פרוטוקול זה נועד לבטל את הלב והריאות של עכברים. ניתן לחסן ולדמות את הפיגומים החוץ-תאיים (ECM) המתקבלים כדי למפות את המיקום והטופולוגיה של הרכיבים שלהם.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנו מציגים כאן פרוטוקול דפלולרציה ללב העכבר ולריאות. הוא מייצר פיגומי ECM מבניים שניתן להשתמש בהם כדי לנתח טופולוגיה והרכב ECM. הוא מבוסס על הליך מיקרו-כירורגי שנועד לצנתר את קנה הנשימה ואת אב העורקים של עכבר מורדם כדי לשוטט בלב ובריאות עם חומרים מנטרלים. קומפלקס קרדיו-ריאות decellularized לאחר מכן ניתן לחסן כדי לחשוף את המיקום של חלבוני ECM מבניים. ניתן להשלים את כל ההליך ב-4 ימים.
פיגומי ECM הנובעים מפרוטוקול זה נקיים מעיוותים ממדיים. היעדר תאים מאפשר בדיקה מבנית של מבני ECM עד לרזולוציית תת-מיקרון בתלת-ממד. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם על רקמה בריאה וחולנית מעכברים בגיל 4 שבועות, כולל מודלים עכבר של פיברוזיס וסרטן, פתיחת הדרך כדי לקבוע ECM שיפוץ הקשורים למחלות לב ריאה.
מבוא
ה- ECM היא רשת תלת ממדית העשויה מחלבונים וגליקנים המתאימה לכל התאים באורגניזם רב-תאי, המעניקה לאיברים את צורתם ומווסתת את התנהגות התאים לאורך החיים1. מהפריית ביצית ואילך, תאים בונים ומשפצים את ה- ECM, והם נשלטים בקפדנות על ידי זה. מטרת פרוטוקול זה היא לפתוח דרך לנתח ולמפה את עכבר ECM, שכן עכברים הם האורגניזם המודל הנפוץ ביותר בפתופיזיולוגיה של יונקים.
ההתפתחות של שיטה זו הונעה על ידי הצורך לאפיין ולבודד ECM2 יליד גרורות הקשורים גרורות. כמו גידולים חסרים כלי דם אנטומיים נאותים ועכברים הם אורגניזמים קטנים יחסית, הליכים מיקרוכירורגיים תוכננו כדי להצטמצם בנסיגה של אב העורקים, תוך בידוד זרימת הכלי העיקרי המוביל לגידול (למשל, ורידים ריאתיים), ובכך למקד את זרימת ריאגנט ומאפשר דפלולרציה של הגידול. שיטה זו מייצרת פיגומי ECM עם מבנה שמור2 שניתן לחסן ולדמות, ומאפשרת מיפוי מבנה ECM בפירוט תת-מיקרון. כדי לבצע פרוטוקול זה, יש צורך לרכוש מיומנויות כירורגיות ומיקרוכירורגיות (ניתוח, מיקרו-uturing וצנתור) שעשויים לייצג מגבלה פוטנציאלית לשימוש בו. למיטב ידיעתנו, שיטה זו מייצגת את הארגון החדיש ביותר עבור ניתוח הדמיית מבנה ECM מקורי2,3.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים הכלולים כאן נבדקו ואושרו על ידי הוועדה האתית המסדירה את הרפואה הניסיונית באוניברסיטת קופנהגן ומסכימה עם החקיקה הדנית והאירופאית. כדי להדגים פרוטוקול זה, השתמשנו בעכברים נקבות BALB / cJ של 8-12 שבועות של עכבר נקבה MMTV-PyMT של גיל 11 שבועות.
הערה: הימנעות מזיהום חיידקי של פיגום ECM המוקלר מעניקה את תוצאות ההדמיה הטובות ביותר ומאפשרת אחסון מדגם לטווח ארוך. לכן חשוב לשמור על כל הצעדים סטריליים. ככזה, כל המכשירים והחומר הכירורגי, כולל תפר, מיקרו-תפר, פתרונות, צינורות, מחברי Luer וצנתרים, חייבים להיות סטריליים. משטחים, כולל מגש פוליסטירן, חייבים להיות מחוטאים עם 70% אתנול, ואת זלוף רצוי להתבצע תחת מכסה המנוע זרימה למינאר. כל ההליכים מתקיימים בטמפרטורת החדר, אלא אם צוין אחרת.
