דווח כאן על מערכת להדמיית סידן בדלקת אלגנס המתנהגת באופן חופשי עם רטט מבוקר היטב, שאינו לוקלי. מערכת זו מאפשרת לחוקרים לעורר תנודות לא-לוקליות בעלות תכונות מבוקרות היטב בתזוזה בקנה מידה ננומטרי ולכמת זרמי סידן במהלך תגובות של C. elegans לתנודות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הדמיית סידן באלגנים של Caenorhabditis המתנהגים בחופשיות עם רטט מבוקר היטב, שאינו מלוטש
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
כוחות מכניים לא-לוקליים, כגון תנודות וגלים אקוסטיים, משפיעים על מגוון רחב של תהליכים ביולוגיים מהתפתחות ועד הומאוסטזיס. בעלי חיים מתמודדים עם גירויים אלה על ידי שינוי התנהגותם. הבנת המנגנונים העומדים בבסיס שינוי התנהגותי כזה דורשת כימות של הפעילות העצבית במהלך התנהגות העניין. כאן, אנו מדווחים על שיטה להדמיית סידן בהתנהגות חופשית של Caenorhabditis elegans עם רטט לא-לוקלי של תדירות, תזוזה ומשך ספציפיים. שיטה זו מאפשרת ייצור של רטט מבוקר היטב, לא-לוקליזציה באמצעות מתמר אקוסטי וכימות של תגובות סידן מעוררות ברזולוציה של תא יחיד. כהוכחה עקרונית, מודגמת תגובת הסידן של אינטרנורון יחיד, AVA, במהלך תגובת הבריחה של C. elegans לרטט. מערכת זו תאפשר הבנה של מנגנונים עצביים העומדים בבסיס התגובות ההתנהגותיות לגירויים מכניים.
מבוא
בעלי חיים נחשפים לעתים קרובות לגירויים מכניים לא לוקליים כגון תנודות או גלים אקוסטיים 1,2. מכיוון שגירויים אלה משפיעים על הומאוסטזיס, התפתחות ורבייה, בעלי חיים חייבים לשנות את התנהגותם כדי להתמודד איתם 3,4,5. עם זאת, המעגלים העצביים והמנגנונים העומדים בבסיס שינוי התנהגותי כזה אינם מובנים היטב.
התנהגות מכנית בנמטודה, Caenorhabditis elegans, היא פרדיגמה התנהגותית פשוטה, שבה תולעים בדרך כלל משנות התנהגות מתנועה קדימה לתגובת בריחה לאחור כאשר הן נתקלות ברטט לא לוקלי6. המעגל העצבי העומד בבסיס התנהגות זו מורכב בעיקר מחמישה נוירונים חושיים, ארבעה זוגות של אינטרנורונים ומספר סוגים של נוירונים מוטוריים 7,8. בנוסף, תולעים רגילות לגירויים מכניים כאלה לאחר אימון מרווח הכולל גירוי חוזרונשנה 9,10,11. לכן, תגובה התנהגותית פשוטה זו מהווה מערכת אידיאלית לחקר מנגנונים עצביים העומדים בבסיס הן התנהגות מעוררת רטט לא-לוקליזציה והן זיכרון. מודגם פרוטוקול להדמיית סידן בתולעים המתנהגות בחופשיות בהשפעת תנודות לא לוקליות. בהשוואה למערכות שדווחו בעבר, מערכת זו פשוטה בכך שהיא אינה דורשת מצלמה נוספת למעקב; עם זאת, הוא מאפשר לנו לשנות את התדירות, התזוזה והמשך של רטט לא-לוקלי. מאחר שהפעלת האינטרנורונים של ה-AVA גורמת לתגובת הבריחה לאחור, תולעים המבטאות במשותף את GCaMP, מחוון סידן, ו-TagRFP, חלבון פלואורסצנטי חסר רגישות לסידן, תחת שליטתו של מקדם ספציפי ל-AVA שימשו כדוגמה (ראו טבלת חומרים לפרטים). הפרוטוקול מדגים את ההפעלה של נוירוני AVA כאשר תולעת עוברת מתנועה קדימה לתנועה לאחור. פרוטוקול זה מאפשר להבין את מנגנון המעגל העצבי העומד בבסיס ההתנהגות המכנוזנסורית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. גידול תולעים עד הדמיית סידן
- ארבעה ימים לפני ניסוי הדמיית סידן, העבירו שתי תולעי ST12 בוגרות לצלחת חדשה של מדיום גדילת נמטודה (NGM) (טבלת חומרים) שעליה Escherichia coli OP50 מפוספסות בתבנית מרובעת (כ-4 מ"מ x 4 מ"מ) באמצעות מפזר תאים, כך שהתולעת מבלה את רוב הזמן בחיידקים במהלך הדמיית סידן12.
