מאמר שיטה

יצירת תנאי סביבה דינמיים באמצעות מכשיר מיקרופלואידי בעל תפוקה גבוהה

DOI:

10.3791/61735

⸱

17 באפריל 2021

 ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Cultivation Base for Photoelectric Technology and Functional Materials, State Key Laboratory of Photon-Technology in Western China Energy, Institute of Photonics and Photon-Technology, Northwest University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים מערכת מיקרופלואידית למחקרי תפוקה גבוהה על מכונות חיים מורכבות, המורכבת מ-1500 יחידות תרבות, מערך של משאבות פריסטליות משופרות ומודולוס ערבוב באתר. השבב המיקרופלואידי מאפשר ניתוח של התנאים המיקרו-סביבתיים המורכבים והדינמיים ביותר ב-vivo.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חיקוי התנאים הסביבתיים vivo הוא חיוני למחקרים במבחנה על מכונות חיים מורכבות. עם זאת, טכניקות הנוכחי מיקוד תאים חיים ואיברים הם גם יקר מאוד, כמו רובוטיקה, או חסר נפח nanoliter ודיוק זמן אלפית שנייה במניפולציה נוזלית. אנו מציגים בזאת את העיצוב וההמצאה של מערכת מיקרופלואידית, המורכבת מ-1,500 יחידות תרבות, מערך של משאבות פריסטליות משופרות ומודולוס ערבוב באתר. כדי להדגים את היכולות של המכשיר המיקרופלואידי, כדוריות תאי גזע עצביים (NSC) נשמרות במערכת המוצעת. ראינו שכאשר תחום המל"ל נחשף ל- CXCL ביום 1 ו- EGF ביום 2, הקונפורמציה העגולה מתוחזקת היטב. שונות בסדר הקלט של 6 תרופות גורמת לשינויים מורפולוגיים בתחום המל"ל ולסמן הייצוגי ברמת הביטוי עבור גזעים של המל"ל (כלומר, Hes5 ו- Dcx). תוצאות אלו מצביעות על כך שלתנאים סביבתיים דינמיים ומורכבים יש השפעות רבות על הבידול וההתחדשות העצמית של המל"ל, והמכשיר המיקרופלואידי המוצע הוא פלטפורמה מתאימה למחקרי תפוקה גבוהים על מכונות החיים המורכבות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טכניקות תפוקה גבוהה חיוניות למחקרים ביו-רפואיים וקליניים. על ידי ביצוע מקביל של מיליוני בדיקות כימיות, גנטיות או חיות של תאים ואורגנואידים, החוקרים יכולים לזהות במהירות גנים המווסתים מסלול ביו-מולקולרי, ולהתאים אישית קלט תרופתי רציף לצרכים הספציפיים של האדם. רובוטיקה1 ושבבים מיקרופלואידיים בשילוב עם תוכנית בקרת מכשיר מאפשרים הליכים ניסיוניים מורכבים להיות אוטומטיים, כיסוי מניפולציה תא / רקמות, טיפול נוזלי, הדמיה, ועיבוד נתונים /שליטה 2,3. לכן, מאות ואלפי תנאים ניסיוניים יכולים להישמר על שבב אחד, על פי התפוקה הרצויה4,5.

בפרוטוקול זה תיארנו את הליך התכנון וההמצאה של מכשיר מיקרופלואידי, המורכב מ-1500 יחידות תרבות, מערך של משאבות פריסטלטיות משופרות ומודולוס ערבוב באתר. תא תרבית התאים הדו-מפלס מונע גזירה מיותרת במהלך חילופי דברים בינוניים, המבטיחה סביבת תרבות ללא הפרעה להדמיית תאים חיים לטווח ארוך. המחקרים מראים כי המכשיר המיקרופלואידי המוצע הוא פלטפורמה מתאימה למחקרי תפוקה גבוהה על מכונות החיים המורכבות. יתר על כן, התכונות המתקדמות של השבב המיקרופלואידי מאפשרות שחזור אוטומטי של תנאי מיקרו-וירוס מורכבים ודינמיים מאוד ב- vivo, כמו ציטוקינים משתנים והרכבי רצועות6,7, שהשלמתם לוקחת חודשים לפלטפורמות קונבנציונליות כמו צלחת 96 באר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. עיצוב שבבים מיקרופלואידיים