1. מיקרוכירורגיה שלאחר המוות
- המתת חסד העכבר באמצעות תא CO2 .
- מניחים את העכבר לתוך תא 4 ליטר, ולהתחיל למלא עם 100% CO2, החל מ 0.2 L / min במשך 2 דקות, הגדלת עד להגיע לזרימה של 0.8 L / min לאחר 3 דקות. העכבר צריך ליפול מחוסר הכרה במהלך 2 הדקות הראשונות, ולאחר מכן הנשימה צריכה להיפסק (בדרך כלל סביב 5 דקות, אבל הזרימה יכולה להישמר לפי הצורך). אשר את המוות לפני שתמשיך לשלב הבא.
- לגלח את בית החזה, הבטן ואת הגב של העכבר עם קוצץ השיער ולחטא עם 70% אתנול. גילוח מפחית מאוד את מספר הממצאים בשל נוכחות של שיער או על דגימות עבור הדמיה או ניתוח ביוכימי.
- הצמד את העכבר למגש פוליסטירן, המרחיב את חזיתו ואת אחוריו, כמו גם את ראשו וזנבו. מניחים אותו מתחת למיקרוסקופ המיקרו-כירורגיה.
- באמצעות מספריים דפוס ישר מאיו ליצור גישה כירורגית עם חתך עורי פועל מהאזור התת-קרקעי לבטן התחתונה ולניתח תת עורית כדי לחשוף את דופן בית החזה ואת הצפק.
- באמצעות מספריים מיקרו-כירורגיים, חתכו את שרירי החזה העיקריים ואת שרירי החזה הקטנים לאורך החלל הבין-קוסטלי השישי משני צידי דופן בית החזה.
- באמצעות מספריים בדפוס ישר, לחתוך את החזה לאורך החתכים הקודמים, ולאחר מכן להשלים כריתת חזה על ידי חיתוך ציר החזה לאורך הציר הארוך שלה, ולאחר מכן לרומם ולהצמיד את שני הצדדים של דופן בית החזה כדי לחשוף את קומפלקס הלבו-ריולאומי.
- באמצעות מלקחיים זעירים עגולים (או מלקחיים זעירים של דומונט), מוציאים את התימוס ורקמת השומן שמסביב על ידי משיכתם בעדינות מההחזקות שלהם. זה יחשוף את כלי השיט העיקריים.
- באמצעות cautery, לצרוב את וריד קאווה היורד, באמצעות מספריים דפוס ישר, לחתוך את הוושט.
- באמצעות מלקחיים זעירים חדים, להפריד את הוורידים brachiocephalic ואת brachiocephalic, השאיר עורקים עורקים תת-בריקליים נפוצים מן הרקמה הבסיסית כדי להקל על קשירה וצרוב.
- באמצעות מחזיק מחט מיקרו, מיקרו-מלקחיים חדים ותפרים במקום תפר 9-0 מעל הופעתו של brachiocephalic, השאיר עורקים עורקים נפוצים והעורקים התת-בריחיים השמאליים.
- לצרוב את הוורידים brachiocephalic.
- להפריד את בלוטות הרוק submandibular לאורך קו האמצע כדי לחשוף את שרירי הצוואר ואת קנה הנשימה. להפריד את השרירים כדי לחשוף את הרצועה cricothyroid. באמצעות מיקרו מספריים, לפתוח כניסה על ידי חתך הרצועה.
- הציגו קטטר 27 גרם קנה הנשימה ולדחוף בעדינות עד קנה הנשימה מסתעף לתוך הסימפונות (כלומר, עד ההתנגדות לצנתר נפגש, ולאחר מכן לסגת 3 מ"מ). תיזהר לא לשבש את הסימפונות. בעזרת תפר 6-0, מניחים 3 תפרים סביב קנה הנשימה כדי לאבטח את הצנתר.