- דגירה של צלחת NGM זו למשך 4 ימים בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס באינקובטור (טבלת חומרים).
2. הגדרת חומרה
- הכינו מיקרוסקופ המצויד בהתקן פיאזואלקטרי לגירוי13, עדשת מטרה 2x, מצלמת sCMOS במהירות גבוהה, אופטיקה לפיצול תמונות, שלב ממונע x-y, מקור אור LED לעירור ומחשב (איור 1). מפרטים חיוניים של מצלמת sCMOS כוללים 2560 x 2160 פיקסלים פעילים, 6.5 מיקרומטר בגודל, עם קישור מצלמה של 10 הקשות כאפשרות ממשק. המפרטים העיקריים של השלב הממונע X-Y כוללים טווח נסיעה של 110 מ"מ x 75 מ"מ, מהירות מרבית של 250 מ"מ לשנייה, תאוצה מרביתשל 2,000 מ"מ לשנייה ו-0.25 מיקרומטר יכולת חזרה חד כיוונית.
- הפעל את המחשב ואת בקר הבמה הממונעת x-y.
- הפעילו את המגבר והגדירו את כוונון עוצמת הקול ל-10 ואת כוונוני הבס והטרבל ל-8.
- כדי לעורר GCaMP ו- TagRFP, הפעל את האורות של 488 ננומטר ו- 560 ננומטר של מקור תאורת ה- LED. הגדר את המדדים של 470 ננומטר ו-550 ננומטר של תרמיל הבקרה במקור האור ל-5% כך שעוצמת נורת ה-LED תתאים להדמיה.
הערה: בעוצמת LED זו, הלבנת תמונות של GCaMP ו- TagRFP פלואורסצנציה אינה מתרחשת במהלך ההקלטה.
3. הגדרת תוכנה להדמיית סידן
- הורד והתקן שלוש חבילות תוכנה ב- Windows: תוכנת מאקרו של עכבר, תוכנה לשליטה במאפיין רטט, תוכנה להפעלת תוכנת מעקב ותוכנה לניתוח נתונים (טבלת חומרים).
- לחץ פעמיים על קובץ תוכנת המעקב.
- לחצו על כפתור ההפעלה והמתינו 5 דקות כדי לייצב את התוכנה (איור 2A).
- ספק את המידע על זמן החשיפה ועל ההצמדה. זמן חשיפה של 0.033 שניות עם חיבור של 2 x 2 מבטיח רכישת תמונה חלקה (איור 2B).
הערה: רק כל תמונה 10שנרכשה מוצגת על מנת להפחית את עומס הזיכרון. - ספק את המידע לרכישת תמונה (איור 2C). לדוגמה, כאשר 500 תמונות מוקלטות פעמיים במרווח של 10 שניות, הזן 1,000 בתיבה 'סה"כ תמונות', 500 בתיבה 'תמונות' ו-10 בתיבה 'מרווח' (s).
- הפעל את לחצן 'רכישה' (איור 2D).
- פיצול התמונה הפלואורסצנטית באמצעות אופטיקה של פיצול תמונה, ושתי התמונות (ערוץ GCaMP, 500-525 ננומטר (איור 2E); ערוץ TagRFP, 584-676 ננומטר (איור 2F)) מוקרנים על שני חצאים של מצלמת ה-sCMOS. כייל את הקואורדינטות של ערוצי GCaMP ו-TagRFP (איור 2G). שמור את הגדרות התוכנה.
- הגדר את הספריה לפלט קובץ הנתונים (איור 2H).
- כבו את לחצן 'רכישה' (איור 2D).
