הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קביעת דרישות האבקה בשזיף היפני על ידי ניטור פנולוגי, האבקות ביד, מיקרוסקופיה פלואורסצנטית וגנוטיפינג מולקולרי

2.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61897

⸱

9 בנובמבר 2020

 ,  , 
1Unidad de Hortofruticultura, Centro de Investigación y Tecnología Agroalimentaria de Aragón (CITA), 2(CITA-Universidad de Zaragoza), Instituto Agroalimentario de Aragón - IA2, 3Departamento de Hortofruticultura, Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas de Extremadura (CICYTEX), Instituto de Investigaciones Agrarias Finca La Orden

במאמר זה

סיכום

מתודולוגיה לקביעת דרישות האבקה בהיברידיות מסוג שזיף יפני מתוארת, המשלבת האבקות שדה ומעבדות ותצפיות של צינורות אבקה תחת מיקרוסקופיית פלואורסצנטיות עם זיהוי של S-genotypes על ידי PCR וניטור הפריחה לבחירת מאביקים.

תקציר

פולחן השזיפים היפני שגודל בדרך כלל הוא בני כלאיים בין-מיניים שמקורם בצלבים בין סליצ'ינה פרונוס המקורית לבין מינים אחרים של פרונוס. רוב ההיברידים מפגינים אי-תאימות עצמית משחקטופיטית, הנשלטת על ידי S-לוקוס יחיד ופולימורפי מאוד המכיל אללים מרובים. רוב ההיברידים המעובדים אינם תואמים את עצמם וצריכים אבקה מתורם תואם כדי להפרות את הפרחים שלהם. קביעת דרישות האבקה בשזיף היפני הופכת חשובה יותר ויותר בשל המספר הגבוה של cultivars חדשים עם דרישות האבקה לא ידועות. בעבודה זו, מתודולוגיה לקביעת דרישות האבקה בהיברידיות מסוג שזיף יפני מתוארת. התאימות העצמית נקבעת על ידי האבקות ידניות הן בתחום והן במעבדה, ולאחר מכן ניטור התארכות צינור האבקה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, וגם ניטור התבגרות פירות בתחום. מבחר של cultivars מאביקים מוערך על ידי שילוב זיהוי של S-genotypes על ידי ניתוח PCR עם ניטור של זמן פריחה בתחום. הכרת דרישות ההאבקה של cultivars מקלה על בחירת cultivars לעיצוב פרדסים חדשים ומאפשרת גילוי מוקדם של בעיות פרודוקטיביות הקשורות עם חוסר האבקה בפרדסים מבוססים.

מבוא

שזיף יפני(פרונוס סליצילינה לינדל) הוא יליד סין1. במאה ה -19, יבול זה הוצג מיפן לארצות הברית, שם הוא היה שזור עם שזיפים דיפלואידים אחרים בצפון אמריקה2. במאהה-20, חלק מההיברידים האלה התפשטו לאזורים ממוזגים ברחבי העולם. כיום, המונח "שזיף יפני" מתייחס למגוון רחב של היברידיות בין-מיניות שמקורן בצלבים בין P. salicina המקורי עם עד 15 פרונוס דיפלואידים אחרים עמ'3,4,5.

שזיף יפני, כמו מינים אחרים של משפחת Rosaceae, מציג Gametophytic עצמית אי תאימות (GSI), אשר נשלט על ידי אחד מאוד polymorphic S- לוקוס המכיל אללים מרובים6. ה- S-לוקוסמכיל שני גנים המקודדים ריבונוקלאז(S-RNase)המתבטא בפסטיל, וחלבון F-box (SFB) המתבטא בגרגר האבקה7. בתגובת אי הכשירות העצמית, כאשר S-allele לידי ביטוי גרגר האבקה (הפלואיד) זהה לאחד מהשניים המבוטאים ב pistil (diploid), הצמיחה של צינור האבקה על פני הסגנון נעצר עקב השפלה של צינור האבקה RNA על ידי הפעולה של S-RNase8. מאז תהליך זה מונע הפריה של gametophyte הנשי בovule, GSI מקדם את outcrossing בין cultivars.