- תחלק את העכבר בגובה החוליה ה-12 של בית החזה. באבי העורקים היורד פועל באופן הקדמי לעמוד השדרה ויש לחלק אותו כאן יחד עם עמוד השדרה. תבדיל את החצי התחתון.
- מצטבטים בדיעבד את העורקים ודוחפים את הצנתר עד שהוא מגיע לקשת של בירי העורקים. בעזרת תפר 9-0, מניחים 4 תפרים סביב העורקים, החל מ-5 מ"מ מתחת לקצה הצנתר.
2. דפלולריזציה
- חבר את העכבר למערכת משאבה באמצעות צינורות סיליקון ומחברי Luer. לטבול עם מים deionized ב 200 μL / דקה במשך 15 דקות. שמור על קצב זרימה זה במהלך הפחתה.
- שנה את חומר הזילוף ל-0.5% נתרן דאוקסיכולאט (DOC) מדולל במים דה-יון ולפרוף בן לילה.
- שנה את חומר זלוף ל 0.1% נתרן דודסיל סולפט (SDS) מדולל במים deionized ו perfuse במשך 8 שעות.
- יש לטפטף מים דה-יונים למשך הלילה כדי לשטוף את ה-SDS וה-DOC למשך 24 שעות.
- יש לכרות את הלב והריאות המנושלים על ידי חתך את זיקותיו לבית החזה באמצעות מספריים מעוקלות ולאחסן בצינור קריו סטרילי עם מים דה-יונים עם 1% (v/v) פניצילין-סטרפטומיצין ו 0.3 מיקרומטר נתרן אזיד ב 4 °C. פיגומי ECM ניתן לאחסן לפחות במשך 12 שבועות1. אם הפיגומים ישמשו לניתוח ביוכימי (למשל, ספקטרומטריית מסה), הצמדה להקפאה בחנקן נוזלי.
3. חיסונים
- תכנן את ההדמיה: קבע נוגדנים ראשוניים (או נוגדנים) ואת השילוב של נוגדנים משניים מצומדים פלואורסצנטית כדי להתאים זה לזה ולהתאים את קווי הלייזר של מיקרוסקופ הפלואורסצנטיות.
- לחסום את המדגם על ידי טבילה אותו cryotube המכיל 6% (v / v) סרום חמור - 3% (w / v) אלבומין סרום בקר (BSA) לילה.
- דגירה עם נוגדן ראשוני (או נוגדנים) בסרום חמור 3% ב- PBS למשך 24 שעות.
- לשטוף 5 פעמים במשך 1 שעות בכל פעם ב 0.05% tween 20 ב PBS (PBST).
- לדגור את המדגם עם נוגדן משני מצומד פלואורסצנטי (או נוגדנים) בסרום חמור 3% ב- PBS למשך 24 שעות.
- לשטוף 5 פעמים במשך שעה אחת ב 0.05% (PBST). המתן שעה בין כל שטיפה.
- מוסיפים מים דה-יוניזציה ומאחסנים במרחק של 4 מעלות צלזיוס מאור ישיר. בשלב זה, הפיגומים מוכנים לתמונה.
4. הדמיה
- מניחים את המדגם בצלחת עם תחתית זכוכית ולחים אותה עם שתי טיפות של פתרון אחסון (PBS או מים דה-יוניים).
- הכן את המטרה. אנו ממליצים להשתמש במטרה טבילת מים.
- בדוק את המדגם באמצעות אור פלואורסצנטיות.
- עבור לבקרת מחשב. הפעל לייזרים ולהתאים את עוצמת הלייזר, צמצם חור הסיכה, גלאים אורכי גל, רווח, רזולוציה וזום. הגדר את המספר ואת גודל השלב עבור z-stack ולהתחיל רכישה. אנו ממליצים להשתמש עירור לייזר מולטי פוטוני כדי להגביר את חדירת הרקמות ולמזער את פיזור האור, ההלבנה ונזק לרקמות.
5. הכתמת המטוקסילין-אאוזין
- Excise 1 אונת ריאות מעכבר מורדם.
- מניחים ב 10 מ"מ x 10 מ"מ x 5 מ"מ cryomold לכסות אותו עם כ 500 μL של תרכובת OCT.
