כאן, אנו מציגים פרוטוקול המדגים את הטכניקה ואת הפקדים הדרושים עבור הדמיית זלוף דופלר לייזר כדי למדוד את זרימת הדם בעכבר hindlimb.
מאמר שיטה
כאן, אנו מציגים פרוטוקול המדגים את הטכניקה ואת הפקדים הדרושים עבור הדמיית זלוף דופלר לייזר כדי למדוד את זרימת הדם בעכבר hindlimb.
התאוששות זרימת הדם היא מדד תוצאה קריטי לאחר איסכמיה אחורית ניסיונית או איסכמיה-רפרופוזיה. הדמיית זלוף דופלר לייזר (LDPI) היא שיטה נפוצה, פולשנית, חוזרת להערכת התאוששות זרימת הדם. הטכניקה מחשבת את זרימת הדם הכוללת ברקמה שנדגמה משינוי דופלר בתדירות שנגרם כאשר לייזר פוגע בתאי דם אדומים נעים. המדידות באות לידי ביטוי ביחידות זלוף שרירותיות, כך שההתבטאות הנגדית שאינה מתערבת ברגל משמשת בדרך כלל כדי לסייע בשליטה על המדידות. עומק המדידה הוא בטווח של 0.3-1 מ"מ; עבור איסכמיה hindlimb, משמעות הדבר היא כי זלוף עורי מוערך. זלוף עורי תלוי במספר גורמים – והכי חשוב טמפרטורת העור וסוכן הרדמה, אשר חייב להיות נשלט בקפידה כדי לגרום קריאות אמינות. יתר על כן, פיגמנטציה שיער ועור יכול לשנות את היכולת של הלייזר להגיע או לחדור הדרמיס. מאמר זה מדגים את הטכניקה של LDPI בעכבר hindlimb.
כיב העור עם ריפוי פצעים לקוי הוא הגורם המוביל של קטיעות בחולים אנושיים1. ריפוי פצעים נאות דורש רמות גבוהות יותר של זלוף עורקים מהנדרש כדי לשמור על עור שלם, אשר נפגע בחולים עם מחלת עורקים היקפית2,3,4. מספר מצבים ראומטולוגיים וסוכרת אחרים יכולים גם להוביל microcirculation העור מופרע ולא מספיק כדי לרפא פצעים5,6. חולי סוכרת רבים סובלים ממחלת עורקים היקפית בו זמנית, מה שמציב אותם בסיכון גבוה במיוחד לקטיעה. הדמיית זלוף דופלר לייזר (LDPI) משמש במצבים קליניים כדי להעריך את microcirculation העור, כמו גם במצבי מחקר כדי להעריך את זרימת הדם ואת זרימת הדם התאוששות לאחר איסכמיה hindlimb ניסיוני, איסכמיה-reperfusion, דש מיקרוכירורגי7.
מערכת LDPI מקרינה קרן לייזר בהספק נמוך המוסטת על-ידי מראה סריקה כדי לנוע מעל אזור מעניין. זה שונה מזרימה של דופלר לייזר, המספק מדידת זלוף עבור האזור הקטן של הרקמה במגע ישיר עם בדיקה flowmetry8. כאשר קרן הלייזר מקיימת אינטראקציה עם דם נע במיקרו-וסקולטורה, היא עוברת שינוי בתדר דופלר, אשר מובלט על ידי הסורק ומומר ליחידות זלוף שרירותיות. מכיוון ש- LDPI היא טכניקה מבוססת אור, היא מוגבלת מבחינת עומק החדירה ל- 0.3-1 מ"מ, כלומר לרוב זלוף עורי מוערך7. זרימה עורית יכולה להשתנות על ידי טמפרטורת העור ומערכת העצבים הסימפתטית, אשר עשוי להיות מושפע סוכני הרדמה שונים9. מדידות מהלייזר האופטי מושפעות גם מתנאי תאורת הסביבה, פיגמנטציה בעור, וניתן לחסום אותן על ידי פרווה או שיער7.