- לחץ פעמיים על תוכנת מערכת המאקרו של העכבר (איור 3A) והגדר את מאפייני הרטט (איור 3B). קרא את קובץ הבדיקה.txt עם מערכת המאקרו של העכבר כך שסמן העכבר נשלט על סמך הקואורדינטות ולוח הזמנים בקובץ זה (איור 3A). הגדר את הקואורדינטות של סמן העכבר (ריבועי מגנטה באיור 3A) והמתן זמן עד לגירוי לאחר תחילת ההקלטה (magenta באיור 3A). הגדר את ערכי התדר ואת ערכי המשרעת בתוכנה לבקרת רעידות (איור 3B).
4. הכנת תולעים להדמיית סידן
- העבר תולעת בודדת המבטאת גם את GCaMP וגם את TagRFP מהצלחת המדגרת לצלחת NGM חדשה וטרייה שעליה הוצב E. coli OP50.
- חברו את לוחית ה-NGM למתמר האקוסטי הפיאזואלקטרי באמצעות סרט הדבקה שקוף (איור 4). אין ללחוץ על הלוחית על המפעיל מכיוון שהדבר משנה את תדר הרטט.
5. הדמיית סידן תחת שליטה של תכונות רטט ספציפיות
- הפעל את לחצן 'רכישה' (איור 2D).
- מצא את התולעת תחת אור בהיר ואור עירור (488 ננומטר ו- 560 ננומטר).
- הגדר את ערך הזום של מיקרוסקופיה ל- 2.5x. שדה הראייה הוא 1.1 מ"מ x 1.1 מ"מ ברזולוציה של 2.6 מיקרומטר לפיקסל.
- כבו את האור הבהיר והפעילו את כפתור הביות (איור 2I) כדי לעקוב אחר הנקודה הפלואורסצנטית של התולעת. לחצן ביות זה מתחיל את התנועה של שלב X-Y כדי לשמור על אזור העוצמה המרבית של התולעת במרכז שדה הראייה בתמונת TagRFP.
הערה: במונחים של מקדם flp-18 , העוצמה הפלואורסצנטית של נוירוני AVA היא החזקה ביותר ואלה מתאי עצב אחרים הם קלושים או לא מזוהים. לכן, מערכת ההגדלה הנמוכה אינה נדרשת למעקב והבמה נעה לאורך כל ההקלטה. - ודא שערכי סרגלי העוצמה באיור 2E ו-2F הם כ-1,000. אם הם לא, כוונו את המדדים של 470 ננומטר ו-550 ננומטר של תרמיל הבקרה במקור האור.
- לחצו על הלחצן 'הפעל ' במערכת המאקרו של העכבר כדי לאפשר שליטה בסמן העכבר בהתאם ללוח הזמנים המתואר באיור 3A. זה מתחיל להקליט באמצעות תוכנת המעקב ולעורר על ידי תוכנת גנים גלים תוך כדי מעקב אחר התולעת.
- בדוק אם קובץ BMP הפלט נוצר כראוי.
6. ניתוח נתונים
- צור תיקיה בשולחן העבודה וקרא לה סידן הדמיה.
- צור תיקיה בתוך התיקיה CalciumImaging וקרא לה CIResult, עבור קבצי תוצאות הפלט.
- לחץ פעמיים על הקובץ DualViewImaging.nb שנכתב בתוכנת ניתוח נתונים עבור Windows.
- הוסף את נתיב הקובץ לתיקיה CIResult (לדוגמה, DirectoryName[/Users/Sugi0911/Desktop/CalciumImaging/CIResult/test.rtf]) (איור 5).
- הוסף את נתיב הקובץ לתיקיה, כולל קובץ BMP (לדוגמה, SetDirectory[/Users/Sugi0911/Desktop/XXX/]) (איור 5), שבו XXX מציין את שם התיקיה כולל קבצי BMP.
- לחץ על המקשים Shift ו - Return בו-זמנית כדי להתחיל ניתוח אוטומטי. ניתוח זה משתמש בערך של אזור שדה ראייה בעוצמה מרבית בתמונת TagRFP (ראה את המקרא של איור 6 להליך חישוב מפורט בתוכנית).
- בדוק אם קבצי הפלט הבאים נוצרים כראוי בתיקיה CIResult.
