מאמר שיטה

איתור הצטברות β עמילואיד באמצעות צביעה אימונו-פלואורסצנטית במודל עכבר של מחלת אלצהיימר

DOI:

10.3791/62254

⸱

19 באפריל 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology and NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בנוירופתולוגיה של מחלת אלצהיימר, אחד המאפיינים המכריעים ביותר הוא שקיעת עמילואיד-β. בפרוטוקול זה, אנו מתארים את השיטה של צביעה אימונופלואורסצנטית בעכבר טרנסגני 5×FAD כדי לזהות הצטברות β עמילואיד בפלאק. תהליך הזילוף, ההקפאה, הצביעה והכימות יתואר בפירוט.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה ניוונית של מערכת העצבים התורמת ל-60-70% שיטיון ברחבי העולם. אחד מסימני ההיכר של אלצהיימר טמון ללא ספק בהצטברות של β עמילואיד (Aβ) במוח. Aβ מיוצר מהמחשוף הפרוטאוליטי של חלבון מבשר בטא-עמילואיד (APP) על ידי β-secretase ו-γ-secretase. בנסיבות פתולוגיות, מחשוף β מוגבר של APP מוביל לייצור יתר של Aβ, המצטבר לפלאק Aβ. מאחר שפלאק Aβ הוא מאפיין של פתולוגיה של אלצהיימר, זיהוי כמות ה-Aβ חשוב מאוד בחקר אלצהיימר. בפרוטוקול זה, אנו מציגים את שיטת הצביעה האימונופלואורסצנטית כדי להמחיש שקיעת Aβ. מודל העכבר ששימש בניסויים שלנו הוא 5×FAD, הנושא חמש מוטציות שנמצאו במחלת אלצהיימר משפחתית אנושית. הליקויים הנוירופתולוגיים וההתנהגותיים של עכברי 5xFAD מתועדים היטב, מה שהופך אותו למודל חי טוב לחקר פתולוגיה של Aβ. נציג את ההליך הכולל זלוף דרך הלב, קריוסקציה, צביעה אימונופלואורסצנטית וכימות לאיתור הצטברות Aβ בעכברי 5×FAD. בעזרת הפרוטוקול הזה, חוקרים יכולים לחקור פתולוגיה של Aβ במודל של עכבר AD.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה ניוונית הגורמת ל-60%-70% דמנציה ברחבי העולם ועולה משאבים חברתיים רבים1. ידוע כי הצטברות β עמילואיד (Aβ) היא סימן היכר פתולוגי במחלת אלצהיימר. חלבון מבשר עמילואיד (APP) הוא חלבון ממברנה אינטגרלי הקיים ברקמות רבות. פפטיד Aβ, המורכב מ-36-42 חומצות אמינו2, מיוצר על ידי הפיצול הבא של β ו-γ-secretase ב-APP 3,4. שינויים במחשוף APP ומוטציות בגן APP מובילים לייצור יתר של Aβ. מולקולות Aβ יכולות להצטבר ליצירת אוליגומרים או סיבים, אשר מאמינים שהם נוירוטוקסיים 5,6. במחקרים קודמים הוכח כי הצטברות Aβ קשורה למוות עצבי ב-7,8,9 לספירה.

העכברים הטרנסגניים 5×FAD (C57BL/6J) מכילים 3 מוטציות ב-APP ו-2 מוטציות ב-PSEN1. הצטברות Aβ תוך-תאית מתחילה כבר בגיל חודש וחצי. הצטברות חוץ-תאית של Aβ נמצאה בסביבות חודשיים, בקליפת המוח ובהיפוקמפוס. ההצטברות גדלה במהירות עם גיל10. הפתולוגיה המתועדת היטב של Aβ הופכת אותו למודל בעל חיים טוב לפרוטוקול שלנו.

