הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דיקור במודל עכברוש של אסטמה

6.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61762

⸱

25 באוגוסט 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Molecular Biology, Shanghai Research Institute of Acupuncture and Meridian, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Shanghai Innovation Center of Traditional Chinese Medicine Health Service

במאמר זה

סיכום

פלטפורמה גבוהה יכולה לתקן חולדות ללא הגבלה ולחשוף לחלוטין את נקודות acupoints על הגב במהלך מניפולציה דיקור סיני. מאמר זה מתאר שיטות לייצור הפלטפורמה הגבוהה, קובע מודל עכברוש של אסטמה ומודד שינויים בתפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography (WBP) לא פולשנית ובזמן אמת.

תקציר

פלטפורמה גבוהה יכולה לתקן חולדות ללא הגבלה ולחשוף לחלוטין את נקודות acupoints על הגב במהלך מניפולציה דיקור סיני. מאמר זה מתאר שיטות לייצור הפלטפורמה הגבוהה, קובע מודל עכברוש של אסטמה ומודד שינויים בתפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography (WBP) לא פולשנית ובזמן אמת.

מבוא

אסטמה היא מחלה כרונית המאופיינת ברונכוקונסטריאקציה ודרכי הנשימה היפר תגובה1. כ 339.4 מיליון אנשים ברחבי העולם מאובחנים עםאסטמה 2. השכיחות של אסתמה גוברת ברחבי העולם, עם 100 מיליון מקרים חדשים צפויים בעשור הבא3. קורטיקוסטרואידים בשאיפה β ארוכי טווח2-אגוניסטים אינם שולטים ביעילות בסימפטומים של כל החולים4. לכן, השימוש בטיפולים אלטרנטיביים כגון דיקור סיני לטיפול באסתמה כבר מקבל תשומת לב מוגברת5. שיטה יעילה לטיפול באסתמה היא מחט GV14 (Dazhui), דו-צדדי BL12 (פנגמן) ו BL13 דו-צדדי (Feishu)6. אקופונקטורה מפחיתה באופן משמעותי את רמות האימונוגלובולין הפרשתי A (SIgA) ברוק ובהפרשות האף של חולים עם אסתמה אלרגית ומפחיתה ספירת אאוזינופילים בדם היקפי עם שיעור אפקטיבי כולל של 85%6. דיקור סיני ב- BL13 ו- ST36 (Zusanli) בעכברים עם אסתמה כרונית מקטין את רמת IL-17 ב - 40% ומפחית את עובי השריר החלק ב - 33% בהשוואה לזה של קבוצת ה- ovalbumin (OVA), ובכך מקל על תסמיני דלקת7,8. עם זאת, המנגנון של טיפול אקופונקטורה לאסטמה אינו ברור לחלוטין.

מודלים של בעלי חיים הם כלי חשוב למחקראסטמה 9 כי המודל החייתי יכול לשמש למדידה רציפה של תפקוד הנשימה כדי להעריך את האפקטיביות של טיפולבאסתמה 10. בינתיים, מחקרים של הפתופיזיולוגיה של אסטמה דורשים דגימות בדיקה, כולל דגימות מן קנה הנשימה, ריאות ושטיפת סימפונות כדי לאמת שינויים ברמות של גורמי מפתח11. מודלים עכברוש של אסטמה משמשים בדרך כלל כדי להעריך פתופיזיולוגיה אסטמה כי הם מייצרים תגובות ארוכות טווח בדרכי הנשימה ולהראות תגובות מיידיות בשלב מאוחר בדרכי הנשימה12. עם זאת, בשל גירוי ניסיוני חוזר ונשנה, החולדות לעתים קרובות להיות עצבני. לכן, יש צורך בשיטה מתאימה לתיקון חולדות. שיטות נפוצות לקיבעון עכברושים כוללות הרדמה ומחייב13. למרות ששיטת ההרדמה מספקת חשיפה טובה יותר של נקודות האקופוינט, היא עשויה להשפיע על ההולכה העצבית ובסופו של דבר להשפיע על תוצאות הניסוי14. שיטת הכריכה אינה מעוררת את אותן השפעות פיזיולוגיות כמו הרדמה, אך חולדות מאופקות יחוו מתח שריר השלד. כמו כן, המחט לא יכולה להגיע בקלות למיקום המיועד15. כאן, אנו מציגים פלטפורמה גבוהה שניתן להשתמש בה כדי לתקן חולדות מבלי להגביל אותן ולחשוף באופן מלא את נקודות הציון מאחור. החולדות ניתן להציב על פלטפורמה גבוהה במהלך הממשל של דיקור סיני. הפלטפורמה הגבוהה מסוגלת להכיל את החולדה רק בזמן שהיא עומדת, ומכיוון שהיא ממוקמת במרחק מסוים מהקרקע, החולדות לא יזוזו בגלל פחד מגבהים16.