XXX-GCaMP.tif (קובץ תמונה הממחיש עקבות של עוצמות GCaMP עבור כל התמונות)
XXX-GCaMP.xls (קובץ גיליון אלקטרוני המפרט עוצמות GCaMP בכל התמונות)
XXX-TagRFP.tif (קובץ תמונה הממחיש עקבות של עוצמות של TagRFP עבור כל התמונות)
XXX-TagRFP.xls (קובץ גיליון אלקטרוני המפרט את עוצמות TagRFP בכל התמונות)
XXX-Ratio.tif (קובץ תמונה הממחיש עקבות של ערך היחס עבור כל התמונות)
XXX-Ratio.xls (קובץ גיליון אלקטרוני המפרט את ערך היחס בכל התמונות)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כאן, תולעת המבטאת הן GCaMP והן TagRFP תחת שליטה של מקדם ספציפי ל- AVA interneuron משמשת כדוגמה להדמיית סידן ב- C. elegans המתנהגים בחופשיות. נתוני ערוץ GCaMP ו-TagRFP התקבלו כסדרה של תמונות, שחלקן מוצגות באיור 6 כסרט (סרט משלים 1). גם התזוזה של לוחית הפטרי המושרה על-ידי מערכת הרטט הלא-לוקלית שלנו (איור 7) כומתה. ניתן לשלוט בתזוזה על-ידי הגדרת ערך המשרעת בתוכנה לבקרת רעידות (איור 3B) ובמתאם עוצמת הקו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
באופן כללי, כימות הפעילות העצבית דורש הכנסת בדיקה ו/או ריסון על תנועת גוף בעלי החיים. עם זאת, עבור מחקרים על התנהגות מכנית, ההקדמה הפולשנית של בדיקה ומעצורים עצמם מהווים גירויים מכניים. C. elegans מספק מערכת לעקיפת בעיות אלה, משום שתכונותיו שקופות ומשום שיש לו מעגל עצבי פשוט וקומפקטי הכולל רק 302 נוירונים. שילוב של יתרונות אלה עם השיטה שפותחה בעבר של גירוי תנודות לא-לוקליות של תזוזה ננומטרית13, המומחשת כאן היא שיטה להדמיית סידן לא פולשנית של C. elegans חסרי מעצורים המגיבים לרטט מ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.
תודות
אנו מודים למרכז הגנטיקה של Caenorhabditis על אספקת הזנים המשמשים במחקר זה. פרסום זה נתמך על ידי JSPS KAKENHI מענק-סיוע למחקר מדעי (B) (מענק מס' JP18H02483), על תחומים חדשניים "מדע הרובוט הרך" פרויקט (מענק מס' JP18H05474), ראש הממשלה מהסוכנות היפנית למחקר ופיתוח רפואי (מענק מספר 19gm6110022h001), וקרן שימאדזו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Data anaylsis software | |||
| DualViewImaging.nb | מחבר | לניתוח נתונים שנרכשו | |
| Mathematica12 | Wolfram | להפעלת תוכנת ניתוח נתונים DualViewImaging | |
| Escherichia coli ו-C. elegans זנים | |||
| E. coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center | OP50 | מזון עבור C. elegans. Uracil auxotroph. E. coli B. |
| lite-1(ce314) זן | Caenorhabditis Genetics Center | KG1180 | מוטנט לא רגיש לאור |
| lite-1(ce314) זן המבטא NLS-GCaMP-NLS ו-TagRFP בשליטת מחבר המקדם הספציפי | של AVA ST12 | lite-1(ce314) מוטציה הנושאת את הגנים המבטאים NLS-GCaMP5G-NLS (NLS; אות לוקליזציה גרעינית) ו-TagRFP בשליטת flp-18 מקדם כמערכים חוץ-כורומוזומליים | |
| <חזק>לייזר דופלר ויברומטר | |||
| Lase דופלר ויברומטר | פוליטק יפן | IVS-500 | לכימות תדר ותזוזה שנוצרו על ידי מערכת המאקרו של מתמר אקוסטי |
| עכבר Assay.txt | |||
| מחבר | סקריפט לשליטה זמנית ומיוחדת עכבר cursol ב Windows | ||
| HiMacroEx | וקטור | https://www.vector.co.jp/download/file/winnt/util/fh667310.html | תוכנה להורדה בחינם לשליטה בסמן העכבר המבוסס על סקריפט |