מטרת שיטת הצביעה המתוארת היא לדמיין ולכמת שקיעת Aβ במוח של מודל עכברי אלצהיימר. ההליך הכולל זלוף פרפורמלדהיד טרנס-קרדיאלי יוצג, קריוסקציה, צביעה אימונו-פלואורסצנטית וכימות לאיתור הצטברות Aβ בעכברי 5×FAD. פרוטוקול זה הוא שיטה אמינה וקלה לחקירת פתולוגיה של Aβ במודל עכבר AD.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הליכי הניסוי בוצעו באישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית שוז'ו ובהתאם להנחיות התקנות הממשלתיות הסיניות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.

1. זלוף של עכברים

הערה: פרטים נוספים על הליך הזלוף יכולים לעיין בסרטון מהמעבדה 11 של וויליאם שיין.

  1. להרדים עכברים טרנסגניים 5×FAD (C57BL/6J) עם נתרן פנטוברביטלי 1% (50 מ"ג/ק"ג משקל גוף) על ידי הזרקה תוך צפקית12,13. אובדן תגובה לצביטה בכפות הרגליים האחוריות מעיד על הרדמה נכונה. אין להתחיל בזילוף לפני שהעכבר מורדם כראוי.
  2. השתמש בארבעה סיכות כדי לקבע את הגפיים על קרש הקצף. הגדר את בטנו של העכבר המורדם כלפי מעלה, כשגפיו מתוחות כראוי. השתמש בזוג מספריים לקשתית כדי לבצע חתך בתהליך ה- xiphoid. ואז הסרעפת תיחשף.
  3. השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך בסרעפת, והמשך בזהירות את חתך הסרעפת לגבול העליון של כלוב הצלעות. חותכים את הצלעות ושרירי בית החזה, מנתחים את הרקמות המחוברות כדי לחשוף את הלב.
  4. מצא את האטריום הנכון של העכבר. חותכים את האטריום הימני בעזרת מספריים לקשתית.
  5. הזרקו 20 מ"ל של 37 מעלות צלזיוס PBS (0.01 מ', pH 7.2-7.4) מהחדר השמאלי של הלב כדי לשטוף את הדם. לאחר מכן יש להזריק לאט 20 מ"ל של 4% PFA מטמפרטורת החדר מהחדר השמאלי כדי לתקן את הרקמות. קצב ההזרקה של PBS ו-4% PFA הוא בסביבות 5 מ"ל לדקה. יש להבחין ברעידות קיבוע תוך שניות.
    אזהרה: 4% PFA עלול לגרות את העיניים ודרכי הנשימה, ועלול לעורר תגובות אלרגיות. שלב זה צריך להיעשות במקומות מאווררים, ועל המפעיל להרכיב משקפי מגן ומסכות פנים.
  6. השתמש במספריים כירורגיים כדי לחתוך את הראש, והסר בזהירות את הגולגולת השתמש במלקחיים לניתוח וחלץ את המוח. לאחר מכן טבלו את המוח לתוך 4 מ"ל של 4% PFA בצינור פלסטיק של 5 מ"ל למשך 12-24 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