  1. עיצוב מולטיפלקסר microfluidic המורכב 18 מפרצון, שכל אחד מהם נשלט על ידי שסתום בודד משאבה peristaltic. כדי להגדיל את נפח הנוזל מונע על ידי כל מחזור שאיבה, יש את המשאבה peristaltic להיות מורכב 3 ערוצי בקרה, אשר הורחב בכוונה ל 200 מיקרומטר, ו 10 קווי זרימה מחוברים.
  2. עצבו את תא התרבות נטול הגזירה. שכפול של יחידת התרבות הדו-מפלסית מורכב מתא תרבית תאים נמוך יותר (400 מיקרומטר x 400 מיקרומטר x 150 מיקרומטר) ושכבת חיץ גבוהה יותר (400 מיקרומטר x 400 מיקרומטר x 75 מיקרומטר), המונעת לחץ גזירה לא רצוי על תאים במהלך חילופים בינוניים (איור 1).
  3. עצב תכונות בעלות תפוקה גבוהה. שכפל את יחידת התרבות כדי ליצור פריסת מטריצה בגודל 30 x 50, תוך כיבוש שטח של כ- 7 ס"מ על 5 ס"מ.

2. ייצור שבבים ותפעול

  1. ייצור של דפוס העתק באמצעות ליתוגרפיה UV
    הערה: דפוס העותק המשוכפל היה מפוברק על רקיק סיליקון על פי פרוטוקול פוטוליטוגרפיה סטנדרטי8.
    1. ייצור מבני הערוצים
      1. פוטורסיסט מסתובב: מעיל ספין 5 מ"ל של הפוטריסט השלילי SU-8 3025 על רקיק סיליקון ב-500 סל"ד ל-10 שניות ו-3000 סל"ד ל-30 שניות.
      2. אפייה רכה: מניחים את הוופל על כיריים בטמפרטורה של 65 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות ולאחר מכן 95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, מצננים אותו לטמפרטורת החדר.
      3. יישור וריפוי: לתקן את הוופל ואת המסכה על מחזיק של המיישר ולהדליק את מקור האור במשך 18 s כדי לרפא את photoresist חשוף.
      4. לפני החשיפה לאפות: להגדיל את הוופל ל 95 מעלות צלזיוס ב 110 מעלות צלזיוס / שעה מטמפרטורת החדר ולשמור אותו לפחות 40 דקות עד הסרת.
      5. פיתוח: לטבול את הוופל בתמיסה המתפתחת (מפתח SU-8) ולהתסיס אותו במשך 2.5 דקות לשטוף photoresist מיותר ולקבל את מבנה ערוץ 25 מיקרומטר גבוה.
      6. אפייה קשה: מכסים את הוופל בצלחת פטרי מזכוכית ואופים ב-65 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות, ואז מגדילים עד 160 מעלות צלזיוס ב-120 מעלות צלזיוס ושומרים אותו למשך 3 שעות.
    2. ייצור תא תרבות התא עם שכבת החיץ
      1. השתמש בפרמטרים של שלב 2.1.1.1 כדי לסובב מעיל 7 מ"ל של SU-8 3075 פוטורסיסט שלילי על הוופל לעיל.
      2. אופים רכים (המתוארים בשלב 2.1.1.2) את הוופל ולשנות את המסכה כדי ליישר היטב עם סמנים על הוופל. ואז להפעיל את מקור האור במשך 24 s כדי לרפא את photoresist חשוף.
      3. טובלים את הוופל לפתרון המתפתח (מפתח SU-8) ומתסיסים אותו במשך 4 דקות ו-40 שניות כדי לשטוף פוטורסיסט מיותר ולקבל מבנה שכבה בגובה 75 מיקרומטר שסביב מבנה הערוץ בגובה 25 מיקרומטר מפוברק לפני כן. אפייה קשה (המתוארת בשלב 2.1.1.6) הוופל כדי להפוך את המבנה המורכב לחזק יותר.
      4. חזור על שלבים 2.1.2.1-2.1.2.3 כדי ליצור מבנה תא בגובה 75 מיקרומטר שנערם על מבנה השכבה.
    3. ייצור מבני השסתום
      1. באמצעות הפרמטר של שלב 2.1.1.1 כדי לסובב מעיל 5 מ"ל של AZ 50x פוטורסיסט חיובי על הוופל לעיל.
      2. אופים רכים (המתוארים בשלב 2.1.1.2) את הוופל ולהפוך את המסכה מיושרת היטב עם סמנים על הוופל, ולאחר מכן לשמור על מקור האור על במשך 20 s ו כיבוי מיד במשך 30 s. חזור על הליך האור / כיבוי ב 5 עיגולים כדי לרפא את photoresist חשוף.
      3. טובלים את הוופל למפתח תואם ומתסיסים אותו במשך כ 8 דקות כדי לשטוף פוטורסיסט מיותר ולקבל את השסתומים בצורת עגול החופפים עם ערוצי הבקרה כדי להבטיח חיבור טוב. אפייה קשה (המתוארת בשלב 2.1.1.6) הוופל בדוגמת כדי להפוך את הדגם כולו חזק יותר.
  2. ייצור שבבים מיקרופלואידיים באמצעות ליתוגרפיה רכה
    1. לטפל ופלים סיליקון בדוגמת ריק עם רימתילכלורוסילאן במשך 15 דקות.
    2. הכן 3 חלקים של ג'ל PDMS (10:1 של יחס מונומר / זרז) המתאים 50 גרם של שכבת זרימה, 20 גרם של שכבת שליטה 2, ו 20 גרם של קרום, בהתאמה.
    3. יצוק 50 גרם של ג'ל PDMS על רקיק סיליקון בדוגמת, ו de-gas אותם במשך 1-2 שעות בתא ואקום ב -0.85 MPa להעתיק את שכבת הזרימה.
    4. Degas את 2 חלקים של 20 גרם של PDMS ולסובב אותו על רקיק בדוגמת וופל סיליקון ריק ב 2000-2800 סל"ד עבור 30 s כמו להכין שכבת בקרה שכבת קרום.
    5. מכניסים את הוופלים המכוסים ב-PDMS לתנור אוורור למשך 60 דקות ב-80 מעלות צלזיוס לדגרה.
    6. ליישר ולקשר את השכבות השונות יחד באמצעות מכשיר אופטי מותאם אישית (זום ב 100x) ומכונת תחריט פלזמה. ואז לשמור אותו בתנור אוורור במשך 2 שעות ב 80 מעלות צלזיוס כדי לשפר את מליטה של השבב.
    7. ניקוב חורי הכניסה על השבב, ולאחר מכן לקשר אותו על כיסוי מצופה PDMS ונרפא לפחות 12 שעות ב 80 °C (60 °F) לפני השימוש.
  3. פעולת שבב
    1. חבר שסתומי סולנואיד פנאומטיים זעירים לשכבת הבקרה של השבב, ופתח את ממשק המשתמש הגרפי MATLAB מותאם אישית8 כדי לקשר ולשלוט במתג.
    2. הגדר את לחצי הסגירה של שסתומי קרום PDMS שכיבות סמיכה ל 25 psi.
    3. ספק תשומות קומבינטוריות/רציפות המשתנות באופן דינמי לתאים ייעודיים (איור 2d) בזמן של השסתומים.