| Nematode גידול מדיה צלחת < / חזק > | |||
| אגר מטוהר אבקה | Nakarai tesque | 01162-15 | עבור הכנת צלחות NGM |
| בקטו פפטון | בקטון דיקינסון | 211677 | להכנת פלטות NGM |
| סידן כלוריד | וואקו | 036-00485 | להכנת צלחות NGM |
| כולסטרול | וואקו | 034-03002 | להכנת פלטות NGM |
| di-Photassium hydrogenphosphate | Nakarai tesque | 28727-95 | להכנת פלטות NGM |
| מרק LB, Lennox | Nakarai tesque | 20066-95 | לתרבית של E. coli OP50 |
| מגנזיום גופרתי נטול מים | TGI | M1890 | להכנת לוחות NGM |
| אשלגן דיהידרוגנפוספט | Nakarai tesque | 28720-65 | להכנת צלחות NGM |
| נתרן כלורי | Nakarai tesque | 31320-05 | להכנת לוחות NGM |
| צלחות פטרי (60 מ"מ) | Nunc | 150270 | להכנת צלחות NGM |
| <חזק>מכשיר רטט לא מקומי | |||
| מגבר | LEPY | LP-A7USB | לגירוי עם רטט נשלט |
| מתמר אקוסטי | MinebeaMitsumi | LVC25 | לגירוי עם רטט נשלט |
| WaveGene Ver. 1.5 | לשגשג | http://efu.jp.net/soft/wg/down_wg.html | תוכנה להורדה בחינם לשליטה ברטט מאפיין |
| <חזק>לא פולשני סידן הדמיה | |||
| 2 ערוצים benchtop 3 פאזי ללא מברשות DC סרוו | בקר Thorlabs | BBD202 | בקר תואם עבור MLS203-1 שלבים |
| 479/585 ננומטר BrightLine מסנן פס פס כפול | Semrock | FF01-479/585-25 | לרכישת תמונות שני ערוצים (GCaMP ו-TagRFP) |
| 505/606 ננומטר BrightLine מפצל אלומה דיכרואי סטנדרטי אפי-פלואורסצנטי כפול קצה | Semrock | FF505/606-Di01-25x36 | לרכישת תמונות דו-ערוציות (GCaMP ו-TagRFP) |
| 512/25 ננומטר מסנן פס פס יחיד של BrightLine | Semrock | FF01-512/25-25 | לרכישת תמונות דו-ערוציות (GCaMP ו-TagRFP) |
| 630/92 ננומטר BrightLine מסנן פס פס יחיד | Semrock | FF01-630/92-25 | לרכישת תמונות דו-ערוציות (GCaMP ו-TagRFP) |
| מחשב | Dell | Precision T7600 | Windows7 עם מעבד Intel Xeon ES-2630 ו-8 GB של זיכרון RAM |
| ממונע x-y במהירות גבוהה | Thorlabs | MLS203-1 | שלב סריקת XY מהיר |
| אופטיקה פיצול תמונה | Hamamatsu photonics | A12801-01 | לרכישת תמונות דו-ערוציות (GCaMP ו-TagRFP) שנוצרו על ידי W-VIEW GEMINI אופטיקה לפיצול תמונה |
| מקור אור LED CoolLED | pE-4000 | להפקת אור עירור של 470 ננומטר ו-560 ננומטר | |
| מיקרוסקופ | מצלמת אולימפוס | MVX10 | |
| sCMOS אנדור | זילה | ||
| x 2 עדשת אובייקט | אולימפוס | MVPLAPO2XC | מרחק עבודה 20 מ"מ ומספרי צמצם 0.5 |
| <חזק>פלסמיד | |||
| pKDK66 | מחבר | pKDK66 | סמן הזרקה משותפת |
| pTAK83 מחבר פלסמיד | pTAK83 | פלסמיד לביטוי של TagRFP בשליטת מקדם flp-18 מחבר | |
| פלסמיד pTAK144 | pTAK144 | פלסמיד לביטוי NLS-GCaMP5G-NLS בשליטת flp-18 promoter | |
| Tracking software | |||
| homingback.vi | קובץ | SubVi למעקב אחר נקודה פלואורסנטית של תולעת באמצעות בקרת משוב של מצלמת sCMOS ושלב ממונע x-y | |
| LabVIEW | מכשירים | להפעלת תוכנת מעקב | |
| Zyla Control ver.2.6CI.vi | מחבר | למעקב אחר נקודת פלואורסנט של תולעת באמצעות בקרת משוב של מצלמת sCMOS ושלב ממונע xy |
מקורות
- Hill, P. S. M., Wessel, A. Biotremology. Current Biology. 26 (5), 187-191 (2016).