2. הטבעה והקפאה

  1. לאחר קיבוע ב-4% PFA, העבירו את המוח ל-4 מ"ל של 15% סוכרוז בצינור פלסטיק של 5 מ"ל ב-4 מעלות צלזיוס. אחרי 12-24 שעות, המוח אמור לשקוע לתחתית.
  2. העבירו את המוח ל-4 מ"ל של 30% סוכרוז בצינור פלסטיק של 5 מ"ל בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 12-24 שעות. ואז המוח מוכן להטמעה. מטרת השריית סוכרוז בשלבים של 15% ו-30% היא לייבש את המוח, מה שמונע היווצרות גבישי קרח בתוך התאים במהלך הטבעה והקפאה. ניתן לאחסן את המוח המיובש בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך שבוע אחד.
  3. השאירו בערך 1 מ"ל סוכרוז עם המוח בצינור. לאחר מכן הוסף את אותו נפח תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) לתוך הצינור וערבב כראוי. זה עוזר לתרכובת OCT לעטוף את המוח בצורה מספקת יותר.
  4. הרכיבו שכבה עבה של תרכובת OCT על משטח הכפתור והקפיאו בטמפרטורה של -21 מעלות צלזיוס לפני ההקפאה. לחתוך את המוח סגיטלי מהאמצע; השתמש בכל אחד מהחצאים לחיתוך בקריוסטט.
  5. לאחר שתרכובת ה-OCT מתמצקת, התקן את הכפתור על ראש הדגימה וחתוך אותו למשטח פלטפורמה. הניחו מחצית אחת של המוח על המשטח הקצוץ כשהצד האמצעי כלפי מטה.
  6. הניחו טבעת נייר כסף סביב המוח כדי למנוע דליפה של תרכובת OCT, ולאחר מכן מלאו את הטבעת בתרכובת OCT עד שהמוח שקוע. כאשר הטמעת תרכובת OCT מתמצקת, היא מוכנה לחיתוך.
  7. הגדר את עובי הקטע ל -20 מיקרומטר. הגדר את טמפרטורת החדר ל-21 מעלות צלזיוס, ואת טמפרטורת ראש הדגימה ל-19 מעלות צלזיוס. חתך את המוח מהקצה הרוסטרלי לקצה הזנב.
  8. מברישים מעט PBS על שקופיות הזכוכית. מצפים מראש את שקופיות הזכוכית בפולי-ליזין כדי למנוע את התקלפות החלקים. חבר את הקטע לשקופית. אם החלק מקופל, השתמש במברשת רכה כדי לפרוש את החלקים בעזרת PBS.
  9. יבש את החלקים למשך הלילה בטמפרטורת החדר ואחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס. ניתן לשמור את החלקים בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס עד חודש לפני צביעת Aβ.

3. נוהל צביעת Aβ

  1. חממו את החלקים בטמפרטורת החדר, יבשו את משטח ההחלקה והשתמשו בעט הידרופובי כדי לצייר עיגול סביב הקטע לדגירת נוגדנים.
  2. משרים את השקופית ב-PBS בקופסת צביעה מפלסטיק של 30 מ"ל כדי לשטוף את תרכובת ה-OCT. השתמש לפחות ב-20 מ"ל של PBS.
  3. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת אחזור אנטיגן 1x לחלקים קפואים לשקופית. דוגרים למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
  4. שטפו את תמיסת השליפה עם לפחות 20 מ"ל PBS בטמפרטורת החדר למשך 3 פעמים (5 דקות לכל אחד).
  5. הוסף נוגדן ראשוני מדולל (6E10) על החלקים ודגירה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 16-24 שעות בקופסה רטובה וחשוכה (תמיסת דילול נוגדנים ראשונית: 1% BSA, 0.3% טריטון X-100, 0.01% נתרן אזיד ב-PBS, דילול 1:500). BSA מתפקד כסוכן חוסם.
  6. שטפו את החלקים עם PBS במשך 3 פעמים, 5 דקות בכל פעם.
    הערה: בצע את שלבים 3.7, 3.8 ו-3.9 במקום חשוך.
  7. דגירה של קטעים בתמיסת נוגדנים משנית (קמח אלקסה 594 נגד עכבר עיזים IgG (H+L), מדולל ב-PBS 1:200) למשך שעה בטמפרטורת החדר בקופסה רטובה וחשוכה.
  8. שטפו את הנוגדן המשני מהחלקים עם לפחות 20 מ"ל PBS למשך 3 פעמים, 5 דקות בכל פעם.
    הערה: אין לשפוך PBS על חלקים במהלך הכביסה כדי למנוע קילוף חלקים. שמור על החלקים רטובים.
  9. סופגים את הנוזל סביב קטעים ומוסיפים טפטוף של אמצעי הרכבה על כל חלק. אטום את החלקים בזכוכית כיסוי, הימנע מבועות.
  10. התבונן בחלקים המוכתמים במיקרוסקופ פלואורסצנטי. שמור על עקביות פרמטרי ההדמיה כדי למנוע גזירה. שמור את המגלשות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במקום חשוך. נתח את הקטעים תוך שבוע, מכיוון שהכתמים ידהו עם הזמן.