LDPI היא טכניקת המחקר הנפוצה ביותר לניטור התאוששות זלוף לאחר איסכמיה מכיוון שהיא לא פולשנית, אינה דורשת ניהול ניגודיות, ויש לה זמני סריקה מהירים המאפשרים איסוף נתונים על בעלי חיים מרובים. זה עושה את זה אידיאלי כדי לעזור לקבוע אם טיפולים שמטרתם arteriogenesis טיפולית או אנגיוגנזה יעילים מודלים בעלי חיים קטנים. התאוששות זרימת הדם לאחר איסכמיה hindlimb כפי שנמדד על ידי LDPI בקורלציה היטב עם פיתוח עורק בטחונות כאשר מוערך באמצעים אחרים כגון יציקת Microfil או מיקרו CT10,11. מטרת פרוטוקול זה היא להדגים את ההערכה של זלוף hindlimb באמצעות LDPI.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ניסויים בבעלי חיים בוצעו על פי פרוטוקול שאושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת וושינגטון.
1. הכנת סורק
2. הכנת סריקה מראש של העכבר
3. סריקה
4. לכידת נתוני LDPI (איור 3)
5. ניתוח
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
LDPI מוצלח אמור לגרום לסריקות חוזרות ונשנות עקביות, עם וריאציה של יחידת זלוף של לא יותר מ- 100-150 (המתאימה לכ- 10% מהזלוף הממוצע הרגיל עבור משטח הרגל של העכבר) בין שלוש הסריקות (איור 2). כפי שמודגם באיור 2, סריקות חוזרות מסייעות לקבוע שהעכבר שוווה כראוי כך שיחס איסכמי/בקרה משקף בצורה הטובה ביותר את זרימת הדם הבסיסית לעומת שונות בזלוף עורי הנגרמת על ידי שינוי טמפרטורה. שימוש בסריקות בודדות עבור נקודות נתונים יגדיל את השונות שתוביל לצורך בעכברים ניסיוניים יותר. כ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
טכניקה עקבית היא קריטית להשגת תוצאות אמינות עם LDPI. יש להשתמש באותם הרדמה, הגדרות טמפרטורה, מיקום העכבר ואזור העניין לאורך כל קורס הזמן. חומרי הרדמה שונים יגרמו לערכי זלוף גבוהים או נמוכים יותר9. הרדמה Isoflurane נוח בגלל הופעתה המהירה, כמו גם בטיחות כללית. אחוז עקבי של isoflurane יש להשתמש כעומק של הרדמה עם סוכן vasodilatory זה עשוי לשנות את זלוף העור. אם אזור העניין כולל פרווה, אז אותה שיטה של הסרת שיער יש להשתמש בכל פעם, כמו עכברים depilated כימית יהיו ערכי זלוף גבוהים יותר מאשר עכברים שפרוותם...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
לד"ר טאנג אין ניגודי אינטרסים לחשוף.
עבודה זו בוצעה עם השימוש במתקנים ומשאבים במרכז הבריאות VA Puget Sound. העבודה היא של המחבר ואינה משקפת בהכרח את עמדת או המדיניות של המחלקה לענייני חיילים משוחררים או ממשלת ארצות הברית. ד"ר טאנג ממומן כיום באמצעות VA (הצטיינות 5 I01 BX004975-02).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שחור שאינו רפלקטיבי | חנות בדים, ניאופרן שחור מומלץ על ידי חברת | ||
| מיכל F/air | A.M. Bickford Inc | 80120 | |
| שמיכה הומותרמית עם בדיקת מתכת קשיחה | הרווארד | מגיע גם עם בדיקה גמישה, אבל זה פחות עמיד | |
| מכונת הרדמה איזופלורן | Drager | יצרנים מרובים | |
| תא אינדוקציה איזופלורן | VetEquip | 941444 | 2 ליטר תא |
| מור לייזר דופלר צילום זלוף | Moor Instruments | MoorLDI2-IR | צילום ברזולוציה גבוהה יותר (MoorLDI2-HIR) |
| חרוט | יצרנים מרובים יצרנים Nair | ||
| מיכל | יצרנים | ||
| Surgilube | מפיצים |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה