה 'גאפ' בתוכנת בקרת מכשיר הרומד כדי להעלות את הגיאומטריה לכל גובה שרירותי.
    11. השתמש מגבונים וכפפות חד פעמיים כדי להסיר ולנקות את הריר על צלחת פלטייה עם פתרון איזופרופנול (ראה שולחן של חומרים).
    12. שמור את הקובץ המכיל הן את ההליך הניסיוני והן את התוצאות בתבנית הקובץ המקורית של תוכנת בקרת מכשיר הרומד.

3. חזור על הפרוטוקול עבור ריכוזים אחרים של פתרונות ריר של 200 מ"ג / מ"ל ו 400 מ"ג / מ"ל.

  1. בצע שלבים 2.5 – 2.8 כולל כל תת השלבים המפורטים בהם עבור שני הריכוזים הנותרים של פתרונות ריר, 200 מ"ג / מ"ל ו 400 מ"ג / מ"ל.

4. ייצוג גרפי וניתוח נתונים

הערה: הקוד המסופק בקובץ הקוד המשלים מבצע ממוצע נתונים ומייצר שגיאות חוזרות, שכבות על הנתונים מכל הניסויים. תכונות חישוב סטיית התקן אינן זמינות בתוכנת בקרת מכשיר הרומד. הקוד כתוב בשפת תכנות לניתוח נתונים, לאחר עיבוד וייצוג גרפי (ראה טבלת חומרים לקבלת פרטים).

  1. ייצוא נתונים שנוצרו בשלב 2.8 הנוגעים לריכוז ריר GR של 100 מ"ג/מ"ל ולשלב 3.1 הנוגעים לריכוז הריר של 200 מ"ג/מ"ל ו-400 מ"ג/מ"ל GR לתבנית גיליון אלקטרוני על-ידי לחיצה על הכרטיסייה'קובץ | ייצוא | Excel' בתוכנת בקרת מכשירים של ריומטר (ראה איור 17 משלים).
  2. הפעל קודים משלימים כדי ליצור חלקות של צמיגות לכאורה (η) עבור שיעורי זן גמירה משתנים ( ## ρ̇ סמל משוואה בניתוח דינמיקה ) ואובדן מודולוס (G"), מודולוס אחסון (G') וזווית פאזה (δ) עבור מתח תנודות משתנה ( משוואת שיווי משקל סטטי, סמל מתח (σ̄), דיאגרמה; מפתח במכניקה. ) וליצור תוצאות מייצגות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בסעיף זה, אנו מציגים את תוצאות הניסויים על ריר GR באמצעות ריומטר סיבובי עם גיאומטריית חרוט (קוטר 40 מ"מ, 1 ° 0 ' 11 '') וצלחת פלטייה. הניסויים סייעו לאפיין את ההתנהגות הלא-ניוטון, מדללת הגיוז של ריר ה- GR ואת לחץ התשואה לכאורה המתאר את המעבר של הריר מחומר דמוי ג'ל לחומר דמוי נוזל. התוצאות הייצוגיות כרוכות בתיאורים כמותיים של מגבלות המומנט הנמוכות והשפעות הזרימה המשניות של מכשור הרומד הסיבובי. מגבלות המכשור ומדידות קצב המתח היציב והדינמי סייעו לברר במדויק את המגמות ההתנהגותיות הצמיגיות ואת לחץ התשואה לכאורה של ריר GR. מדי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

אחת המטרות העיקריות של פיתוח פרוטוקול זה היא לקבוע כי הוא מתאים היטב לאפיון ריולוגי של ריר GR כאשר נפחי מדגם קטנים מאוד זמינים. אנו מכירים בכך שנדרשות דגימות נוספות מבית ספר לקרפיון כסף כדי לאפיין באופן מלא את התכונות הרוולוגיות של ריר GR והנתונים המוצגים כאן אינם הכללה על פני כל אוכלוסיית קרפיון הכסף. הטכניקה שלנו מוצדקת בגלל היעילות שלה עם אפיון רולוגי של נפחי מדגם קטנים ועם חקירות ממושכות המערבות הרכבים גדולים יותר של דגימות ריר.

השלבים הקריטיים בפרוטוקול הם הכנת פתרונות ריר בריכוזים שונים,...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

תודות

המחברים מכירים בתמיכה ובמימון ממרכז GW לביומימטיקה והנדסה ביו-השראה. אנו מודים לפרופסור ל. פטרישיה הרננדז מהמחלקה למדעי הביולוגיה באוניברסיטת ג'ורג ' וושינגטון על שנתנה השראה לחקירה ולשיתוף הפעולה המתמשך, סיפקה מומחיות ביולוגית בפיזיולוגיה של קרפיון הכסף ואספקת דגימות הריר. אנו מודים לתלמידים, מר דיוויד פלומבו, גברת קרלי כהן, מר אייזק פינברג, מר דומיניק פטרוסינו, מר אלקסיס רנדרוס, גברת פריסילה ורגזה, מר קרטר טגן ומר רגב פג'ור על עזרתם במעבדה ומר תומאס אוונס ומר ג'יימס תומאס מ"ת"א אינסטרומנטס", "הטירה החדשה", "דה" לתמיכה בהכשרה ותחזוקה של מד הרימון. תמונות עבור איורים 5A,C צולמו במהלך ניתוח שבוצע על ידי פרופסור ל. פטרישיה הרננדז מהמחלקה למדעי הביולוגיה באוניברסיטת ג'ורג 'וושינגטון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>חומרים
מגבוני קיםVWR470224-038לניקוי דגימה מכפפות צלחת
VWR89428-750למניעת זיהום של דגימה
פיפטהVWR89079-974להובלת דגימה מבקבוקון לראומטר
טיפים לפיפטהתרמו סיינטיפיק72830-042להובלת דגימה מבקבוקון לשייקר ריאומטר
VWR89032-094כדי לערבב באופן הומוגני דגימה של בקבוקוני ריר
VWR66008-710מכיל נפחי דגימה מדודים
משקל משקלOhausScout – מאזני SPXלשקילת מסה של דגימות ריר
<ריאגנטים חזקים>כימיים
(H20)-נוזל
סטרילי 70% איזופרופנול (C3H8O)VWR89108-162ריר נוזלי
<חזק>GR רירי
100 מ"ג/מ"ל ריכוז, 2 מ"ל--חומר ויסקו-אלסטי
ריכוז 400 מ"ג/מ"ל, 1 מ"ל-חומר ויסקו-אלסטי
ריכוז 200 מ"ג/מ"ל, 1 מ"ל- חומר ויסקו-אלסטי
<חזק>תוכנה
MATLABMathworksR2017aניתוח נתונים, עיבוד לאחר וייצוג גרפי
TriosTA Instrumentsv4.5.042498תוכנת בקרה וניתוח מכשירי ריאומטר