4. הדמיה וכימות של הצטברות Aβ על ידי ImageJ

  1. צלם תמונות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי המחובר למצלמה דיגיטלית ותוכנת הדמיה. השתמשנו בתוכנת Image Pro Plus ופרמטר ההדמיה הוגדר באופן הבא: Exp Pvw: 450 אלפיות השנייה, Exp Acq: 450 אלפיות השנייה; Pvw: 1 × 1, Acq: 1 × 1; רזולוציית Pvw: רוחב 1 × גובה 1, רזולוציית ACQ: רוחב 1 × גובה 1; עומק לכידה: שחור-לבן של 8 סיביות; רווח: Pvw: 13, Acq: 13, גמא: Pvw: 1, Acq: 1, עבירה: Pvw: -700, Acq: -700.
  2. ב-ImageJ Fiji 2.0.0 (https://imagej.net/Fiji), בחר Plugins | תפירה | MosaicJ בתפריט. לאחר מכן בחר קבצים | פתח את רצף התמונות כדי לפתוח את התמונות לתפירה (איור 1A).
  3. כל התמונות שנבחרו יוצגו בתחתית. לאחר תפירת התמונות באופן ידני, בחר File | יצירת פסיפס (איור 1B, C, D).
  4. בחר תמונה | התאם | בהירות/ניגודיות ..., והתאמת הבהירות והניגודיות של התמונה (איור 3A). לאחר מכן ניתן לשמור את התמונה (איור 1E).
  5. כדי לכמת את ההצטברות של Aβ, פתח את התמונה דרך קובץ | פתוח... בתפריט (איור 2A).
  6. בחר תמונה | סוג | 8 סיביות כדי להתאים את התמונה ל-8 סיביות. לאחר מכן בחר את האזור המיועד לספירה באמצעות בחירת מצולע (איור 2B).
  7. בחר תמונה | התאם | סף לבחירת סף האותות המתאים. ניתן לכוונן את הסף על ידי גרירת פסי הגלילה או שינוי המספרים ישירות בתיבת הטקסט (מקסימום: 255, מינימום: 0). כאשר כל אותות ה-Aβ במקטע הפכו לאדומים, הסף מתאים למדידה (איור 2C). ודא שהתיבה רקע כהה מסומנת.
  8. בחירת ניתוח | הגדר מידה... בתפריט כדי לבחור את הפרמטרים שיוצגו בתוצאות. ודא שהאפשרות צפיפות משולבת והגבלה לסף נבחרה. צפיפות משולבת (עוצמה כוללת) היא יעד המדידה (איור 2D).
  9. בחר נתח | מדוד כדי לקבל את התוצאות. התוצאות יוצגו ומוכנות לניתוח סטטיסטי (איור 2E).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השתמשנו בהליכי הצביעה האימונופלואורסצנטיים שתוארו לעיל כדי לחקור את שקיעת הצטברות Aβ בעכברי 5×FAD בגילאים שונים. איור 3 מייצג תוצאות טיפוסיות ותוצאות לא אופטימליות באמצעות הפרוטוקול שלנו. פרוסות מוח של עכברים טרנסגניים הטרוזיגוטיים 5×FAD בני 5 חודשים ו-8 חודשים וביקורת מסוג פרא של 4 עד 6 חודשים נצבעו בנוגדנים 6E10 וזוהו במיקרוסקופ פלואורסצנטי. איור 3A מראה הצטברות Aβ בפלאק בחלק הסגיטלי של מוח העכבר. הם מופקדים בעיקר בקליפת המוח ובהיפוקמפוס, עם הצפיפות הגבוהה ביו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

צביעה אימונו-פלואורסצנטית באמצעות נוגדן 6E10 יכולה לזהות באופן ספציפי הצטברות Aβ במוח, שקל לכמת על ידי תמונה J. מה שכדאי לשים לב אליו הוא שכמה שלבים מכריעים בפרוטוקול זה עשויים להשפיע על התוצאות.

