דימום אינטרפרנכימלי ודלקת עצבית המלווה בחבלה מוחית עלולים לגרום לפגיעה מוחית משנית חמורה. פרוטוקול זה מפרט מודל השפעה קליפתית מבוקרת עכבר (CCI) המאפשר לחוקרים לחקור דימום, קונטוזיה ותגובות חיסוניות פוסט-טראומטיות ולחקור טיפולים פוטנציאליים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל השפעה קליפת המוח מבוקרת פרה-קלינית עבור דימום טראומטי, חבלה ודלקת עצבית
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
חבלה מוחית היא בעיה רפואית חמורה המשפיעה על מיליוני אנשים ברחבי העולם מדי שנה. יש צורך דחוף להבין את המנגנון הפתופיזיולוגי ולפתח אסטרטגיה טיפולית יעילה להפרעה נוירולוגית הרסנית זו. דימום אינטרפרנכימלי ותגובה דלקתית פוסט-טראומטית הנגרמת על ידי השפעה פיזית ראשונית יכולים להחמיר את הפעלת מיקרוגליה/מקרופאגים ודלקת עצבית, אשר לאחר מכן מחמירים את הפתולוגיה במוח. אנו מספקים כאן פרוטוקול השפעה קורטיקלית מבוקרת (CCI) שיכול לשחזר חבלה קורטיקלית ניסיונית בעכברים באמצעות מערכת השפעה פנאומטית כדי להעביר כוח מכני עם גודל ומהירות הניתנים לשליטה על פני השטח הדוראליים. מודל פרה-קליני זה מאפשר לחוקרים לגרום לחבלה מוחית מוקדית בינונית חמורה בעכברים ולחקור מגוון רחב של התפתחויות פתולוגיות פוסט-טראומטיות, כולל חבלה בדימום, הפעלת מיקרוגליה/מקרופאגים, רעילות ברזל, פגיעה אקסונלית, כמו גם ליקויים נוירו-התנהגותיים לטווח קצר וארוך. הפרוטוקול הנוכחי יכול להיות שימושי לחקר ההשפעות ארוכות הטווח של התערבויות פוטנציאליות לחבלה מוחית.
מבוא
חבלה מוחית היא צורה של פגיעה מוחית טראומטית המדורגת גבוה בין בעיות הבריאות הקטלניות ביותר בחברה המודרנית1. זה נגרם בעיקר על ידי אירועים מקריים כגון תאונת דרכים שגורמת לכוחות חיצוניים להפעיל אנרגיה מכנית על הראש. פגיעה מוחית טראומטית משפיעה על כ -3.5 מיליון אנשים ומהווה 30% מכלל מקרי המוות הקשורים לפציעה חריפה בארה"ב בכל שנה2. חולים ששורדים חבלה מוחית סובלים לעתים קרובות מהשלכות ארוכות טווח הכוללות חולשה מוטורית מוקדית, תפקוד חושי לקוי ומחלות נפש1.
הפגיעה העיקרית של חבלה מוחית נגרמת על ידי גורמים מכניים כולל כוחות מתיחה וקריעה, מה שמוביל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים המתוארים בפרוטוקול זה נערכו תחת אישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים בבית החולים הכללי צ'נג סין ובמכללה הלאומית לרפואה של אוניברסיטת טייוואן. בפרוטוקול זה נעשה שימוש בעכברי בר זכרים בני שמונה עד עשרה שבועות מסוג C57BL/6.
1. אינדוקציה הרדמה
- מרדים את העכבר עם ~4% איזופלורן מעורבב עם אוויר החדר ב~0.2 ליטר/דקה בתא אינדוקציה המחובר לוופורייזר איזופלורן.
- ודא שדפוס הנשימה חלק. בדוק את עומק ההרדמה על ידי אישור חוסר רפלקס צביטת הבוהן בחיה.
2. הכנה טרום ניתוחית
- גילח את ראש העכבר עם קוצצים חשמליים בכיוון קאודלי עד רוסטרלי. אין לקצ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המחשה של מיקום סטריאוטקטי והליך קרניוטומיה.
מודל CCI ידוע ביציבותו וביכולת השחזור שלו בייצור פציעות החל מקלה ועד חמורה18. טכניקה סטריאוטקטית נכונה והליך קרניוטומיה הם גורמים עיקריים ביצירת פגיעה מוחית יציבה וניתנת לשחזור הנגרמת על-ידי CCI (איור 1A,B). הליך קרניוטומיה אידיאלי יגרום לפגיעה היסטולוגית מינימלית במוח המופעל על ידי דמה27,28 כפי שמוצג (
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול CCI מייצר פגיעה מכנית במוח הניתנת לשחזור לצורך מחקר חבלה מוחית. השלבים הבאים חיוניים ליצירת פגיעה מוחית עקבית בבעלי חיים באמצעות פרוטוקול CCI זה.
ראשית, ראש העכבר צריך להיות מותקן ביציבות על המסגרת הסטריאוטקסית ואת ציוני הדרך האנטומיים ברגמה ולמבדה תמיד באותו מישור אופקי. מיקום ראש לא יציב או לא יציב גורם לעיתים קרובות לרמות פציעה שונות בין בעלי חיים. כדי להבטיח שראש החיה מאובטח בבטחה, השתמש בזוג מלקחיים כדי לדחוף בעדינות את ראש העכבר לרוחב. הראש צריך.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לדניה ג'יאנג על עריכת כתב היד ועל הקלט מלא התובנה. אנו מודים לג'יה סיואן לין על הסיוע בהכנת כתבי היד. עבודה זו נתמכה על ידי משרד המדע והטכנולוגיה של טייוואן (MOST 107-2320-B-002-063-MY2) ל- C.F.C.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מקדחה טרפין קצרה 4 מ"מ | Salvin Dental Specials, Inc. | TREPH-SHORT-4 | |
| נוגדן נגד Iba1 | Wako כימיקלים # | 019-19741 | |
| נוגדן נגד Ly76 | abcam | ab91113 | |
| מלט קרבוקסילאט | 3M | 70201136010 | |
| פגיעה בחבלה בקליפת המוח עיצוב | מותאם אישית & פבריקיישן, בע"מ | S/N 49-2004-C, eCCI דגם 6.3 | מכשיר CCI (S/N 49-2004-C, eCCI דגם 6.3) |
| קרסיל סגול אצטט | Sigma-Aldrich | C5042 | |
| ערכת צביעה DAB | וקטור | SK-4105 | |
| נוגדן משני IgG נגד ארנב עזים, Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11034 | |
| נוגדן משני IgG נגד חולדות, Alexa Fluor 594 | Invitrogen | A11007 | |
| פינצטה Hematoxylin | ScyTek | HMM500 | |
| כלים מדעיים עדינים | 11252-20 מס' 5 | ||
| איזופלורן | Panion & BF ביוטק בע"מ | ||
| Bupivacaine 0.25% | Hospira | ||
| ליתיום קרבונט | Sigma-Aldrich | 62470 | |
| מסגרת סטריוטקסית | סטולינג | ||
| כלים | מדעיים עדינים | 14068-12 | |
| ממס כחול 38 | סיגמא-אולדריץ' | S3382 |
מקורות
- Maas, A. I. R., et al. Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research. The Lancet Neurology. 16 (12), 987-1048 (2017).
- Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