למרות שחלק מכת השזיפים היפנית תואמת את עצמה, רוב הפולחנים הגדלים כיום אינם תואמים את עצמם, והם זקוקים לאבקה מתורמים בין-תואמים כדי להפרות את הפרחים שלהם3. במיני פרי אבן מסוג פרונוס כגוןשקדים 9, משמש10,11,12 ודובדבן מתוק13, דרישות האבקה של cultivars ניתן לקבוע על ידי גישות שונות. תאימות עצמית (in) יכולה להיקבע על ידי האבקה עצמית של פרחים בשטח וניטור לאחר מכן של ערכת פירות, או על ידי האבקה עצמית של חצי ויוו בתנאים מבוקרים במעבדה ותצפית של צינורות אבקה מתחת למיקרוסקופ14,15,16,17,18 . יחסי אי התאמה בין cultivars ניתן לקבוע על ידי האבקות צולבות בתחום או במעבדה באמצעות אבקה של cultivar מאביקים פוטנציאליים, ועל ידי זיהוי S-alleles של כל cultivar על ידי ניתוח PCR14,15,16,19,20,21,22 . במינים כגון דובדבן מתוק או שקדים, התאימות העצמית (in)ניתן להעריך גם על ידי זיהוי של אלס S מסוים הקשורים לתאימות עצמית, כמו S4' בדובדבן מתוק13 או Sf בשקדים23.

מספר תוכניות גידול שזיפים מהמדינות המייצרות העיקריות משחררות מספר cultivarsחדשים 2,14, רבים מהם עם דרישות האבקה לא ידועות. בעבודה זו, מתודולוגיה לקביעת דרישות האבקה בהיברידיות מסוג שזיף יפני מתוארת. תאימות עצמית נקבעת על ידי האבקה עצמית הן בתחום והן במעבדה, ואחריהן תצפיות של צינורות אבקה תחת מיקרוסקופיית הפלואורסצנטיות. מבחר של cultivars מאביקים משלב את הזיהוי של S-genotypes על ידי ניתוח PCR עם ניטור של זמן פריחה בתחום.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. האבקה ידנית בשטח

  1. מיצוי אבקה
    1. כדי להשיג אבקה, לאסוף ניצני פרחים בשלב D24, על פי שלב 57 בסולם BBCH25,26.
      הערה: יותר ניצני פרחים נחוצים בשזיף יפני מאשר במינים אחרים של פרונוס מכיוון שהאנטרים שלהם מייצרים פחות אבקה.
    2. הסר את anthers באמצעות רשת פלסטיק (2 מ"מ x 2 מ"מ נקבובית גודל) ומניחים אותם על נייר בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות עד anther dehiscence.
    3. מסננים את גרגרי האבקה דרך רשת עדינה (0.26 מ"מ x 0.26 מ"מ גודל נקבובית), ושמר אותם בצינור זכוכית 10 מ"ל עם מכסה ב 4 °C (4 °F) עד לשימוש.
  2. האבקה של פרחים מוסרסים
    1. כאשר בין 10%-20% מהפרחים פתוחים, בחר וסמן מספר ענפים. הסר פרחים פתוחים וניצנים צעירים, משאיר רק ניצני פרחים בשלב D24, על פי שלב 57 בסולם BBCH25,26.
    2. הסר את עלי הכותרת, עלי הכותרת, ואת פסלונים של בין 800 ל 1,000 ניצני פרחים לטיפול עם ציפורניים או פינצטה.
    3. יד להאביק את pistils בעזרת מברשת צבע בסדר 24 שעות לאחר סירוס. חלק מענפים המכילים מחצית pistils עם אבקה של אותו cultivar, ואת החצי השני עם אבקה תואמת מן cultivar אחרים כמו שליטה. היזהר לא לזהם את קצות האצבעות או מברשת צבע עם גרגרי אבקה מן cultivars אחרים.
    4. ספירה שבועית שיא של פרחים ופירות מתפתחים כדי לאפיין את דפוס טיפת הפירות ולכמת את הפירות הסופיים שנקבעו בכל טיפול האבקה.
  3. האבקה משלימה בתחום
    1. כמה ימים לפני פתיחת הפרחים הראשונים, סגרו עצים נבחרים בכלוב רשת 0.8 מ"מ כדי למנוע הגעת חרקים מאביקים.
    2. כאשר 10%-20% פרחים פתוחים, בחר וסמן מספר ענפים לטיפול האבקה, ומשאיר 1,000-1,500 פרחים לטיפול.
    3. למחרת, כאשר פרחים פתוחים, להאביק כל פרח בעזרת מברשת צבע עם אבקה המקבילה (אבקה מאותו cultivar עבור האבקה עצמית, מן cultivars תואם אחרים כמו בקרת האבקה צולבת).
    4. להאבי כל יומיים עד שכל הפרחים נפתחים.
    5. ספירה שבועית שיא של פרחים ופיתוח פירות מן anthesis לקצור כדי לאפיין את דפוס טיפת פירות ולכמת פירות סופיים להגדיר בכל טיפול האבקה.