כדי למנוע פרוסות להתקלף או לשבור המוצגות באיור 3C, יש לשים לב לכמה נקודות מפתח. הזלוף צריך להתקדם במהירות לאחר ביצוע החתך בסרעפת בגלל ההשפעות הפתופיזיולוגיות הבלתי הפיכות הנגרמות על ידי היפוקסיה. השפעות אלה עשויות להשפיע עמוקות על התוצאות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי פרויקט כללי של הקרן למדעי הטבע של סין (מספר מענק: 81974157) מהקרן למדעי הטבע של סין, פרופסור ממונה מיוחד של ג'יאנגסו (ל-C.L) ממחלקת החינוך של ג'יאנגסו, תוכנית צוות חדשנות ויזמות של מחוז ג'יאנגסו (ל-H.Z., A.L., W.W., C.L. ו-Y.S.), מענק התחלתי של כישרונות מצוינים (D2019025) ותוכנית הכשרה לחדשנות ויזמות (201910313038Z ל-Z.S., י.ק., מ.ז. וג'.ד.) מהאוניברסיטה הרפואית של שוז'ואו. מחקר זה נתמך גם על ידי מרכז ההדגמה הלאומי לחינוך ניסיוני בסיסי למדעי הרפואה (האוניברסיטה הרפואית שוז'ו).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>הרדמה
מזרק הזרקהKLMEDICAL1 מ"ל
נתרן פנטוברביטואלסיגמא-אולדריץ'P37611% במי מלח להזרקת i.p
<חזק>בית החזה:
איריס-מספריים ישרים עדינים (~11.5 ס"מ)RWDS12010-11
מספריים כירורגיים מעוקלים חדים (11.5 ס"מ)RWDS14016-11
מלקחיים ישרים לניתוח (~10.5 ס"מ)RWDF12010-10
<חזק>זלוף
5 מ"ל)הזרקת Biosharp
KLMEDICAL20 מ"ל
ParaformaldehydeVicmedVIH100
PBS 0.01M (PH7.2-7.4) אבקתVicmedVC2001Pהוסף מים נטולי יונים ליצירת תמיסה
<חזקה>קיבוע, התייבשות וחתך בהקפאה
שקופיות מיקרוסקופCITOTEST18810576.2 מ"מ ופעמים; 25.4 מ"מ
מיקרוטום קריוסטטLEICACM1950
תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT)Sakura Finetek4583
סוכרוזVETECV900116
<חזק>צביעה אימונופלואורסצנטית
מיקרוסקופ פלואורסצנטיOLYMPUSIX-81
נוגדן משני נגד עכבר IgG (H+L) נספג צולב, Alexa Fluor 594Thermo Fisher ScientificA-11005200X
Image-Pro Plus 7.0CMedia Cyberneticsתוכנה מדעית לגרפיקה וניתוח נתונים
אימונוהיסטוכימית קופסה רטובה (שחורה)Sinylabמותאם אישית300 מ"מ ופעמים; 100 מ"מ ופעמים; 38 מ"מ, עומק חריץ 27 מ"מ, יכול להכיל 10 שקופיות סטנדרטיות
PipetThermo Scientific
Pipette טיפיםקופסת
מותאמת אישית30 מ"ל, יכולה להכיל 5 שקופיות סטנדרטיות
מאגר דילול נוגדנים ראשוניתוצרת המעבדה1% BSA 1g, 0.3% Triton X-100 300ul, 0.01% נתרן אזיד 10 מ"ג ב-100 מ"ל PBS
מטוהר אנטי בטא עמילואיד, נוגדן 1-16 (6E10)BiolegendSIG-39320500X
פתרון אחזור אנטיגן מהיר לקפוא סעיפיםKeyGEN BioTECHKGIHC0055X
Quantification
Graphpad Prism 8.0.1תוכנת מיפוי רפואיGraphpad
תמונה J פיג'י 2.0.0המכון הלאומי לבריאותתוכנה לגרפים מדעיים וניתוח נתונים
מזרק הידבקות צביעה מפלסטיק Sinylab שלנו