3. יצירת תשומות דינמיות במיקרו-וירוסים תאיים

  1. טיפול בשבב וטעינת תאים
    1. לשמור על תנאי התרבות הסטנדרטיים (37 °C (37 °C, 5% CO2) על המיקרוסקופ לפחות 5 שעות.
    2. ממלאים את השבב במדיום ציפוי (כלומר, מוזכר בפתק) ומדגירה אותו בתנאי התרבות הסטנדרטיים (המתוארים בשלב 3.1.1) למשך שעה אחת לפחות.
    3. רוקן את השבב על ידי מלוחים עם אגירת פוספט (PBS) או מדיום תרבית תאים (DMEM הבינוני של הנשר שעבר שינוי של Dulbecco) כדי לבנות סביבת תרבות בריאה.
    4. קציר תאים ב 80% confluency, ו resuspend התאים באמצעות מדיית תרבות (DMEM) בצפיפות של ~ 106/ mL. לאחר מכן לטעון תאים לתוך השבב על ידי לחיצה על הפתרון המכיל תאים.
      הערה: Culturing קווי תאים שונים על שבב דורש מדיום ציפוי מתאים לטיפול בתא תרבות התא. בדרך כלל, עבור ניסויים על 3T3 fibroblast ותרבות חסידים של תרנגולת כל השסתומים השולטים בתאי התרבות פתוחים, תאים זורמים לתוך כל תאי התרבות בתוך אותו טור.
  2. כיוונון עבור דימות תאים חיים בתפוקה גבוהה
    הערה: לרכישת תמונה, נעשה שימוש במיקרוסקופ הפוך עם שלב תרגום אוטומטי ומצלמת מוליכים למחצה משלימה דיגיטלית של תחמוצת מתכת (CMOS). הבמה ורכישת התמונה נשלטו באמצעות התוכנה המותאמת אישית.
    1. דמיינו את המטריצה של תאי התרבות באמצעות עדשה אובייקטיבית 10x בשדה בהיר כדי לאשר ולהגדיר את קואורדינטות המיקום של כל תא של מטריצת התא 30 על 50.
    2. להפוך את העדשה האובייקטיבית 20x או 40x, ולאחר מכן לבחור את קואורדינטות המיקום של התא הרצוי ואת השלב התרגום עובר לעמדה שהוקצתה לאחר אישור. כוונן את מישור המוקד x, y, z כדי לקבל תמונה אופטימלית.
    3. עוצמת האור האופטימלית, זמן החשיפה ופרמטרים אחרים בתמונה נקבעו בנפרד עבור כל ערוץ (כלומר, הדמיית שדה בהיר ופלואורסצנטי).
    4. הגדר את המרווח ומשך הזמן של מחזור ההדמיה, שמור את הנתיב ולאחר מכן התחל דימות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המשאבה peristaltic על השבב הקונבנציונלי תוארה לראשונה על ידי סטיבן Quake בשנת 2000, באמצעותו peristalsis היה מופעל על ידי דפוס 101, 100, 110, 010, 011, 001 8,10. המספר 0 ו- 1 מציינים "פתוח" ו"קרוב" של 3 קווי הבקרה האופקיים. מחקרים באמצעות יותר מ 3 שסתומים (למשל, חמישה) דווחו גם11. למרות שהמשאבה peristaltic המורכבת על ידי 3 קווי בקרה 3 קווי זרימה מספק דיוק nanoliter, קצב ההובלה הוא איטי מדי להאכיל 1,500 תאי תרבות. כדי לפתור את הבעיה, אנו כו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מכשירים מיקרופלואידיים שונים פותחו לביצוע ניסויים מולטיפלקסים ומורכבים17,18,19,20. לדוגמה, microwells עשוי מערך של גושים טופולוגיים יכול ללכוד תאים בודדים ללא שימוש בכוח חיצוני, מראה תווים יתרון כולל גודל מדגם קטן, parallelization, עלות חומר נמוכה יותר, תגובה מהירה יותר, רגישות גבוהה21,22,23,

