מאמר שיטה

השתלה תוך-שרירית של הידרוג'ל להזרקה בטעינת MSC לאחר אוטם שריר הלב במודל מורין

DOI:

10.3791/61752

⸱

20 בספטמבר 2020

 ,  ,  ,  ,  , 
1Cardiovascular Research Institute for Intractable Disease, College of Medicine, The Catholic University of Korea, 2Division of Cardiology, Department of Internal Medicine, Seoul St. Mary's Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, 3Division of Cardiology, Department of Internal Medicine, Uijeongbu St. Mary's Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טיפול מבוסס תאי גזע התפתח כאסטרטגיה יעילה לתיקון רקמות לב פגועות לאחר אוטם שריר הלב. אנו מספקים יישום vivo אופטימלי להשתלת תאי גזע באמצעות הידרוג'לים ג'לטין המסוגלים להיות מקושרים אנזימטית.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אחת הבעיות העיקריות הניצבות בפני טיפולים נוכחיים בתאי גזע לב למניעת אי ספיקת לב לאחר לידה היא שיעורי ההחזקה וההישרדות הנמוכים של תאים מושתלים בתוך שריר הלב הפגוע, המגבילים את יעילותם הטיפולית. לאחרונה, השימוש ביו-חומרים פיגומים צברה תשומת לב לשיפור ומקסום הטיפול בתאי גזע. מטרת פרוטוקול זה היא להציג טכניקה פשוטה וישירה להשתלת תאי גזע mesenchymal נגזר מח עצם (MSCs) באמצעות חומצה הידרוקסיפניל propionic להזרקה (GH) הידרוג'לים; הידרוג'לים הם חיוביים כפלטפורמת אספקת תאים עבור יישומים הנדסת רקמת לב בשל יכולתם להיות מקושרים במקום תאימות ביולוגית גבוהה. אנו מציגים שיטה פשוטה לפברק הידרוג'לים GH טעינת MSC (MSC / הידרוג'לים) ולהעריך את הישרדותם והתפשטותם בתרבות תלת מימדית (3D) במבחנה. בנוסף, אנו מדגימים טכניקה להשתלה תוך-שרירית של MSC/הידרוג'ל בעכברים, המתארת הליך כירורגי כדי לגרום לאוטם שריר הלב (MI) באמצעות קשירת עורקים כלילית קדמית שמאלית (LAD) והשתלת MSC/הידרוגלס לאחר מכן.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טיפול בתאי גזע לב התפתח כגישה פוטנציאלית לתיקון שריר הלב והתחדשות1,2. למרות התוצאות החיוביות האחרונות במודלים של בעלי חיים וניסויים קליניים, היישום של טיפול מבוסס תאי גזע לתיקון שריר הלב מוגבל עקב שימור נמוך והישרדות לקויה של תאים מוזרקים ברקמות הלב האוטמות3,4. כתוצאה מכך, השימוש בהנדסת רקמות מבוססות תאים, כולל ביו-חומריםלהזרקה 5, מדבקות לב6, ויריעות תאים7, נחקר באופן אינטנסיבי כדי לשפר את שימור התא ואינטגרציה בתוך שריר הלב המארח.

בין הגישות הפוטנציאליות....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הליכי המחקר בבעלי חיים ניתנו בהתאם לחוק רווחת בעלי חיים במעבדה, המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה וההנחיות והמדיניות לניסויים במכרסמים שסופקו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) בבית הספר לרפואה של האוניברסיטה הקתולית של קוריאה.

