Method Article

דגימה ועיבוד צחצוח אף באמצעות מיקרוסקופ וידאו ריסני דיגיטלי במהירות גבוהה – התאמה למגפת הקורונה

DOI:

10.3791/61949

⸱

November 7th, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Pneumology laboratory, I3 Group, GIGA Research Center, University of Liège, 2Department of ENT, University Hospital of Liège, 3Department for Occupational Safety and Health, Biosafety and Biosecurity Unit, University of Liège, 4Division of Respirology, Department of Pediatrics, University of British Columbia and British Columbia Children's Hospital, 5Division of Cardiology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège, 6Department of Pneumology, University Hospital of Liège, 7Division of Respirology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי להבטיח ניתוח פונקציונלי ריסוני מוצלח ואיכותי לאבחון PCD, שיטה מדויקת וזהירה לדגימת אפיתל נשימתי ועיבודו היא חיונית. כדי להמשיך לספק שירות אבחון PCD במהלך מגיפת COVID-19, פרוטוקול מיקרוסקופ הווידאו הריסי עודכן כדי לכלול אמצעי בקרת זיהום מתאימים.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דיסקינזיה ריסנית ראשונית (PCD) היא סיליופתיה גנטית, המובילה למחלה אוטוסינופולמונרית משמעותית. אבחון PCD לעתים קרובות מתפספס או מתעכב בגלל אתגרים עם שיטות אבחון שונות. מיקרוסקופ וידאו ריסני, באמצעות מיקרוסקופ וידאו דיגיטלי במהירות גבוהה (DHSV), אחד מכלי האבחון עבור PCD, נחשב לשיטה האופטימלית לביצוע ניתוח פונקציונלי ריסני (CFA), הכולל ניתוח תדירות פעימות ריסניות (CBF) ודפוס פעימות (CBP). עם זאת, ל-DHSV אין נוהל הפעלה סטנדרטי שפורסם לעיבוד וניתוח דגימות. הוא משתמש גם באפיתל נשימתי חי, נושא משמעותי בבקרת זיהומים במהלך מגיפת COVID-19. כדי להמשיך לספק שירות אבחון במהלך משבר בריאותי זה, פרוטוקול מיקרוסקופ הווידיאו הריסי הותאם כך שיכלול אמצעי בקרת זיהום נאותים.

כאן, אנו מתארים פרוטוקול מתוקן לדגימה ועיבוד מעבדה של דגימות נשימה ריסניות, תוך הדגשת התאמות שנעשו כדי לעמוד באמצעי בקרת הזיהום של COVID-19. מתוארות תוצאות מייצגות של CFA מדגימות צחצוח אף שהתקבלו מ -16 נבדקים בריאים, שעובדו ונותחו על פי פרוטוקול זה. אנו גם ממחישים את החשיבות של השגה ועיבוד של רצועות אפיתל באיכות אופטימלית, שכן דגימות שאינן עומדות בקריטריונים לבחירת איכות מאפשרות כעת CFA, מה שעלול להפחית את אמינות האבחון ואת היעילות של טכניקה זו.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דיסקינזיה ריסנית ראשונית (PCD) היא סיליופתיה תנועתית הטרוגנית תורשתית, שבה ריסונים נשימתיים הם נייחים, איטיים או דיסקינטיים, מה שמוביל לפגיעה בסילוק הליחה ולמחלה אוטו-סינו-פולמונרית כרונית 1,2,3,4. הביטויים הקליניים של PCD הם שיעול רטוב כרוני וגודש כרוני באף החל מינקות מוקדמת, זיהומים חוזרים או כרוניים בדרכי הנשימה העליונות והתחתונות המובילים לברונכיאקטזיס, ודלקת אוזניים חוזרת או כרונית וסינוסיטיס 5,6,7. כמחצית מחולי PCD מציגים פגמים צדדיים באיברים ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

האישור התקבל מוועדת האתיקה של בית החולים בליאז' ומהמחלקה האוניברסיטאית להיגיינה והגנה על הבריאות בעבודה.

1. דגימת אפיתל ריסני נשימתי

  1. יש לוודא שהנבדקים נקיים מזיהום במשך 4-6 שבועות לפחות, וללא תרופות באף ובשאיפה, לפני הדגימה.
  2. הכינו תוספת להכנת M199: תוספת תרבית תאים בינונית 199 (M199) (500 מ"ל) עם תמיסה אנטיביוטית (5 מ"ל סטרפטומיצין/פניצילין (50 מק"ג/מ"ל)) ותמיסה אנטי-פטרייתית (5 מ"ל אמפוטריצין B (2.5 מיקרוגרם/מ"ל)).
  3. הכינו 2 (אחד לכל נחיר) 15 מ"ל צינורות חרוטיים עם מכסים, ומלאו כל אחד מהם עם 3 מ"ל של M199 מוסף.
  4. הכינו מברשת ציטולוגיה של הסימפונות (עובי: 2 מ"מ ואורך: 11 מ"מ). חתכו את קצה החוט כדי לוודא ש....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי להמחיש את יעילות הטכניקה, אנו מציגים את תוצאות CFA בסדרה של 16 מתנדבים בוגרים בריאים (5 גברים, טווח הגילאים 22-54 שנים).