2. האבקות ידניות במעבדה

  1. לאסוף 50-100 פרחים בשלב D24, על פי שלב 57 בסולם BBCH25,26.
  2. במעבדה, לסרס 30 פרחים לטיפול (האבקה עצמית והצלבה).
    הערה: יש להמשיך את הסירס בקפידה כדי למנוע נזק על הממסלולים.
  3. לעשות חתך טרי על הבסיס של כל פדיקור פרח מתחת למים לפני הנחת אותו על חתיכת קצף פרחים רטוב (חתיכה אחת של קצף עבור כל טיפול האבקה).
  4. יד להאביק כל pistil 24 שעות מאוחר יותר באמצעות מברשת צבע בסדר עם אבקה שנאספה בעבר (ראה סעיף 1.1). להאביק קבוצה אחת של pistils עם אבקה מאותו cultivar, והשני להגדיר עם אבקה מן cultivar תואם כמו שליטה.
  5. השאירו את pistils מואבק 72 שעות לאחר האבקה בטמפרטורת החדר. הקצף הפרחוני צריך להיות רטוב ללא הרף עם מים.
  6. תקן את pistils בתמיסה קבועה של אתנול / חומצה אצטית (3:1) לפחות 24 שעות ב 4 °C (70 °F). החלף את הקיבעון עם 75% אתנול. ניתן לשמר דגימות בפתרון זה ב 4 °C (5 °F) עד לשימוש27°
    הערה: ודא שהדגימות שקועות לחלוטין בפתרון.

3. תצפיות מיקרוסקופיות

  1. הערכה של נביטת אבקה במבחנה
    1. כדי לפרט נביטת אבקה בינונית, להמיס 25 גרם של סוכרוז על 250 מ"ל של מים מזוקקים, ולאחר מכן להוסיף 0.075 גרם של סידן חנקתי [Ca(NO3)2] ו 0.075 גרם של חומצה בורית (H3BO3).
    2. מוסיפים 2 גרם אגר לתמיסה ומערבבים עד להמסה מוחלטתשל 28.
    3. כדי לעקר את המדיום, autoclave אותו ב 120 °C (70 °F) במשך 20 דקות. מצננים את המדיום, ולפני שהוא מתמצק, מפיצים 3 מ"ל לכל צלחת פטרי סטרילית (55 מ"מ x 12 מ"מ) במכסה זרימה למינאר סטרילי. לאחר התגבשות בינונית, יש לשמר את כלי הפטרי עטופים בנייר אלומיניום ב-4 מעלות צלזיוס עד לשימוש.
    4. להפיץ את האבקה של כל cultivar שימש בעבר כתורם אבקה בהאבקות מבוקרות בשתי מנות פטרי ודגרה אותם ב 25 °C (24 °F) במשך 24 שעות.
      הערה: ניתן לצפות במדיה התרבותית המחוסנת במיקרוסקופיה מיד לאחר או לאחסן ב- -20 °C (70 °F). לשם כך, יש להחליף את מנות הפטרי מהמקפיא למקרר 24 שעות לפני תצפיות מיקרוסקופיות.
    5. כדי לצפות גרגרי האבקה, להכין 1% (v/ v) פתרון כחול אנילין כי מכתים callose. ראשית, להכין 0.1 N אשלגן פוספט טריבסיק (K3PO4)פתרון על ידי המסת 7.97 גרם של K3PO4 ב 1,000 מ"ל של מים מזוקקים. כדי לפרט את הפתרון הכחול 1% (v/v), להמיס 1 מ"ל של כחול אנילין ב 100 מ"ל של 0.1 N K3PO4.
    6. הוסיפו 2-3 טיפות של תמיסה כחולה אנילין לכל צלחת צלחת פטרי ושימו לב לאחר 5 דקות תחת מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטיות UV באמצעות מסנן exciter BP340-390 ומסנן מחסום LP425. ספירת גרגרי אבקה בני קיימא ולא ברי קיימא בשלושה שדות לכל צלחת, כל שדה המכיל 100-200 גרגרי אבקה, בשתי מנות פטרי לכל כת.
  2. צמיחת צינור אבקה
    1. לשטוף את pistils קבוע עם מים מזוקקים שלוש פעמים (1 שעות כל אחד, 3 שעות בסך הכל) ולהעביר ל 5% (w / v) נתרן סולפיט (Na2SO3) ב 4 °C (24 °F) עבור 24 שעות. כדי להכין את הפתרון הזה, להמיס 5 גרם של נתרן סולפיט ב 100 מ"ל של מים מזוקקים.
    2. אוטומטית לכלוך את pistils ב 120 °C במשך 8 דקות ב 5% (w /v) נתרן סולפיט כדי לרכך את הרקמות.
    3. סקווש מרוכך pistils בירידה של 1% (v /v) פתרון כחול אנילין תחת כיסוי על שקופית כדי להכתים callose.
    4. צפה צמיחת צינור אבקה לאורך הסגנון תחת מיקרוסקופ עם אפיפלואורסצנטיות UV באמצעות מסנן exciter BP340-390 ומסנן מחסום LP425.