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מכירים בתמיכה הטכנית של ג'יפנג צ'אנג מצ'אנסן אינסטרומנט (סין) בע"מ. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים (הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין,51927804).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2713 Loker Avenue WestTorrey Pines מדעי
AZ-50XAZ חומרים אלקטרוניים, לוקסמבורג
Chlorotrimethylsilane (TMCS) 92360-25mLSigma
CO2 Incubator HP151Heal Force
Desktop Hole Puncher לשבבי DMS WH-CF-14Suzhou Wenhao Microfluidic Technology Co., Ltd.
DMEM (L-גלוטמין, גלוקוז גבוה, הנול אדום)איזון אלקטרוני Invitrogen
UTP-313 מקסימום: 600 גרם, e: 0.1 גרם, d: 0.01gשנחאי Hochoice יצרן מכשירים ושות', בע"מ.
FBSSigma
Fibronection 0.25 מ"ג/מ"לMillipore, אוסטריה
Glutamax 100xGibco
חימום אינקובטור BGG-9240Aשנחאי bluepard מכשירים ושות', בע"מ
ניקון דגם Eclipse Ti2-Eניקון
עט / סטרפטוקוס 10 יחידות / מ"ל פניצילין 10 ug / מ"ל סטרפטומיציןInvitrogen
מנקה פלזמה PDC-002האריק פלזמה
פולידימתילסילוקסן (PDMS)פוליליזין מומנטיב
0.01%סיגמא
ספין ציפוי ARE-310Awatori Rentaro
ציפוי ספין TDZ5-WSCence
Spin Coater WH-SC-01Suzhou Wenhao Microfluidic Technology Co., Ltd.
SU-8 3025MicroChem, ווסטבורו, מסצ'וסטס, ארה"ב
SU-8 3075MicroChem, ווסטבורו, מסצ'וסטס, ארה"ב