מאמר זה מתאר בפירוט את הייצור של הפלטפורמה הגבוהה, הקמת מודל חולדה של אסטמה, הפעולה של דימוך חולדה על הפלטפורמה הגבוהה ומדידת תפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography לכל הגוף (WBP).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לאתיקה של ניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית (מספר אישור אתי PZSHUTCM190308020).

1. ייצור הפלטפורמה הגבוהה

  1. הגדר את האורך והרוחב של ההתקן התומך ל- 86 ס"מ על 17 ס"מ (איור 1).
  2. תקן את ההתקן המחבר אנכית להתקן התומך. אורך המכשיר המחבר צריך להיות כ-30 ס"מ כדי למנוע מהחולדה לרוץ אל המשטח העליון של הפלטפורמה הגבוהה ולרוחב של 14 ס"מ.
  3. תקן את הדוושה האופקית (5 ס"מ x 5 ס"מ) להתקן המחבר. הגובה התלוי בתחתית הדוושה האופקית צריך להיות גדול או שווה ל-50 ס"מ.
    הערה: בהתאם למספר החולדות הניסיוניות, ניתן להשתמש בדוושות אופקיות מרובות, כאשר חולדה אחת מונחת על כל דוושה.

2. הקמת מודל חולדה של אסטמה

  1. רגישות החולדות עם OVA
    1. הכינו את פתרון הרגישות ביום 0. הכינו כל 1 מ"ל של פתרון הרגישות עם 1 מ"ג של OVA ו 10 מ"ג של אלומיניום הידרוקסיד, עם מלוחים רגילים כמו הממס.
    2. תוך-פרטית להזריק כל חולדה עם 1 מ"ל של פתרון הרגישות ביום 0. צייר את פתרון הרגישות באמצעות מזרק מתאים לשימוש מאוחר יותר.
    3. תפוס את הזנב והרם את החולדה, הניח אותה על משטח מחוספס ומשוך בעדינות את הזנב לאחור. לתפוס את העור של האוזניים והצוואר עם האגודל השמאלי ואת האצבע המורה תוך החזקה הדוקה של העור האחורי עם שלוש האצבעות וכפות הידיים הנותרות (היזהרו מהפעלת כוח עודף שיחונק את החולדה).
    4. ביד ימין, לבצע זריקה תוך-פרטית בחולדה עם המזרק מוכן עם 1 מ"ל של פתרון הרגישות.
  2. חולדות מאתגרות עם OVA
    1. בחר תיבה עם מכסה (האורך, הרוחב והגובה הם 39 ס"מ x 28 ס"מ x 23 ס"מ), וקדוח חור קטן בצד. חבר את התיבה האטומה, את הכומתה הערפילית ואת נבולייזר הדחיסה באמצעות צינור גומי(איור משלים 1).
      הערה: גודל החלקיקים הערפילי של nebulizer דחוס הוא 1 - 5 מיקרומטר, קצב הערפול הוא גדול מ 0.2 מ"ל / דקה, ואת הלחץ האולטימטיבי הוא 205 kPa.
    2. ביום ה -14 לאחר הרגישות, לפתוח את המכסה של התיבה אטומה תוצרת בית ומניחים את החולדה בתיבה (התיבה יכולה להכיל 5 חולדות), ולאחר מכן לשים את התיבה אטומה בארון biosafety.
    3. הכינו את פתרון האתגר. ביסודיות לערבב 300 מ ג של OVA עם 30 מ"ל של מלוחים רגילים.
    4. הפעל את nebulizer קולי ולהוסיף 30 מל של פתרון האתגר לתוך nebulizing. להתאים את המינון של פתרון אתגר ואת מספר החולדות על פי נפח של קופסה אטומה תוצרת בית.
    5. חזור על ערפיליות מספר פעמים (פעם ביום) או להתאים את ההליך על פי חומרת הסימפטומים אסטמה.