4. קביעת יחסי אי-תאימות

  1. הפקת דנ"א מהעלים
    1. כדי לחלץ דנ"א, אספו 3-4 עלים צעירים מכל כת בשטח, רצוי באביב.
      הערה: DNA יכול גם להיות מופק עלים בוגרים, אבל DNA של עלים צעירים יש פחות תרכובות פנוליות.
    2. לבודד DNA באמצעות ערכה מסחרית ולעקוב אחר ערכת הפרוטוקול שסופקה (ראה טבלת חומרים).
    3. לכמת את ריכוז ה- DNA ולהעריך את איכות ה- DNA של כל דגימה ב 260 ננומטר בספקטרופוטומטר מיקרו-Vis מיקרו-וויס. התאם את ריכוז הדנ"א ל-10 ננוגרם/מיקרו-אל.
  2. תנאי PCR להגברת קטעים
    1. תווית 0.2 mL PCR צינורות וכובעים.
    2. הכן את ריאגנטים PCR על פי טבלה 1 ולתת להם להפשיר על קרח.
    3. הגדר נפח של תמהיל מאסטר של כל זוג פריימרים במיקרו-Tube של 1.5 מ"ל בהתאם למספר התגובות בתוספת 10% של עודף, בהתחשב בנפח של 16 μL לכל תגובה. מוסיפים את ריאגנטים לאחר הסדר בטבלה 1 ומערבבים היטב.
    4. Aliquot 16 μL של תערובת מאסטר לתוך כל צינור PCR 0.2 מ"ל המכיל 4 μL של תבנית DNA או 4 μL של מים מזוקקים מעוקרים כמו שליטה שלילית (C-). השתמש בדנ"א של cultivars עם גנוטיפ ידוע כמו פקדים חיוביים. מערבבים בעדינות, סוגרים את צינורות התגובה עם הכובעים, וצנטריפוגטה ב 2,000 x g עבור 30 s כדי לאסוף את כל הנפח בתחתית צינור התגובה.
    5. מקם את צינורות התגובה בתרמוציקלר והגדיר את תוכנית ה- PCR באמצעות פרופיל הטמפרטורה הבא: שלב ראשוני של 3 דקות ב 94 °C (74 °F), 35 מחזורים של 1 דקות ב 94 °C (54 °F), 1 דקות ב 56 °C (56 °F) ו 3 דקות ב 72 °C (72 °F), וצעד סופי של 7 דקות ב 72 °C(72 °F) 20°C ..
  3. אלקטרופורזה והערכה של גודל שבר
    1. כדי להכין 1.7% (w/v) ג'ל מיני אגרוז, להמיס 0.68 גרם של אגרוז ו 40 מ"ל של 1x TBE חוצץ לתוך בקבוק 100 מ"ל ארלנמאייר. להמיס את הפתרון על ידי חימום במיקרוגל ב 600 W במרווחים של 30 שניות כדי למנוע רותחים.
    2. תן את הפתרון להישאר על הספסל כדי להתקרר, ולאחר מכן להוסיף 3.5 μL של תמיסת כתמי חומצה גרעין.
    3. מניחים את מגש הג'ל לתוך דוכן הליהוק ומכניסים את המסרק הנבחר לתבנית הג'ל. הקפד לקבל מספיק בארות עבור כל מוצר PCR וסולם DNA.
    4. יוצקים את תמסת אגרוז לתבנית הג'ל ומניחים לה להתקרר עד פילמור. הסר את המסרק של ג'ל פולימרי. מניחים את הג'ל במערכת אלקטרופורזה אופקית המכילה מספיק חיץ TBE 1x כדי לכסות את פני השטח של הג'ל.
    5. טען את בארות הראשון והאחרון עם 2 μL של סולם משקל מולקולרי DNA (1 kb סולם DNA). לטעון 3 μL של כל מוצר של PCR בבארות האחרות. סגור את התא, הפעל את הכוח, והפעל את הג'ל ב 100 V במשך 30 דקות.
    6. שימו לב לג'ל תחת אור UV באמצעות מערכת תיעוד ג'ל. השתמש בסולם המשקל המולקולרי של ה- DNA כדי לקבוע את גודל השבר המוגבר ולהשוות אותו עם הפקדים החיוביים על מנת לזהות את אללים המתאימים.