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Michael, S., et al. A robotic platform for quantitative high-throughput screening. Assay and Drug Development Technologies. 6 (5), 637-657 (2008).
  2. Kim, S. J., Lai, D., Park, J. Y., Yokokawa, R., Takayama, S. Microfluidic automation using elastomeric valves and droplets: reducing reliance on external controllers. Small. 8 (19), 2925-2934 (2012).
  3. Melin, J., Quake, S. R. Microfluidic large-scale integration: the evolution of design rules for biological automation. Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 36, 213-231 (2007).
  4. Tsui, J. H., Lee, W., Pun, S. H., Kim, J., Kim, D. H. Microfluidics-assisted in vitro drug screening and carrier production. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (11-12), 1575-1588 (2013).
  5. Junkin, M., et al. High-content quantification of single-cell immune dynamics. Cell Reports. 15 (2), 411-422 (2016).
  6. Obernier, K., Alvarez-Buylla, A. Neural stem cells: origin, heterogeneity and regulation in the adult mammalian brain. Development. 146 (4), (2019).
  7. Kageyama, R., Shimojo, H., Ohtsuka, T. Dynamic control of neural stem cells by bHLH factors. Neuroscience Research. 138, 12-18 (2019).
  8. Unger, M. A., Chou, H. P., Thorsen, T., Scherer, A., Quake, S. R. Monolithic microfabricated valves and pumps by multilayer soft lithography. Science. 288 (5463), 113-116 (2000).
  9. Zhang, C., et al. Ultra-multiplexed analysis of single-cell dynamics reveals logic rules in differentiation. Science Advances. 5 (4), (2019).
  10. Quake, S. R., Scherer, A. From micro-to nanofabrication with soft materials. Science. 290 (5496), 1536-1540 (2000).
  11. Okandan, M., Galambos, P., Mani, S. S., Jakubczak, J. F. Development of surface micromachining technologies for microfluidics and BioMEMS. Microfluidics and BioMEMS. 4560, International Society for Optics and Photonics. 133-139 (2001).
  12. Freshney, R. I. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications, Sixth Edition. , (1983).
  13. Niu, W., et al. SOX2 reprograms resident astrocytes into neural progenitors in the adult brain. Stem Cell Reports. 4 (5), 780-794 (2015).
  14. Sarkar, D. K., et al. Cyclic adenosine monophosphate differentiated β-endorphin neurons promote immune function and prevent prostate cancer growth. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (26), 9105-9110 (2008).
  15. Watanabe, J., et al. Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide-induced differentiation of embryonic neural stem cells into astrocytes is mediated via the β isoform of protein kinase. C. Journal of Neuroscience Research. 84 (8), 1645-1655 (2006).
  16. Watanabe, J., et al. Involvement of protein kinase C in the PACAP-induced differentiation of neural stem cells into astrocytes. Annals of the New York Academy of Sciences. 1070 (1), 597-601 (2006).
  17. Thorsen, T., Maerkl, S. J., Quake, S. R. Microfluidic large-scale integration. Science. 298 (5593), 580-584 (2002).
  18. Khademhosseini, A., et al. Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays. Lab on a Chip. 5 (12), 1380-1386 (2005).
  19. Martinez, A. W., Phillips, S. T., Whitesides, G. M. Three-dimensional microfluidic devices fabricated in layered paper and tape. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (50), 19606-19611 (2008).
  20. Zhang, Y., et al. DNA methylation analysis on a droplet-in-oil PCR array. Lab on a Chip. 9 (8), 1059-1064 (2009).
  21. Huang, N. T., Hwong, Y. J., Lai, R. L. A microfluidic microwell device for immunomagnetic single-cell trapping. Microfluidics and Nanofluidics. 22 (2), 16(2018).
  22. Galler, K., Bräutigam, K., Große, C., Popp, J., Neugebauer, U. Making a big thing of a small cell-recent advances in single cell analysis. Analyst. 139 (6), 1237-1273 (2014).
  23. Grünberger, A., Wiechert, W., Kohlheyer, D. Single-cell microfluidics: opportunity for bioprocess development. Current Opinion in Biotechnology. 29, 15-23 (2014).
  24. Lin, H., Mei, N., Manjanatha, M. G. In vitro comet assay for testing genotoxicity of chemicals. Optimization in Drug Discovery. , Humana Press. Totowa, NJ. 517-536 (2014).
  25. Bai, H., et al. Efficient water collection on integrative bioinspired surfaces with star-shaped wettability patterns. Advanced Materials. 26 (29), 5025-5030 (2014).
  26. Zhao, J., Chen, S. Following or against topographic wettability gradient: movements of droplets on a micropatterned surface. Langmuir. 33 (21), 5328-5335 (2017).
  27. Theberge, A. B., et al. Microfluidic platform for combinatorial synthesis in picolitre droplets. Lab on a Chip. 12 (7), 1320-1326 (2012).
  28. Zhang, L., et al. Fabrication of ceramic microspheres by diffusion-induced sol-gel reaction in double emulsions. ACS Applied Materials & Interfaces. 5 (22), 11489-11493 (2013).
  29. Moerman, R., et al. Quantitative analysis in nanoliter wells by prefilling of wells using electrospray deposition followed by sample introduction with a coverslip method. Analytical Chemistry. 77 (1), 225-231 (2005).
  30. Zhou, X., Lau, L., Lam, W. W. L., Au, S. W. N., Zheng, B. Nanoliter dispensing method by degassed poly (dimethylsiloxane) microchannels and its application in protein crystallization. Analytical Chemistry. 79 (13), 4924-4930 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PDMS

מאמרים קשורים