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Burns, A., Iliffe, S. Alzheimer's disease. BMJ. 338, 158(2009).
  2. Leong, Y. Q., Ng, K. Y., Chye, S. M., Ling, A. P. K., Koh, R. Y. Mechanisms of action of amyloid-beta and its precursor protein in neuronal cell death. Metabolic Brain Disease. 35 (1), 11-30 (2020).
  3. Tiwari, S., Atluri, V., Kaushik, A., Yndart, A., Nair, M. Alzheimer's disease: pathogenesis, diagnostics, and therapeutics. International Journal of Nanomedicine. 14, 5541-5554 (2019).
  4. Murphy, M. P., LeVine, H. Alzheimer's disease and the amyloid-beta peptide. Journal of Alzheimer's Disease. 19 (1), 311-323 (2010).
  5. Hardy, J. A., Higgins, G. A. Alzheimer's disease: the amyloid cascade hypothesis. Science. 256 (5054), 184-185 (1992).
  6. Reitz, C. Alzheimer's disease and the amyloid cascade hypothesis: a critical review. International Journal of Alzheimer's Disease. 2012, 369808(2012).
  7. Bozyczko-Coyne, D., et al. CEP-1347/KT-7515, an inhibitor of SAPK/JNK pathway activation, promotes survival and blocks multiple events associated with Abeta-induced cortical neuron apoptosis. Journal of Neurochemistry. 77 (3), 849-863 (2001).
  8. Canevari, L., Abramov, A. Y., Duchen, M. R. Toxicity of amyloid beta peptide: tales of calcium, mitochondria, and oxidative stress. Neurochemical Research. 29 (3), 637-650 (2004).
  9. Zhu, X., et al. Oxidative stress signalling in Alzheimer's disease. Brain Research. 1000 (1-2), 32-39 (2004).
  10. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. Journal of Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  11. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).
  12. An, S., et al. Medial septum glutamatergic neurons control wakefulness through a septo-hypothalamic circuit. Current Biology. , (2021).
  13. Cao, J. L., et al. Activation of peripheral ephrinBs/EphBs signaling induces hyperalgesia through a MAPKs-mediated mechanism in mice. Pain. 139 (3), 617-631 (2008).
  14. Ly, P. T., Cai, F., Song, W. Detection of neuritic plaques in Alzheimer's disease mouse model. Journal of Visualized Experiments. (53), e2831(2011).
  15. Klunk, W. E., Jacob, R. F., Mason, R. P. Quantifying amyloid beta-peptide (Abeta) aggregation using the Congo red-Abeta (CR-abeta) spectrophotometric assay. Analytical Biochemistry. 266 (1), 66-76 (1999).
  16. Hatami, A., Albay, R., Monjazeb, S., Milton, S., Glabe, C. Monoclonal antibodies against Abeta42 fibrils distinguish multiple aggregation state polymorphisms in vitro and in Alzheimer disease brain. Journal of Biological Chemistry. 289 (46), 32131-32143 (2014).
  17. Shi, X. Z., Wei, X., Sha, L. Z., Xu, Q. Comparison of beta-Amyloid Plaque Labeling Methods: Antibody Staining, Gallyas Silver Staining, and Thioflavin-S Staining. Chinese Medical Sciences Journal. 33 (3), 167-173 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

5xFAD
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים