עבודה זו מציגה פרוטוקול כדי לחקור את ההשפעה נגד השמנת יתר של שני צמחים המשמשים יחד, במשך 5 שבועות. היה ממשל משולב של תמצית דיאטה עתירת שומן (HFD) בעכברים שמנים. השיטה יכולה לקדם את היתרונות של צמחים בטיפול בהשמנת יתר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל מהיר כדי להעריך את הפוטנציאל נגד השמנת יתר של שילוב של Syzygium ארומטיום (ציפורן) ו cyminum כמון (כמון) על C57BL6 / j עכברים הפד דיאטה עתירת שומן
במאמר זה
סיכום
תקציר
מספר מחקרים הראו כי התוכן הפיטוכימי של צמחים הם סוכנים פוטנציאליים נגד השמנת יתר. במחקר זה אנו בוחנים את ההשפעה של שימוש בשילוב של כפתורים יבשים מ Syzygium ארומטיום וזרעים מן cyminum כמון (CC) על עכברים C57BL6 /J המושרה עם השמנת יתר באמצעות דיאטה עתירת שומן (HFD). מטרת מחקר זה היא להוכיח כי השיטה המוצעת במחקר הפחיתה השמנת יתר באופן משמעותי לאחר מספר שבועות של ניסויים. התמצית משני הצמחים הוצאה באמצעות אולטרסאונד כדי לשפר את החילוץ של פיטוכימיקלים. תנאי החילוץ האופטימליים התקבלו עם אתנול כדלקמן: 50:50 v / v מים עם כוח אולטרסאונד של 300 W, וזמן ultrasonication של 30 דקות. הממשל בו זמנית של תמצית CC ב- HFD במשך 5 שבועות הוביל לוויסות פרופילי השומנים (כולסטרול וטריגליצרידים), הפחתת צריכת המזון, עלייה במשקל, רקמת שומן ומשקל כבד. ממצאים שהתקבלו על ידי מודל זה שמנים עולה כי תמצית CC יכול למנוע השמנת יתר. בהשוואה לשיטת 16 השבועות המסורתית (8 שבועות כדי לקבל שומן, ו 8 שבועות לרדת במשקל), תוצאות דומות התקבלו במחקר הנוכחי מודל שמנים בפחות זמן של ניסויים.
מבוא
הצטברות שומן גוף עודף הוא מאפיין של השמנת יתר. חוסר שיווי המשקל בין צריכת האנרגיה לצריכה מוביל לאחסון אנרגיה עודפת באדיפוציטים, הקשורה לגורמי סיכון מטבוליים להיפרגליקמיה ולעמידות לאינסולין בסוכרת מסוג 2, יתר לחץ דם, היפרכולסטרולמיה ומחלות לב וכלידם 1,2.
מוצרים טבעיים עם תופעות לוואי מינימליות ועלות נמוכה קיבלו תשומת לב מוגברת מאז מחקרים קודמים דיווחו על פיטוכימיקלים ביו-אקטיביים וסוכנים פוטנציאליים נגד השמנת יתר עם מנגנונים שהופכים או מעכבים תסמונת מטבולית ופתולוגיות נלוות8.
מספר צמחי מרפא נחקרו כדי למנוע השמנת יתר ומחלות נלוות. ביניהם, Syzygium ארומטיקום נחקרה על הפוטנציאל שלה נגד השמנת יתר בטיפול במבחנה על 3T3-L1 תאים בטיפול vivo על עכברים האכילו עם דיאטה עתירת שומן11. בנוסף, השפעות משמעותיות נגד עודף משקל נצפו בניסוי פתוח רב מרכזי של כמוינום cyminum על נושאים שמנים מאוד12. במחקר זה, עכברי C57BL6/J שימשו כדי לחקור את המודל המהיר הניסיוני כדי להעריך סוכן נגד השמנת יתר פוטנציאלי באמצעות שילוב של שני צמחים אכילים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת הניסויים בבעלי חיים של Escuela Nacional de Ciencias Biologicas (IPN; פרוטוקול מס' 2732).