5. ניטור תאריכי פרחים

  1. לפקח על הפנולוגיה של עצים שונים של כל cultivar בפריחה על פני שנים שונות. לקבוע את אורך תקופת הפריחה מהראשון (כ -5%) עד הפרחים הפתוחים האחרונים (כ -95%). פריחה מלאה נחשבת כאשר לפחות 50% מהפרחים נמצאים בשלב F24, על פי שלב 65 בסולם BBCH25,26.
  2. כדי להשוות את תאריכי הפריחה של cultivars בין תואם ולקבוע את אלה חופפים בזמן הפריחה מדי שנה, לפרט לוח שנה של זמני פריחה עם נתונים ממספר שנים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כל ניצן פרח שזיף יפני מכיל תפרחת עם 1-3 פרחים. כמו במיני פרי אבן אחרים, כל פרח מורכב מארבעה פרחים: קרפל, פסלנים, עלי כותרת וספלים, אשר מותכים ויוצרים בבסיס הפרח. מבני הפרחים קטנים יותר מפירות אבן אחרים, עם פסטיל קצר ושברירי מוקף אבקנים המכילים כמות קטנה של גרגרי אבקה. בפריחה מלאה, הפרחים של כל תפרחת מופיעים מופרדים על גבעולים קצרים, ומציגים את עלי הכותרת הלבנים היוצרים בלון מוקף בפתחים הירוקים (שלב D, 57 BBCH) (איור 1A) בימים שלפני ההאנסה. הפרח פתוח במלואו בהנסתזה, ומציג את האנת'ים ואת המסלו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המתודולוגיה המתוארת כאן לדרישות האבקה של פולחנים שזיפים יפניים דורשת קביעת התאימות העצמית של כל כת על ידי האבקות מבוקרות בתחום או במעבדה, ותצפית לאחר מכן של צמיחת צינור אבקה עם מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. מערכות היחסים של אי-תאימות נוצרות על ידי אפיון של S-alleles על ידי genotyping מולקולרי. לבסוף, הבחירה של מאביקים מבוצע על ידי פנולוגיית ניטור כדי לזהות את אלה cultivars כי בקנה אחד עם פריחה מדי שנה.