מקורות

  1. Cohen, K. E., Hernandez, L. P. The complex trophic anatomy of silver carp, Hypophthalmichthys molitrix, highlighting a novel type of epibranchial organ. Journal of Morphology. 279, 1615-1628 (2018).
  2. Cohen, K. E., Hernandez, L. P. Making a master filterer: Ontogeny of specialized filtering plates in silver carp (Hypophthalmichthys molitrix). Journal of Morphology. 279, 925-935 (2018).
  3. Cremer, M., Smitherman, R. Food habits and growth of silver and bighead carp in cages and ponds. Aquaculture. 20 (1), 57-64 (1980).
  4. Battonyai, I., et al. Relationship between gill raker morphology and feeding habits of hybrid bigheaded carps (Hypophthalmichthys spp.). Knowledge and Management of Aquatic Ecosystems. 416, 36(2015).
  5. Zhou, Q., Xie, P., Xu, J., Ke, Z., Guo, L. Growth and food availability of silver and bighead carps: Evidence from stable isotope and gut content analysis. Aquaculture Research. 40 (14), 1616-1625 (2009).
  6. Freedman, J. A., Butler, S. E., Wahl, D. H. Impacts of invasive Asian carps on native food webs (Final Report). , University of Illinois, Kaskaskia Biological Station. Urbana-Champaign, IL. (2012).
  7. Nico, L., Fuller, P., Li, J. Silver carp (Hypophthalmichthys molitrix)-FactSheet. , (2017).
  8. Walleser, L., Howard, D., Sandheinrich, M., Gaikowski, M., Amberg, J. Confocal microscopy as a useful approach to describe gill rakers of Asian species of carp and native filter-feeding fishes of the upper Mississippi River system. Journal of Fish Biology. 85 (5), 1777-1784 (2014).
  9. Nelson, A. Z., Ewoldt, R. H. Design of yield-stress fluids: a rheology-to-structure inverse problem. Soft Matter. 13, 7578-7594 (2017).
  10. Chen, T. Rheological Techniques for Yield Stress Analysis. TA Instruments Applications Note, RH025. , (2020).
  11. Ewoldt, R. H., Johnston, M. T., Caretta, L. M. Experimental challenges of shear rheology: how to avoid bad data. Complex Fluids in Biological Systems. Spagnolie, S. , Springer. (2015).
  12. Thornton, D. J., Sheehan, J. K. From Mucins to Mucus: Toward a more coherent understanding of this essential barrier. Proceedings of the American Thoracic Society. 1, 54-61 (2004).
  13. Shepard, K. L. Functions for fish mucus. Reviews in Fish Biology and Fisheries. 4, 401-429 (1994).
  14. Fernández-Alacid, L., et al. Skin mucus metabolites in response to physiological challenges: A valuable non-invasive method to study teleost marine species. Science of the Total Environment. 644, 1323-1335 (2018).
  15. Wagner, C. E., Wheeler, K. M., Ribbeck, K. Mucins and Their Role in Shaping the Functions of Mucus Barriers. Annual Reviews in Cell and Developmental Biology. 34, 189-215 (2018).
  16. Bird, R. B., Armstrong, R. C., Hassager, O. Dynamics of Polymeric Liquids, Volume 1: Fluid Mechanics. , Wiley. New York. 1255-1284 (1987).
  17. Mantle, M., Allen, A. Isolation and characterisation of the native glycoprotein from pig small intestinal mucus. Biochemical Journal. 195, 267-275 (1981).
  18. Allen, A., Hutton, D. A., Pearson, J. P., Sellers, L. A. Mucus glycoprotein structure, gel formation and gastrointestinal mucus function. Mucus and Mucosa (Ciba Foundation Symposium). Nugent, J., O'Conner, M. , Pitman. London. 137-156 (1984).
  19. Asakawa, M. Histochemical studies of the mucus on the epidermis of eel, Anguillajaponica. Bulletin of Japanese Society of Scientific Fisheries. 36, 83-87 (1970).
  20. Fletcher, T. C., Jones, R., Reid, L. Identification of glycoproteins in goblet cells of epidermis and gill of plaice (Pleuroneces platessa L.), flounder (Platichthys flesus (L.)) and rainbow trout (Salmo gairdneri Richardson). Histochemical Journal. 8, 597-608 (1976).
  21. Silberberg, A. Mucus glycoprotein, its biophysical and gel forming properties. Symposia of the Society for Experimental Biology. 43, 43-64 (1989).
  22. Hills, B. The Biology of Surfactants. , Cambridge Univ. Press. Cambridge. 408(1988).
  23. Aubert, H., Brook, A. J., Shephard, K. L. Measurement of the adhesion of a desmid to a substrate. British Phycology Journal. 24, 293-295 (1989).
  24. Sanderson, S. L., Cech, J. J., Patterson, M. R. Fluid dynamics in suspension feeding black fish. Science. 251, 1346-1348 (1991).
  25. Lai, S. K., Wang, Y. Y., Wirtz, D., Hanes, J. Micro- and macrorheology of mucus. Advanced Drug Delivery Reviews. 61 (2), 86-100 (2009).
  26. Chaudhary, G., Ewoldt, R. H., Thiffeault, J. L. Unravelling hagfish slime. Journal of Royal Society Interface. 16 (150), 20180710(2019).
  27. Downing, S., Salo, W., Spitzer, R., Koch, E. The hagfish slime gland: a model system for studying the biology of mucus. Science. 214, 1143-1145 (1981).
  28. Hwang, S. H., Litt, M., Forsman, W. C. Rheological properties of mucus. Rheologica Acta. 8, 438-448 (1969).
  29. Litt, M. Mucus rheology. Archives of Internal Medicine. 126, 417-423 (1970).
  30. Quarishi, M. S., Jones, N. S., Mason, J. The rheology of nasal mucus: a review. Clinical Otolaryngology. 23, 403-413 (1998).
  31. Nordgård, C. T., Draget, K. I., Seternes, T. Rheology of salmon skin mucus. Annual Transactions - The Nordic Rheology Society. 23, 175-179 (2015).
  32. Fernández-Alacid, L., et al. Comparison between properties of dorsal and ventral skin mucus in Senegalese sole: Response to an acute stress. Aquaculture. 513, 734410(2019).
  33. Yüce, C., Willenbacher, N. Challenges in Rheological Characterization of Highly Concentrated Suspensions - Case Study for Screen-printing Silver Pastes. Journal of Visualized Experiments. (122), e55377(2017).
  34. Sultan, S., Mathew, A. P. 3D Printed Porous Cellulose Nanocomposite Hydrogel Scaffolds. J. Vis. Exp. (146), (2019).
  35. Barnes, H. A., Hutton, J. F., Walters, K. An Introduction to Rheology. , Elsevier. Amsterdam. (1989).
  36. National Water Information System. USGS Current Conditions for USGS 06910450 Missouri River at Jefferson City, MO. U.S. Geological Survey. , Available from: https://nwis.waterdata.usgs.gov/usa/nwis/uv/?cb_00010=on&cb_00060=on&cb_00065=on&format=gif_default&site_no=0691045&p09-19&end_date=2018-09-21 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

אפיון מאקרו-ריאולוגיה של ריר גיל רייקר בקרפיון הכסף, היפופתלמיכטיס מוליטריקס
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.