1. הכנת תמצית השילוב של ציפורן וכמון
הערה: הצמחים האכילים, סיזיגיום ארומטיקום (ציפורן) וצימינום כמון (כמון) נרכשו ממרכז דה אבסטוס CDMX, מקסיקו.
- לטחון 500 גרם של זרעים מן הצמחים ולבצע מיצוי בסיוע קולי. Sonicate אותם (320 וואט; תדר 24 kHz, 30 דקות) עם אתנול:מים (60:40 v /v) בטווח טמפרטורות של 30 ± 4 °C(63 °F).
- מסננים את המוצקים באמצעות נייר מסנן Whatman מספר 2 תחת ואקום ולרכז את התמצית עם מאייד סיבובי.
- למדוד את הספקטרום UV-vis של התמצית של שני הצמחים (CC).
2. בעלי חיים
- השתמש זכר C57BL6 / J עכברים של שישה שבועות (48 בסך הכל, משקל גוף 24-29 גרם) למחקר.
- בית בעלי החיים בקבוצות של שמונה בתנאי מעבדה סטנדרטיים: טמפרטורה (20-22 ± 1 °C (1 °F), לחות יחסית (45-54 ± 2%), תאורה (08:00-20:00 שעות) עם ליביטום מודעת מזון ומים. התאקלמות העכברים בתנאים אלה במשך שבוע לפני הניסוי.
3. הליך ניסיוני
- הכן את דיאטה עתירת שומן14 כמו בטבלה 1.
- בתחילת הבדיקה, נושא כל אחת מהקבוצות נוצרו (n = 8) לטיפולים שונים: קבוצת הזנה 1 על תזונה נורמלית; קבוצה 2, על דיאטה עתירת שומן; קבוצה 3, על דיאטה עתירת שומן + 100 מ"ג / קילוגרם של תמצית CC; קבוצה 4, על דיאטה עתירת שומן + 250 מ"ג/ק"ג של תמצית CC; קבוצה 5, על דיאטה עתירת שומן + 450 מ"ג / קילוגרם של תמצית CC; קבוצה 6, על דיאטה עתירת שומן + phentermine (תרופה נגד פוביות המשמשת כשליטה חיובית)15.
- להאכיל את כל קבוצות העכברים במשך 5 שבועות ולתעד את כמות המזון הנצרך מדי יום.
- במבחנה עם פקק, הומוגניזציה של התמצית או התרופה עם מינון המים המתאים לקבוצה שאליה הטיפול מנוהל. זה נעשה עם שייקר מערבולת.
- לאחר הומוגניזציה, להוסיף את כל הטיפול המתאים לתוך השתיין של כל קבוצה.
4. אוסף לדוגמה
- למדוד הן את צריכת המזון והן את משקל הגוף פעם בשבוע. תריץ את העכברים למשך 5 שבועות.
- להקריב אותם על ידי נקע בצוואר הרחם ונמק.
- לאחר שהעכברים הוקרבו, שתק אותם בתנוחה על-חושית.
- באמצעות מלקחיים כירורגיים נקיים ומספריים, לאתר ולהרים את העור המרכזי ליד איברי המין ולעשות חתך קטן 0.2 מ"מ.
- הכנס את המספריים השטוחים אופקית לתוך החתך והפרד בזהירות את עור הבטן מקיר הבטן.
- עם המלקחיים, להרים את העור המרכזי עם מספריים כירורגיים לחתוך אותו ברמה של כלוב הצלעות. ואז לחתוך את העור מעל שני הגפיים האחוריות כדי להקל על איסוף של רקמת שומן.
- להבטיח את האוסף של כל רקמת השומן מהגוף על ידי ניתוח בוטה עם מספריים ומלקחיים. לאחר איסוף, מניחים את רקמת השומן בנייר אלומיניום. זכור לאסוף את השומן סביב איברי הרבייה. הימנע הצטברות של שיער ועור כדי לא לשנות את התוצאות.