דגימות צחצוח אף מ -14 (4 גברים, טווח הגילאים 24-54 שנים) מתוך סך של 16 מתנדבים סיפקו מספיק קצוות אפיתל מתאימים שעמדו בקריטריוני הבחירה הדרושים לביצוע CFA. מתוך 14 דגימות צחצוח האף הללו, נרשמו בסך הכל 242 קצוות מרוסנים, ו-212 קצוות עמדו בקריטריוני ההכללה שהוגדרו ונותחו. כל הקצוות הללו תועדו בפרופיל הצידי (מכות ריסונים ממעל הצופה תועדו ונותחו עבור כל מתנדב כדי להעריך אם נצ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה נועד לספק נוהל הפעלה סטנדרטי עבור CFA באמצעות דגימות צחצוח האף, עם התאמות שבוצעו לשיקולי בקרת זיהום מתאימים במהלך מגיפת COVID-19. אבחון PCD הוא מאתגר, וכיום דורש פאנל של בדיקות אבחון שונות, על פי המלצה בינלאומית, כולל מדידת תחמוצת החנקן באף, CFA באמצעות DHSV, ניתוח אולטרה-סטרוקטורלי ריסני באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת (TEM), תיוג חלבונים ריסניים באמצעות immunofluorescence, ובדיקות גנטיות עבור PCD גורם גנים 4,37. נכון לעכשיו, אין בדיקה אחת שיאבחן כל ח.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אלה אין מה לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברצוננו להודות לז'אן-פרנסואה פאפון, ברונו לואי, אסטל אסקודיה ולכל חברי הצוות של מרכז אבחון PCD בפריז-אסט על זמינותם וקבלת הפנים הלבבית במהלך הביקור במרכז אבחון ה- PCD שלהם, והחילופים הרבים. אנו מודים גם לרוברט הירסט ולכל חברי הצוות במרכז PCD בלסטר על קבלת הפנים והזמן, העצות והמומחיות.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
צינורות חרוטיים 15 מ"לFisherScientific35209615 מ"ל צינור חרוטי פוליפרופילן בעל בהירות גבוהה עם מכסה
אמפוטריצין BLONZA17-836Eתמיסה אנטי פטרייתית
מלקחיים לאף Blakesley-weilNOVO SURGICALE7739-12משמש להחזקת המברשת לביצוע צחצוח האף
מברשת ציטולוגיה של הסימפונותCONMED129משמש לאף צחצוח
צמר גפןNUOVA APTACA2150/SGמשמש לבדיקת COVID-19 מצלמת
וידיאו במהירות גבוההIDTeu חדשנות בתנועהCrashCam Mini 1510
שקופיות זכוכיתThermoScientific12372098מיקרוסקופ שקופיות המשמשות ליצירת תא ההדמיה
תאי IBIDI תיבה מחוממת במוקד10918משמש לחימום לדוגמא
מיקרוסקופ אור הפוךZeissAXIO Vert.A1
מחמם עדשותTOKAI HITTPiE-LHמשמש לחימום עדשת טבילת שמן
בינוני 199 (M199), HEPESTermoFisher Scientific12340030תרבית תאים Medium
Motion Studio X64IDT Motionגרסה 2.14.01תוכנה
שמןFischerScientific, Carl Zeiss
תלוש כיסוי מלבניVWR631-0145משמש לכיסוי תא ההדמיה
מרווח (Ispacer) 0.25 מ"מSunjinlabIS203משמש ליצירת תא ההדמיה הסגור ההרמטי
החלקת כיסוי מרובעתVWR631-0122משמש ליצירת תא הדמיה פתוח שנבנה במעבדה
Streptomycin/PenicillinFisherScientific, Gibco11548876תמיסת אנטיביוטיקה
11825153

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chilvers, M. A., Rutman, A., O'Callaghan, C. Ciliary beat pattern is associated with specific ultrastructural defects in primary ciliary dyskinesia. Journal of Allergy Clinical Immunology. 112 (3), 518-524 (2003).
  2. Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ciliary VideomicroscopyDigital High Speed VideomicroscopyNasal Brushing SamplingCiliary Functional AnalysisCiliary Beat FrequencyCiliary Beat PatternPrimary Ciliary DyskinesiaInfection Control MeasuresEpithelial Ciliated StripsVideo Analysis Software

Related Articles