- להקפיא על קרח יבש (-70 °C (70 °F) ולשמור על המדגם בטמפרטורה זו.
- Excise אונה אחת ריאה decellularized מעכבר מעובד על פי שלב 2.5.
- מניחים בקריומולד עם שטח הפנים הגדול ביותר למטה ולכסות אותו עם תרכובת OCT כפי שצוין בשלב 5.2.
- יש להקפיא על קרח יבש (-70 מעלות צלזיוס) ולשמור על הדגימה בטמפרטורה זו עד שיידרש אחרת. ניתן לאחסן את הדגימה למשך 12 שבועות לפחות.
- בלוקים רקמה קפואה סעיף ב -20 °C בקריוסטט עם עובי 5 מיקרומטר ומניחים חלקים על שקופיות זכוכית דבק ולאחסן ב -80 °C (80 °F).
- יש ליטול את השקופיות לטמפרטורת החדר עד לייבוש האוויר (כ-20 דקות).
- זמן קצר לטבול PBS ולתקן על ידי טבילת השקופיות ב 4% paraformaldehyde ב PBS במשך 15 דקות. לשטוף פעם אחת PBS במשך 5 דקות, ולאחר מכן פעמיים במים מזוקקים במשך 5 דקות.
- תוכלו לטבול בתמיסת המטוקסילין של מאייר למשך 10 דקות. הפעם ניתן אופטימיזציה על פי מקור רקמה והכנת כתמים.
- לשטוף בצנצנת קופלין מתחת מים מזוקקים זורמים במשך 10 דקות.
- לטבול בפתרון אאוזין במשך 7 דקות. הפעם ניתן אופטימיזציה על פי מקור רקמה והכנת כתמים.
- טובלים ב-50% אתנול כדי להסיר עודף אאוזין ומתייבשים תוך זמן קצר בטבילה ב-70% אתנול, וב-96% וב-100% אתנול למשך 30 שניות. טובלים בקסילן מספר פעמים.
- יש למרוח כמה טיפות של הרכיבה על DPX בינונית ומניחים כיסוי זכוכית.
- השאר שקופיות להתייבש לילה מתחת למכסה המנוע הכימי.
- סרוק שקופיות בסורק שקופיות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
דפלולרציה לב-ריאה
לאחר השלמת הפרוטוקול בהצלחה, הלב והריאות, כמו גם רקמת נספח כגון קשת העורקים, יהיו נקיים מתאים. ניתן לאמת את ההקטוקסילין-אאוזין (איור 1) של פיגומי ECM המראים הסרה של הגרעינים בהשוואה לרקמה המקורית. פיגומים אלה שומרים על מידותיהם של איברים טריים ומבנה ECM המסיס שלו שלם2. איור 2 מציג ייצוג סכמטי של השלבים הכירורגיים העיקריים הנדרשים כדי לתבל בהצלחה את קומפלקס הלבו-ריאתי ש...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
טכניקות Decellularization המבוססות על תסיסה רקמה לשנות מבנה ECM, מה שהופך אותם לא מתאים לניתוח מבנה ECM4. דטרמינוליזציה זלוף, באמצעות מסלול אנטומי כגון אב העורקים של קנה הנשימה, מאפשר להגיע למיטה נימי, או alveoli סופני, ומאפשר את המסירה של סוכנים decellularizing ברחבי האיבר. השימוש zwitterionic, אניוני ולא יוני דטרגנטים כדי decellularize רקמה מדווח4,5,6, עם זאת, נתרן דודציל סולפט (SDS, אניוני) ליניארי קול...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לפרופ' איוונה נובאק וד"ר נין מיין כריסטנסן (המרכז להנפשה ביולוגית מתקדמת (CAB), אוניברסיטת קופנהגן) על מתן גישה למיקרוסקופ. עבודה זו נתמכה על ידי מועצת המחקר האירופית (ERC-2015-CoG-682881-MATRICAN; AEM-G, OW, RR ו- JTE); מלגת דוקטורט מקרן לונדבק (R286-2018-621; מר); מועצת המחקר השוודית (2017-03389; CDM); האגודה השבדית לסרטן, Cancerfonden (CAN 2016/783, 19 0632 Pj, ו- 190007; CDM); סיוע גרמני לסרטן (דויטשה קרבשילפה; RR); והאגודה הדנית לסרטן (R204-A12454; ר.ר).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>מיקרו-כירורגיה | |||