קביעת דרישות האבקה בכתות שזיפים יפניות חדשות הופכת לחשובה יותר ויותר בשל המספר הגבוה של...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

מחקר זה מומן על ידי המכון הלאומי לחקר y Tecnología אגריה y Alimentaria (RFP2015-00015-00 ו RTA2017-00003-00); Gobierno de Aragón – הקרן החברתית האירופית, האיחוד האירופי (Grupo Consolidado A12-17R) ו חונטה דה אקסטרמדורה — פונדו אירופה דה דסארולו אזורי (FEDER), Plan Regional de Investigación (IB16181), Grupo de Investigación (AGA001, GR18196). B.I. Guerrero נתמך על ידי מלגה של Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología של מקסיקו (CONACYT, 471839).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
חומצה אצטית קרחוןPanreac131008.1611
אגרiNtRON Biotechnology25999
כחול אניליןDifco8504-88
חומצה בורית (H3BO4)Panreac131015.1210
סידן חנקתי 4-הידרט (Ca(NO3)2 · 4H2O)Panreac131231.1211
CoverglassDeltalabD10246024 מ"מ x 60 מ"מ
הדמיית מצלמהדיגיטלית Developmet SystemsUI-1490SE
חבילת תוכנה למצלמהדיגיטלית Imaging Developmet Systems4.93.0.
DNA OligosThermoFisher Scientific
dNTP Mix, 10 מ"מ כל אחדThermoSischer ScientificR0193
DreamTaq Green DNA פולימראזThermoFisher ScientificEP0713
אתנול 96°VWR-Chemicals83804.360
סולם DNA 1Kb (פטנט ארה"ב מס' 4.403.036) (500pb-12Kb)Invitrogen15615-016גודל: 250 ומיקרו; g; Conc: 1.0 ומיקרו; g/µ l
מערכת תיעוד ג'לBio-Rad1708195
מונה ידTamacoTM-4
Image Lab תוכנהBio-Rad מערכת ניתוח תמונות Bio-Radלמערכת תיעוד ג'ל
MetaPhor AgaroseLonza50180
מיקרוצנטריפוגה 5415 REppendorfZ605212
מיקרוסקופ עם UV EpiflurescenceLeicaDM2500Exciter filter BP340-390, מסנן מחסום LP425
MicroslidesDeltalabD10000426 מ"מ x 76 מ"מ
מיני מערכת אלקטרופורזהFisherbrand14955170
MinicentrifugeThermoFisher Scientific15334204
NanoDrop 1000 ספקטרופוטומטרThermoFisher ScientificND1000
צלחות פטריDeltalab20020155 מ"מ x 14 מ"מ
אשלגן פוספט Tribasic (K3PO4· 1.5H2O)Panreac141513
פריימר קדימה 'Pru C2'ThermoFisherScientific
Primer קדימה Pru T2'ThermoFisherScientific
Primer הפוך 'PCER'ThermoFisherScientific
RedSafe תמיסת צביעת חומצות גרעיןiNtRON Biotechnology21141
SaccharosePanreac131621.1211
נתרן סולפיט נטול מים (Na2SO3)Panreac131717.1211
Speedtools ערכת מיצוי DNA צמחיBiotools21272
TBE Buffer (10X)PanreacA0972,5000PE
Thermal Cycler T100Bio-Rad
Thermomixer comfortEppendorfT1317
Vertical Autoclave Presoclave IIJP Selecta4001725
VortexFisherbrand11746744
1861096

מקורות

  1. Hendrick, U. P. The Plums of New York. , J. B. Lyon Co., State Printers. (1911).
  2. Okie, W. R., Hancock, J. F. Plums. Temperate Fruit Crop Breeding. Hancock, J. F. , Springer. Dordrecht. 337-357 (2008).
  3. Guerra, M. E., Rodrigo, J. Japanese plum pollination: a review. Scientia Horticulturae. 197, 674-686 (2015).
  4. Okie, W. R. Introgression of Prunus species in plum. New York Fruit Quarterly. 14 (1), 29-37 (2006).
  5. Okie, W. R., Weinberger, J. H. Fruit Breeding, vol. 1. Tree and tropical fruits. Janick, J., Moore, J. , John Wiley and Sons Inc. New York. 559-608 (1996).
  6. Mccubbin, A. G., Kao, T. Molecular recognition and response in pollen and pistil interactions. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 16, 333-364 (2000).
  7. Hegedűs, A., Halász, J. Recent findings of the tree fruit self-incompatibility studies. International Journal of Horticultural Science. 13 (2), 7-15 (2007).
  8. de Nettancourt, D. Incompatibility and Incongruity in Wild and Cultivated Plants. , Springer-Verlag. Berlín. (2001).
  9. Tao, R., et al. Identification of stylar RNases associated with gametophytic self-incompatibility in almond (Prunus dulcis). Plant and Cell Physiology. 38 (3), 304-311 (1997).
  10. Halász, J., Pedryc, A., Ercisli, S., Yilmaz, K., Hegedűs, A. S-genotyping supports the genetic relationships between Turkish and Hungarian apricot germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (5), 410-417 (2010).
  11. Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Self-incompatibility and S-allele identification in new apricot cultivars. Acta Horticulturae. (1231), 171-176 (2019).
  12. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Determination of self- and inter-(in)compatibility relationships in apricot combining hand-pollination, microscopy and genetic analyses. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (160), (2020).
  13. Cachi, A. M., Wunsch, A. Characterization of self-compatibility in sweet cherry varieties by crossing experiments and molecular genetic analysis. Tree Genetics & Genomes. 10, 1205-1212 (2014).
  14. Guerra, M. E., Guerrero, B. I., Casadomet, C., Rodrigo, J. Self-compatibility, S-RNase allele identification, and selection of pollinizers in new Japanese plum-type cultivars. Scientia Horticulturae. 261, 109022(2020).
  15. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing production in the new generation of apricot cultivars: self-incompatibility, S-RNase allele identification, and incompatibility group assignment. Frontiers in Plant Science. 9, 1-12 (2018).
  16. Herrera, S., Rodrigo, J., Hormaza, J. I., Lora, J. Identification of self-incompatibility alleles by specific PCR analysis and S-RNase sequencing in apricot. International Journal of Molecular Sciences. 19 (11), 3612(2018).
  17. Sociasi Company, R., Kodad, O., Fernández i Martí, J. M., Alonso, J. M. Mutations conferring self-compatibility in Prunus species: from deletions and insertions to epigenetic alterations. Scientia Horticulturae. 192, 125-131 (2015).
  18. Rodrigo, J., Herrero, M. Evaluation of pollination as the cause of erratic fruit set in apricot 'Moniqui. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 71 (5), 801-805 (1996).
  19. Beppu, K., et al. Se-haplotype confers self-compatibility in Japanese plum (Prunus salicina Lindl). Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 80 (6), 760-764 (2005).
  20. Guerra, M. E., Rodrigo, J., López-Corrales, M., Wünsch, A. S-RNase genotyping and incompatibility group assignment by PCR and pollination experiments in Japanese plum. Plant Breeding. 128 (3), 304-311 (2009).
  21. Guerra, M. E., Wunsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Flower emasculation as the cause for lack of fruit set in Japanese plum crosses. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (6), 556-562 (2010).
  22. Guerra, M. E., Wünsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Lack of fruit set caused by ovule degeneration in Japanese plum. Journal of the American Society for Horticultural Science. 136 (6), 375-381 (2011).
  23. Fernández i Martí, A., Gradziel, T. M., Socias i Company, R. Methylation of the Sf locus in almond is associated with S-RNase loss of function. Plant Molecular Biology. 86, 681-689 (2014).
  24. Baggiolini, M. Les stades repérés des arbres fruitiers à noyau. Revue romande d'Agriculture et d'Arboriculture. 8, 3-4 (1952).
  25. Meier, U. Growth stages of mono-and dicotyledonous plants: BBCH Monograph. Federal Biological Research Centre for Agriculture and Forestry. , (2001).