- כדי לגשת לרקמת השומן הקרביים, לחתוך את שריר הבטן עם מספריים כירורגיים מאיברי המין לכלוב הצלעות, ביצוע חתך בשרירי הבטן מאיברי המין לכיוון הגב של העכבר.
- בצע כריתת כבד כדי להסיר 100% מהכבד. כדי להחצין את הכבד, להסיר איברים מיותרים לחתוך את ורידי הכבד והעורקים כדי להפריד את הכבד משאר הגוף. כמו הצעד האחרון, בדיוק לחלץ את כיס המרה מן הכבד16.
- למדוד היפרכולסטרולמיה (כולסטרול) ו hypertriglyceridemia (טריגליצרידים) באמצעות ערכות מבחנים מסחריים על פי אינדיקציות היצרן.
5. ניתוח סטטיסטי
הערה: כל התוצאות הניסיוניות צריכות להיות מייצגות משלוש בדיקות עצמאיות, המתבטאות ככוונה ± סטיית תקן.
- חשב שגיאת תקן באמצעות ניתוח ANOVA חד-כיווני של שונות ואחריו בדיקת הטווח של Tukey. שקול P< 0.05 כמשמעותי סטטיסטית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
חילוץ בסיוע אולטרה סאונד
מצב החילוץ האופטימלי עבור החילוץ היה אתנול:מים (50:50, v / v) עם כוח אולטרסאונד של 300 W וזמן ultrasonication של 30 דקות. בדרך זו, החילוץ היה מהיר יותר מאשר שיטות החילוץ קונבנציונאלי (טבלה 2). התמצית הראתה שיא ספיגה אינטנסיבי של 320 ננומטר בספקטרום UV גלוי (איור 1).
צריכת מזון ומשקל גוף
השינויים במשקל הגוף של העכברים בהינתן ריכוזים שונים של התמצית (100, 200 ו 450 מ"ג / קילוגרם) במשך 5 שבועות מוצגים ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במחקר זה הערכנו, בפעם הראשונה, את ההשפעה של ניהול אוראלי של שילוב של ציפורן וכמון (CC) תמצית על פרופילי השומנים והשמנת יתר בעכברים האכילו עם דיאטה עתירת שומן במשך 5 שבועות. הממצאים הצביעו על כך שקבוצות HFD הראו עלייה משמעותית במשקל הגוף בהשוואה לקבוצת ND, שהראתה כי אינדוקציה של השמנת יתר במודל השמנת יתר היה מוצלח. המינון המנוהל של CC (100, 200 ו 450 מ"ג / קילוגרם / יום) הפיק ירידה בצריכת המזון ומשקל הגוף. כתוצאה מכך, הירידה בצריכת המזון חייבת לנבע מירידה בתיאבון של בעלי החיים.
הפחתת דיסליפידמי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים לא מצהירים על ניגוד עניינים.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי מכון פוליטקניקו נאסיונאל מקסיקו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מים מזוקקים | כל ספק | n/a | זמין גם עבור ספקים אחרים |
| אתנול | פרמונט | 6063 | 99.8% טוהר |
| <חזק> מרכיבי דיאטה | |||
| קזאין | כל ספק | n/a | |
| תאית | כל ספק | n/a | |
| איזון Centrum מולטי ויטמין | פייזר | n/a | |
| כולין ביטרטרט | כל ספק | n/a | |
| L- ציסטאין | סיגמא אולדריץ' | 168149 | זמין גם עבור ספקים אחרים |
| שומן חזיר | כל ספק | n/a | |
| מלטודקסטרין 10 | כל ספק | n/a | |
| כדורי Nutricubos | Purina | n/a | זמין עבור ספקים אחרים כמו גם |
| שמן סויה | כל ספק | n/ | |
| סוכרוז | כל ספק | n/a | |
| ציוד מיצוי חזק> | |||
| Rotavapor | Buchi | R-300 | |
| Shimadzu UV-1800 UV / ספקטרופוטומטר סריקה גלויה | Cole Parmer | T-83400-20 | זמין גם עבור ספקים אחרים |
| יחידה אולטרסאונד | Elma | TI-H-20 | זמין גם עבור ספקים אחרים |
| משאבת ואקום | Buchi | V-100 |
מקורות
- Singla, P., Bardoloi, A., Parkash, A. A. Metabolic effects of obesity: A review. World Journal of Diabetes. 1 (1), 76-88 (2010).