| 6-0 תפר, מחט חתך משולש (ויקריל) | Ethicon | 6301124 | |
| 9-0 מיקרו-תפר (Safil) | B בראון | G1048611 | |
| מלקחיים של אדסון | Fine Science Tools | 11006-12 | |
| מלקחיים של אדסון עם שיניים | Fine Science Tools | 11027-12 | |
| מחזיק מיקרו-מחט Castroviejo | כלי מדע עדינים | מס' 12061-01 | |
| CO2 תא אוורור להמתת חסד של עכבר | |||
| נטולי יונים (Milli-Q IQ 7000, מערכת מים מעבדה Ultrapur) | מגש | ||
| (~30 ופעמים; 50 ס"מ) | |||
| מיקרוסקופ דיסקציה (Greenough, עם צוואר אווז דו-זרועי) | Leica | S6 D | |
| מיקרו-מרית דו-צדדית | Fine Science Tools | 10091-12 | |
| מיקרו-מלקחיים של Dumont (שניים) | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| מיקרו-מלקחיים של Dumont עם 45° טיפים (שניים) | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| קוצץ שיער | אוסטר | 76998-320-051 | |
| מחזיק מחט הלסי (עם לסתות טונגסטן קרביד) | Fine Science | Tools 12500-12 | |
| קטטר תוך-ורידי 24 מד (Insyte) | BD | 381512 | |
| קטטר תוך-ורידי 26 מד (Terumo) | Surflo-W | SR+DM2619WX | |
| מספריים מאיו (חתך קשה, ישר) | Fine Science Tools | 14110-15 | |
| מיקרו-מלקחיים עם קצות טבעתיים (שניים) | Aesculap | FM571R | |
| מספריים מיקרו-קפיציים (Vannas, מעוקלים) | Fine Science | Tools 15001-08 | |
| Minicutter | KLS Martin | 80-008-03-04 | |
| Molt Periostotome | Aesculap | D0543R | |
| מחטים (מד 27; Microlance) | BD | 21018 | |
| מגבת נייר (סטרילית) או מפית כירורגית | |||
| מספריים משוננים (CeramaCut, ישר) | Fine Science Tools | 14958-09 | |
| מרית (Freer-Yasargil) | מזרקי Aesculap | OL166R | |
| (1 מ"ל; מזרקי 3021001 | פלסטיפאק | ||
| BD (10 מ"ל; Plastipak) | BD | 3021110 | |
| מספריים לגיד (Walton) | Fine Science Tools | 14077-09 | |
| IMMUNOSTAINING | |||
| Alexa Fluor 488 חמור נגד שרקנים IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | |
| Alexa Fluor 594 חמור נגד ארנב IgG | Life Technologies | A11037 | |
| BSA (אלבומין שבר בקר V, כיתה סטנדרטית, ליופיליזציה) | Serva | 11930.03 | |
| נוגדן רב-שבטי קולגן IV (RRID: AB_2276457) | Millipore | AB756P | מארח: ארנב |
| PBS (pH 7.4, 10&, Gibco) | Thermo Fisher Scientific | 70011044 | מארח: |
| נוגדן רב-שבטי פריוסטין עז (מתנה אדיבה ממנואל קוך. RRID:AB2801621) | מארח: שרקן ניסיונות | ||
| אזמל חד פעמי עם להב מס' 11 (יח '10) | VWR | 233-5364) | |
| סרום (סרום חמור רגיל) | Jackson ImmunoResearch | 017-000-121 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416-50ML | |
| חזק>הדמיה | |||
| גלאים (גלאי היברידי (Leica, דגם HyD S) וצינורות פוטו-מכפיל (PMTs; ) | לייקה | ||
| מקור אור פלואורסצנטי | לייקה | EL6000 | |
| מיקרוסקופ (מיקרוסקופ מולטיפוטון הפוך) | Leica | SP5-X MP | |
| אובייקטיבי (כחול למבדה, 20×, 0.70 צמצם מספרי (NA) IMM UV) | Leica | HCX PL APO | |
| שני פוטונים Ti– לייזר ספיר (ספקטרה-פיזיקה, מודל Mai Tai DeepSee) | |||
| לייזר אור לבן (WLL) | Leica | ||
| DECELLULARIZATION | |||