  26. Fadón, E., Herrero, M., Rodrigo, J. Flower development in sweet cherry framed in the BBCH scale. Scientia Horticulturae. 192, 141-147 (2015).
  27. Fadon, E., Rodrigo, J. Combining histochemical staining and image analysis to quantify starch in the ovary primordia of sweet cherry during winter dormancy. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (145), (2019).
  28. Hormaza, J. I., Pinney, K., Polito, V. S. Correlation in the tolerance to ozone between sporophytes and male gametophytes of several fruit and nut tree species (Rosaceae). Sexual Plant Reproduction. 9, 44-48 (1996).
  29. Burgos, L., et al. The self-compatibility trait of the main apricot cultivars and new selections from breeding programmes. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 72 (1), 147-154 (1997).
  30. Dicenta, F., Ortega, E., Cánovas, J. A., Egea, J. Self-pollination vs. cross-pollination in almond: pollen tube growth, fruit set and fruit characteristics. Plant Breeding. 121, 163-167 (2002).
  31. Alonso, J. M., Socias i Company, R. Differential pollen tube growth in inbred self-compatible almond genotypes. Euphytica. 144, 207-213 (2005).
  32. Hedhly, A., Hormaza, J. I., Herrero, M. The effect of temperature on pollen germination, pollen tube growth, and stigmatic receptivity in peach. Plant Biology. 7, 476-483 (2005).
  33. Hedhly, A., Hormaza, J. I., Herrero, M. Warm temperatures at bloom reduce fruit set in sweet cherry. Journal of Applied Botany. 81, 158-164 (2007).
  34. Milatović, D., Nikolić, D. Analysis of self-(in)compatibility in apricot cultivars using fluorescence microscopy. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 82, 170-174 (2007).
  35. Jia, H. J., He, F. J., Xiong, C. Z., Zhu, F. R., Okamoto, G. Influences of cross pollination on pollen tube growth and fruit set in Zuili plums (Prunus salicina). Journal of Integrative Plant Biology. 50, 203-209 (2008).
  36. Herrero, M., Salvador, J. La polinización del ciruelo Red Beaut. Información Técnica Econónomica Agraria. 41, 3-7 (1980).
  37. Ramming, D. W. Plum. Register of new fruit and nut varieties: Brooks and Olmo, List 37. HortScience. 30 (6), 1142-1144 (1995).
  38. Hartmann, W., Neümuller, M. Plum breeding. Breeding plantation tree crops: Temperate species. , Springer. New York, NY. 161-231 (2009).
  39. Guerra, M. E., López-Corrales, M., Wünsch, A. Improved S-genotyping and new incompatibility groups in Japanese plum. Euphytica. 186 (2), 445-452 (2012).
  40. Tao, R., et al. Molecular typing of S-alleles through identification, characterization and cDNA cloning for S-RNases in sweet cherry. Journal of the American Society for Horticultural Science. 124 (3), 224-233 (1999).
  41. Yamane, H., Tao, R., Sugiura, A., Hauck, N. R., Lezzoni, A. F. Identification and characterization of S-RNases in tetraploid sour cherry (Prunus cerasus). Journal of the American Society for Horticultural Science. 126, 661-667 (2001).
  42. López, M., Jose, F., Vargas, F. J., Battle, I. Self-(in)compatibility almond genotypes: a review. Euphytica. 150, 1-16 (2006).
  43. Bošković, R., Tobutt, K. R. Correlation of stylar ribonuclease zymograms with incompatibility alleles in sweet cherry. Euphytica. 90, 245-250 (1996).
  44. Beppu, K., Syogase, K., Yamane, H., Tao, R., Kataoka, I. Inheritance of self-compatibility conferred by the Se-haplotype of Japanese plum and development of Se-RNase gene-specific PCR primers. Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 85, 215-218 (2010).
  45. Beppu, K., Kumai, M., Yamane, H., Tao, R., Kataoka, I. Molecular and genetic analyses of the S-haplotype of the self-compatible Japanese plum (Prunus salicina Lindl.) "Methley". Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 87 (5), 493-498 (2012).
  46. Beppu, K., Konishi, K., Kataoka, I. S-haplotypes and self-compatibility of the Japanese plum cultivar 'Karari'. Acta Horticulturae. 929, 261-266 (2012).
  47. Sapir, G., Stern, R. A., Shafir, S., Goldway, M. S-RNase based S-genotyping of Japanese plum (Prunus salicina Lindl.) and its implication on the assortment of cultivar-couples in the orchard. Scientia Horticulturae. 118, 8-13 (2008).
  48. Karp, D. Luther Burbank's plums. HortScience. 50 (2), 189-194 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

SollenPCR
קביעת דרישות האבקה בשזיף היפני על ידי ניטור פנולוגי, האבקות ביד, מיקרוסקופיה פלואורסצנטית וגנוטיפינג מולקולרי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.