1. הכנת MSCs והידרוגלים ג'לטין להזרקה

  1. תרבות MSCs בצלחת תרבות 100 מ"מ ב 37 °C (77 °F) ו 5% CO2. כאשר צמיחת MSCs מגיעה למפגש של 80%, שטפו את המנה פעמיים עם DPBS והוסיפו 1 מ"ל של טריפסין-תחליף ב-37 מעלות צלזיוס למשך 3 דקות.
    הערה: MSCs היו מבודדים ממח העצם מורין בעקבות הליכים קונבנציונליים16, בתרבית בינוני של הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) המכיל 10% סרום....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לספק ביעילות MSCs ל שריר הלב האוטם, נעשה שימוש בטעינת MSC בהידרוג'לים הניתנים לחיבור צולב של situ המתוארים באיור 1 בפרוטוקול זה. לפני השתלת vivo, התפשטות והישרדות של MSCs ב הידרוג'לים GH אושרו על ידי 3D במבחנה חי / תא מת מכתים assay (לחיות: ירוק; מת: אדום). כפי שמוצג באיור 2, תמונות מייצגות הציגו התפשטות MSCs מספיק, מראה רשתות מסועפות בתוך הידרוג'לים GH. בנוסף, מבנה תלת-ממדי רב-תאי נרחב של MSCs נצפה בבירור ביום 14, המציין כי הידרוג'לים GH יכול לספק microenvi.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הידרוג'לים GH להזרקה יש פוטנציאל גדול עבור יישומי in vivo בגלל היכולת שלהם לשלב הומוגנית סוכנים טיפוליים מגוונים באתרו. יתר על כן, התכונות הפיזיות והביוכימיות שלהם ניתן לתפעל בקלות בהתבסס על דרישות תלויות מחלה. במובן זה, הידרוג'לים להזרקה הוצעו כדי להתמודד עם המגבלות העיקריות בטיפול הנוכחי בתאי גזע לב הקשו על ידי הישרדות לקויה ושמירת תאים (כלומר, < 10% בתוך 24 שעות לאחר ההשתלה) בלב הפצוע19,20. כדי להתגבר על תוצאה גרועה זו, הפרוטוקול המתואר בזאת מספק שיטה פשוטה וי.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עם עבודה זו.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית מחקר מדעי בסיסי באמצעות קרן המחקר הלאומית של קוריאה (NRF) במימון משרד החינוך (NRF-2018R1D1A1A02049346)

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4% פרפורמלדהיד (PFA)IntronIBS-BP031-2
5-0 תפר משיAILEESK534
8-0 תפר פוליפרופילןETHICONM8732H
שקופית תא 8 בארותNunc LAB-TEK154534
Angiocath Plus (22GA) קטטרBD Angiocath PlusREF382423
אנטיביוטיקה-אנטימיוקוטיתGibco15240-062
צנטריפוגהGYROGEN1582MGR
מיקרוסקופ קונפוקליZeissLSM 510
כיסוי להחליקMARIENFELD101242
דלוקס ערכת קוטריה בטמפרטורה גבוההBovieQTY1
DMEMGibco11995-065
DPBSGibco14040-133
מזרק
EOSINSIGMA-ALDRICH
אתנולEMSUREK49350783 739
FBSGibco16000-044
Fechtner מלקחיים לחמית טיטניום WORLDPRECISISON INSTRUMENTSWP1820
פלואורסצאין איזומר איזותיוציאנט I (FITC)SIGMA-ALDRICHF7250
מלקחייםHEBUHB0458
קרם להסרת שיערIldong כרית חימום פרמצבטית
Stoelting50300מערכת שמיכות Homeothermic
50301כרית חימום חלופית עבור 50300 (10 X 12.5 ס"מ)
המטוקסיליןSIGMA-ALDRICHHHS80
מי חמצן חזרת (HRP; 250-330 U/mg)SIGMA-ALDRICHP8375
מי חמצן (H2O2; 30 wt % ב-H2O)SIGMA-ALDRICH216763
יודירוק פרמצבטיקה
ערכת צביעה של תאים חיים/מתיםThermo FisherR37601
מאוורר מכניהרווארד מכשיר
מיקרו צנטריפוגהHANILמיקרו 12
מחזיק מחט מיקרוKASCO37-1452
מיקרו מספרייםHEBUHB7381
מיקרוסקופOLYMPUSSZ61
MT ערכת צביעהSIGMA-ALDRICHHT1079-1SETWeigert& rsquo; s תמיסת המטוקסילין ברזל
HT15-1KTערכת כתמים טריכרום (מאסון) פרפין
HB7454
סרט כירורגי3M micopore1530-1
קלטת רקמותScilab KoreaCas3003
ג'ל מתמרSUNGHEUNGSH102
מחזיק מחט פורל-Barraquer מעוקלKASCO50-3710c
מערכת אולטרסאונדPhilipsAffiniti 50
XyleneJUNSEIברקוד 25175-0430
כפול HT110116 LK LABKOREA H06-660-107 PBS מאגר Gibco 10010-023 ערכת צביעה PHK26 SIGMA-ALDRICH MINI26 סורק שקופיות Leica SCN400 מספריים כירורגיים HEBU

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jhund, P. S., McMurray, J. J. Heart failure after acute myocardial infarction: a lost battle in the war on heart failure. Circulation. 118 (20), 2019-2021 (2008).
  2. Cahill, T. J., Kharbanda, R. K.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

MSCMSCs

מאמרים קשורים