- Fettiplace, R., Hackney, C. M. The sensory and motor roles of auditory hair cells. Nature Reviews Neuroscience. 7 (1), 19-29 (2006).
- Vogel, V., Sheetz, M. Local force and geometry sensing regulate cell functions. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 7 (4), 265-275 (2006).
- Katta, S., Krieg, M., Goodman, M. B. Feeling force: physical and physiological principles enabling sensory mechanotransduction. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 31, 347-371 (2015).
- Orr, A. W., Helmke, B. P., Blackman, B. R., Schwartz, M. A. Mechanisms of mechanotransduction. Developmental Cell. 10 (1), 11-20 (2006).
- Goodman, M. B., Sengupta, P. How Caenorhabditis elegans senses mechanical stress, temperature, and other physical stimuli. Genetics. 212 (1), 25-51 (2019).
- Chalfie, M., et al. The neural circuit for touch sensitivity in Caenorhabditis elegans. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 5 (4), 956-964 (1985).
- Wicks, S. R., Rankin, C. H. The integration of antagonistic reflexes revealed by laser ablation of identified neurons determines habituation kinetics of the Caenorhabditis elegans tap withdrawal response. Journal of Comparative Physiology. A Sensory, Neural, and Behavioral Physiology. 179 (5), 675-685 (1996).
- Rankin, C. H., Beck, C. D., Chiba, C. M. Caenorhabditis elegans: a new model system for the study of learning and memory. Behavioural Brain Research. 37 (1), 89-92 (1990).
- Bozorgmehr, T., Ardiel, E. L., McEwan, A. H., Rankin, C. H. Mechanisms of plasticity in a Caenorhabditis elegans mechanosensory circuit. Frontiers in Physiology. 4, 88(2013).
- Sugi, T., Ohtani, Y., Kumiya, Y., Igarashi, R., Shirakawa, M. High-throughput optical quantification of mechanosensory habituation reveals neurons encoding memory in Caenorhabditis elegans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (48), 17236-17241 (2014).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
- Sugi, T., Okumura, E., Kiso, K., Igarashi, R. Nanoscale mechanical stimulation method for quantifying C. elegans mechanosensory behavior and memory. Analytical Sciences: The International Journal of the Japan Society for Analytical Chemistry. 32 (11), 1159-1164 (2016).
- Brownell, P. H. Compressional and surface waves in sand: used by desert scorpions to locate prey. Science. 197 (4302), 479-482 (1977).
- Clark, D. A., Gabel, C. V., Gabel, H., Samuel, A. D. T. Temporal activity patterns in thermosensory neurons of freely moving Caenorhabditis elegans encode spatial thermal gradients. Journal of Neuroscience. 27 (23), 6083-6090 (2007).
- Tsukada, Y., et al. Reconstruction of spatial thermal gradient encoded in thermosensory neuron AFD in Caenorhabditis elegans. Journal of Neuroscience. 36 (9), 2571-2581 (2016).
- Piggott, B. J., Liu, J., Feng, Z., Wescott, S. A., Xu, X. Z. S. The neural circuits and synaptic mechanisms underlying motor initiation in C. elegans. Cell. 147 (4), 922-933 (2011).
- Nguyen, J. P., et al. Whole-brain calcium imaging with cellular resolution in freely behaving Caenorhabditis elegans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (8), 1074-1081 (2016).
- Schrodel, T., Prevedel, R., Aumayr, K., Zimmer, M., Vaziri, A. Brain-wide 3D imaging of neuronal activity in Caenorhabditis elegans with sculpted light. Nature Methods. 10 (10), 1013-1020 (2013).
- Prevedel, R., et al. Simultaneous whole-animal 3D imaging of neuronal activity using light-field microscopy. Nature Methods. 11, 727-730 (2014).
- Nichols, A. L. A., Eichler, T., Latham, R., Zimmer, M. A global brain state underlies C. elegans sleep behavior. Science. 356 (6344), (2017).
- Zheng, M., Cao, P., Yang, J., Xu, X. Z. S., Feng, Z. Calcium imaging of multiple neurons in freely behaving C. elegans. Journal of Neuroscience Methods. 206 (1), 78-82 (2012).
- Sugi, T., Ito, H., Nishimura, M., Nagai, K. H. C. elegans collectively forms dynamical networks. Nature Communications. 10 (1), 1-9 (2019).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