- Ojulari, O. V., Lee, S. G., Nam, J. O. Beneficial Effects of Natural Bioactive Compounds from Hibiscus sabdariffa L. on Obesity. Molecules. 24 (1), 210(2019).
- Bahmani, M., et al. Obesity phytotherapy: review of native herbs used in traditional medicine for obesity. Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 21 (3), 228-234 (2016).
- Ríos-Hoyo, A., Gutiérrez-Salmeán, G. New Dietary Supplements for Obesity: What We Currently Know. Current Obesity Reports. 5 (2), 262-270 (2016).
- Hasani-Ranjbar, S., Nayebi, N., Larijani, B., Abdollahi, M. A systematic review of the efficacy and safety of herbal medicines used in the treatment of obesity. World Journal Gastroenterology. 15 (25), 3073-3085 (2009).
- Hardeman, W., Griffin, S., Johnston, M., Kinmonth, A. L., Wareham, N. J. Interventions to prevent weight gain: a systematic review of psychological models and behaviour change methods. Nternational Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders. 24 (1), 131-143 (2000).
- Dinda, B., Dinda, M., Roy, A., Dinda, S. Dietary plant flavonoids in prevention of obesity and diabetes. Advances in Protein Chemistry and Structural Biology. 120, 159-235 (2020).
- Mayer, M. A., Hocht, C., Puyo, A., Taira, C. A. Recent advances in obesity pharmacotherapy. Current Clinical Pharmacology. 4 (1), 53-61 (2009).
- Rafie, A. Z. M., Syahir, A., Ahmad, W. A. N. W., Mustafa, M. Z., Mariatulqabtiah, A. R. 2018 supplementation of stingless bee honey from heterotrigona itama improves antiobesity parameters in high-fat diet induced obese rat model. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. , 6371582(2018).
- Song, J., et al. Anti-obesity effects of the flower of prunus persica in high-fat diet-induced obese mice. Nutrients. 11, 2176(2019).
- Jung, C. H., Ahn, J., Jeon, T. -I., Kim, T. W., Ha, T. Y. Syzygium aromaticum ethanol extract reduces high-fat diet-induced obesity in mice through downregulation of adipogenic and lipogenic gene expression. Experimental and Therapeutic Medicine. 4 (3), 409-414 (2012).
- Said, O., Saad, B., Fulder, S., Khalil, K., Kassis, E. Weight Loss in Animals and Humans Treated with "Weigh level", a Combination of Four Medicinal Plants Used in Traditional Arabic and Islamic Medicine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. , 874538(2011).
- Anaya-Esparza, L. M., Ramos-Aguirre, D., Zamora-Gasga, V. M., Yahia, E., Montalvo-Gonzalez, E. Optimization of ultrasonic-assisted extraction of phenolic compounds from Justicia spicigera leaves. Food Science and Biotechnology. 27 (4), 1093-1102 (2018).
- Ayoub, R. M., et al. The effect of anthocyanin-rich purple vegetable diets on metabolic syndrome in obese Zucker. Journal of Medical Food. , (2017).
- Go, R., et al. Effects of anti-obesity drugs, phentermine and mahuang, on the behavioral patterns in Sprague-Dawley rat model. Laboratory of Animals Research. 30 (2), 73-78 (2014).
- Tan, P., Pepin, É, Lavoie, J. L. Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA analysis. Journal of Visualized Experiments. (13), e57026(2018).
- Bjorndal, B., Burri, L., Staalesen, V., Skorve, J., Berge, R. K. Different adipose depots: Their role in the development of metabolic syndrome and mitochondrial response to hypolipidemic agents. Journal of Obesity. 2011, 490650(2011).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