3. טיפול בדיקור סיני

  1. בחר נקודות Acupoints, כולל GV14, BL12 דו-צדדי ו- BL13 דו-צדדי, על פי התיאוריה של הרפואה הסינית המסורתית לטיפול באסתמה (איור משלים 2). נהל דיקור ידני ביום השני ובצע אחת לשנייה במשך 7 מפגשים בסך הכל (איור 2).
    1. דיקור סיני GV14 הממוקם בין חוליית צוואר הרחם השביעית לחוליה הראשונה בבית החזה (חלולה של השכמה), על קו האמצע של הגב (איור 3).
    2. דיקור סיני BL13 הממוקם מתחת לחוליה השלישית בבית החזה, משני צידי החללים הבין-צלעיים (הקצה התחתון של השכם).
    3. אקופונקטורה BL12 הממוקם מתחת לחוליה בית החזה השני, משני צידי החללים הבין צלעיים (מתחת לשכם, מיקום מזוהה על פי BL13).
  2. תפסו את החולדות והניחו אותן על הרציף הגבוה.
  3. החזק את מחט הנירוסטה החד פעמית (0.3 מ"מ x 13.0 מ"מ, איור משלים 3)עם האגודל והאצבע המורה של יד ימין, ולחץ על גב החולדה בכף יד ימין.
    הערה: מחטים חד פעמיות חייבות להיות חד פעמיות בלבד. כי שימוש חוזר יהיה בוטה המחט, מה שמוביל לכאב מוגבר בחולדות.
  4. לגעת בדיכאון באמצע הקצה העליון (GV14) או בקצה התחתון של השכם (BL12 ו BL13), ולאחר מכן בעדינות לדקור את העור של החולדה עם קצה המחט כדי לאתר את נקודות acupoints.
  5. הכנס במהירות את המחט לאחר קביעת המיקום הספציפי של acupoint ולהסיר במהירות את יד ימין.
  6. עיוות באופן שווה את המחטים כ 360 ° בקצב של 60 פעמים / דקה במשך 10 - 20 s, לתפעל אותם כל 5 דקות, ולאחר מכן למשוך אותם לאחר 20 - 30 דקות (איור משלים 4).