| 70% אתנול (אלכוהול מוחלט 99.9%); יש להתאים את האלכוהול האבסולוטי ל-70% (נפח/נפח) באמצעות מים נטולי יונים | שזיפים | ||
| (Milli-Q IQ 7000, מערכת מי מעבדה אולטרה-טהורים) | Merck | ZIQ7000T0 | |
| אביזרי גברים Luer-to-tubing (1/8 אינץ') | World Precision Instruments | 13158-100 | |
| PBS (pH 7.4, פי 10;, Gibco) | Thermo Fisher Scientific | 70011044 | |
| פניצילין-סטרפטומיצין | Gibco | 15140122 | |
| משאבה פריסטלטית (עם 12 ערוצים) | Ole Dich | 110AC(R)20G75 | |
| (עם תעודת זהות של 2 מ"מ ו-4 מ"מ OD) | Ole Dich | 31399 | |
| נתרן אזיד | סיגמא-אולדריץ' | 08591-1ML-F | |
| נתרן דאוקסיכולאט (DOC) | סיגמא-אולדריץ' | D6750-100G | |
| נתרן דודציל סולפט | סיגמא-אולדריץ' | L3771-500G | |
| <חזק>H& E STAINING | |||
| 4% PFA | Fisher Scientific | 15434389 | |
| 96% שזיף אתנול | 201446-5L | ||
| שזיף | אתנול מוחלט | 201152-1L | |
| Coverslips (24x50 מ"מ; 1000 יח') | Hounisen | 422.245 | |
| Cryomolds ביניים (15 x 15 x 5 מ"מ; 100 יח') | Tissue-Tek | 4566 | |
| Cryostat | Leica | CM3050S | |
| DPX הרכבה בינונית | Hounisen | 1001.0025 | |
| תמיסת Eosin Y אלכוהולית 0.5% | Sigma | 1024390500 | |
| להב מיקרוטום נוצה נירוסטה, C35 (50 יח') | Pfm רפואי | 207500003 | |
שקופיות Fisherbrand Superfrost Plus (25 x 75 מ"מ; 144 יח') | Thermofisher | ||
| מאיירס המטוקסילין | סיגמא | MHS32-1L | |
| OCT תרכובת | VWR | 361603E | |
| סורק שקופיות (Nanozoomer) | Hamamatsu Photonics | ||
| Xylene | Sigma | 534056-4L |
מקורות
- Hynes, R. O. Extracellular matrix: not just pretty fibrils. Science. 326, 1216-1219 (2009).
- Mayorca-Guiliani, A. E., et al. ISDoT: in situ decellularization of tissues for high-resolution imaging and proteomic analysis of native extracellular matrix. Nature Medicine. 23, 890-898 (2017).
- Mayorca-Guiliani, A. E., et al. Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D. Nature Protocols. 14, 3395-3425 (2019).
- White, L. J., et al. The impact of detergents on the tissue decellularization process: A TOF-sims study. Acta Biomaterialia. 50, 207-219 (2017).
- Ott, H. C., et al. Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nature Medicine. 14, 213-221 (2008).
- Uygun, B. E., et al. Organ re-engineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nature Medicine. 16, 814-820 (2010).
- Susaki, E. A., et al. Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging. Nature Protocols. 10, 1709-1727 (2015).
- Tomer, R., Ye, L., Hsueh, B., Deisseroth, K. Advanced CLARITY for rapid and high-resolution imaging of intact tissues. Nature Protocols. 9, 1682-1697 (2014).
- Erturk, A., et al. Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO. Nature Protocols. 7, 1983-1995 (2012).
- Wershof, E., et al. A FIJI Macro for quantifying pattern in extracellular matrix. BioRxiv. , (2019).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