4. מדידת פן

  1. הכן מטכולין: מניחים 100 מ"ג של מטכולין לתוך צינור צנטריפוגה 5 מ"ל ומוסיפים PBS לנפח של 2 מ"ל (50 מ"ג / מ"ל מטכולין). לאחר מכן, לדלל את הפתרון 50 מ"ג / מ"ל methacholine ל 25 מ"ג / מ"ל, 12.5 מ"ג / מ"ל, 6.25 מ"ג / מ"ל ו 3.125 מ"ג / מ"ל.
  2. בדיקת מכשירים
    1. הפעל את מגבר האות (מערכת חלוקת האירוסול ומערכת אספקת הזרימה של הטיית המכרסמים כבויות כולן ומחבר הערפילית סגור).
    2. בדוק את הערוצים: לחץ על כיול, החזר את תוכנית הבסיס של ההתאמה הגסה ל- 0 ועבור למיקום הזרם הישיר (DC). כוונן את קו הבסיס ל-0 והזרק 5 מ"ל גז במזרק. לאחר מכן, עבור למיקום הנוכחי (AC) לסירוגין.
    3. לאחר בדיקת הערוצים, ודא שערך השגיאה קטן מ- 0.5%.
  3. הגדרת פרמטרים
    1. הפעל את מערכת הפצת האירוסול ואת מערכת אספקת הזרימה של הטיית המכרסמים. להתאים את קצב הזרימה ל 4.5 מ"ל על פי רמת הנוזל על כדור הכספית.
    2. לחץ על צור אפשרויות מחקר ובחר מחקר תגובה מינון, בחר עכברוש של מינים ולחץ על הבא.
    3. בחר רשימת מינון פשוט, הגדר את מספר המנות ל- 6 ולחץ על הבא.
    4. בחר את הפרמטרים Penh ו- Area: הגדר את זמן ההסתגלות של בעלי החיים ל- 5 דקות, את זמן הערפילית ל- 2 דקות, את זמן התגובה ל- 3 דקות ואת זמן ההחלמה ל- 2 דקות.
    5. ברצף להוסיף את הפתרונות הבאים nebulizer (200 μL לכל חולדה): methacholine (0 מ"ג / מ"ל, 3.125 מ"ג / מ"ל, 6.25 מ"ג / מ"ל, 12.5 מ"ג / מ"ל, 25 מ"ג / מ"ל ו 50 מ"ג / מ"ל). ניתן לצפות בשינויים בזמן אמת ב-Penh (איור 4).
    6. לאחר שכל 6 הפתרונות עם ריכוזים שונים הגיבו, לחץ על קובץ וסיום הפעלה כדי להשלים את הניסוי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

עם דיקור סיני ב- GV14, BL12 דו-צדדי ונקודות BL13 דו-צדדיות, החולדה שומרת על עמדה מועדת. החולדה יכולה לסובב את ראשה רק מבחוץ ולא מבפנים, כי כיוון אחד חסום בלוח עץ(איור 5).

ככל שריכוז המתכולין גדל, פן מראה מגמה הולכת וגוברת וקצב הצמיחה עולה בהדרגה. בריכוזים של 3.125 מ"ג/מ"ל, 6.25 מ"ג/מ"ל, 12.5 מ"ג/מ"ל, 25 מ"ג/ מ"ל ו 50 מ"ג / מ"ל, פן גדל ב 18.40% ± 10.70%, 27.55% ± 2 6.30%, 88.10% ± 45.63%, 427.60% ± 172.92% ו-882.27% ± 121.97%, בהתאמה, מה שמראה השפעה שעולה עם הגדלת ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

GV14, דו-צדדי BL12 ו BL13 acupoints דו צדדי בשימוש במחקר זה ממוקמים על הגב, ולכן הפלטפורמה הגבוהה מתאימה לתיקון חולדות. במחקרים אחרים, יש לבחור שיטת קיבעון נאותה בהתאם למיקום של acupoints15. עבור acupoints על הבטן, החולדה יכולה להיות ממוקמת כלפי מטה בקונוס שחור (בדומה לשקית מאפה בשימוש על ידי אופים)17. שרשרת מחוברת לקונוס הריסון לצורך קיבעון, וגם הרגל האחורית של החולדה קבועה. בדרך זו, החלק הקדמי של גוף החיה קבוע היטב בקונוס, בעוד הבטן והגב חשופים. עבור acupoints על הרגל, הח...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס ' 81922076, 81973951, 81873373), פרויקט בנייה של חדשנות שיתופית של שנגחאי (לא. ZYJKFW201811010, ZYJKFW201701005).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחט דיקור 0.3 מ"מ x 13.0 מ"מסין מפעל
Al(OH)3American Thermo77161
נבולייזר דחיסהג'יאנגסו לוד אלקטרוניקה רפואית ושות', בע"מNB-212C
Fine Pointe V2.0במעבדת בוקסקו
אמריקאית דריריט26800
מתכוליןאמריקאי סיגמאMKCF6054
אובאלבומיןאמריקאי סיגמאA5503-25G
תמיסת חיץ פוספט (1x)GelifesciencesSH30256.01
קופסת חותםIRIS Corporation of Japan
מערכת מדידת תפקודי נשימה פלתיסמוגרפיה של כל הגוףBuxco
המכשור הרפואי של סוג'ואו יחידת ייבוש גז אמריקאית

מקורות

  1. Papi, A., Brightling, C., Pedersen, S. E., Reddel, H. K. Asthma. Lancet. 391 (10122), 783-800 (2018).
  2. Global Initiative for Asthma, 2019. Global strategy for asthma management and prevention. , Available from: https://ginasthma.org/gina-reports/ (2019).
  3. Enilari, O., Sinha, S. The Global Impact of Asthma in Adult Populations. Annals of Global Health. 85 (1), (2019).
  4. Global Initiative for Asthma, 2020. Global strategy for asthma management and prevention. , Available from: https://ginasthma.org/gina-reports/ (2020).
  5. Zhuang, Y., Xing, J. J., Li, J., Zeng, B. Y., Liang, F. R. History of acupuncture research. International Review of Neurobiology. 111, 1-23 (2013).
  6. Yang, Y. Q., et al. Considerations for use of acupuncture as supplemental therapy for patients with allergic asthma. Clinical Reviews in Allergy & Immunology. 44 (3), 254-261 (2013).
  7. Nurwati, I., et al. Reduction of interleukin-17 level by acupuncture at Feishu (BL13) is strengthened by acupuncture at Zusanli (ST36) in a mouse model of chronic asthma: An experimental study. Medical Acupuncture. 27 (4), 278-282 (2015).
  8. Nurwati, I., et al. Improvement in inflammation and airway remodelling after acupuncture at BL13 and ST36 in a mouse model of chronic asthma. Acupuncture in Medicine. 37 (4), 228-236 (2019).
  9. Reddy, A. T., Lakshmi, S. P., Reddy, R. C. Murine model of allergen induced asthma. Journal of Visualized Experiments. (63), e3771(2012).
  10. Zhou, D. D., et al. Metallothionein-2 is associated with the amelioration of asthmatic pulmonary function by acupuncture through protein phosphorylation. Biomedicine & Pharmacotherapy. 123, 109785(2020).
  11. Yin, L. M., et al. Transgelin-2 as a therapeutic target for asthmatic pulmonary resistance. Science Translational Medicine. 10 (427), (2018).
  12. Shin, Y. S., Takeda, K., Gelfand, E. W. Understanding asthma using animal models. Allergy Asthma & Immunology Research. 1 (1), 10-18 (2009).
  13. Cui, K. M., et al. Electro-acupuncture relieves chronic visceral hyperalgesia in rats. Neuroscience Letters. 376 (1), 20-23 (2005).
  14. Tobin, J. R., Martin, L. D., Breslow, M. J., Traystman, R. J. Selective anesthetic inhibition of brain nitric oxide synthase. Anesthesiology. 81 (5), 1264-1269 (1994).
  15. Dimitrov, N., Sivrev, D., Atanasova, D. Method of rat immobilization during experimental acupuncture. Scripta Scientifica Medica. 45, 105-108 (2013).
  16. Aguilar, R., et al. emotional reactivity and fear of heights: a factor analytic map from a large F(2) intercross of Roman rat strains. Brain Research Bulletin. 57 (2), 17-26 (2002).
  17. Lai, X., et al. Proteomic response to acupuncture treatment in spontaneously hypertensive rats. PloS One. 7 (9), 44216(2012).
  18. Niu, C., et al. A novel uni-acupoint electroacupuncture stimulation method for pain relief. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2011, 209879(2011).
  19. McFadden, E. R., Luparello, T., Lyons, H. A., Bleecker, E. The mechanism of action of suggestion in the induction of acute asthma attacks. Psychosomatic Medicine. 31 (2), 134-143 (1969).
  20. Savov, J. D., et al. Ozone-induced acute pulmonary injury in inbred mouse strains. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 31 (1), 69-77 (2004).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל חולדות לדיקור סיניהשראת אסתמהפלטפורמה גבוההפלתיסמוגרפיה של הגוף כולורגישות ל-OVAבחירת נקודות דיקורדיקור ידנימדידת Penhאתגר מתכוליןרפואה סינית מסורתית
דיקור במודל עכברוש של אסטמה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.